专利名称：：植物抗逆性相关蛋白及其编码基因TaERECTA与应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种植物抗逆性相关蛋白及其编码基因7s^^T力与应用。
背景技术：
：干旱是影响世界粮食生产的最主要限制因子之一，由于干旱导致的粮食减产占世界粮食减产总量的一半左右(Gale2002，//2feri迈5"ci'e刀ce6bw2cW5H7jfi7^Z4rF(9朋^6^7tm7Z/y^G/i^#iZ4776^7E^W7H朋77flV5;p1-27)。因此，发展节水农业是保证粮食增产和节约水资源的重大需求，而在各种农业节水措施中，生物节水是最经济、最有效的途径之一。生物节水是指通过发掘、利用植物自身的特性和生理潜能，提高植物的水分利用效率(wateruseefficiency,WUE)，实现节水增产。WUE是作物通过光合作用同化C02形成的干物质(assimilation,A)与蒸腾耗水(transpiration,T)的比值，它反映了作物耗水与干物质生产之间的关系，其中A、T受气孔对C02和水分的导度以及叶片内外C02和水蒸汽浓度梯度的影响(Bacon等1998，尸7朋f尸力"io7,118:1507-1515)。众所周知，气孔是植物与外界进行物质交换的重要通道，是水分蒸腾和C02获取的必经之地，是决定植物WUE高低的关键所在。就气孔对WUE的影响而言，气孔密度(单位叶面积上的气孔数量)和气孔开度是影响植物WUE的两个决定性因素。调节气孔开度是植物提高WUE的重要途径之一。许多研究表明，气孔的关闭和水分散失与C02的吸收之间呈非线性关系，在一定条件下，气孔开度对气孔导度影响较大，因此通过调节气孔开度来改变气孔导度可以达到提高WUE的目的(Bacon，2004，rafer〃see/YYcie/2cj/&/J朋tWo7og,p42-112)。植物气孔调节机制非常复杂，在干旱发生过程中，植物能感知外界环境的水分亏缺，并与之(干旱的土壤或空气)发生相互作用，产生一系列化学调节因子，如ABA、细胞分裂素、乙烯、硝酸盐等，这些信号分子与植物体内的其它因子相互作用，共同调节气孔开度(Bacon，2004,,aterosee/"/Yci朋cyi/pJ朋tZ^Wog,p42-112)。控制气孔密度是植物提高WUE的另一个重要途径。Masle等(7fe^/re，2005，436:866-870)首次报道了拟南芥调节蒸腾效率的基因——^^^CM，在生物节水领域引起了积极的反响。早期研究表明，J^7P^^4编码一种富含亮氨酸的受体类激酶，参与调节拟南芥器官建成，影响叶、花和果实等的发育(Douglas等2002,W朋tCe//，14:547-558;Torii等1996，尸7朋tCeW，8:735-746;Lease等2001，13(12):2631-2641;Shpak等2003，Zere7op層f，131:1491-1501)。另有研究显示，^^^fitTJ还参与对各种生物胁迫和非生物胁迫的应答(Llorente等2005，尸_7朋^乂43(2):165-180;Qi等2004，/7朋te,219(2):270-276)。近期Masle等发现一方面，」^V^67^参与控制叶片的气孔密度，该基因突变导致气孔密度增大，气孔导度增大，蒸腾耗水增加；另一方面，力^V^CT^参与调节叶肉细胞的数量及其堆积的致密程度，从而影响叶片的光合效率(Masle等2005，7fe&re，436:866-870)。^z^^CZ4突变导致单位叶面积上的叶肉细胞明显减少，光合作用效率也急剧下降(Masle等2005，yfe^/re，436:866-870;Farquhar等1978，77/3/^尸力7^'W，61:1000-1005)。此外，Masle的发现还为该基因参与器官建成，控制细胞分裂、膨大和细胞间相互联系提供了直接证据(Masle等2005，7fe&re，436:866-870;Farquhar等1978，尸7a/f尸力yw'o7，61:1000-1005;Somerville等2002，7Xe^ra力iafe/^^sp1-28.)。由于」t0^CZ4基因既参与控制气孔密度，又参与调节光合作用，因此被称作蒸腾效率(transpirationefficiency)基因，亦称为水分利用效率基因，以区别于单一调节气孔或控制光合作用的基因。Jf^^CM基因是迄今为止发现的第一个调节蒸腾效率的基因，也是第一个真正意义上的节水抗旱基因(Masle等2005，#3t〃re，436:866-870)。然而，迄今为止，除^^V^CZ4之外，尚未见到粮食作物，如小麦、水稻等有关蒸腾效率基因的相关报道。
发明内容本发明的一个目的是提供一种植物抗逆相关蛋白及其编码基因。本发明所提供的植物抗逆相关蛋白，来源于普通小麦(7^'"c咖s"^K鹏L.)，为如下(a)或(b)所示的蛋白(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗逆相关的由(a)衍生的蛋白质。其中，序列表中的序列2由977个氨基酸残基组成，富含亮氨酸。为了使(a)中的蛋白便于纯化，可在由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的N端或C端连接上如表1所示的标签。表l.标签的序列<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>上述(a)或(b)中的蛋白可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述(b)中的蛋白的编码基因可通过将序列表中序列1的自5'端第282至3215位碱基所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5'端和/或3'端连上表1所示的标签的编码序列得到。