具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列的制作方法

专利名称：具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及新的编码具有抑癌功能(即抑制癌细胞生长)的人蛋白的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。
人基因组学研究目前是国际上的热点，除人染色体DNA大规模测序，表达序列测序(EST)的方法外，还缺少从功能开始的筛选具有功能基因的高通量的方法。
癌症是危害人类健康的主要疾病之一。为了有效地治疗和预防肿瘤，目前人们已越来越关注肿瘤的基因治疗。因此，本领域迫切需要开发研究具有抑癌功能的人蛋白及其激动剂/抑制剂。
本发明的目的是提供一类新的具有抑癌功能的人蛋白多肽以及其片段、类似物和衍生物。
本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。
本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。
在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的具有抑癌功能的蛋白多肽，它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:41、SEQ IDNO:44、SEQ ID NO:47；或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
较佳地，该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47。
在本发明的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85％相同性(a)编码上述的具有抑癌功能的蛋白多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:41、SEQ IDNO:44、SEQ ID NO:47。更佳地，该多核苷酸的序列选自下组SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ IDNO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:48的编码区序列或全长序列。
在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。
在本发明的第四方面，提供了制备具有具有抑癌功能的蛋白活性的多肽的制备方法，该方法包含(a)在适合表达具有抑癌功能的蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有具有抑癌功能的蛋白活性的多肽。
在本发明的第五方面，提供了与上述的具有抑癌功能的蛋白多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的10-800个核苷酸。
在本发明的第六方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明的具有抑癌功能的蛋白多肽以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗癌症以及细胞异常增殖等病症。
本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
本发明采用大规模cDNA克隆转染癌细胞，在获得具有抑癌作用的基础上，经测序证明为新的基因，进一步得到全长cDNA克隆。DNA转染试验证明，本发明的具有抑癌功能的蛋白对癌细胞(肝癌细胞)具有抑制克隆形成的作用，其抑制率在50％或50％以上。
如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。
如本文所用，“分离的具有抑癌功能的蛋白或多肽”是指具有抑癌功能的蛋白多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化具有抑癌功能的蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。具有抑癌功能的蛋白多肽的纯度能用氨基酸序列分析。
本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本发明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。
本发明还包括具有抑癌功能的人蛋白的片段、衍生物和类似物。如本文所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明的天然具有抑癌功能的人蛋白相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(ⅰ)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ⅱ)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(ⅲ)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(ⅳ)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。
本发明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。以PP1224蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO:3所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO:2的蛋白质，但与SEQ ID NO:3所示的编码区序列有差别的核酸序列。以PP265蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO:6所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO:5的蛋白质，但与SEQ ID NO:6所示的编码区序列有差别的核酸序列。对于其他具有抑癌功能的蛋白，可依此类推。对于其他具有抑癌功能的蛋白，可依此类推。
编码成熟多肽的多核苷酸包括只编码成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。
术语“编码多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸，也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。
本发明还涉及上述多核苷酸的变异体，其编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。
本发明还涉及与上述的序列杂交且两个序列之间具有至少50％，较佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本发明中，“严格条件”是指(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，如0.2×SSC,0.1％SDS,60℃；或(2)杂交时加有变性剂，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll,42℃等；或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95％以上，更好是97％以上时才发生杂交。并且，可杂交的多核苷酸编码的多肽与SEQ IDNO:2所示的成熟多肽有相同的生物学功能和活性。
本发明还涉及与上述的序列杂交的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的长度至少含15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的扩增技术(如PCR)以确定和/或分离编码具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸。
本发明中的多肽和多核苷酸优选以分离的形式提供，更佳地被纯化至均质。
本发明的DNA序列能用几种方法获得。例如，用本领域熟知的杂交技术分离DNA。这些技术包括但不局限于1)用探针与基因组或cDNA文库杂交以检出同源性核苷酸序列，和2)表达文库的抗体筛选以检出具有共同结构特征的克隆的DNA片段。
编码具有抑癌功能的蛋白的特异DNA片段序列产生也能用下列方法获得1)从基因组DNA分离双链DNA序列；2)化学合成DNA序列以获得所需多肽的双链DNA。
上述提到的方法中，分离基因组DNA最不常用。当需要的多肽产物的整个氨基酸序列已知时，DNA序列的直接化学合成是经常选用的方法。如果所需的氨基酸的整个序列不清楚时，DNA序列的直接化学合成是不可能的，选用的方法是cDNA序列的分离。分离感兴趣的cDNA的标准方法是从高表达该基因的供体细胞分离mRNA并进行逆转录，形成质粒或噬菌体cDNA文库。提取mRNA的方法已有多种成熟的技术，试剂盒也可从商业途径获得(Qiagene)。而构建cDNA文库也是通常的方法(Sambrook,et al.,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory.New York,1989)。还可得到商业供应的cDNA文库，如Clontech公司的不同cDNA文库。当结合使用聚合酶反应技术时，即使极少的表达产物也能克隆。
可用常规方法从这些cDNA文库中筛选本发明的基因。这些方法包括(但不限于)(1)DNA-DNA或DNA-RNA杂交；(2)标志基因的功能出现或丧失；(3)测定具有抑癌功能的蛋白的转录本的水平；(4)通过免疫学技术或测定生物学活性，来检测基因表达的蛋白产物。上述方法可单用，也可多种方法联合应用。
在第(1)种方法中，杂交所用的探针是与本发明的多核苷酸的任何一部分同源，其长度至少15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸。此外，探针的长度通常在2kb之内，较佳地为1kb之内。此处所用的探针通常是在本发明的基因DNA序列信息的基础上化学合成的DNA序列。本发明的基因本身或者片段当然可以用作探针。DNA探针的标记可用放射性同位素，荧光素或酶(如碱性磷酸酶)等。
在第(4)种方法中，检测具有抑癌功能的蛋白基因表达的蛋白产物可用免疫学技术如Western印迹法，放射免疫沉淀法，酶联免疫吸附法(ELISA)等。
应用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki,et al.Science 1985；230:1350-1354)被优选用于获得本发明的基因。特别是很难从文库中得到全长的cDNA时，可优选使用RACE法(RACE-cDNA末端快速扩增法)，用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择，并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。
如上所述得到的本发明的基因，或者各种DNA片段等的核苷酸序列的测定可用常规方法如双脱氧链终止法(Sanger et al.PNAS,1977,74:5463-5467)。这类核苷酸序列测定也可用商业测序试剂盒等。为了获得全长的cDNA序列，测序需反复进行。有时需要测定多个克隆的cDNA序列，才能拼接成全长的cDNA序列。
本发明也涉及包含本发明的多核苷酸的载体，以及用本发明的载体或具有抑癌功能的蛋白编码序列经基因工程产生的宿主细胞，以及经重组技术产生本发明所述多肽的方法。
通过常规的重组DNA技术，可利用本发明的多聚核苷酸序列可用来表达或生产重组的具有抑癌功能的蛋白多肽(Science,1984；224:1431)。一般来说有以下步骤
(1)．用本发明的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸(或变异体)，或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞；(2)．在合适的培养基中培养的宿主细胞；(3)．从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。
本发明中，具有抑癌功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。在本发明中适用的载体包括但不限于在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg,et al.Gene,1987,56:125)；在哺乳动物细胞中表达的pMSXND表达载体(Lee and Nathans,J Bio Chem.263:3521,1988)和在昆虫细胞中表达的来源于杆状病毒的载体。总之，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。
本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含具有抑癌功能的人蛋白编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等(Sambroook,et al.Molecular Cloning,a Laboratory Manual,coldSpring Harbor Laboratory.New York,1989)。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上，以指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有大肠杆菌的lac或trp启动子；入噬菌体PL启动子；真核启动子包括CMV立即早期启动子、HSV胸苷激酶启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。
此外，表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP)，或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。
包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体，可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。
宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。
本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时，如果在载体中插入增强子序列时将会使转录得到增强。增强子是DNA的顺式作用因子，通常大约有10到300个碱基对，作用于启动子以增强基因的转录。可举的例子包括在复制起始点晚期一侧的100到270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点晚期一侧的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。
本领域一般技术人员都清楚如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。
用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl2法处理，所用的步骤在本领域众所周知。可供选择的是用MgCl2。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。
获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。
在上面的方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。
重组的具有抑癌功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。这些用途包括(但不限于)直接做为药物治疗具有抑癌功能的蛋白功能低下或丧失所致的疾病，和用于筛选促进或对抗具有抑癌功能的蛋白功能的抗体、多肽或其它配体。例如，抗体可用于激活或抑制具有抑癌功能的人蛋白的功能。用表达的重组具有抑癌功能的人蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能抑制或刺激具有抑癌功能的人蛋白功能的多肽分子。
本发明也提供了筛选药物以鉴定提高(激动剂)或阻遏(拮抗剂)具有抑癌功能的人蛋白的药剂的方法。激动剂提高具有抑癌功能的人蛋白刺激细胞增殖等生物功能，而拮抗剂阻止和治疗与细胞过度增殖有关的紊乱如各种癌症。例如，能在药物的存在下，将哺乳动物细胞或表达具有抑癌功能的人蛋白的膜制剂与标记的具有抑癌功能的人蛋白一起培养。然后测定药物提高或阻遏此相互作用的能力。
具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂包括筛选出的抗体、化合物、受体缺失物和类似物等。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可以与具有抑癌功能的人蛋白结合并消除其功能，或是抑制具有抑癌功能的人蛋白的产生，或是与多肽的活性位点结合使多肽不能发挥生物学功能。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可用于治疗用途。
在筛选作为拮抗剂的化合物时，可以将具有抑癌功能的蛋白加入生物分析测定中，通过测定化合物影响具有抑癌功能的蛋白和其受体之间的相互作用来确定化合物是否是拮抗剂。用上述筛选化合物的同样方法，可以筛选出起拮抗剂作用的受体缺失物和类似物。
本发明的多肽可直接用于疾病治疗，例如，各种恶性肿瘤、和细胞异常增殖等。
