一次性检测肺癌多重基因的引物、探针、检测体系和试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体地涉及肺癌多重基因的引物、探针及检测体系。
【背景技术】
[0002] 肺癌是恶性肿瘤中发病率和病死率最高的恶性肿瘤之一，其中非小细胞肺癌 (NSCLC)占肺癌的85%左右。随着对肿瘤发病机制及其生物学行为研宄的不断深入，人们 越来越多的把焦点聚向特异性高、不良反应轻为特点的分子革G向治疗。近几年，在肺癌分 子靶向治疗领域，研宄热点主要集中在EGFR、ALK、ROS1、KRAS、BRAF等靶点上，这些基因的 突变或融合状态与靶向药物的疗效相关，多基因的联合检测可进一步提高预测预后的准确 性。然而，目前大多每次只能检测一个突变或一段基因的突变，检测通量低，只能逐个筛查， 耗时长。同时，由于晚期患者取材较难，样本量较少，往往不能满足逐个筛查的需要，且临床 上尚无能够同时、一次性完成对此9个热点基因进行检测的试剂盒。
[0003] 本发明提供一种高灵敏度和高特异性的用于一次性检测多重肺癌基因的引物、探 针、试剂盒及引物分配方式。该检测试剂盒利用DNA样本进行基因突变和RNA样本进行基因 融合的检测，特异性和灵敏度高，检测结果重复性好，而且引入了荧光检测技术，克服了传 统PCR产物遗留污染的问题，操作简便快捷，为临床EGFR、ALK、ROS1、RET、KRAS、BRAF、NRAS、 HER2、PIK3CA9种基因突变/融合的检测提供了一种快速可靠的检测方法。该方法可以实 现一次性检测肺癌的多重基因，大大缩短了检测的时间，提高了肺癌基因检测的灵敏度和 准确率，从而实现指导肺癌临床治疗方案制定及化疗预后。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种用于一次性检测多重肺癌基因的引物、探针，包括 已6卩1?、8狀?、1(狀5、4〇(和1?051等热点基因的引物、探针及分配方式，其序列如表1 :
[0005] 表1引物、探针以及序列号
【主权项】
1. 一种试剂盒中引物和探针的分布方法，其特征在于：采用12联管或8联管，将引物 和探针序列分组，分装于12联管或8联管中，其中，（1)同组引物之间不会引起引物二聚体 方面的互相干扰；（2)同组引物共用上游或下游引物；（3)所有组的引物和探针扩增程序一 致、操作一致；(4)不同组的探针中，至少具有双色染料，以提供至少双色检测通道。
2. -次性检测肺癌多重基因的引物和探针，包括如下115条序列，且所述的序列分为 12组，具体如下：
3. -次性检测肺癌基因检测的反应体系，包括 ①融合基因 DEPC H2O
其中，所述的引物和探针如权利要求1所示。
4. 如权利要求3所述一次性检测肺癌基因检测的反应体系，其特征在于，加入的LMG混 合酶A的组成为Hs-taq酶0? 26 y L、UNG酶0? 03 y L、逆转录酶0? 5 y L ;LMG混合酶B的组 成为 Hs-taq 酶 0? 20 y L、UNG 酶 0? 05 y L。
5. -种试剂盒，包括权利要求2所述的12组序列，这12组序列分别装入12联管内。
【专利摘要】本发明公开了一种检测肺癌多重基因的引物、探针、检测体系及试剂盒，其中包括用于检测肺癌EGFR基因25种突变、KRAS基因7种突变和BRAF 6种基因突变、NRAS 9种基因突变、HER2 5种基因突变，PIK3CA 2种基因突变以及ALK 5种融合基因、ROS1 13种融合基因和RET 6种融合基因的引物、探针及其分配方式。本发明的检测试剂盒采用12联PCR反应条设计，每一个12联PCR条检测一个样品的多重基因，12联条的1-4号管内装有相应的融合检测试剂和内控试剂。本发明可以实现一次性检测肺癌的24种融合和54种突变，大大缩短了检测的时间，灵敏度高，特异性强，操作简便快捷，可为临床医生对肺癌患者选择肿瘤靶向药物治疗提供参考。
【IPC分类】C12N15-11, C12Q1-68
【公开号】CN104818320
【申请号】CN201410727044
【发明人】江风阁, 林清华, 黄蛤目, 施伟杰, 宋庆涛, 阮力
【申请人】厦门艾德生物医药科技有限公司
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2014年12月3日