上述蛋白的氨基酸序列中一个或几个氨基酸残基的取代、替换和/或添加，有的是由于自然发生的多态变异引起的，例如由获得蛋白质的生物的物种、个体等的差异导致；有的是由定点诱变、随机诱变等人工诱变处理引起。本发明所提供的编码基因可为如下l)或2)或3)或4)的基因1)其核苷酸序列是序列表中序列1的自5'末端第282-3215位脱氧核糖核苷酸所示的DNA分子；2)其核苷酸序列是序列表中序列1所示的DNA分子；3)在严格条件下与l)或2)限定的DNA序列杂交且编码所述抗逆相关蛋白的DNA分子；4)与l)或2)限定的DNA序列有90。/Q以上同源性且编码所述抗逆相关蛋白的DNA分子。上述严格条件是，在6XSSC，0.5y。SDS的溶液中，在65。C下杂交，然后用2XSSC，0.1%SDS和1XSSC,0.1%SDS各洗膜一次。序列表中的序列1由3652个脱氧核糖核苷酸组成，包括2934bp的ORF区、281bp的5'UTR、421bp的3'UTR、以及16bp的poly(A)尾巴。其自5'末端的第282至3215位核苷酸为开放阅读框(OpenReadingFrame,ORF)。含有上述任一所述编码基因的重组载体、重组菌、转基因细胞系或表达盒也属于本发明的保护范围。扩增上述任一所述基因全长或其任意片段的引物对也属于本发明的保护范围。所述引物对可为如下任一所述引物对1)一条引物的序列如序列表中序列3所示，另一条引物的序列如序列表中序列4所示；2)—条引物的序列如序列表中序列5所示，另一条引物的序列如序列表中序列6所示。可用现有的植物表达载体构建含有本发明基因的重组表达载体。本发明的另一个目的是提供一种培育抗逆植物的方法。本发明所提供的培育抗逆植物的方法，是将上述任一所述的编码基因导入植物细胞中，培育得到抗逆植物。可以采用常规方法将所述编码基因导入植物中，例如基因枪法，高压电穿孔法，脂质体法，菌转化或转染等。本发明中的具体操作是，先将基因导入载体中，得到重组表达载体，再将重组表达载体导入农杆菌中，得到含有本发明基因的重组农杆菌，再通过农杆菌将基因导入植物中。上述抗逆植物是抗干旱和/或抗高盐和/或耐低温的植物。本发明方法对单子叶植物或双子叶植物均适用，单子叶植物具体可为水稻，双子叶植物具体可为拟南芥。本发明首次在小麦中分离得到植物抗逆相关基因&^^o>I，该基因不仅参与控制叶片的气孔密度，还参与调节叶肉细胞的数量及其堆积的致密程度，该基因突变导致气孔密度增大，气孔导度增大，蒸腾耗水增加，同时叶肉细胞数量减少，堆积程度降低，从而影响叶片的光合效率。此外，该基因还参与对各种生物胁迫和非生物胁迫的应答，如各种病害，干旱、低温、高盐、脱落酸，并在植物发育和衰老中起重要作用。实验证明，将本发明基因导入植物中，可提高植物的抗逆性，如抗旱性和/或抗盐性和/或耐低温性。因此，本发明基因及其应用对培育抗旱节水、抗盐或耐低温农作物新品种具有重要的意义，适合于推广应用。图1为TaERECTA蛋白与AtERECTA蛋白的三维结构比较。图2为7ai5y^T4基因对不同逆境胁迫的应答。6图3为基因fs^^O^在不同发育时期的表达量。图4为水稻转化载体构建示意图。图5为转基因水稻耐盐性鉴定结果。具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。所使用的试剂等如无特殊说明，均可从商业途径获得。实施例1、小麦中抗逆相关蛋白的编码基因化^^6X4的分离与表达分析一、抗逆相关蛋白的编码基因^fi^O^的分离本实施例中所用的小麦为普通小麦(rri"c鹏aesz^K咖L.)。构建小麦的全长cDNA文库，按照文献(毛新国等，2005，用改进的Cap-trapper法构建拟斯卑尔脱山羊草全长cDNA文库.遗传学报，32(8):811-817)中所述方法进行(1)总RNA提取及mRNA纯化，用TRIZ0L提取小麦总RNA，用oligo(dT)纤维素分离纯化mRNA。(2)第一链cDNA的合成取10ugmRNA与引物I混合，变性后加入第一链cDNA合成的试剂，当温度升到4(TC时，加入反转录酶，当反应进行到40分钟时加入引物II(第一链合成引物如下)。为得到更多全长cDNA,在第一链合成时向反应体系中加入海藻糖和山犁糖醇；为限制poly(A)尾巴的长度，以便于大规模测序，用混合引物替代传统的单一引物oligo(dT)w。反应结束后用CTAB-UREA法除去糖类，沉淀cDNA/RNA。第一链cDNA合成引物PrimerldAGATTGTGGTCTCCTCGAGT16RPrimer2dAGATTGTGGTCTCCTCGAGT16CR引物IPrimer3dAGATTGTGGTCTCCTCGAGT16CCRPrimer4dAGATTGTGGTCTCCTCGAGT16CTR引物IIdAGATTGTGGTCTCCTCGAGT16CY(3)高碘酸钠氧化向上步反应管中加入高碘酸钠溶液，氧化RNA，用甘油终止反应。(4)生物素标记离心收集高碘酸钠氧^f七的cDNA/RNA，清洗、晾干重新溶解后，加入新鲜配置的Biotin-hydrzide，23。C温育1416h，用柠檬酸钠终止反应。(5)RNaseI消化经高碘酸钠氧化后，mRNA5，和3，端末位碱基核糖上相邻的二醇基团被氧化成为二醛基团，它们都可以和生物素结合。后期利用链霉亲和素包被的磁珠分离全长cDNA时，mRNA3'端的生物素也可以与磁珠结合。为得到5'端完整的cDNA，必须特异地将3'端标记的生物素除去。真核生物mRNA3'端poly(A)长度一般在100250bp,在合成第一链cDNA时，将poly(A)的长度限制在16个碱基，因此cDNA/RNA复合体中mRNA3'端poly(A)将以单链的形式存在，因此可以用RNaseI将其特异除去。