本发明的多肽，及其片段、衍生物、类似物或它们的细胞可以用来作为抗原以生产抗体。这些抗体可以是多克隆或单克隆抗体。多克隆抗体可以通过将此多肽直接注射动物的方法得到。制备单克隆抗体的技术包括杂交瘤技术，三瘤技术，人B-细胞杂交瘤技术，EBV-杂交瘤技术等。
可以将本发明的多肽和拮抗剂与合适的药物载体组合后使用。这些载体可以是水、葡萄糖、乙醇、盐类、缓冲液、甘油以及它们的组合。组合物包含安全有效量的多肽或拮抗剂以及不影响药物效果的载体和赋形剂。这些组合物可以作为药物用于疾病治疗。
本发明还提供含有一种或多种容器的药盒或试剂盒，容器中装有一种或多种本发明的药用组合物成分。与这些容器一起，可以有由制造、使用或销售药品或生物制品的政府管理机构所给出的指示性提示，该提示反映出生产、使用或销售的政府管理机构许可其在人体上施用。此外，本发明的多肽可以与其它的治疗化合物结合使用。
药物组合物可以以方便的方式给药，如通过局部、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内或皮内的给药途径。具有抑癌功能的蛋白以有效地治疗和/或预防具体的适应症的量来给药。施用于患者的具有抑癌功能的蛋白的量和剂量范围将取决于许多因素，如给药方式、待治疗者的健康条件和诊断医生的判断。
具有抑癌功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于具有抑癌功能的蛋白的无表达或异常/无活性的具有抑癌功能的蛋白的表达所致的细胞增殖、发育或代谢异常。重组的基因治疗载体(如病毒载体)可设计成表达变异的具有抑癌功能的蛋白，以抑制内源性的具有抑癌功能的蛋白活性。例如，一种变异的具有抑癌功能的蛋白可以是缩短的、缺失了信号传导功能域的具有抑癌功能的蛋白，虽可与下游的底物结合，但缺乏信号传导活性。因此重组的基因治疗载体可用于治疗具有抑癌功能的蛋白表达或活性异常所致的疾病。来源于病毒的表达载体如逆转录病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒、单纯疱疹病毒、细小病毒等可用于将具有抑癌功能的蛋白基因转移至细胞内。构建携带具有抑癌功能的蛋白基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook,et al.)。另外重组具有抑癌功能的人蛋白基因可包装到脂质体中转移至细胞内。
抑制具有抑癌功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酶也在本发明的范围之内。核酶是一种能特异性分解特定RNA的酶样RNA分子，其作用机制是核酶分子与互补的靶RNA特异性杂交后进行核酸内切作用。反义的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技术获得，如固相磷酸酰胺化学合成法合成寡核苷酸的技术已广泛应用。反义RNA分子可通过编码该RNA的DNA序列在体外或体内转录获得。这种DNA序列已整合到载体的RNA聚合酶启动子的下游。为了增加核酸分子的稳定性，可用多种方法对其进行修饰，如增加两侧的序列长度，核糖核苷之间的连接应用磷酸硫酯键或肽键而非磷酸二酯键。
多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括将多聚核苷酸直接注入到体内组织中；或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中，再将细胞移植到体内等。
本发明的多肽还可用作肽谱分析，例如，多肽可用物理的、化学或酶进行特异性切割，并进行一维或二维或三维的凝胶电泳分析。
本发明还提供了针对具有抑癌功能的人蛋白抗原决定簇的抗体。这些抗体包括(但不限于)多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库产生的片段。
抗具有抑癌功能的人蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活检标本中的具有抑癌功能的人蛋白。
与具有抑癌功能的人蛋白结合的单克隆抗体也可用放射性同位素标记，注入体内可跟踪其位置和分布。这种放射性标记的抗体可作为一种非创伤性诊断方法用于肿瘤细胞的定位和判断是否有转移。
本发明中的抗体可用于治疗或预防与具有抑癌功能的人蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以刺激或阻断具有抑癌功能的人蛋白的产生或活性。
抗体也可用于设计针对体内某一特殊部位的免疫毒素。如具有抑癌功能的人蛋白高亲和性的单克隆抗体可与细菌或植物毒素(如白喉毒素，蓖麻蛋白，红豆碱等)共价结合。一种通常的方法是用巯基交联剂如SPDP，攻击抗体的氨基，通过二硫键的交换，将毒素结合于抗体上，这种杂交抗体可用于杀灭具有抑癌功能的人蛋白阳性的细胞。
多克隆抗体的生产可用具有抑癌功能的人蛋白或多肽免疫动物，如家兔，小鼠，大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。
具有抑癌功能的人蛋白单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler and Milstein.Nature,1975,256:495-497)。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术生产(Morrison et al,PNAS,1985,81:6851)。而已有的生产单链抗体的技术(U.S.PatNo.4946778)也可用于生产抗具有抑癌功能的人蛋白的单链抗体。
能与具有抑癌功能的人蛋白结合的多肽分子可通过筛选由各种可能组合的氨基酸结合于固相物组成的随机多肽库而获得。筛选时，必须对具有抑癌功能的人蛋白分子进行标记。
本发明还涉及定量和定位检测具有抑癌功能的人蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的，且包括FISH测定和放射免疫测定。试验中所检测的具有抑癌功能的人蛋白水平，可以用作解释具有抑癌功能的人蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断具有抑癌功能的蛋白起作用的疾病。
具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有抑癌功能的蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面，具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于检测具有抑癌功能的蛋白的表达与否或在疾病状态下具有抑癌功能的蛋白的异常表达。如具有抑癌功能的蛋白DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断具有抑癌功能的蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法，Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术，相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片(又称为“基因芯片”)上，用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用具有抑癌功能的蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测具有抑癌功能的蛋白的转录产物。
检测具有抑癌功能的蛋白基因的突变也可用于诊断具有抑癌功能的蛋白相关的疾病。具有抑癌功能的蛋白突变的形式包括与正常野生型具有抑癌功能的蛋白DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响蛋白的表达，因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。
本发明的序列对染色体鉴定也是有价值的。该序列会特异性地针对某条人染色体具体位置且并可以与其杂交。目前，需要鉴定染色体上的各基因的具体位点。现在，只有很少的基于实际序列数据(重复多态性)的染色体标记物可用于标记染色体位置。根据本发明，为了将这些序列与疾病相关基因相关联，其重要的第一步就是将这些DNA序列定位于染色体上。
简而言之，根据cDNA制备PCR引物(优选15-35bp)，可以将序列定位于染色体上。然后，将这些引物用于PCR筛选含各条人染色体的体细胞杂合细胞。只有那些含有相应于引物的人基因的杂合细胞会产生扩增的片段。
体细胞杂合细胞的PCR定位法，是将DNA定位到具体染色体的快捷方法。使用本发明的的寡核苷酸引物，通过类似方法，可利用一组来自特定染色体的片段或大量基因组克隆而实现亚定位。可用于染色体定位的其它类似策略包括原位杂交、用标记的流式分选的染色体预筛选和杂交预选，从而构建染色体特异的cDNA库。
将cDNA克隆与中期染色体进行荧光原位杂交(FISH)，可以在一个步骤中精确地进行染色体定位。此技术的综述，参见Verma等，Human Chromosomes:a Manual of BasicTechniques,Pergamon Press,New York(1988)。
一旦序列被定位到准确的染色体位置，此序列在染色体上的物理位置就可以与基因图数据相关联。这些数据可见于例如，V.Mckusick,Mendelian Inheritance in Man(可通过与Johns Hopkins University Welch Medical Library联机获得)。然后可通过连锁分析，确定基因与业已定位到染色体区域上的疾病之间的关系。
接着，需要测定患病和未患病个体间的cDNA或基因组序列差异。如果在一些或所有的患病个体中观察到某突变，而该突变在任何正常个体中未观察到，则该突变可能是疾病的病因。比较患病和未患病个体，通常涉及首先寻找染色体中结构的变化，如从染色体水平可见的或用基于cDNA序列的PCR可检测的缺失或易位。根据目前的物理作图和基因定位技术的分辨能力，被精确定位至与疾病有关的染色体区域的cDNA，可以是50至500个潜在致病基因间之一种(假定1兆碱基作图分辨能力和每20kb对应于一个基因)。
本发明的具有抑癌功能的蛋白核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。
一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。
此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。
目前，已经可以完全通过化学合成来编码本发明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中的各种DNA分子(如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。
此外，由于本发明的具有抑癌功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列，因此，与来源于其他物种的同族蛋白相比，预计在施用于人时将具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人体内的免疫原性更低或没有)。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1cDNA基因的获得及对癌细胞克隆形成的抑制作用SP1224来自于从GIBCO BRL公司购得的肝cDNA文库(cat,No.10422-012),PP265,PP384,PP432,PP552,PP591,PP603,PP632,PP844,PP928,PP1200,PP1226,PP1292,PP1396,PP1563和PP1746是通过用常规方法构建人胎盘cDNA文库获得的。取3、6、10月龄的胎盘组织，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-script TMXR cDNA文库构建试剂盒(Stratagene公司)构建上述mRNA的cDNA文库。其中反转录酶改用MMLV-RT-SuperscriptⅡ(GIBCO BRL)，反转录反应在42℃进行。转化XL10-Gold感受细胞，获得了1×106cfu/μg cDNA滴度的cDNA文库。第一轮随机挑取cDNA克隆，其后以高丰度cDNA克隆和已证明有抑癌细胞生长功能的cDNA克隆为探针，杂交筛选cDNA文库，挑取弱阳性及阴性克隆。用Qiagen 96孔板质粒抽提试剂盒，按厂家说明书进行质粒DNA的提取。质粒DNA和空载体同时转染肝癌细胞系7721。100ngDNA酒精沉淀干燥后，加6μl H2O溶解，待转染。每份DNA样品中加0.74μl脂质体及9.3μl无血清培液，混匀后，室温放置10分钟。每管中加150μl无血清培液，均分加入3孔生长于96孔板的7721细胞中，37℃放置2小时，每孔再加50μl无血清培液，37℃24小时。每孔换100μl全培液，37℃24小时，换含G418的全培液100μl,37℃24～48小时，边观察，边换G418浓度不等的培液。约2～3次后，直到镜检细胞有克隆形成，计数。发现上述克隆有抑制细胞克隆形成作用，结果如下表所示。
cDNA克隆转染细胞(7721)克隆形成情况
对cDNA克隆采用双脱氧终止法，在ABI377 DNA自动测序仪上测定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后，确定为新基因克隆，进行另一端测序，仍未获得全长cDNA序列，设计引物，再次进行测序，直到获得全长序列(SEQ ID NO:1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46)。
实施例2从胎盘cDNA中PCR获得基因克隆取3、6、10月龄的胎盘组织，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-SuperscriptⅡ(GIBCO BRL)反转录酶在42℃进行反转录反应，获得胎盘cDNA。利用各个基因的转异引物(如下表所示)，按90℃3分钟1个循环94℃30秒，60℃30秒，72℃1分钟，共35个循环；72℃10分钟，1个循环进行PCR扩增，获得含有完整开放阅读框序列的各蛋白基因的扩增产物。扩增产物经测序验证，与实施例1测得的序列相符，随后用常规技术将扩增产物转入宿主细胞，以获得重组蛋白。
基因特异引物
实施例3cDNA克隆序列分析1．SP1224A核苷酸序列(SEQ ID NO:1)长度2492bp1 CCCACGCGTC CGGGAATCCA GTCCGGGGGC CGAGCTGGCT GCGCCCTCCG51 CCAAGCGCCG GCAGCGCGGG GCGAGCTCCG GACGGCGCGC GGCCCAGGCA101 GCGGCTCCCG CTCGGCCCGC CCTCCGAGCC GCAGGGGCCG CCACCGCCGC151 GGCGCCTCCC CTGGCGACCG CGCCCCCGGG CCCCGGCTCC GGCCCGGGAC201 GGAGGAGCCG GCGCTCGACA CAGAGAGCTC TTCAGAAACC AGGCTGCTTT251 CAGGAACATT GCTGTGGATT CCCAGGGCCT ATTCCACTAG AAGCAAGATG301 GCTGAACTCA ATACTCATGT GAATGTCAAG GAAAAGATCT ATGCAGTTAG351 ATCAGTTGTT CCCAACAAAA GCAATAATGA AATAGTCCTG GTGCTCCAAC401 AGTTTGATTT TAATGTGGAT AAAGCCGTGC AAGCCTTTGT GGATGGCAGT451 GCAATTCAAG TTCTAAAAGA ATGGAATATG ACAGGAAAAA AGAAGAACAA501 TAAAAGAAAA AGAAGCAAGT CCAAGCAGCA TCAAGGCAAC AAAGATGCTA551 AAGACAAGGT GGAGAGGCCT TGAGGCAGGG CCCCTGCAGC CGCAGCCACC601 ACAGATTCAA AACGGCCCCA TGAATGGCTG CGAGAAGGAC AGCTCGTCCA651 CAGATTCTGC TAACGAAAAA CCAGCCCTTA TCCCTCGTGA GAAAAAGATC701 TCGATACTTG AGGAACCTTC AAAGGCACTT CGTGGGGTCA CAGAAGGCAA751 CAGACTACTG CAACAGAAAC TATCCTTAGA TGGGAACCCC AAACCTATAC801 ATGGAACAAC AGAGAGGTCA 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MLKTRWRGLE AGPLQPQPPQ IQNGPMNGCE KDSSSTDSAN EKPALIPREK51 KISILEEPSK ALRGVTEGNR LLQQKLSLDG NPKPIHGTTE RSDGLQWSAE101 QPCNPSKPKA KTSPVKSNTP AAHLEIKPDE LAKKRGPNIE KSVKDLQRCT151 VSLTRYRVMI KEEVDSSVKK IKAAFAELHN CIIDKEVSLM AEMDKVKEEA201 MEILTARQKK AEELKRLTDL ASQMAEMQLA ELRAEIKHFV SERKYDEELG251 KAARFSCDIE QLKAQIMLCG EITHPKNNYS SRTPCSSLLP LLNAHAATSG301 KQSNFSRKSS THNKPSEGKA ANPKMVSSLP STADPSHQTM PANKQNGSSN351 QRRRFNPQYH NNRLNGPAKS QGSGNEAEPL GKGNSRHEHR RQPHNGFRPK401 NKGGAKNQEA SLGMKTPEAP AHSEKPRRRQ HAADTSEARP FRGSVGRVSQ451 CNLCPTRIEV STDAAVLSVP AVTLVAC核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:3)克隆号和蛋白名称SP1224起始编码子545 ATG终止编码子1975 TGA蛋白质分子量52451.741C CCA CGC GTC CGG GAA TCC AGT CCG GGG GCC GAG CTG GCT GCG CCC 4647 TCC GCC AAG CGC CGG CAG CGC GGG GCG AGC TCC GGA CGG CGC GCG GCC 9495 CAG GCA GCG GCT CCC GCT CGG CCC GCC CTC CGA GCC GCA GGG GCC GCC 142143 ACC GCC GCG GCG CCT CCC CTG GCG ACC GCG CCC CCG GGC CCC GGC TCC 190191 GGC CCG GGA CGG AGG AGC CGG CGC TCG ACA CAG AGA GCT CTT CAG AAA 238239 CCA GGC TGC TTT CAG GAA 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abcl protein homolog precursor.12/1998长度=610分值=161 bits(404)，预计值=3e-39相同性=78/158(49％)，相似性=105/158(66％)，缺口=2/158(1％)Query:1 MQTDPNWSNFFYDPQQHKVALLDFGATREYDRSFTDLYIQIIRAAADRDRETVRAKSIEM 60MQTDPNWSNF Y+ + K +LLDFGA+EYD F Y +++ AAA R+RE + S+E+Sbjct:451 MQTDPNWSNFLYNGKTKKIELLDFGASIEYDEKFIKKYCRLLLAAAHRNREKCKKLSVEL 510Query:61 KFLTGYEVKVMEDAHLDAILILGEAFASDEP--FDFGTQSTTEKIHNLIPVMLRHRLVPP 118+L +E M DAH+++I L E FA D P +DFG Q+ T ++ IPVML RL PPSbjct:511 GYLNNHESAQMIDAHINSIFTLAEPFAFDAPDVYDFGDQTITARVKQQIPVMLDLRLQPP 570Query:119 PEETYSLHRKMGGSFLICSKLKARFPCKAMFEEAYSNY 156PEETYSLHR++ G FL+C+KL A+ CK +F +YSbjct:571 PEETYSLHRRLSGHFLLCAKLGAKVRCKELFSGMLKHY 6083．