点是在plinl基因序列第八外显子的第49位为A或T的碱基多态性位 点，表现为AA、AT或TT三种基因型，其中TT型为肉食鸡的优良屠宰性状分子遗传标记标 的。实验发现:AA、AT或TT三种基因型的鸡在产肉率以及肉质优化等方面都有很大差别，TT 型鸡屠宰性状（产肉率以及肉质）明显优于AA、AT两种类型，所以该基因型的雏鸡可以作 为具备优良屠宰性状的种鸡来培育，这也肯定了基因型为TT的鸡可以作为种鸡来培育具 有优良屠宰性状的品种鸡的可实施性。本发明应用方法简单、快速、低成本、便于推广应用， 可广泛应用于鸡的辅助选择和分子育种中，将为培育出高产优质肉性状的优良品种提供支 持。
【附图说明】
[0019] 图1为本发明所述肉食鸡的优良屠宰性状分子遗传标记的实际应用流程示意图。
[0020] 图2为本发明扩增的鸡的plinl编码基因结构示意图与第八外显子序列。
[0021] 其中，第八外显子的49位核苷酸用下划线及黑体放大字母示意。在野生基因中， 第49位核苷酸为A，突变基因中为T。
[0022] 图3为本发明中部分样品PCR产物经特异性酶切筛查到的鸡plinl基因序列琼脂 糖凝胶电泳结果图。
[0023] 其中，AA为未突变型，AT为杂合突变型，TT为纯合突变型。
【具体实施方式】
[0024]本发明首先根据鸡plinl基因的保守序列设计引物，以不同品种鸡基因组DNA为 模板，进行PCR扩增，测序。然后，进行特异性酶切，并将酶切结果的琼脂糖凝胶电泳图和序 列比对筛查出不同品种鸡plinl基因SNP位点。然后，根据在群体中检测到的基因型，进行 群体遗传统计分析和生长性状的关联分析，筛选出与鸡生长性状密切相关的分子标记。最 后，利用获得的分子遗传标记在辅助筛选或预测具备优良屠宰性状的肉食鸡品种中应用， 将筛选到的拥有与鸡优异屠宰性状相关分子标记的鸡作为种鸡进行培养，以期繁殖更多的 优质鸡。下面对本发明做详细说明，所述内容是对本发明的解释而不是限定。
[0025] 实施例1:不同品种鸡plinl基因部分DNA序列的克隆
[0026] 1、鸡血的采集及处理：随机抽取无病健康鸡，包括1478只鲁禽1号鸡、616只鲁禽 3号鸡以及68只石歧杂鸡，由翅下静脉采血，EDTA做抗凝处理。
[0027] 2、基因组DNA的提取：利用Tiangen血液DNA提取试剂盒提取DNA。使用200yL 新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，加入20yL蛋白酶K溶液，混匀；然后加入200yL缓 冲液GB，混匀后70°C放置10分钟；加入200yL无水乙醇，充分振荡混匀，此时会出现絮状 沉淀；将所得溶液和絮状沉淀全部转移到放入收集管中的吸附柱CB3中，12000rpm离心30 秒并弃废液；加入500yL缓冲液⑶，12000rpm离心30秒并弃废液；加入700yL漂洗液 PW(使用前加入无水乙醇），12000rpm离心30秒并弃废液，并重复该步骤两次；彻底除尽吸 附材料中的漂洗液之后，使用水或洗脱液TE将所得DNA产物尽可能的洗脱下来。
[0028] 3、扩增引物设计：根据NCBI数据库中（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)鸡的 GenBank登录号为：NM-001127439的plinl基因的外显子序列，以该基因序列保守区序列为 参考设计PCR引物对，其引物对序列如下：
[0029]上游引物：CATAAAGGCGAGGCAAAGGITC
[0030]下游引物：CACGGATGGACAGATGGACAA
[0031] 该引物扩增了plinl基因第八外显子702bp序列。
[0032] 4、PCR扩增鸡plinl基因外显子：以鸡的DNA为模版，用上述设计的引物对进行 PCR扩增，PCR总反应体系为30yL，见表1 ;PCR总反应程序，见表2。
[0033] 表1PCR反应体系
[0034]
【主权项】
1. 一种肉食鸡的优良屠宰性状分子遗传标记，该标记是鸡plinl基因单核苷酸多态性 序列上的多态性位点，其特征在于：所述鸡plinl基因单核苷酸多态性序列的多态性位点 是在plinl基因序列第八外显子的第49位为A或T的碱基多态性位点，表现为AA、AT或TT 三种基因型，其中TT型为肉食鸡的优良屠宰性状分子遗传标记。
2. 权利要求1所述肉食鸡的优良屠宰性状分子遗传标记在辅助筛选或预测具备优良 屠宰性状的肉食鸡品种中的应用。
3. 根据权利要求2所述的应用，方法是：以待检测鸡plinl基因组DNA为模板，以引物 对plinlE8F/E8R进行PCR扩增，扩增完成后进行琼脂糖凝胶电泳，然后使用特定的限制性 核酸内切酶对扩增出的目的片段进行酶切；之后对酶切产物再一次进行琼脂糖凝胶电泳， 来检测酶切产物的片段大小，分析确定鸡plinl基因的碱基多态性位点，当plinl基因序列 第八外显子的第49位为A或T，且基因型为TT型时，即可判定待检测鸡品种为具有优良屠 宰性状的品种鸡； 其特征在于： 所述引物对plinlE8F/E8R的核苷酸序列为： plinlE8F：CATAAAGGCGAGGCAAAGGTTC； plinlE8R：CACGGATGGACAGATGGACAA； 所述PCR扩增的反应程序为：95 °C预变性4-5min ;94 °C变性30-35s，55-61 °C退火 30-35s，72°C延伸lmin，28-35个循环，最后72°C延伸lOmin，并置于4°C保存； 所述特定的限制性核酸内切酶为：NspI、BstNSI、NspHI、PauAI或PunAII，其酶切作用 位点为扩增出目的基因中的以下序列：5'…RCATG1 Y…3'或3'?Yt GTACR…5'。
4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于：对于plinlE8F/E8R引物对来说，PCR扩 增程序为：95°C预变性4min ;94°C变性30s，55°C退火30s，72°C延伸lmin，35个循环，最后 72°C延伸lOmin，并置于4°C保存。
5. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述特定的限制性核酸内切酶为：NspI、 BstNSI 或 NspHI。
【专利摘要】本发明公开了一种肉食鸡的优良屠宰性状分子遗传标记，是鸡plin1基因单核苷酸多态性序列上的多态性位点，该位点是在plin1基因序列第八外显子的第49位为A或T的碱基多态性位点，表现为AA、AT或TT三种基因型，其中TT型为肉食鸡的优良屠宰性状分子遗传标记。本发明还公开了所述标记在辅助筛选或预测具备优良屠宰性状的肉食鸡品种中的应用。实验证实：特异型酶切位点的多态性与生产性能之间具备相关性，基因型为TT的个体各项测量指标均高于基因型为AA和AT的个体，提示基因型为TT的个体可以作为种鸡来培育具有优良屠宰性状的品种鸡。
【IPC分类】C12Q1-68, C12N15-11
【公开号】CN104593363
【申请号】CN201510015900
【发明人】林浴霜, 王丹丹, 胡玮, 曹顶国, 周艳, 雷秋霞
【申请人】山东大学
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2015年1月13日