(6)全长cDNA的捕获及单链cDNA释放先用无DNA污染的tRNA封阻磁珠(DynalbeadM-280)，室温下让c薩/RNA和磁珠结合20min，用NaOH-EDTA洗脱cDNA/RNA。(7)末端转移酶加尾收集单链cDNA，变性后加入末端转移反应试剂，37'C反应9分钟，终止反应。(8)第二链cDNA的合成收集单链cDNA，用LA-Taq合成第二链cDNA。待反应结束后，电泳，回收大于lkb的cDNA。(9)酶^^I属于二类限制性内切酶，它的酶切位点正好处于识别位点下游的第一个碱基处，而且酶切没有碱基特异性，但对识别位点的胞嘧啶甲基化敏感。经SmI酶切的DNA将产生4个碱基突出的黏性末端。根据这些特性，在引物设计时引入了^幼I、v5bo^I和J力ol位点，其中第一链引物中为&al和J力ol位点，第二链引物中为万mI和位点。通过采取这些措施，仅用AmI对cDNA进行单一酶切，就可以实现cDNA的定向克隆。(10)连接、包装及插入片段检测收集分级后的目的cDNA片段，重新溶解fddH20中，检测cDNA浓度，确定cDNA的浓度后，取cDNA与载体UniZAPII(Stratagene)连接过夜。包装后，侵染宿主菌XL1-Blue，检测滴度。(11)质粒提取及序列测定产量，然后重复蛋白酶K消化，酚/氯仿萃取等步文库扩增后，取一定量的扩增文库用于噬粒环骤，最后将cDNA置于乙醇中沉淀过夜。环化，检测噬粒滴度，最后取适量环化后的噬粒侵染SOLR宿主细胞。(12)将噬粒侵染过的宿主细胞涂布平板，37。C培养过夜。随即挑取阳性克隆于96孔培养板，提取质粒、测序，构建小麦全长cDNA数据库。以拟南芥J^V^CZ4基因编码的蛋白(蛋白质序列由基因cDNA序列推导而来，拟南芥Jz^Xfit7^基因序列的GenBanknumber为AT2G26330)为探针搜索上述小麦全长cDNA数据库，得到与之同源的候选克隆，测序，得到小麦ra^57^CZ4的cDNA序列，如序列表中序列l所示，该序列全长3652bp。分析序列l所示基因的结构，表明，其自5'末端第1-281位核苷酸为5'UTR(281bp)，第282-3215位核苷酸为开放阅读框(2934bp)，第3216-3636位核苷酸为3，UTR(421bp)，第3637-3652位核苷酸为的多聚(A)尾巴(16bp)。该基因编码的氨基酸序列如序列表中序列2所示，由977个氨基酸残基组成。将序列表中序列1的自5'末端第282-3215位核苷酸所示的序列与基因J^XfiT7^(GenBanknumber为AT2G26330)的序列进行比对，其相似性达69%;将序列表中序列2所示的氨基酸序列与蛋白AtERECTA的序列进行比对，其相似性达71.9%，而且二者在三维结构上也相似(图l，A为AtERECTA的三维结构；B为小麦TaERECTA的三维结构)。将本发明的序列表中序列l所示的基因命名为植物抗逆性相关基因Ts^ffirW(rW^'c咖3es&V鹏^^6T力，由其编码的蛋白(序列表中序列2所示)命名为植物抗逆性相关蛋白TaERECTA，该蛋白富含亮氨酸，其理化性质如表2所示。表2、丰]t物抗性相关蛋白TaERECTA理化性质分〗折结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>二、植物抗逆性相关基因7s^y^a^的表达特征(一)植物抗逆性相关基因ra^ffit7^对不同逆境胁迫的应答情况以抗旱小麦(旱选io号)为实验材料。挑选籽粒饱满、大小一致的抗旱小麦种子，将其置于光照培养箱中，在2(TC、12h/d的条件下培养，水培至一叶一心，然后进行逆境胁迫处理。水分胁迫除去培养皿中的水分，加入PEG-6000(渗透势为-0.5MPa)水溶液；高盐胁迫除去培养皿中的水分，加入250慮NaCl水溶液；低温胁迫直接将培养皿移至4。C光照培养箱培养；外源ABA处理采用50uMABA溶液进行喷雾直至叶片全部湿润。分别在不同胁迫处理的Oh、1h、3h、6h、12h、24h、48h和72h采集叶片，液氮速冻，-7(TC保存备用。对照一直采用无离子水培养。用TRIZOL提取小麦叶片总RNA，以MMLV反转录试剂盒合成第一链cDNA(Invitrogen)，采用实时定量PCR(Real-timeQuantitativePCR，qRT-PCR)的方法检测基因ra^^CZ4对各种逆境胁迫的响应情况。用组成型表达的7i/Zw"'/2基因作为内参，设计了qRT-PCR的引物。7^^'/:F:5'-GAGGCCTCGTGTGGTCGCTTTGT-3'R:5'-GCCCAGTTGTTACCCGCACCAGA-3'7^^^C7^:Fl:5'-TGAACCTTGCAAACAACAGCCTAG-3'(序列表中序列3)Rl:5'-AATTGGACCAGTAATCATGTTGCA-3'(序列表中序列4)按照LivakandSchmittgen提出的公式计算7^^^67^基因在4种处理下的表达量为对照的N倍，N=2—AACT，(6T"考t,TiMx)_CT(Tubull,Tix))—(CTw,Time0)—(Tubulin'Time0))o其中，CT值的含义是每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。PCR循环在到达CT值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期(对数期)，此时微小误差尚未放大，因此CT值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的CT值是恒定的。timex代表不同的处理时间点；time0代表处理的零点；(Ta^t,T，x)为经过胁迫处理x时间时，小麦中7^￡"7￡0^基因的表达量；CT(Tubulin.T^"为经过胁迫处理x时间时，小麦中n/Zw^'/基因的表达量；CT(T，u^。)