PP384A核苷酸序列(SEQ ID NO:7)长度2357bp1 CAAAGGGCTG TTGCTGACAG TTAATACCAG TAGTCAGAAT GGGAAGGCCT51 GGAAGAACAC TTATTAAAGA AATCCAGAGT CCTCTGTCTA GTATCTGTGA101 TGGCTCCATA GCTCTAGATG CTGAGCCTGT TACCCAGCCA GCATCGCTGC151 CCAGACACAG CAGCACACCA GACCACACCA GCACACTGGA GCCTCCTCGT201 TTGCCTCAAA GAAAGAACTT ACAAAGTGAA AAGGAAACTT ATCAGCTGTC251 TAAGGAAGTG GAAATTTTAT 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LP + + + Y Q+ K+++ILS +L+C + L ++NSbjct:522 TTRMLPSGEIVGFDLHLYAQVRKKLQILSESLIAYPNCTTVLMQLIYN 5694．PP432A核苷酸序列(SEQ ID NO:10)长度1615bp1 GGCGCGCCCG CTCCCAAGTC GGCTTCCTCC CCGCCGGGGC CGCTTTGCCT51 CGGGTCTCCC CATTCTCCAG GTCCCCTGAA CTGCACAGTC GGAGGCCGTG101 GGCGGCGGGC TCTGCCTCCG CCGAGGGACA GCCGGATCGC CCCTCTGCTT151 CCCGCAACTG CCCTGATCAC CCCCCGTCCC AGCCCTTGAG TGAACGTCCT201 TCTGAGCGGC TTCCTGGGGT CCTCCCCACG TCCCAAAGGC CGGCAAGATG251 GTGTCCTGGA TGATCTGTCG CCTGGTGGTG CTGGTGTTTG GGATGCTGTG301 TCCAGCTTAT GCTTCCTATA AGGCTGTGAA GACCAAGAAC ATTCGTGAAT351 ATGTGCGGTG GATGATGTAC TGGATTGTTT TTGCACTCTT CATGGCAGCA401 GAGATCGTTA CAGACATTTT TATCTCCTGG TTCCCTTTCT ACTATGAGAT451 CAAGATGGCC TTCGTGCTGT GGCTGCTCTC ACCCTACACC AAGGGCGCCA501 GCCTGCTTTA CCGCAAGTTT GTCCACCCGT CCCTGTCCCG CCATGAGAAG551 GAGATCGACG CGTACATCGT GCAGGCCAAG GAGCGCAGCT ACGAGACCGT601 GCTCAGCTTC GGGAAGCGGG GCCTCAACAT TGCCGCCTCC GCTGCTGTGC651 AGGCTGCCAC CAAGAGTCAG GGGGCGCTGG CCGGCAGGCT GCAGAGCTTC701 TCCATGCAGG ACCTGCGCTC CATCTCTGAC GCACCTGCCC 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AAA GGT AAT GAT AAA AAA AAA AAA AAA AAA1854DBlastp结果Query=PP632AA(107个氨基酸)＞SP_IN:045021 045021 caenorhabditis elegans.zc123.1 protein.
11/1998长度=768分值=35.6 bits(80)，预计值=0.16相同性=19/50(38％)，相似性=21/50(42％)，缺口=8/50(16％)Query:5 PWSTCPPHPLPSCLTACCSPAHQPVRGSAQPPASDLCTCVTCCSGPHPNY54P + CPP P P CC PA P PA+ CCC G P YSbjct:106 PLACCPPPPPPK---PCCQPAFGPCC-----PATPNCCPKPCCRGRRPEY 147＞SP_IN:Q17982 Q17982 caenorhabditis elegans.similarity to erbb-3receptor protein-tyrosine kinase.11/1998长度=654分值=31.7 bits(70)，预计值=2.3相同性=24/99(24％)，相似性=32/99(32％)，缺口=15/99(15％)Query:7 STCPPHPLPSCLTACCSPAHQPVRGS------------AQPPASDLCTCVTCCSGPHPNY 54S+C PSC+ C+PA QP S QPP SC + CPSbjct:352 SSCMPACQSSCVQQACAPACQPKCSSQCVEQQQAQIVVVQPPTSSSNNCASSCM---PQC 408Query:55 PPAHLLPTSSXXXXXXXXXXXXXXXXVDCFSALLSACET 93P + + C A L +CE+Sbjct:409 TPQCVQQQTICAAACQPSCQSSCSSNAQCVQACLPSCES 447＞PIR2:A60533 tumor-associated antigen DF3-human长度=256分值=30.5 bits(67)，预计值=5.2相同性=19/56(33％)，相似性=25/56(43％)，缺口=7/56(12％)Query:4 SPWSTCPP-HPLPSCLTACCSPAHQPVRGSAQPPASDLCTCVTCCSGPHPNYPPAH 58+P ST PP H + S +P +P GS PPA + + PPPAHSbjct:130 APGSTAPPAHRVTS----APESRPAPGSTAPPAHRVTSAPESRPAPGSTAPPAH 1799．PP844A核苷酸序列(SEQ ID NO:25)长度1843bp1 TGAAGGCCGA TGCTGTGGGG GTGGGCGTGG AGAGAATTCT TCTGTGGGTC51 CTCTGGTGTT GAGTGGTCGG CTTGGTGTGG TGTGCGGAGG AGCTCCAGGC101 CCGTCGGCGC GGAGGGTCTT GCTGTGTTGC CCAGCCTGGT CTTGAATTCC151 TGGACTCAAG TGATGCTCCT GCCTTGGCTT CCCAAACTCC TGGAATTACA201 ACTTGGTCTC ACGTGTGAAA CATGGCTACA GATTGGCTGG GAAGTATTGT251 GTCCATCAAT TGTGGAGATA GCTTGGGTGT CTATCAGGGA AGAGTGTCAG301 CTGTGGATCA GGTCAGCCAG ACCATTTCTC TCACCCGGCC TTTCCATAAT351 GGAGTGAAGT GTCTTGTTCC AGAAGTCACC TTCAGGGCAG GTGACATTAC401 GGAGTTAAAA ATTCTGGAGA TACCAGGACC TGGAGACAAC CAACATTTTG451 GAGACCTTCA TCAAACAGAA TTAGGCCCCT CTGGTGCTGG CTGCCAAGTG501 GGCATCAATC AGAATGGCAC AGGCAAGTTT GTCAAGAAGC CAGCCTCTTC551 CAGCAGTGCC CCTCAGAATA TCCCTAAGAG GACAGATGTG AAGAGCCAGG601 ATGTTGCCGT TTCCCCGCAG CAGCAACAGT GCTCAAAGAG CTATGTCGAC651 AGGCACATGG AATCCTTGAG TCAGTCCAAA AGTTTCCGTC GTCGGCACAA701 CTCCTGGTCA TCTAGTAGCA GGCACCCAAA TCAGGCAACT CCCAAGAAAA751 GTGGTTTAAA GAATGGCCAG ATGAAGAATA AAGATGACGA GTGCTTCGGG801 GATGATATTG AGGAGATCCC AGACACAGAT 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TGT GCG GAG GAG CTC 9596 CAG GCC CGT CGG CGC GGA GGG TCT TGC TGT GTT GCC CAG CCT GGT CTT 143144 GAA TTC CTG GAC TCA AGT GAT GCT CCT GCC TTG GCT TCC CAA ACT CCT 191192 GGA ATT ACA ACT TGG TCT CAC GTG TGA AAC ATG GCT ACA GAT TGG CTG 2391 Met Ala Thr Asp Trp Leu 6240 GGA AGT ATT GTG TCC ATC AAT TGT GGA GAT AGC TTG GGT GTC TAT CAG 2877 Gly Ser Ile Val Ser Ile Asn Cys Gly Asp Ser Leu Gly Val Tyr Gln 22288 GGA AGA GTG TCA GCT GTG GAT CAG GTC AGC CAG ACC ATT TCT CTC ACC 33523 Gly Arg Val Ser Ala Val Asp Gln Val Ser Gln Thr Ile Ser Leu Thr 38336 CGG CCT TTC CAT AAT GGA GTG AAG TGT CTT GTT CCA GAA GTC ACC TTC 38339 Arg Pro Phe His Asn Gly Val Lys Cys Leu Val Pro Glu Val Thr Phe 54384 AGG GCA GGT GAC ATT ACG GAG TTA AAA ATT CTG GAG ATA CCA GGA CCT 43155 Arg Ala Gly Asp Ile Thr Glu Leu Lys Ile Leu Glu Ile Pro Gly Pro 70432 GGA GAC AAC CAA CAT TTT GGA GAC CTT CAT CAA ACA GAA TTA GGC CCC 47971 Gly Asp Asn Gln His Phe Gly Asp Leu His Gln Thr Glu Leu Gly Pro 86480 TCT GGT GCT GGC TGC CAA GTG GGC ATC AAT CAG AAT GGC ACA GGC AAG 52787 Ser Gly Ala Gly Cys Gln Val Gly Ile Asn Gln Asn Gly Thr Gly Lys 102528 TTT GTC AAG AAG CCA GCC TCT TCC AGC AGT GCC CCT CAG AAT ATC CCT 575103 Phe Val Lys Lys Pro Ala Ser Ser Ser Ser Ala Pro Gln Asn Ile Pro 118576 AAG AGG ACA GAT GTG AAG AGC CAG GAT GTT GCC GTT TCC CCG CAG CAG 623119 Lys Arg Thr Asp Val Lys Ser Gln Asp Val Ala Val Ser Pro Gln Gln 134624 CAA CAG TGC TCA AAG AGC TAT GTC GAC AGG CAC ATG GAA TCC TTG AGT 671135 Gln Gln Cys Ser Lys Ser Tyr Val Asp Arg His Met Glu Ser Leu Ser 150672 CAG TCC AAA AGT TTC CGT CGT CGG CAC AAC TCC TGG TCA TCT AGT AGC 719151 Gln Ser Lys Ser Phe Arg Arg Arg His Asn Ser Trp Ser Ser Ser Ser 166720 AGG CAC CCA AAT CAG GCA ACT CCC AAG AAA AGT GGT TTA AAG AAT GGC 767167 Arg His Pro Asn Gln Ala Thr Pro Lys Lys Ser Gly Leu Lys Asn Gly 182768 CAG ATG AAG AAT AAA GAT GAC GAG TGC FTC GGG GAT GAT ATT GAG GAG 815183 Gln Met Lys Asn Lys Asp Asp Glu Cys Phe Gly Asp Asp Ile Glu Glu 198816 ATC CCA GAC ACA GAT TTT GAT TTT GAA GGG AAC 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hypothetical 49.2 kd protein.5/1999长度=454分值=77.6 bits(188)，预计值=2e-13相同性=80/347(23％)，相似性=138/347(39％)，缺口=63/347(18％)Query:201 DTDFDFEGNLALFDKAAVFEEIDTYERRSGTRSRGIPNERPTR-YRHDENILE--------252D +FDF NL FDK VF E+++ + N+ P R Y H +N+LSbjct:96 DEEFDFAANLEKFDKKQVFAEFREKDKKDPAKLLVSHNKSPNRNYHHKQNVLGPSVKDEF 155Query:253---------------------------------SEPIVYRRIIVPHNVSKEFCTDSGLVVP 280S + ++ V N+ E T +G ++Sbjct:156 VDLPSAGSQINGIDAVLSSSSNGHVTPGSKKGSRETLKKKPFVDENIPAELHTTTGDILK 215Query:281 SISYELHKKLLSVAEKHGLTLERRLEMTGVCASQMALTLLGGPNRLNPKNVHQRPTVALL 340I+ E + +++A T + +E SQ ++LGG RL+ +N + +P V +LSbjct:216 PITPEQLSQGIALAIAKTST-DIVVENAAQLLSQFVFSVLGGHKRLSSRNHNSQPLVCIL 274Query:341 CGPHVKGAQGISCGRHLANHDVQVILFLPNFVKMLESITNELSLFSKTQG----QQVSSL 396G H + ++ GR L++V+L L ++L +FG+Sbjct:275 VGSHDHASAAVAAGRRLCAIGIKVVLRL---LTPFNVDNRQLLMFQAAGGYIPTENFDQF 331Query:397 KDLPTSPVDLVINCLDCPENVFLRDQPWYKAAVAWANQNRAPVLSIDPP----VHEVEQG 452+ TSP++LV++ L++ A + WAN +LS+D PV +Sbjct:332 LNKLTSPIELVVDVLTGFHPSIDKNS---HALIQWANDLNVLILSVDIPSGYTVQKKNTA 388Query:453 IDAKWSLALGLPLPLGEHAG--------RIYLCDIGIPQQVFQEVGI 491I KW+LALGA +++ ++G Q + E+GISbjct:389 ILPKWTLALGAVTTTLAQAALVKQAAGVSVFVGNLGTGSQTWAELGI 435＞SW:YNUO YEAST P40165 saccharomyces cerevisiae(baker＇s yeast).
