orous silica nano particles, Biomaterials, 34(2013)2719-2730)中的方法测定阿霉素的包封率，TATp-MSN 对阿霉素包封率为83. 3%。
[0091] S5、PEG修饰的脂质双分子层（LB)的制备
[0092] 将 P0PC(l-palmitoyl-2-〇leoyl-sn-glycer〇-3-phosphocholine)'cholesterol、 PEG2000-DSPE(1，2-distearoyl-sn-glycer〇-3-phosphoethanolamine_N-[amino(polyet hylene glycol)-2000])、MAL-PEG2000-DSPE、a -tocopherol 按摩尔比为 52. 26 :41. 97 : 5. 255 :0. 315 :0. 2的比例混合，得到混合试剂NI ;取Iml混合试剂NI加至5ml的圆底烧瓶 中，将该盛有上述各试剂的圆底烧瓶接到旋转蒸发仪上，旋转蒸发仪以转速为200rpm/min 旋转并打开真空泵抽真空，待圆底烧瓶表面产生一层水汽后，将瓶身降至水浴锅中于35°C 下水浴，旋转IOmin后即可关闭真空泵并停止旋转，得到盛有反应后试剂的圆底烧瓶；将盛 有反应后试剂的圆底烧瓶放至真空干燥箱中干燥2h去除有机溶剂后，加入1ml的hepes缓 冲液（ρΗ6· 5, lOmmol/1) (h印es缓冲液的制备方法为：精确称量2. 383gHEPES溶于800ml的 单蒸水，使用IM的盐酸将pH调整到6. 5,然后用容量瓶定容到1L)，得到混合液N2 ;将混合 液N2在超声波清洗机中水浴超声（超声条件为250W，常温（20-25°C)下水浴超声）5min，得 到白色悬液；将白色悬液加入脂质体挤出器的玻璃注射器中，依次过200nm聚碳酸酯膜20 次、IOOnm聚碳酸酯膜20次和50nm聚碳酸酯膜21次，得到PEG修饰的脂质双分子层（LB) 〇
[0093] S6、适配体TLSlla修饰的脂质双分子层（TLSlla-LB)的制备
[0094] 将适配体TLSl Ia和MAL-PEG2000-DSPE按照摩尔比为1:10的比例混合，得到混合 试剂Pl ;取50 μ 1混合试剂Pl加至S5得到的马来酰亚胺修饰的脂质双分子层（LB)中后， 在氮气保护环境下反应24h，透析去除未反应的适配体TLSlla得到适配体TLSlla修饰的脂 质双分子层（TLSlla-LB)。透析时间为4小时，2小时更换一次透析液，透析袋的截留分子 量为10000,透析液为由去离子水、氯化钠和三羟甲基氨基甲烷盐酸组成的液体，透析液中 氯化钠的浓度为140mmol/L，三羟甲基氨基甲烷盐酸（TriS-HCl)的浓度为25mmol/L，透析 液的pH为7. 0)。
[0095] S7、肿瘤细胞膜/核膜双靶向肿瘤纳米药物缓释系统（TLSlla-LB-TATp-MSN/DOX) 的制备
[0096] 将IOmg步骤S4得到的TATp-MSN/DOX加至100 μ 1步骤S6得到的适配体 TLSlla修饰的脂质双分子层（TLSlla-LB)中，用移液枪混合数30次，4°C下静置4周，得 到混合液R1，将混合液Rl于15000rpm(28500g)下离心3分钟，其上清液，得到沉淀Ql ; 将沉淀Ql用PBS (ρΗ7· 2-7. 4)进行洗涤，得到TLSlla-LB中装载有TATp-MSN/DOX的系 统一肿瘤细胞膜/核膜双靶向肿瘤纳米药物缓释系统（TLSlla-LB-TATp-MSN/DOX)，每个 TLSlla-LB-TATp-MSN/DOX 中含有一个 TATp-MSN/DOX。
[0097] 利用文献（Pan et al. , Overcoming multidrug resistance of cancer cells by direct intranuclear drug delivery using TAT-conjugated mesoporous silica nano particles, Biomaterials, 34(2013)2719-2730)中的方法测定阿霉素的包封率，TATp-MSN 对阿霉素包封率为83. 3%。
[0098] 按照上述方法，将步骤S4得到的TATp-MSN/DOX替换为步骤S4得到的MSN/D0X，其 他步骤均不变，得到TLS11a-LB中装载有MSN/D0X的系统，将其命名为TLS11a-LB-MSN/DOX。
[0099] 按照上述方法，将步骤S4得到的TATp-MSN/DOX替换为步骤S3得到的 TATp-MSN，其他步骤均不变，得到TLSl Ia-LB中装载有TATp-MSN的系统，将其命名为 TLSlIa-LB-TATp-MSN。
[0100] 按照上述方法，将步骤S4得到的TATp-MSN/DOX替换为步骤S2得到的MSN-NH2，其 他步骤均不变，得到TLSlla-LB中装载有MSN-NH 2的系统，将其命名为TLSlla-LB-MSN-NH 2。
[0101] 按照上述方法，将步骤S4得到的TATp-MSN/DOX替换为ΤΑΤρ，其他步骤均不变，得 到TLSlla-LB中装载有TATp的系统，将其命名为TLSlla-LB-TATp。