为未开始胁迫处理时，小麦中7^欣0^基因的表达量；CT(Tubulin,6。)为未开始胁迫处理时，小麦中rw力wh'72基因的表达量。实验设3次重复，结果取平均数，结果如图2所示(A为ABA处理，B为NaCl处理，C为PEG处理，D为低温处理)。相对表达量为诱导后与诱导前表达量的比值。结果表明，7i^y^C7^基因对PEG胁迫反应最敏感，对ABA处理反应最弱。(二)植物抗逆相关基因7^fifir^在小麦不同发育时期的表达量以旱选10号为实验材料。分别以水培幼苗的根、叶，大田中正常生长小麦拔节期心叶和抽穗期的幼穗为材料，提取总RNA，用應LV反转录试剂盒合成第一链cDNA，采用qRT-PCR的方法检测7k&i^邀因在不同发育时期不同幼嫩组织中的表达情况，所用的引物序列同前。实验设3次重复，结果如图3所示(以幼苗期叶中的表达为基准，其它发育时期和其它组织较幼苗叶中的基因的表达水平为相对表达量)。结果表明，基因7^^ffitT^在抽穗期幼穗中的表达量最高，幼苗根中次之，而在幼苗叶，拔节期心叶中表达量相对较低。实施例2、基因rsy57^CZ4在水稻中的应用一、构建转基因ra^72firZ4水稻双元载体pCAMBIA1390-Ubipro的构建过程首先以玉米基因组DNA为模板，用引物5，-GCCCAAGCTTCTAGGCAGTGCAGCGTGAC-3'(A7d11酶切位点)和5'-GCCA丰TGCA(^TTAGTGCAGAAGTAACACCA-3，酶切位点)扩增玉米的Ubiguntin启动子(带第一个内含子)，然后用忠72oTII和/^rt双酶切目标片断，将其连接到用历'/7oin和尸WI酶切的pCAMBIA1390载体(Genbankaccessionnumber为AF234307)上得到pCAMBIA1390-Ubipro载体。制备具有序列表中序列7所示序列的基因片段(其中，自序列7的5'末端第l-6位核苷酸为限制性内切酶^s/dU的识别位点，5'末端第68-3001位核苷酸为基因的编码框，5'末端第3002-3007位核苷酸为限制性内切酶SpeI的识别位点)，用限制性内切酶&el和Aa历Hl进行酶切所述基因片段，回收目标基因片段；用限制性内切酶6>eI和丑柳HI酶切双元载体pCAMBIA1390-Ubipro，回收目的载体片段；将回收的目标基因片段和目的载体片段进行连接，筛选，得到含有序列表中序列1第282-3215位核苷酸(即基因7a^^T^的开放阅读框)的阳性重组载体pCAMBIA1390-Ubi-TaERECTA(图4)。利用农杆菌介导的方法将含有基因7^^i^tX4的阳性重组载体转到水稻中。传代培养筛选，得到转基因纯系后，验证r^^fiTM的功能。以未转入任何载体和基因的野生型水稻、转入空载体pCAMBIA1390-Ubipro的水稻为对照。二、转基因水稻的抗盐性检测选取籽粒饱满的转基因水稻、未转基因的野生型水稻、转入空载体pCAMBIA1390-Ubipro的水稻种子，用蒸馏水浸泡至发芽，将发芽的水稻种子转到底部有孔水平的塑料篮，用Hoagland's营养液培养3周，然后将水稻转移到加有lOOraMNaCl的Hoagland，s营养液中培养一周(22°C、12h光照/d)，统计存活率，7天后测量水稻幼苗的长度，照相。实验设3次重复，结果取平均数。结果表明，转基因水稻的存活率平均为50%，而未转基因的野生型水稻和转入空载体pCAMBIA1390-Ubipro的水稻存活率平均为30%。表明，转基因水稻的耐盐性得到明显提高。各种水稻的生长状况如图5所示(图5，A代表野生型，B-D为转7^^^T力基因株系)。存活率的计算公式存活率=盐处理后存活水稻幼苗数目/盐处理前水稻幼苗数目。序列表<160>7<210〉〈211〉〈212〉13652靈〈213〉小麦属普通小麦(W"c鹏譜",L.)〈400〉1cacggctactcstccttccggcccgagaaacgcgagcttcctgcccggsccggcgtacggacgacggggcacgactggtctcgctgtcgctcagcgcccttcccggacgatggatggcgattctggacttaggttcttcatgtgccagtttaccsgscsctgactggatcggaacaggtttagatctgagggaatatgtccggcggsgctgcasc33gtttgsstctgtcatttggacatgcsgcttggactgccgagttgtggtctgst3t3t3tC3ttcgcctgacsgcctccagccsgtgggcttgtttttcaaagaactgcagaccttcaaactgagstsctcccttctgggatgtttcggstcgcggataatcca3cctcscgg3atgtcatgggagaaigtccgsccgtggsc33tgstggsgscaggtgttccsacgaggtggt3gccgcsgccgcscgctgtccgctgtcactcgcgsgcgsgccaaccgggsggacgccgtaggtgsctcttcgcgctcattggcgctgctgcggagacgsccgcgctcaacgaagsgcctcgsttggggatC3t3CC3ttCgctggtcggcatacttgggtgaccggccttcsttgggssc33tCCCtttCcactggtcctactatacatga3cgcttcatggg33agctttcccaacaat333tgggeiccgtc3satcatcttggatttagcatctattgtggg3scttgtcctcaagaaasctggggatcaatastttgcttcttgggtccaagagaaatstcctcctgtgtctctgttcstggccctccatcattgggggtggcsstcgcttgagactatcacctgtttttacatgaatctcggtgctcagggatgtactttggcattcactattggctgtctacagccgagtgcaatggtcgscccggctggcgctggcgcgtgctggcccsccggcgtcgtcctgcgagccggcagccagtgctccacgcacttcacctctcctctcgcaccttcggcctcgctccgsggtgasgacactgctcctctctccgggcgtctcgattgtgctcatcgstcggtgtccsgcgatcccgtaaactgagtgttgcgcggcatggtactttgtgtactagctsscattggct3tcccstctgctatctggcccaaggcaacaacaggcttatataagttcttattcctcgttttgagtggtctcctgcs3C3aggagtatcgcttggaatgcgtctcttcacgctggcgtgg33tcctggccCC3C333tct3tg3ttttsaagcaaaccagcatgtctatgtatggggcataagaagctgtgtcggcagtsgggaatcttcggtcaatccagctcsaggccgcgaagagtttscsttgstctatggcatcgctccatcactgscatcgccgctgtgcaccagactgcctggccgagctacggcc3sctcgtccgcagcgsgctctctccctctccgctgcctctctcccggtaccaccggctcctcctcctagtcgttccgggcgcggcgttcaacctcgaatctgsagtcttasgscgctagctcaagcacgacgctgtcgggsgstsccaccaattggattcaggtctttccttcaagtttattggcctct3taccgtcagttasctggatgacttgaagtgtgaatctcgttgtgtaaCt3ttCCt3ttgsttsctggtgagcaagasgtgagattgatgcaaaatcttgatgasctgtccctactgatttgtggatacgaaggctgctagccgtttgtgagcaatgtcsagcacagtatgcccagtatcaaacaccgtcttctscgattgcctacctatatcctccttgtgtgtttcccgsgtscgctcctgctcgacgatcctatcacacgtgccaagsagcsgcctgcsccccgsccaacgagtacgagcscgtccsgcgsgcggcgctcgccsgcaccagttgccatctccccccstggcggcgcgcggccggccsacgtcggccctctgcgacgggcgawtcgsatgggctgggatttgtcccctcga3accgcagctcccaaaggctaatcaggaaccctccwt3gcctgggatttatcttgctacactgcatgcaggcagatactgggsgacaataccatC33Ctt3CtccttgcaaacC33t3gctttacttgagagctgagctttcstccaattccatgctcttgtttctgtccsacgatgttgctacttcsgcctsC33C33CttCctggcttgccgatactcggccaggccgcaccccccccssggaggatgactttataaatgtcccgc33sgcgaatttsgtggtacatggaagctcgattggcgacaaagatgcgcscttccgctgctgacggsagacggcgggacctcggcgtcggsccggcccgccgccgcgtgagcctgggacgcggagccgtcccggcccaaagcggaaacagcgccagtaaatgccsacggcggcgggccgccgcggsacgtgctctaacgtcsccttctccggccgsccggccagattgst3ttg3tattggsatgtcccctgataactggggagatac33tcatttccttgcaagcttgctgtacaacttgacatccagaacttggggtccattcsacsgcctagaatgcccatgatgacgtctttcggccatcgggattcstccaaccstcttgsatactttaatcscggtttttcgtgccgttattgctctggagttctcctgctagtgatacgsgaacttgagttctgasgsctgaaggsatagtcttcsagaatggcagccgsgactcgcctgcagtccgctacgagccacscgtcgacctcgcctcsscgagcascgcggccgacgatgcsaggccgccccggggcgccgctgttcctcs6012018〇240300360420480540600660720780840900960102010801140120012601320138014401500156016201680174018001860192019802040210021602220228023402400246025202580264027002760282028802940300030603120318012agttcggccaggccatctcccscsacscggagtaggsctttgsggccgccctcaggcggcggcgggggatgcaggtagtcagtcagacgagtagtagcactctaaatatgtgccggaggttaaccaagaaagagactggatcggtggcgtaaaaaggccatgtattttctttctcttcctccccctcttatctctaacctttcgatggatctctcttcttttctgcgaccgttcttggactggaacgatggstcttgtaaggatgtcggtagcsatgtctctctcctctgtgtgtctgctgtagasctsattcagttscctgagtcagtgggggagsacctggtgtgagagctctggtaa3240ccacattttg3300tctcccctgt3360agtaggaggt3420tgssttggct3480cacgctggct3540actaattcat3600ttaccggagatctsttgattttctcccggctccggcaaaaaaaasaaaaa3652<210>2<211>977〈212〉Pro〈213》J、麦属普通小麦(7"."