hypothetical 27.5 kd protein in spx19-gcr2 intergenicregion.7/1998长度=246分值=35.6 bits(80)，预计值=1.0相同性=51/212(24％)，相似性=89/212(41％)，缺口=28/212(13％)Query:277 LVVPSISYELHKKLLSVAEKHGLTLERRLEMTGVCASQMALTLLGGPNRLNPKNVHQRPT 336+V ++ E+ K+L++ G TL++ +E +G +QP R +Sbjct:6 VVSSKLAAEIDKELMG--PQIGFTLQQLMELAGFSVAQAVCRQF--PLR-GKTETEKGKH 60Query:337 VALLCGPHVKGAQGISCGRHLANHDVQVILFLP------NFVKMLESITN--ELSLFSKT 388V ++ GP G G+ C RHL ++F P F K LN ++ + S+Sbjct:61 VFVIAGPGNNGGDGLVCARHLKLFGYNPVVFYPKRSERTEFYKQLVHQLNFFKVPVLSQD 120Query:389 QGQQVSSLKDLPT-SPVDLVINCLDCPENVFLRDQPWYKAAV--AWANQNRAPVLSIDPP 445+G + LK T VD + P+R+ +K V QN P++S+D PSbjct:121 EGNWLEYLKPEKTLCIVDAIFGFSFKPP---MREP--FKGIVEELCKVQNIIPIVSVDVP 175Query:446 V-HEVEQG------IDAKWSLALGLPLPLGEH 470+V++G I+++L +P P HSbjct:176 TGWDVDKGPISQPSINPAVLVSLTVPKPCSSH 207＞SP IN:P91255 P91255 caenorhabditis elegans.f12f3.2 protein.5/1999长度=2783分值=35.2 bits(79)，预计值=1.3相同性=25/92(27％)，相似性=39/92(42％)，缺口=8/92(8％)Query:48 LVPEVTFRAGDITELKILEIPGPGDNQHFGDLHQTELGPSGAGCQVGINQNGTGKFVKKP 107+VP++ IL ++N F L +ELG + A CQV I KPSbjct:1536 IVPDEKIDVATTSTSSILNLKSQEENGTFNCLIENELGQASASCQVTI--------FNKP 1587Query:108 ASSSSAPQNIPKRTDVKSQDVAVSPQQQQCSK 139AS S P + +R V + A++ + Q +Sbjct:1588 ASLQSTPDHSLERNLVPTLQKALNNESAQAGQ 1619＞SP_IN:Q21740 Q21740 caenorhabditis elegans.r05d11.8 protein.
1/1999长度=566分值=34.4 bits(77)，预计值=2.3相同性=31/138(22％)，相似性=64/138(45％)，缺口=13/138(9％)Query:6 LGSIVSINCGDSLGVYQGRVSAVDQVSQTISLTRPFHNGV---KCLVPEVTFRAGDITEL 62+GS++SD VYQG+++ D + +++ NG+ +C T + DI +LSbjct:6 IGSVISTETKDG-NVYQGKLTTYDTNNGNLTMANVIKNGLPLHRCF----TLSSSDISRL 60Query:63 KILEIPGPGDNQHFGDLHQTELGPSGAGCQVGINQNGTGKFVKKPASSSSAPQNIPKRTD 122K+ I G + + +Q + ++ V +++SS+ ++P +Sbjct:61 KV--IRGATQSTQKSQPLPVQNSSNSVNKQRPIKKSAEST-VSSTSTASSSASSVPDSS- 116Query:123 VKSQDVAVSPQQQQCSKS 140+++ VAVSPQ++SSbjct:117 -RNRSVAVSPQKSAKGRS 13310．PP928A核苷酸序列(SEQ ID NO:28)长度1964bp1 GTCCAGCCCA GCCACTCACC CACCGAGAAC AGCAAAGGCC AAAGCCCACC51 CTCGAAGGAT GGGAGTGGTG ACTACCAGTC TCGTGGGCTG GTAAAGGCCC101 CTGGCAAGAG CTCGTTCACG ATGTTTGTGG ATCTAGGGAT CTACCAGCCT151 GGAGGCAGTG GGGACAGCAT CCCCATCACA GCCCTAGTGG GTGGAGAGGG201 CACTCGGCTC GACCAGCTGC AGTACGACGT GAGGAAGGGT TCTGTGGTCA251 ACGTGAATCC CACCAACACC CGGCCCACAG TGAGACCCCT GAGATCCGGA301 AGTACAAGAA GCGATTCAAC TCCGAGATCC TCTGTGCAGC CCTTTGGGGG351 GTCAACCTGC TGGTGGGCAC GGAGAACGGC 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VIALKSSVEV101 YAWAPKPYHK FMAFKSFADL PHRPLLVDLT VEEGQRLKVI YGSSAGFHAV151 DVDSGNSYDI YIPVHIQSQI TPHAIIFLPN TDGMEMLLCY EDEGVYVNTY201 GRIIKDVVLQ WGEMPTSVAY ICSNQIMGWG EKAIEIRSVE TGHLDGVFMH251 KRAQRLKFLC ERNDKVFFAS VRSGGSSQVY FMTLNRNCIM NWC核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:30)克隆号和蛋白名称PP928起始编码子383 ATG终止编码子1261 TGA蛋白质分子量33572.241G TCC AGC CCA GCC ACT CAC CCA CCG AGA ACA GCA AAG GCC AAA GCC 4647 CAC CCT CGA AGG ATG GGA GTG GTG ACT ACC AGT CTC GTG GGC TGG TAA 9495 AGG CCC CTG GCA AGA GCT CGT TCA CGA TGT TTG TGG ATC TAG GGA TCT 142143 ACC AGC CTG GAG GCA GTG GGG ACA GCA TCC CCA TCA CAG CCC TAG TGG 190191 GTG GAG AGG GCA CTC GGC TCG ACC AGC TGC AGT ACG ACG TGA GGA AGG 238239 GTT CTG TGG TCA ACG TGA ATC CCA CCA ACA CCC GGC CCA CAG TGA GAC 286287 CCC TGA GAT CCG GAA GTA CAA GAA GCG ATT CAA CTC CGA GAT CCT CTG 334335 TGC AGC CCT TTG GGG GGT CAA CCT GCT GGT GGG CAC GGA GAA CGG CTG 382383 ATG TTG CTG GAC CGA AGT GGG CAA GGC AAG GTG TAT GGA CTC ATT GGG 4301 Met Leu Leu Asp Arg Ser Gly Gln Gly Lys Val Tyr Gly Leu Ile Gly 16431 CGG CGA CGC TTC CAG CAG ATG GAT GTG CTG GAG GGG CTC AAC CTG CFC 47817 Arg Arg Arg Phe Gln Gln Met Asp Val Leu Glu Gly Leu Asn Leu Leu 32479 ATC ACC ATC TCA GGG AAA AGG AAC AAA CTG CGG GTG TAT TAC CTG TCC 52633 Ile Thr Ile Ser Gly Lys Arg Asn Lys Leu Arg Val Tyr Tyr Leu Ser 48527 TGG CTC CGG AAC AAG ATT CTG CAC AAT GAC CCA GAA GTG GAG AAG AAG 57449 Trp Leu Arg Asn Lys Ile Leu His Asn Asp Pro Glu Val Glu Lys Lys 64575 CAG GGC TGG ACC ACC GTG GGG GAC ATG GAG GGC TGC GGG CAC TAC CGT 62265 Gln Gly Trp Thr Thr Val Gly Asp Met Glu Gly Cys Gly His Tyr Arg 80623 GTT GTG AAA TAC GAG CGG ATT AAG TTC CTG GTC ATC GCC CTC AAG AGC 67081 Val Val Lys Tyr Glu Arg Ile Lys Phe Leu Val Ile Ala Leu Lys Ser 96671 TCC GTG GAG GTG TAT GCC TGG GCC CCC AAA CCC TAC CAC AAA TTC ATG 71897 Ser Val Glu Val Tyr Ala Trp Ala Pro Lys Pro Tyr His Lys Phe Met 112719 GCC TTC AAG TCC TTT GCC GAC CTC CCC CAC CGC CCT CTG CTG GTC GAC 766113 Ala Phe Lys Ser Phe Ala Asp Leu Pro His Arg Pro Leu Leu Val Asp 128767 CTG 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ATG GAG TTT CAC TCT TTT CGC CTA GGC 95869 Phe Phe Phe Phe Phe Phe Glu Met Glu Phe His Ser Phe Arg Leu Gly 84959 TGG AGT GCA GTG GCG CAC TCT CCA CTC ACT GCA ACC TCC TCC TCC TGG100685 Trp Ser Ala Val Ala His Ser Pro Leu Thr Ala Thr Ser Ser Ser Trp 1001007 GTT CTA GCG ATT CTC CTG CCT CAG CCT CCC TAG TAG CTG GGA TTA CAG1054101 Val Leu Ala Ile Leu Leu Pro Gln Pro Pro *** 1111055 GCG TAC TCC ACC ATG CCC AAC TTA ATT TCT TTG TAT CTT TAG TAG AGA11021103 CGG GGT TTC GCC CTG TTG GCC AAG CTG GTC CCA AAC TCC TGA TCG CAG11501151 GTG ATC CGT CCA CCT CAG CCT CCC AAA GTG CTG GGA TTA CAG GCA CGA11981199GCC ACA GCT CCT GGC CTA AAG TTG TTT TGA TAT TGG ACA ATG CCC CTG 12461247GCC ACC CAG AAC CTC ATG AGT TCA GCA CTG AAG GCG TCG AAG TGA TAA 12941295ATG CTT GCT CCC AGA GAA GCA TCT CTA ATT CAG CCT CTA GGT CAG GGG 13421343TCG TAA AGA CCT TTC AGG CTC ATT ACA CAT GGT ACT CTT TGG AAA AGA 13901391TTG TCA GTG CTA TGG AAG AGA ACC CCA ATA GAG GGA ACA TCA TAT CAT 14381439TGA AGA TAC CAT TAT TGT TTA GAA AAA GAT GTG AAA GCT CTC AAG CCT 14861487GAA ACA ACA AAT TTT TGC AGG AGA AAA CTC CAG ATG TTG TGT GAC TTC 15341535ACA GGA TGG AAA TCA TGA TAG AGA TTG TGG ATA TGG CAA GAA AGG TTG 15821583GGG GTT AAG GAT TTC AAG ATA GGG ATC TTG GAG ATA TTC AGG AGC TAA 16301631TAG ACA CCA AAC CAG AAG AAT TAA CAG AAG ATG ACT TGA TGG AGA TGA 16781679CTG CTT CCA AAC CAC TGC CAG ACA GTG AGG AAG AAG ACA TAG AAA AAG 17261727AGA AAA AGC GTG CAA GAA AAC AGA TTG ACA CTA GAC AGT CTG ACA GAA 17741775GGG GTC TGA TTA TTC AAG ACT GCT TTT CAC TTC GTT TGC AAC GTG GAC 18221823CGT TTG GTG ATA TGA GAA CTG AAA CTA AAG CAA ATG GTG GAA GAA GGA 18701871TTG GTA CCA TAT GGA AAC AAT TTA GAG AAC AAA AAA GCA GAA AAG TCA 19181919GAA ATT ACA TTG TAT TTC CAT AAA GTT ACA CCA AGT ATG CCT GCC TCT 19661967CCA GCC TCC CCT TTT ACC TTC TCC ACC TCT GCT AAC CCT GAG ACA GCA 20142015AGA CCA ACC CCT CTT CTA CCT ATT CAA TGT AAA GAC AAG GAT GAA GAC 20622063TTT TAT GAT GAT CGA CTT TCA CTT AAT GAA TAG TAA ATA TAT TTT CTC 21102111TTC CTT GTG ATT TTC TGA AAA AAA AAA AAA 