[0102] 按照上述方法，将步骤S4得到的TATp-MSN/DOX替换为D0X，其他步骤均不变，得到 TLSlla-LB中装载有DOX的系统，将其命名为TLSlla-LB-DOX。
[0103] 按照上述方法，将步骤S6得到的适配体TLSlIa修饰的脂质双分子层（TLSlla-LB) 替换为步骤S5得到的马来酰亚胺修饰的脂质双分子层（LB)，其他步骤均不变，得到LB中装 载有TATp-MSN/DOX的系统，将其命名为LB-TATp-MSN/DOX。
[0104] 按照上述方法，将步骤S4得到的TATp-MSN/DOX替换为步骤S4得到的MSN/D0X， 并将步骤S6得到的适配体TLSlla修饰的脂质双分子层（TLSlla-LB)替换为步骤S5得到 的马来酰亚胺修饰的脂质双分子层（LB)，其他步骤均不变，得到LB中装载有MSN/DOX的系 统，将其命名为LB-MSN/D0X。
[0105] 按照上述方法，将步骤S4得到的TATp-MSN/DOX替换为步骤S3得到的TATp-MSN， 并将步骤S6得到的适配体TLSlla修饰的脂质双分子层（TLSlla-LB)替换为步骤S5得到 的马来酰亚胺修饰的脂质双分子层（LB)，其他步骤均不变，得到LB中装载有TATp-MSN的系 统，将其命名为LB-TATp-MSN。
[0106] 按照上述方法，将步骤S4得到的TATp-MSN/DOX替换为步骤S2得到的MSN-NH2，并 将步骤S6得到的适配体TLSlla修饰的脂质双分子层（TLSlla-LB)替换为步骤S5得到的 马来酰亚胺修饰的脂质双分子层（LB)，其他步骤均不变，得到LB中装载有MSN-NHd^系统， 将其命名为LB-MSN-NH 2。
[0107] 按照上述方法，将步骤S4得到的TATp-MSN/DOX替换为ΤΑΤρ，并将步骤S6得到的 适配体TLSlla修饰的脂质双分子层（TLSlla-LB)替换为步骤S5得到的马来酰亚胺修饰的 脂质双分子层（LB)，其他步骤均不变，得到LB中装载有TATp的系统，将其命名为LB-TATp。
[0108] 按照上述方法，将步骤S4得到的TATp-MSN/DOX替换为D0X，并将步骤S6得到的适 配体TLSlla修饰的脂质双分子层（TLSlla-LB)替换为步骤S5得到的马来酰亚胺修饰的脂 质双分子层（LB)，其他步骤均不变，得到LB中装载有DOX的系统，将其命名为LB-D0X。
[0109] 透射电镜下观察上述各系统，结果如图3所示。图3中A为MSN的透射电镜图，MSN 分散均匀，表面光滑，图3中B为TLSl Ia-LB-TATp-MSN的透射电镜图，TLSl Ia-LB-TATp-MSN 大小均勾，表面包裹一层浓密物质。
[0110] MSN、MSN-NH2、TATp-MSN、LB-TATp-MSN 和 TLSlla-LB-TATp-MSN 的粒径如图 4 所 示。结果显示，未经任何修饰的MSN的粒径在50nm左右，经TATp修饰、脂质双分子层包装、 TLSlla修饰后，最后得到的TLSl la-LB-TATp-MSN/DOX的粒径为80nm左右。
[0111] 实施例2、实施例1的TLSlla-LB-TATp-MSN/DOX对肿瘤的治疗作用
[0112] 分别将实施例 1 的 TLSl la-LB-TATp-MSN/DOX、TATp-MSN/DOX、TLSl Ia-LB-MSN/ DOX、TLSl Ia-LB-TATp-MSN和LB-TATp-MSN/DOX用PBS悬浮，分别得到阿霉素含量均为 6 μ g/ μ L 的 TLSlla-LB-TATp-MSN/DOX 注射液、TATp-MSN/DOX 注射液、TLSlla-LB-MSN/D0X 注射液、TLSlla-LB-TATp-MSN注射液和LB-TATp-MSN/DOX注射液。将DOX溶于PBS中，得 到阿霉素含量为6 μ g/ μ L的DOX注射液。
[0113] 取6-8周龄近交系雌性裸鼠（BALB/c Nude Mice)，每只于左前肢腋窝皮下接种 2X106个H22肿瘤细胞。每周两次测量肿瘤长径和短径，根据公式TV = l/2XaXb2计算 肿瘤体积。待肿瘤平均体积长至约IOmm3时，得到荷瘤BalB/c裸鼠。对每只荷瘤BalB/ c裸鼠的尾静脉中注射200 μ L上述TLSlla-LB-TATp-MSN/DOX注射液进行治疗，将第一次 注射记为治疗第0天，分别在治疗第3天、治疗第6天和治疗第9天均注射200 μ L上述 TLSlla-LB-TATp-MSN/DOX注射液，共处理26只荷瘤BalB/c裸鼠。
[0114] 按照上述方法，将TLS11a-LB-TATp-MSN/DOX注射液分别替换为PBS、DOX注射 液、TATp-MSN/DOX 注射液、TLSlla-LB-MSN/D0X 注射液、TLSlIa-LB-TATp-MSN 注射液和 LB-TATp-MSN/DOX注射液，其他步骤均不变，得到PBS和各注射液处理的荷瘤BalB/c裸鼠， 每个处理均为26只荷瘤BalB/c裸鼠。
[0115] 分别在治疗第2天、治疗第4天、治疗第6天、治疗第8天、治疗第10天和治疗第 12天测量每个处理中20只荷瘤BalB/c裸鼠的肿瘤体积（图5和表1)，从治疗第1天开始 记录每个处理中20只荷瘤BalB/c裸鼠的存活时间，统计生存率（图6和表2)。
[0116] 表1、不同注射