快速诱导繁殖偏穗鹅观草下胚轴愈伤组织的方法与流程

文档序号:12299450阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种快速诱导繁殖偏穗鹅观草下胚轴愈伤组织的方法,其特征在于步骤如下:

(1)无毒条件下无菌外植体的获得:将偏穗鹅观草种子置于50%~55%的浓硫酸中,在条件为28℃~30℃,210r/min~220r/min的摇床里振荡0.9~1.2小时做脱皮催芽处理,之后用蒸馏水洗去浓硫酸并置于超净工作台,首先用无菌水清洗种子,然后用75%的酒精振荡冲洗2.5~3.5min,紧接着用无菌水将种子表面的酒精清洗干净,再用20%~25%的次氯酸钠振荡冲洗14~16min,最后用无菌水将种子表面的次氯酸钠清洗干净,获得偏穗鹅观草无菌种子,将灭菌后的种子放置于培养无菌实生苗的培养基中培养10-15d,获得无菌实生苗的下胚轴幼嫩部分作为诱导愈伤的外植体;

(2)愈伤组织诱导:将步骤(1)获得的无菌实生苗下胚轴横切为约0.3-0.5cm长的小段作为诱导愈伤的材料,接种于诱导愈伤组织培养基上培养25-30d,诱导愈伤发生;

(3)愈伤组织增殖培养:将步骤(2)获得的颜色黄绿,质地疏松的愈伤组织切割成直径为0.1-0.2cm的小块,然后转接到诱导愈伤组织增殖培养基中,培养25-30d后继续转接到新的诱导愈伤组织增殖培养基中进行继代增殖,最终获得颜色黄绿,结构致密的优良愈伤组织材料。

2.如权利要求1所述的快速诱导繁殖偏穗鹅观草下胚轴愈伤组织的方法,其特征在于:步骤(1)中所述的培养无菌实生苗的培养基为MS营养液、5-7g/L琼脂、20-30g/L蔗糖、0.05-0.1g肌醇组成,PH=5.7-5.8;步骤(2)中所述的诱导愈伤组织培养基、步骤(3)中所述的诱导愈伤组织增殖培养基均为MS诱导培养基,其配比为:3.0-5.0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸,5-7g/L琼脂,20-30g/L蔗糖,0.05-0.1g肌醇组成,PH=5.7-5.8。

3.如权利要求1所述的快速诱导繁殖偏穗鹅观草下胚轴愈伤组织的方法,其特征在于:所述的步骤(1)中偏穗鹅观草发芽阶段需暗培养,发芽以后阶段及步骤(2)、(3)的下胚轴愈伤诱导和愈伤增殖均在连续光照培养,光照强度在1500-2000lx之间,湿度60-70%的环境下进行。

4.如权利要求1所述的快速诱导繁殖偏穗鹅观草下胚轴愈伤组织的方法,其特征在于还包括有步骤(3)所述的产生的愈伤组织材料,通过称量法测定愈伤组织的生长量,其具体步骤为:

1)将盛有MS诱导培养基的锥形瓶放在天平上进行称量,得到数值a;

2)将1)中称量过的锥形瓶放入超净工作台中进行愈伤组织的转接,转接结束后对锥形瓶进行称量,得到数值b;

3)将转接后的愈伤组织培养30天后再次对锥形瓶进行称量,得到数值c;

4)愈伤组织的生长量为:c-(b-a)。

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