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GCC TAA GAC TGG TCC CAG TTC GGT TCT CTC CCA CAG CCA GAG CTG GTG 623624 GAA CGT CTC ATT GCT GTA GAT ATC AGC CCA GTG GAA AGC ACA GGT GTC 671672 TCC CAC TTT GCA ACC TAT GTG GCA GCC ATG AGG GCC ATC AAC ATC GCA 7191 Met Arg Ala Ile Asn Ile Ala 7720 GAT GAG CTG CCC CGC TCC CGT GCC CGA AAA CTG GCG GAT GAA CAG CTC 7678 Asp Glu Leu Pro Arg Ser Arg Ala Arg Lys Leu Ala Asp Glu Gln Leu 23768 AGT TCT GTC ATC CAG GAC ATG GCC GTG CGG CAG CAC CTG CTC ACT AAC 81524 Ser Ser Val Ile Gln Asp Met Ala Val Arg Gln His Leu Leu Thr Asn 39816 CTG GTA GAG GTA GAC GGG CGC TTC GTG TGG AGG GTG AAC TTG GAT GCC 86340 Leu Val Glu Val Asp Gly Arg Phe Val Trp Arg Val Asn Leu Asp Ala 55864 CTG ACC CAG CAC CTA GAC AAG ATC TTG GCT TTC CCA CAG AGG CAG GAG 91156 Leu Thr Gln His Leu Asp Lys Ile Leu Ala Phe Pro Gln Arg Gln Glu 71912 TCC TAC CTC GGG CCA ACA CTC TTT CTC CTT GGT GGA AAC TCC CAG TTC 95972 Ser Tyr Leu Gly Pro Thr Leu Phe Leu Leu Gly Gly Asn Ser Gln Phe 87960 GTG CAT CCC AGC CAC CAC CCT GAG ATT ATG CGG CTC TTC CCT CGG GCC100788 Val His Pro Ser His His Pro Glu Ile Met Arg Leu Phe Pro Arg Ala 1031008 CAG ATG CAG ACG GTG CCG AAC GCT GGC CAC TGG ATC CAC GCT GAC CGC1055104 Gln Met Gln Thr Val Pro Asn Ala Gly His Trp Ile His Ala Asp Arg 1191056 CCA CAG GAC TTC ATA GCT GCC ATC CGA GGC TTC CTG GTC TAA GAG TTG1103120 Pro Gln Asp Phe Ile Ala Ala Ile Arg Gly Phe Leu Val *** 1331104 CTG GCA AGA AGA TGG CCG GGC GTG GTG GCT CAT GCC TGT AAT TCC AGC11511152 ACT TTG GGA GGC TAA GGC GGG AGG ATG ACT TGA GGC CAG GAG TTG GAG11991200 ACC AGC CTG GCC AAC ATG GTG AAA CCC TGT CTC TAC TAA AAA TAC AAA12471248 AAT TAG CCT GGC GTG GTG GTG CAC ACC TGT AAT CCC AGC TAC TCT GGA12951296 GGC TGA GGC AGG AGA ATC ACT TGA ACC CTG GAG GCA GAG GTT GCA ATG13431344 AGC CGA GAT CAC ACC ACT ACA CTC CAG CCT AGG CAA CAG AGC AAG ACT13911392 CTG TCT CAA AAA AAA CAA AAC AAA AAG GAG GCA CAA AAC CCC AGG CTT14391440 CAA GTC TCT GCA GCC TGC TCC ACA TTT GGG CAC AGA AGG ACT CAG ACA14871488 GGC ACT GTG TGG GCA CGA GGT TTT ACA GGG GTG GTC AGA CCT CAG 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putative abhydrolase.5/1999长度=270分值=61.3 bits(146)，预计值=3e-09相同性=36/118(30％)，相似性=65/118(54％)，缺口=6/118(5％)Query:19 ADEQLSSVIQDMAVRQHLLTNLVEVDGR---FVWRVNLDALTQHLDKILAFPQRQES--Y 73AD+ +S+V +D+ VR LL+NL+F +RV++ +++ L I FP YSbjct:152 ADKMMSTVEKDILVRSFLLSNLKKDSNNSNTFKFRVPIELISKSLKTIEGFPASLNDLVY 211Query:74 LGPTLFLLGGNSQFVHPSHHPEIMRLFPRAQMQTVPNAGHWIHADRPQDFIAAIRGFL 131PTL+ + F+ S P + FP+ ++ ++ + GHW+H ++P++F +I FLSbjct:212 DSPTLVIRALKAPFIPDSALPVFKKFFPKYELVSL-DCGHWVHFEKPKEFSESIINFL 268＞SW:YGlL_YEAST P53219 saccharomyces cerevisiae(baker＇s yeast).
hypothetical 38.5 kd protein in ervl-gls2 intergenicregion.11/1997长度=342分值=45.7 bits(106)，预计值=2e-04相同性=42/132(31％)，相似性=66/132(49％)，缺口=15/132(11％)Query:14 RARKLADEQLSSVIQ-DMAVRQHLLTNL--VEVDGR-------FVWRVNLDALTQHLDK- 62R K ADE L+ I + VR+ LLT L V++D F R+ L L + KSbjct:207 RTLKQADEHLAERIGGNELYRRFLLTALKKVKMDNSSSVSSYTFEERIPLATLKDAIVKG 266Query:63 -ILAFP--QRQESYLGPTLFLLGGNSQFVHPSHHPEIMRLFPRAQMQTVPNAGHWIHADR 119I A+P+E+ P LF+S +V+P I FPR + + + +AGHW++A++Sbjct:267 EIAAWPLDPARERWTRPALFIRATQSHYVVDEYLPIIGAFFPRFETRDI-DAGHWVNAEK 325Query:120 PQDFIAAIRGFL 131P++I F+Sbjct:326 PGECAESIVDFV 33713．PP1292A核苷酸序列(SEQ ID NO:37)长度966bp1 GATGTCTGGG ATGGCACGTG GCCCGACCTC CACAAGCTCC CTCATGCTTC51 CTGTCCCCCG CTTACACGAC AACGGGCCAG ACCACGGGAA GGACGGTGTT101 TGTGTCTGAG GGAGCTGCTG GCCACAGTGA ACACCCACGT TTATTCCTGC151 CTGCTCCGGC CAGGACTGAA CCCCTTCTCC ACACCTGAAC AGTTGGCTCA201 AGGGCCACCA GAAGCATTTC TTTATTATTA TTATTTTTTA ACCTGGACAT251 GCATTAAAGG GTCTATTAGC TTTCTTTCCG TCTGTCTCAA CAGCTGAGAT301 GGGGCCGCCA AGGAGTGCCT TCCTTTTGCT CCCTCCTAGC TGGGAGTGAC351 GGGTGGGAGT GTGTGTGCCC AGGTGGGGGT GTCTCCTGGC TGGGAAGGAG401 GGAAAGGGAG GGAGAGTTTT GCGGGGGTTG GCAGTGAAGA GCAGGCTGGA451 AAGGAGATGG CTAATAGCTG TTTAATGGAA ACCTGCTGGG CTGGAGGGAG501 TTAGGCTGAA TTTCCCGACT TCCTCTGCCA GTTATTGACA CAGCTCTCTT551 TGTAAGAGAG GAAAGAAACT AAACCCACCC AAGGGATGAT TTCAGGGGGA601 GAGGTGGAGG GCAGATGTCC TGGGCAAACC GGGCCCCTTT GCCCACACAC651 CTCACTTGAT CCTTTTGCCA AACTTGTCAA ACTCAGGGGA ACTGGCTTCC701 CAGTTGCCCC TTTGCCATAT TCCAAGTCCC CCTCAGACTT CATGTCTCTG751 CTCATCAGCA CTGTCCCAGG ATCCTGGAGA GGGAGAACCC CTGGCCCCAG801 GGGAAAGAGG GGGGGGTCTC CCGTTTCCTG TGCCTGCACC AGCCCTGCCC851 CCATTGCGTC TGCACACCCC TGCGTGTAAC TGCATTCCAA CCACTAATAA901 AGTGCCTATT GTACAGGTCC AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA951 AAAAAAAAAA AAAAAAB氨基酸序列(SEQ ID NO:38)长度97个氨基酸1 MISGGEVEGR CPGQTGPLCP HTSLDPFAKL VKLRGTGFPV APLPYSKSPS51 DFMSLLISTV PGSWRGRTPG PRGKRGGSPV SCACTSPAPI ASAHPCVC．核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:39)克隆号和蛋白名称PP1292起始编码子586 ATG终止编码子879 TAA蛋白质分子量9929.971 GAT GTC TGG GAT GGC ACG TGG CCC GAC CTC CAC AAG CTC CCT CAT GCT 4849 TCC TGT CCC CCG CTT ACA CGA CAA CGG GCC AGA CCA CGG GAA GGA CGG 9697 TGT TTG TGT CTG AGG GAG CTG CTG GCC ACA GTG AAC ACC CAC GTT TAT 144145 TCC TGC CTG CTC CGG CCA GGA CTG AAC CCC TTC TCC ACA CCT GAA CAG 192193 TTG GCT CAA GGG CCA CCA GAA GCA TTT CTT TAT TAT TAT TAT TTT TTA 240241 ACC TGG ACA TGC ATT AAA GGG TCT ATT AGC TTT CTT TCC GTC TGT CTC 288289 AAC AGC TGA GAT GGG GCC GCC AAG GAG TGC CTT CCT TTT GCT CCC TCC 336337 TAG CTG GGA GTG ACG GGT GGG AGT GTG TGT GCC CAG GTG GGG GTG TCT 384385 CCT GGC TGG GAA GGA GGG AAA GGG AGG GAG AGT TTT GCG GGG GTT GGC 432433 AGT GAA GAG CAG GCT GGA AAG GAG ATG GCT AAT AGC TGT TTA ATG GAA 480481 ACC TGC TGG GCT GGA GGG AGT TAG GCT GAA TTT CCC GAC TTC CTC TGC 528529 CAG TTA TTG ACA CAG CTC TCT TTG TAA GAG AGG AAA GAA ACT AAA CCC 576577 ACC CAA GGG ATG ATT TCA GGG GGA GAG GTG GAG GGC AGA TGT CCT GGG 6241 Met Ile Ser Gly Gly Glu Val Glu Gly Arg Cys Pro Gly 13625 CAA ACC GGG CCC CTT TGC CCA CAC ACC TCA CTT GAT CCT TTT GCC AAA 67214 Gln Thr Gly Pro Leu Cys Pro His Thr Ser Leu Asp Pro Phe Ala Lys 29673 CTT GTC AAA CTC AGG GGA ACT GGC TTC CCA GTT GCC CCT TTG CCA TAT 72030 Leu Val Lys Leu Arg Gly Thr Gly Phe Pro Val Ala Pro Leu Pro Tyr 45721 TCC AAG TCC CCC TCA GAC TTC ATG TCT CTG CTC ATC AGC ACT GTC CCA 76846 Ser Lys Ser Pro Ser Asp Phe Met Ser Leu Leu Ile Ser Thr Val Pro 61769 GGA TCC TGG AGA GGG AGA ACC CCT GGC CCC AGG GGA AAG AGG GGG GGG 81662 Gly Ser Trp Arg Gly Arg Thr Pro Gly Pro Arg Gly Lys Arg Gly Gly 77817 TCT CCC GTT TCC TGT GCC TGC ACC AGC CCT GCC CCC ATT GCG TCT GCA 86478 Ser Pro Val Ser Cys Ala Cys Thr Ser Pro Ala Pro Ile Ala Ser Ala 93865 CAC CCC TGC GTG TAA CTG CAT TCC AAC CAC TAA TAA AGT GCC TAT TGT 91294 His Pro Cys Val *** 98913 ACA GGT CCA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 960961 AAA AAA 96614．PP1396A核苷酸序列(SEQ ID NO:40)长度2070bp1 GGACCCCAGG CACCCTCCAG CGTCAGGTGC GGATCCCCCA GATGCCCGCC51 CCGCCCCATC CCAGGACACC CCTGGGGTCT CCAGCTGCGT ACTGGAAACG101 AGTGGGACAC TCTGCATGCT CAGCGTCCTG CGGGAAAGGT GTCTGGCGCC151 CCATTTTCCT CTGCATCTCC CGTGAGTCGG GAGAGGAACT GGATGAACGC201 AGCTGTGCCG CGGGTGCCAG GCCCCCAGCC TCCCCTGAAC CCTGCACGGC251 ACCCCATGCC CCCCATACTG GGAGGCTGGC GAGTGGACAT CCTGCAGCCG301 CTCCTGTGGC CCCGGCACCC AGCACCGCCA GCTGCAGTGC CGGCAGGAAT351 TTGGGGGGGG TGGCTCCTCG GTGCCCCCGG AGCGCTGTGG ACATCTCCCC401 CGGCCCAACA TCACCCAGTC TTGCCAGCTG CGCCTCTGTG GCCATTGGGA451 AGTTGGCTCT CCTTGGAGCC AGTGCTCCGT GCGGTGCGGC CGGGGCCAGA501 GAAGCCGGCA GGTTCGCTGT GTTGGGAACA ACGGTGATGA AGTGAGCGAG551 CAGGAGTGTG CGTCAGGCCC CCCACAGCCC CCCAGCAGAG AGGCCTGTGA601 CATGGGGCCC TGTACTACTG CCTGGTTCCA CAGCGACTGG AGCTCCAAGT651 GCTCAGCCGA GTGTGGGACG GGAATCCAGC GGCGCTCTGT GGTCTGCCTT701 GGGAGTGGGG CAGCCCTCGG GCCAGGCCAG GGGGAAGCAG GAGCAGGAAC751 TGGGCAGAGC TGTCCAACAG GAAGCCGGCC CCCTGACATG CGCGCCTGCA801 GCCTGGGGCC CTGTGAGAGA ACTTGGCGCT GGTACACAGG GCCCTGGGGT851 GAGTGCTCCT CCGAATGTGG CTCTGGCACA CAGCGTAGAG ACATCATCTG901 TGTATCCAAA CTGGGGACGG AGTTCAACGT GACTTCTCCG AGCAACTGTT951 CTCACCTCCC CAGGCCCCCT GCCCTGCAGC CCTGTCAAGG 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GGGCTGGGGT CAGCCACTGC1851 CAATCCTGCC TTACTCAGGA AGGCAGGAGG AAAGAGACTG CCTCTCCAGA1901 GCAAGGCCCA GCTGGGCAGA GGGTGAAAAA GAGAAATGTG AGCATCCGCT1951 CCCCCACCAC CCCGCCCAGC CCCTAGCCCC ACTCCCTGCC TCCTGAAATG2001 GTTCCCACCC AGAACTAATT TATTTTTTAT TAAAGATGGT CATGACAAAT2051 GAAAAAAAAA AAAAAAAAAAB氨基酸序列(SEQ ID NO:41)长度237个氨基酸1 MGPCTTAWFH SDWSSKCSAE CGTGIQRRSV VCLGSGAALG PGQGEAGAGT51 GQSCPTGSRP PDMRACSLGP CERTWRWYTG PWGECSSECG SGTQRRDIIC101 VSKLGTEFNV TSPSNCSHLP RPPALQPCQG QACQDRWFST PWSPCSRSCQ151 GGTQTREVQC LSTNQTLSTR CPPQLRPSRK RPCNSQPCSQ RPDDQCKDSS201 PHCPLVVQAR LCVYPYYTAT CCRSCAHVLE RSPQDPSC核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:42)克隆号和蛋白名称PP1396起始编码子602 ATG终止编码子1315 TGA蛋白质分子量25657.551G GAC CCC AGG CAC CCT CCA GCG TCA GGT GCG GAT CCC CCA GAT GCN 4647 CGC CCC GCC CCA TCC CAG GAC ACC CCT GGG GTC TCC AGC TGC GTA CTG 9495 GAA ACG AGT GGG ACA CTC TGC ATG CTC AGC GTC CTG CGG GAA AGG TGT 142143 CTG GCG CCC CAT TTT CCT CTG CAT CTC CCG TGA GTC GGG AGA GGA ACT 190191 GGA TGA ACG CAG CTG TGC CGC GGG TGC CAG GCC CCC AGC CTC CCC TGA 238239 ACC CTG CAC GGC ACC CCA TGC CCC CCA TAC TGG GAG GCT GGC GAG TGG 286287 ACA TCC TGC AGC CGC TCC TGT GGC CCC GGC ACC CAG CAC CGC CAG CTG 334335 CAG TGC CGG CAG GAA TTT GGG GGG GGT GGC TCC TCG GTG CCC CCG GAG 382383 CGC TGT GGA CAT CTC CCC CGG CCC AAC ATC ACC CAG TCT TGC CAG CTG 430431 CGC CTC TGT GGC CAT TGG GAA GTT GGC TCT CCT TGG AGC CAG TGC TCC 478479 GTG CGG TGC GGC CGG GGC CAG AGA AGC CGG CAG GTT CGC TGT GTT GGG 526527 AAC AAC GGT GAT GAA GTG AGC GAG CAG GAG TGT GCG TCA GGC CCC CCA 574575 CAG CCC CCC AGC AGA GAG GCC TGT GAC ATG GGG CCC TGT ACT ACT GCC 6221 Met Gly Pro Cys Thr Thr Ala 7623 TGG TTC CAC AGC GAC TGG AGC TCC AAG TGC TCA GCC GAG TGT GGG ACG 6708 Trp Phe His Ser Asp Trp Ser Ser Lys Cys Ser Ala Glu Cys Gly Thr 23671 GGA ATC CAG CGG CGC TCT GTG GTC TGC CTT GGG AGT GGG GCA GCC CTC 71824 Gly Ile Gln Arg Arg Ser Val Val Cys Leu Gly Ser Gly Ala Ala Leu 39719 GGG CCA GGC CAG GGG GAA GCA GGA GCA GGA ACT GGG CAG AGC TGT CCA 76640 Gly Pro Gly Gln Gly Glu Ala Gly Ala Gly Thr Gly Gln Ser Cys Pro 55767 ACA GGA AGC CGG CCC CCT GAC ATG CGC GCC TGC AGC CTG GGG CCC TGT 81456 Thr Gly Ser Arg Pro Pro Asp Met Arg Ala Cys Ser Leu Gly Pro Cys 71815 GAG AGA ACT TGG CGC TGG TAC ACA GGG CCC TGG GGT GAG TGC TCC TCC 86272 Glu Arg Thr Trp Arg Trp Tyr Thr Gly Pro Trp Gly Glu Cys Ser Ser 87863 GAA TGT GGC TCT GGC ACA CAG CGT AGA GAC ATC ATC TGT GTA TCC AAA 91088 Glu Cys Gly Ser Gly Thr Gln Arg Arg Asp Ile Ile Cys Val Ser Lys 103911 CTG GGG ACG GAG TTC AAC GTG ACT TCT CCG AGC AAC TGT TCT CAC CTC 958104 Leu Gly Thr Glu Phe Asn Val Thr Ser Pro Ser Asn Cys Ser His Leu 119959 CCC AGG CCC CCT GCC CTG CAG CCC TGT CAA GGG CAG GCC TGC CAG GAC1006120 Pro Arg Pro Pro Ala Leu Gln Pro Cys Gln Gly Gln Ala Cys Gln Asp 1351007 CGA TGG TTT TCC ACG CCC TGG AGC CCA TGT TCT CGC TCC TGC CAA GGG1054136 Arg Trp Phe Ser Thr Pro Trp Ser Pro Cys Ser Arg Ser Cys Gln Gly 1511055 GGA ACG CAG ACA CGG GAG GTC CAG TGC CTG AGC ACC AAC CAG ACC CTC1102152 Gly Thr Gln Thr Arg Glu Val Gln Cys Leu Ser Thr Asn Gln Thr Leu 1671103 AGC ACC CGA TGC CCT CCT CAA CTG CGG CCC TCC AGG AAG CGC CCC TGT1150168 Ser Thr Arg Cys Pro Pro Gln Leu Arg Pro Ser Arg Lys Arg Pro Cys 1831151 AAC AGC CAA CCC TGC AGC CAG CGC CCT GAT GAT CAA TGC AAG GAC AGC1198184 Asn Ser Gln Pro Cys Ser Gln Arg Pro Asp Asp Gln Cys Lys Asp Ser 1991199 TCT CCA CAT TGC CCC CTG GTG GTA CAG GCC CGG CTC TGC GTC TAC CCC1246200 Ser Pro His Cys Pro Leu Val Val Gln Ala Arg Leu Cys Val Tyr Pro 2151247 TAC TAC ACA GCC ACC TGT TGC CGC TCT TGC GCA CAT GTC CTG GAG CGG1294216 Tyr Tyr Thr Ala Thr Cys Cys Arg Ser Cys Ala His Val Leu Glu Arg 2311295 TCT CCC CAG GAT CCC TCC TGA AAG GGG TCC GGG GCA CCT TCA CGG TTT1342232 Ser Pro Gln Asp Pro Ser *** 2381343 TCT GTG CCA CCA TCG GTC ACC CAT TGA TCG GCC CAC TCT GAA CCC CCT13901391 GGC TCT CCA GCC TGT CCC AGT CTC AGC AGG GAT GTC CTC CAG GTG ACA14381439 GAG GGT GGC AAG GTG ACT GAC ACA AAG TGA CTT TCA GGG CTG TGG TCA14861487 GGC CCA TGT GGT GGT GTG ATG GGT GTG TGC ACA TAT GCC TCA GGT GTG15341535 CTT TTG GGA CTG CAT GGA TAT GTG TGT GCT CAA ACG TGT ATC ACT TTT15821583 CAA AAA GAG GTT ACA CAG ACT GAG AAG GAC AAG ACC TGT TTC CTT GAG16301631 ACT TTC CTA GGT GGA AAG GAA AGC AAG TCT GCA GTT CCT TGC TAA TCT16781679 GAG CTA CTT AGA GTG TGG TCT CCC CAC CAA CTC CAG TTT TGT GCC CTA17261727 AGC CTC ATT TCT CAT GTT CAG ACC TCA CAT CTT TTA AGC CGC CCT GTG17741775 TCT CTG ACC CCT TCT CAT TTG CCT AGT ATC TCT GCC CCT GCC TCC CTA18221823 ATT AGC TAG GGC TGG GGT CAG CCA CTG CCA ATC CTG CCT TAC TCA GGA18701871 AGG CAG GAG GAA AGA GAC TGC CTC TCC AGA GCA AGG CCC AGC TGG GCA19181919 GAG GGT GAA AAA GAG AAA TGT GAG CAT CCG CTC CCC CAC CAC CCC GCC19661967 CAG CCC CTA GCC CCA CTC CCT GCC TCC TGA AAT GGT TCC CAC CCA GAA20142015 CTA ATT TAT TTT TTA TTA AAG ATG GTC ATG ACA AAT GAA AAA AAA AAA20622063 AAA AAA AA 2070DBlastp结果Query=PPl396[基因=PP1396](237个氨基酸)＞SP_IN:Q19791 Q19791 caenorhabditis elegans.f25h8.3 protein.5/1999长度=2165分值=98.7 bits(242)，预计值=4e-20相同性=58/205(28％)，相似性=86/205(41％)，缺口=31/205(15％)Query:8 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S G E+Sbjct:1011 ASCYIDCSGRKWNY--GEWTSCSETCGSNGKMHRKSYCVDDSNRRVDESLCGREQKEATE 1068Query:114 SNCSHLPRPPALQPCQGQACQDRWFSTPWSPCSRSCQGGTQTREVQCL--STNQTLSTRC 171C+ +P P RWWS CSRSC GG + R QCL + +T ++RCSbjct:1069 RECNRIPCP-------------RWVYGHWSECSRSCDGGVKMRHAQCLDAADRETHTSRC 1115Query:172 PPQLRPSRKRPCNSQPCSQRPDDQCKDSSPHCPLVVQAR 210P + CN C+D S C VQ RSbjct:1116 GP---AQTQEHCNEHACTWWQFGVWSDCSAKCGDGVQYR 115115．PP1563A核苷酸序列(SEQ ID NO:43)长度1664bp1 TCGAGTTTTT TTTTTTTTTT TTTAATTAGA GCAGGTATGC TTTTGATGGT51 AGGGAAGGGA TGGAAAAAAG GAAAAGCAAT AGAAACTGTC CAATTCACAT101 CAGTTATCCG TCTGCTTTTT CTTGAGAGCT TGTGGAAGGT GTTAACGTGG151 CTGGGAACAT CAACACCTTG GCATGCATGA ATGTTAAGTC AGGAAGGCCA201 GCGATCACCT TGATAGCTTC TTCACTTAGG TGCTCTTCTC TTTTCGGTTT251 CCTACTGGTA GATGTGCTTG TCTTCTCTAC TGTAGACATG AGTCTTGCAA301 ATGCATCAGT CACTTTGAGG CTTGAGGTGG AGATTTCCAG CTTAGAAGTT351 GTTAACTCAT ACAACTCCGG ATCCACACCT GGGATTGTGG TGCTGCTGCT401 AGAGCTACTG TCATCCACGG GCCCAAAGAA ATCAAGGTTC AGAAGAGTGG451 AACCTCCACT AGCATCTAAA GGGTTAGTAA 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Asp Lys Ser Phe Leu Leu Leu Trp Glu Pro Pro His 62768 TGG TAT CTC AAG CCA TGT GCA TCA TGG ATA TCC TGT AGC TCA GTC CAC 81563 Trp Tyr Leu Lys Pro Cys Ala Ser Trp Ile Ser Cys Ser Ser Val His 78816 ACA TCT AGC AAT TCC CCA CTT TCA GGT AAG GCC TCT CTC GTT TTT ATT 86379 Thr Ser Ser Asn Ser Pro Leu Ser Gly Lys Ala Ser Leu Val Phe Ile 94864 GGC AAA GTG CTT GTT TCC AGC AAG TGC TTC AGG GAA GTA ACT TCC TCT 91195 Gly Lys Val Leu Val Ser Ser Lys Cys Phe Arg Glu Val Thr Ser Ser 110912 TCA GCA TCA GGG ACA AGT ATG GAA GGA AAA CAT GCT TCG AAA ATT CGC 959111 Ser Ala Ser Gly Thr Ser Met Glu Gly Lys His Ala Ser Lys Ile Arg 126960 TCC AGG CGG TTT AAT AAA GCT GTC TGA ACT GAA GTG GCT GAT TCC TGT1007127 Ser Arg Arg Phe Asn Lys Ala Val *** 1351008 AAA TGG CCA CTA GCA ACT GCT CCT TTG GAA GTT GCT GAA GGT ACA CTG10551056 TGC GTT TTG GGG GTT CCT GGA GTA TCA ATA TTT TCA TCT GTC CTA TGT11031104 GAC TGC CAG GCT TCC TTT CGA TGA TGA GAT TCA GTA GCC TGC TGG TCT11511152 CCA AAA GCA GCC CAA GAA CAA CTA TCT TTT TGT TCA TCC TCA AAA GCA11991200 TTC CAA TCT ACA ACT TGG CTA GGA CCA GCT GAA CTG AAG TCT GCA AAA12471248 TCA TCA GAG TCT TGA AAA CCA TTG CAG TCA TCC TGA ATA TTT GGC ACA12951296 GAA TCA AAA TGT CCA ATC TCA CCT TCT TGC CCA TTT TTA AGT TTT GCA13431344 ACA GGT TCA GTG CCT GTT CCA CTA GAT TTT CTT GCC AAT TGA CAT TCT13911392 TCT GAT AAA TTA TCA GAA GTC TGT TTT AGG TCT GAC TTT GTT AAT ATT14391440 GTC TCC TCT TGG CAA GAA ACA GCA TTT ATA TCC CCA AAT TCT CCA AAG14871488 TCA TCA CCT GGT TCA CTA AAA TGT GGA AAG TGC TCT GAA GAC TCT TCA15351536 AAA GTG GCA TCA CTC ATT GAA TCT TGA GTA CCA GTA ACA AAA GGT GGA15831584 GTT GAG CCA CTG GCA GAG CCA AAG TCA CCA AAA TCC CCC AAA AAA AAA16311632 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA1664DBlastp结果Query=PP1563[基因=PP1563](134个氨基酸)＞SP_FUN:Q05164 Q05164 saccharomyces cerevisiae(baker＇s yeast).
aob567,aof1001,aoe110,aoe264 and aoe130 genes.8/1998长度=1001分值=31.3 bits(69)，预计值=3.6相同性=22/61(36％)，相似性=31/61(50％)，缺口=1/61(1％)Query:65 LKPCASWISCSSVHTSSNSPLSGKASLVFIGKVLVSSKCFREVTSSSASGTSMEGKHASK 124+ P SSS TSS S +SG +S+ G +SSE + SSASG+S + SSbjct:81 IAPSTSSSEVSSSITSSGSSVSGSSSITSSGSSVSSSSSATE-SGSSASGSSSATESGSS 139Query:125 I 125+Sbjct:140 V 140＞SP_FUN:Q08294 Q08294 saccharomyces cerevisiae(baker＇s yeast).
chromosome xv reading frame orf yol155c.11/1996长度=967分值=31.3 bits(69)，预计值=3.6相同性=22/61(36％)，相似性=31/61(50％)，缺口=1/61(1％)Query:65 LKPCASWISCSSVHTSSNSPLSGKASLVFIGKVLVSSKCFREVTSSSASGTSMEGKHASK 124+ P SSS TSS S +SG +S+ G + SSE+SSASG+S + SSbjct:81 IAPSTSSSEVSSSITSSGSSVSGSSSITSSGSSVSSSSSATE-SGSSASGSSSATESGSS 139Query:125 I 125+Sbjct:140 V 140＞SW:YA06_CAEEL Q20762 caenorhabditis elegans.hypothetical 167.7 kdprotein f54d1.6 in chromosome ⅳ.7/1998长度=1462分值=30.1 bits(66)，预计值=8.0相同性=14/56(25％)，相似性=29/56(51％)，缺口=3/56(5％)Query:63 WYLKPCASWISCSSVHTSSNSPLSGKASLVFIGKVLVSSKC---FREVTSSSASGT 115WY + A W T+S+ P + ++ IG+ + +C FR++T +++ G+Sbjct:673 WYDEDGAQWNFIRDTETNSSCPCIERQAIADIGRFMPHPRCSQAFRDITCTTSIGS 72816．PP1746A核苷酸序列(SEQ ID NO:46)长度1977bp1 GTCCAATGCC CCCCACATCC CTGTGCACCT GGGTGCCATG CAGGAGACGG51 TGCAGTTCCA GATTCAGCAC CTGGGGGCCG ATCTCCACCC TGGCGACGTG101 CTACTGAGCA ACCATCCCAG TGCCGGGGGC AGCCACCTGC CAGACCTGAC151 TGTTATCACA CCGGTGAGGG GTGCTGCCCG CCTGCCTCTG CTGGGGCAGT201 GGTGGCCGAT GCAGCTGACC GTGGCTCTCC 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GACCCGTCGC1101 CCGAGGCGGC GGTGGTGGGC GGCAACGTGC TCACGTCGCA GCGCGTGGTG1151 GATGTCATCC TGGGGGCCTT TGGGGCCTGC GCCGCCTCCC AGGTGCGGGG1201 GCGGGGTGGG CGCAGCTCGG GGGCGGACTG GGTGGGCAGG CTGGAGTAGG1251 AGCGGGAGGG CGAGGTGGGG ACGCCCTGCC CCAGCCCAGC GCAGCGACCA1301 GGTGCCCTCA CCAGGGCTGC ATGAACAACG TGACCCTGGG CAACGCCCAC1351 ATGGGCTACT ACGAGACGGT GGCGGGCGGC GCGGGCGCGG GTCCCAGCTG1401 GCACGGGCGC AGCGGTGTGC ACAGCCACAT GACCAACACA CGCATCACCG1451 ACCCTGAGAT CCTGGAGAGC CGGTACCCGG TCATCCTGCG CCGCTTCGAG1501 CTGCGGCGGG GCTCGGGGGG CAGAGGCCGC TFCCGAGGCG GCGACGGCGT1551 CACCCGCGAG CTGCTCTTTC GTGAGGAGGC GCTGCTGTCA GTGCTGACCG1601 AGCGCCGCGC CTTCCGGCCA TACGGGCTCC ACGGGGGCGA GCCTGGCGCC1851 CGCGGCCTAA ACCTGCTGAT CCGCAAAAAC GGCCGGACGG TGAATCTGGG1701 CGGCAAGACG TCGGTGACCG TGTACCCCGG GGATGTGTTC TGTCTCCACA1751 CGCCCGGCGG CGGTGGCTAT GGGGACCCGG AGGACCCCGC CCCACCGCCG1801 GGGTCGCCCC CGCAAGCACT GGCCTTTCCC GAGCACGGCA GCGTCTATGA1851 GTATCGCCGG GCCCAGAAGG CCGTGTGAGG ATCCCGCAAT AAAAATGCCT1901 TAAGTCTCCC GGTTCTGGGG ACGCAGCTAC GGCGCCTTAA AAAAAAAAAA1951 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAB氨基酸序列(SEQ ID NO:47)长度353个氨基酸1 MHNVFKKHVV MYTFCNYLFC CFVATICKTF QMVAPKKKKK KKKKKKKKKK51 NSRGGPVPGN LLPALSGGPR HPTQPGLPGA SARGHSPRLH PGPVARGGGG101 GRQRAHVAAR GGCHPGGLWG LRRLPGAGAG WAQLGGGLGG QAGVGAGGRG151 GDALPQPSAA TRCPHQGCMN NVTLGNAHMG YYETVAGGAG AGPSWHGRSG201 VHSHMTNTRI TDPEILESRY PVILRRFELR RGSGGRGRFR GGDGVTRELL251 FREEALLSVL TERRAFRPYG LHGGEPGARG LNLLIRKNGR TVNLGGKTSV301 TVYPGDVFCL HTPGGGGYGD PEDPAPPPGS PPQALAFPEH GSVYEYRRAQ351 KAVC核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:48)克隆号和蛋白名称PP1746起始编码子817 ATG终止编码子1878 TGA蛋白质分子量37265.901 GTC CAA TGC CCC CCA CAT CCC TGT GCA CCT GGG TGC CAT GCA GGA GAC 4849 GGT GCA GTT CCA GAT TCA GCA CCT GGG GGC CGA TCT CCA CCC TGG CGA 9697 CGT GCT ACT GAG CAA CCA TCC CAG TGC CGG GGG CAG CCA CCT GCC AGA 144145 CCT GAC TGT TAT CAC ACC GGT GAG GGG TGC TGC CCG CCT GCC TCT GCT 192193 GGG GCA GTG GTG GCC GAT GCA GCT GAC CGT GGC TCT CCA CCC GCT AGG 240241 TGT TTT GGC CGG GTC AGA CGC GGC CTG TGT TCT ATG TGG CCA GCC GAG 288289 GGC ACC ACG CAG ACA TCG GGG GCA TCA CAC CAG GCT CCA TGC CCC CCC 336337 ACT CCA CCA TGC TGC AAC AGG AGG GTG CCG TCT