，薦"丽L.)<400>2MetAlaAlaThrAlaAlaAlaAlaTyrGlyAlaLeulieAlaSerLeu151015LeuLeuLeuLeuAlaAlaGlyAlaAlaAlaAspAspGlyAlaAlaLeu202530LeuGluValLysLysSerPheArgAsnValGlyAsnValLeuTyrAsp354045TrpSerGlyAspAspHisCysSerTrpArgGlyValLeuCysAspAsn505560ValThrPheAlaValAlaAlaLeuAsnLeuSerGlyLeuAsnLeuGlu65707580GlyGlulieSerProAlaValSerAlaLeuLysSerLeuValSerlie859095AspLeuLysSerAsnGlyLeuThrGlyGinlieProAspGlulieGly<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>260265270ProlieProSerVallieGlyLeuMetGinAlaLeuAlaValLeuAsp275280285LeuSerTyrAsnGinLeuSerGlyProlieProSerlieLeuGlyAsn290295300LeuThrTyrThrGluLysLeuTyrMetGinGlyAsnLysLeuThrGly305310315320ThrlieProProGluLeuGlyAsnMetSerThrLeuHisTyrLeuGlu325330335LeuAsnAspAsnGinLeuThrGlySerlieProAlaGluLeuGlyLys340345350LeuThrGlyLeuTyrAspLeuAsnLeuAlaAsnAsnSerLeuGluGly355360365ProlieProAsnAsnlieSerSerCysValAsnLeuAsnSerPheAsn370375380AlaHisGlyAsnLysLeuAsnGlyThrlieProArgSerLeuCysLys385390395400LeuGluSerMetThrSerLeuAsnLeuSerSerAsnHisLeuSerGly405410415ProlieProlieGluLeuSerArglieAsnAsnLeuAsplieLeuAsp15420425430LeuSerCysAsnMetlieThrGlyProlieProSerAlalieGlySer435440445LeuGluHisLeuLeuLysLeuAsnLeuSerLysAsnAlaLeuValGly450455460PhelieProAlaGluPheGlyAsnLeuArgSerlieGlyGlulieAsp465470475480LeuSerAsnAsnHisLeuGlyGlyLeulieProGinGluLeuGlyMet485490495LeuGinAsnLeuMetLeuLeuLysLeuGluAsnAsnAsnlieThrGly500505510AspValSerSerLeuMetAsnCysPheSerLeuAsnThrLeuAsnlie515520525SerPheAsnAsnLeuAlaGlyValValProThrAspAsnAsnPheSer530535540ArgPheSerProAspSerPheLeuGlyAsnProGlyLeuCysGlyTyr545550555560TrpLeuAlaSerCysArgSerSerSerHisGinGluI>ysProGinlie565570575SerLysAlaAlalieLeuGlylieAlaUuGlyGlyLeuVallieLeu580585590LeuMetlieLeulieAlaValCysArgProHisSerSerProValPhe595600605LysAspValSerValSerLysProValSerAsnValProProLysLeu610615620VallieLeuAsnMetAsnMetAlaLeuHisValTyrGluAsplieMet625630635640ArgMetThrGluAsnLeuSerGluLysTyrlielieGlyTyrGlyAla645650655SerSerThrValTyrLysCysValLeuLysAsnCysArgProValAla660665670lieLysLysLeuTyrAlaGinTyrProGinSerLeuLysGluPheGin675680685ThrGluLeuGluThrValGlySerlieLysHisArgAsnLeuValSer690695700LeuGinGlyTyrSerLeuSerProValGlyAsnLeuLeuPheTyrGlu705710715720TyrMetGluAsnGlySerLeuTrpAspValLeuHisGluGlyGinSer725730735LysLysLysLysLeuAspTrpGluThrArgLeuArglieAlaLeuGly740745750AlaAlaGinGlyLeuAlaTyrLeuHisHisAspCysSerProArglie755760765lieHisArgAspValLysSerLysAsnlieLeuLeuAspLysAspTyr770775780GluProHisLeuThrAspPheGlylieAlaLysSerLeuCysValSer785790795800LysThrHisThrSerThrTyrValMetGlyThrlieGlyTyrlieAsp805810815ProGluTyrAlaArgThrSerArgLeuAsnGluLysSerAspValTyr820825830SerTyrGlylieValLeuLeuGluLeuLeuThrGlyLysLysProVal835840845AspAsnGluCysAsnLeuHisHisSerlieLeuSerLysThrAlaSer850855860AsnAlaValMetGluThrValAspProAsplieAlaAspThrCysGin865870875880AspLeuGlyGluValLysLysValPheGinLeuAlaLeuLeuCysThr885890895LysLysGinProSerAspArgProThrMetHisGluValValArgVal900905910LeuAspCysLeuValHisProAspProProProLysAlaAlaGinPro915920925GinProProThrGlyProSerTyrAlaAsnGluTyrValSerLeuArg930935940GlyAlaGlyThrLeuSerSerSerCysAlaAsnSerSerSerThrSer945950955960AspAlaGluLeuPheLeuLysPheGlyGinAlalieSerHisAsnThr965970975Glu<210>3〈211〉24<212〉DNA<220〉<223〉<400〉3tgaaccttgcaaacaacagcctag24<210〉4<211>24<212〉DNA〈220〉〈223〉19<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>gttccgc33Cgtcggcaacgtgctctacgactggtccggagacgaccactgctcctggcg240cggcgtcctctgcgacaacgtcaccttcgctgtcgccgcgCtC33CCtCtccgggctc33300cctcgagggcgaaatctctccggccgtc^gcgccctgaagagcctcgtctcgattgaitct360gaagtcgaatgggctgaccggccagatcccggacgagattggggattgctcatcgattaa420gscgctggstttgtccttcstggcgacataccattctcggtgtccsagct480cssgcacctcgaaaccttgstattgaagaaC3sccsgctggtcggcgcgatcccgtcgsc540gctgtcgcagctccc3saitttgaagsttctggacttggcatgsgtgggga600gataccaaggCtWtCt3ttggaatgaggttcttcwbscttgggtttgcgcggcsacca660attggaaggasccctctcccctgstatgtgccagttgaccggcctttggtactttgacgt720gaagaacaatagcctgactggggagatsccagacaccattgggasctgtsctsgctttca780ggtcttggattt3tctt3C3atcatttgactggatcaatccctttcaacattggcttcct840tcaagttgct3C3CtgtCCttgcaagggaacaggttcactggtcctatcccatctgttat900tggcctcstgcaggcacttgctgtactagatctgsgttscctggccctst9603ccgtcg3tsctgggaaacttgsc3t3tsctgaga3act3tsc3tgc3sggcaacsagtt102〇aactgggacaatsccaccsgaacttgggaatatgtcaacgCttC3tt3CC1080tgatsatc33cttactgggtccsttccggcggagctggga3agctt3caggcttatatga1140cttgasccttgcctagsagg3CCd3ttCCCaacaatataagttcttgtgt1200g33tctcsatagctttaatgccc3tggcs3caagttaaatgggaccattcctcgttcgtt1260gtgtasacttgagagcatgscgtctttgaatctgtcgtca3dtC3tttg3gtggtcctat1320tcctattgdgctttcaagaatcaacaatttggacatcttggstttatcctgcaacstgat1380tactggtccasttccatcggccatcggcagcttggagcatctattgaascttaacctgag1440cttgttggattcatccctgccgagtttgggaacttgaggagtatcggtgs1500gsttgstctgtcca_a_ca_3cc3tcttggtggtctgsttcctC33ga3cttggaatgctgcs1560aaatctgstgttgctaaaacggggatgtctcttC3Ctgst1620gasctgcttcCttt333tdt3tC3ttC33t3atttggctggcgtggtccc1680tactgacaac3acttctcscggttttcgcctgscagcttcttgggtaatcctggcctttg1740tggatactggcttgcctcgtgccgttcctcC3gcc3cc3sgagaaaccacaaatctcgaal謂ggctgcgatactcggcattgctctgggtgggcttgttstcctcctgstgsttttaatagc1860cgtttgcaggccgcsc3gttctcctgttttcaasgatgtctctgtteigcaaaccagtgag1920csatgtcccccccaagctagtgatacttaatatgaacatggccctccatgtctstgsags1980C3tsstgsggatgactgagaacttgagcgaga33t3C3tC3ttgggtatggggcatcaag2040cacagtttatasatgtgttctgaagasctgcagaccggtggcwtcasgsagctgtstgc2100ccagtacccgC33agcctgaaggaatttcaaactgagcttgagactgtcggcagtatcaa2160acaccggaatttagtgagtcttcaaggatactccctatc3cctgttgggaatcttctctt2220ctacgagtacgcsgcctctgggatgttttacatgaaggtc2280gaaaaagctcgattgggagactcgccttcggstcgctctcggtgctgctcsaggccttgc2340Ct3CCttC3Ccatgactgcagtccgcggatwtccacaggcaaagaatat2400cctcctcgacaaagattacgsgccacacctcacggsctttggcattgcgsagagtttgtg2460tgtttcsaaaacacacacgtcgacctatgtcatgggcactattggctscattgatcccga2520gtacgcgcgcacttcccgcctcaacgagaagtccgatgtctacagctatggcatcgtcct2580gctcgagctgctgacgggcaaaaagcccgtggscaacgagtgcaatctccstcactcgst2640cctatcgaagacggcgagca3cgcggtg5ttggagacggtcgacccggacatcgccgacac2700gtgccaggacctcggcgaggtgaagaaggtgttccagctggcgctgctgt2760gcagccgtcggaccggccgaggtggtgcgcgtgctggsctgcctggtgca2820ccccgscccgccgccgaaggccgcccsgccgcagccgcccaccggcccgagctacgccaa2880cgagtacgtgagcctgcggggcgccggcacgctgtcgtcgtcctgcgccssctcgtcgsg2940cacgtcggacgcggagctgttcctcaagttcggccsggccatctcccacs3cacggagts3000gactagt30072权利要求1、一种蛋白，选自如下(a)或(b)(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗逆相关的由(a)衍生的蛋白质。2、权利要求l所述蛋白的编码基因。3、根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于所述编码基因为如下l)或2)或3)或4)的基因1)其核苷酸序列是序列表中序列1的自5'末端第282-3215位脱氧核糖核苷酸所示的DNA分子；2)其核苷酸序列是序列表中序列1所示的DNA分子；3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码所述抗逆相关蛋白的DNA分子；4)与l)或2)限定的DNA序列有90y。以上同源性且编码所述抗逆相关蛋白的DNA分子。4、含有权利要求2或3所述编码基因的重组载体、重组菌、转基因细胞系或表达盒。5、扩增权利要求2或3所述基因全长或其任意片段的引物对。6、根据权利要求5所述的引物对，其特征在于所述引物对为如下1)或2):1)一条引物的序列如序列表中序列3所示，另一条引物的序列如序列表中序列4所示；2)—条引物的序列如序列表中序列5所示，另一条引物的序列如序列表中序列6所示。7、一种培育抗逆植物的方法，是将权利要求2或3所述的编码基因导入植物中，培育得到抗逆植物。8、根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述抗逆植物是抗干旱和/或抗高盐和/或耐低温的植物。9、根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于所述植物为水稻或小麦。10、权利要求l中所述蛋白在培育抗逆植物中的应用。全文摘要本发明公开了一种植物抗逆性相关蛋白及其编码基因TaERECTA与应用。本发明蛋白，选自如下(a)或(b)(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗逆相关的由(a)衍生的蛋白质。实验证明，将本发明基因导入植物中，可提高植物的抗逆性，如抗旱性和/或抗盐性和/或耐低温性。而且，本发明基因对单子叶、双子叶植物均适用。因此，本发明基因及其应用对培育抗旱节水、抗盐或耐低温农作物新品种具有重要的意义，适合于推广应用。文档编号C07K14/415GK101492498SQ20081024671公开日2009年7月29日申请日期2008年12月26日优先权日2008年12月26日发明者昌小平,景蕊莲,毛新国申请人:中国农业科学院作物科学研究所