TTC TGT CCT TCA AAC 384385 TTG TCC AGG GGG GCG TCT TCC AGG AGG AGG CGG TGA CGG AGG CCC TGC 432433 GGG CGC CAG GCA AGG TCC CCA ACT GCA GCG GAA CCA GAA ACC TGC ACG 480481 ACA CCT GGA AGA TAA ACT GAA ATG CAC CAA AGA GGA GCA CCT CTG TAC 528529 ACA AAG GAT GCT GGA CCA GAC CCT GCT TGA CCT GAA TGA GAT GTA GAA 576577 CGC CCC AGT CCC ACC CTG CTG CTG CTC CFC CCT CTG ACC CAG ACT CCG 624625 CCT GAG GCC AGC CTG CGG GAA GCT GAC CTT TAA TTG AGG GCT GAT CTT 672673 TAA CTG GAA GGC TGC TTT CTC CTT TCA CCA CCC CCT CCT TCC CTG TGT 720721 CTT TTT CGC CAA ACT GTC TCT GCC TCT TCC CGG AGA ATC CAG CTG GGC 768769 TAG AGG CTG AGC ACC TTT GGA AAC AAC ATT TAA GGG AAT GTG AGC ACA 816817 ATG CAT AAT GTC TTT AAA AAG CAT GTT GTG ATG TAC ACA TTT TGT AAT 8641 Met His Asn Val Phe Lys Lys His Val Val Met Tyr Thr Phe Cys Asn 16865 TAC CTT TTT TGT TGT TTT GTA GCA ACC ATT TGT AAA ACA TTC CAA ATG 91217 Tyr Leu Phe Cys Cys Phe Val Ala Thr Ile Cys Lys Thr Phe Gln Met 32913 GTT GCT CCA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 96033 Val Ala Pro Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 48961 AAA AAA AAC TCG AGG GGG GGC CCG GTA CCA GGT AAT CTA CTG CCT GCG100849 Lys Lys Asn Ser Arg Gly Gly Pro Val Pro Gly Asn Leu Leu Pro Ala 641009 CTG TCT GGT GGG CCG CGA CAT CCC ACT CAA CCA GGG CTG CCT GGC GCC105665 Leu Ser Gly Gly Pro Arg His Pro Thr Gln Pro Gly Leu Pro Gly Ala 801057 AGT GCG CGT GGT CAT TCC CCG AGG CTC CAT CCT GGA CCC GTC GCC CGA110481 Ser Ala Arg Gly His Ser Pro Arg Leu His Pro Gly Pro Val Ala Arg 961105 GGC GGC GGT GGT GGG CGG CAA CGT GCT CAC GTC GCA GCG CGT GGT GGA115297 Gly Gly Gly Gly Gly Arg Gln Arg Ala His Val Ala Ala Arg Gly Gly 1121153 TGT CAT CCT GGG GGC CTT TGG GGC CTG CGC CGC CTC CCA GGT GCG GGG1200113 Cys His Pro Gly Gly Leu Trp Gly Leu Arg Arg Leu Pro Gly Ala Gly 1281201 GCG GGG TGG GCG CAG CTC GGG GGC GGA CTG GGT GGG CAG GCT GGA GTA1248129 Ala Gly Trp Ala Gln Leu Gly Gly Gly Leu Gly Gly Gln Ala Gly Val 1441249 GGA GCG GGA GGG CGA GGT GGG GAC GCC CTG CCC CAG CCC AGC GCA GCG1296145 Gly Ala Gly Gly Arg Gly Gly Asp Ala Leu Pro Gln Pro Ser Ala Ala 1601297 ACC AGG TGC CCT CAC CAG GGC TGC ATG AAC AAC GTG ACC CTG GGC AAC1344161 Thr Arg Cys Pro His Gln Gly Cys Met Asn Asn Val Thr Leu Gly Asn 1761345 GCC CAC ATG GGC TAC TAC GAG ACG GTG GCG GGC GGC GCG GGC GCG GGT1392177 Ala His Met Gly Tyr Tyr Glu Thr Val Ala Gly Gly Ala Gly Ala Gly 1921393 CCC AGC TGG CAC GGG CGC AGC GGT GTG CAC AGC CAC ATG ACC AAC ACA1440193 Pro Ser Trp His Gly Arg Ser Gly Val His Ser His Met Thr Asn Thr 2081441 CGC ATC ACC GAC CCT GAG ATC CTG GAG AGC CGG TAC CCG GTC ATC CTG1488209 Arg Ile Thr Asp Pro Glu Ile Leu Glu Ser Arg Tyr Pro Val Ile Leu 2241489 CGC CGC TTC GAG CTG CGG CGG GGC TCG GGG GGC AGA GGC CGC TTC CGA1536225 Arg Arg Phe Glu Leu Arg Arg Gly Ser Gly Gly Arg Gly Arg Phe Arg 2401537 GGC GGC GAC GGC GTC ACC CGC GAG CTG CTC TTT CGT GAG GAG GCG CTG1584241 Gly Gly Asp Gly Val Thr Arg Glu Leu Leu Phe Arg Glu Glu Ala Leu 2561585 CTG TCA GTG CTG ACC GAG CGC CGC GCC TTC CGG CCA TAC GGG CTC CAC1632257 Leu Ser Val Leu Thr Glu Arg Arg Ala Phe Arg Pro Tyr Gly Leu His 2721633 GGG GGC GAG CCT GGC GCC CGC GGC CTA AAC CTG CTG ATC CGC AAA AAC1680273 Gly Gly Glu Pro Gly Ala Arg Gly Leu Asn Leu Leu Ile Arg Lys Asn 2881681 GGC CGG ACG GTG AAT CTG GGC GGC AAG ACG TCG GTG ACC GTG TAC CCC1728289 Gly Arg Thr Val Asn Leu Gly Gly Lys Thr Ser Val Thr Val Tyr Pro 3041729 GGG GAT GTG TTC TGT CTC CAC ACG CCC GGC GGC GGT GGC TAT GGG GAC1776305 Gly Asp Val Phe Cys Leu His Thr Pro Gly Gly Gly Gly Tyr Gly Asp 3201777 CCG GAG GAC CCC GCC CCA CCG CCG GGG TCG CCC CCG CAA GCA CTG GCC1824321 Pro Glu Asp Pro Ala Pro Pro Pro Gly Ser Pro Pro Gln Ala Leu Ala 3361825 TTT CCC GAG CAC GGC AGC GTC TAT GAG TAT CGC CGG GCC CAG AAG GCC1872337 Phe Pro Glu His Gly Ser Val Tyr Glu Tyr Arg Arg Ala Gln Lys Ala 3521873 GTG TGA GGA TCC CGC AAT AAA AAT GCC TTA AGT CTC CCG GTT CTG GGG1920353 Val *** 3541921 ACG CAG CTA CGG CGC CTT AAA AAA AAA AAA AAA AAAAAA AAA AAA AAA 19681969 AAA AAA AAA1977DBlastp结果Query=PP1746[基因=PP1746](353个氨基酸)＞SW:YAOE_SCHPO Q10093 schizosaccharomyces pombe(fission yeast).
hypothetical 138.8 kd protein clld3.14c in chromosome ⅰ.
12/1998长度=1260分值=134 bits(335)，预计值=9e-31相同性=75/157(47％)，相似性=92/157(57％)，缺口=10/157(6％)Query:166 QGCMNNWTLG----NAHMGY--YETVAGGAGAGPSWHGRSGVHSHMTNTRITDPEILESR 219QGCMNN+T GN G +YET+AGGAGAGP+W+G SGVH+HMTNTRITDPE++E RSbjct:1093 QGCMNNLTFGYDGENGEEGFAMYETIAGGAGAGPTWNGTSGVHTHMTNTRITDPEVVERR 1152Query:220 YPVILXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXVTRELLFREEALLSVLTERRAFRPYGLHGGEPGAR 279PVILV R FR S+L+ERR+ PYG++GGE GASbjct:1153 APVILRRFCLRENSGGKGEYHGGDGVIRHFEFRRSMHCSILSERRSRAPYGMNGGEDGAM 1212Query:280 GLNLLIRKNG--------RTVNLGGKTSVTVYPGDVFCLHT 312G+N I+ R VNLGGK V + GD + TSbjct:1213 GVNTWIDCSNPDFPRYVNLGGKNHVLMGKGDHIVIET 1249在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
权利要求
1．一种分离的具有抑癌功能的人蛋白，其特征在于，它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQID NO:32、SEQID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47；或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
2．如权利要求1所述的多肽，其特征在于，该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQIDNO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47。
3．一种分离的多核苷酸，其特征在于，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85％相同性(a)编码如权利要求1和2所述多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。
4．如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:4 1、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47。
5．如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸的序列选自下组SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:30、SEQIDNO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:48的编码区序列或全长序列。
6．一种载体，其特征在于，它含有权利要求3所述的多核苷酸。
7．一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它是选自下组的一种宿主细胞(a)用权利要求6所述的载体转化或转导的宿主细胞；(b)用权利要求3所述的多核苷酸转化或转导的宿主细胞。
8．一种具有具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽的制备方法，其特征在于，该方法包含(a)在适合表达具有抑癌功能的人蛋白的条件下，培养权利要求7所述的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽。
9．一种能与权利要求1所述的具有抑癌功能的人蛋白特异性结合的抗体。
10．一种核酸分子，它含有权利要求3所述的多核苷酸中连续的10-800个核苷酸。
11.一种药物组合物，其特征在于，它含有安全有效量的权利要求1所述的多肽以及药学上可接受的载体。
全文摘要
本发明公开了一类新的具有抑癌功能的人蛋白,编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生该多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病如癌症等的方法。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这类新的具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸的用途。
文档编号C07K14/435GK1313318SQ0011199
公开日2001年9月19日 申请日期2000年3月14日 优先权日2000年3月14日
发明者顾健人, 杨胜利 申请人:上海市肿瘤研究所