的其他化合物。
[0419] 4小时后，使用公式2计算有效渗透性（Pe)并且使用公式3计算转运百分比：
[0420]
[0421]
[0422]其中：
[0423] t 为时间（h)
[0424] CA(t)为时间t时受体孔中的化合物浓度
[0425] 并且CD (tj为在h时供体孔中的化合物浓度。
[0426] 基于表2所示的指示值Pe，新化合物示出跨越BBB的良好渗透性（表3)
[0427] 表2:指示值Pe
[0428]
[0429] 表3 :新化合物的有效渗透性（PJ和转运百分比
[0430]
[0431] 新化合物对认知损伤动物模型的学习与记忆的影响
[0432] 在认知损伤的药理学模型中评价新化合物作为认知增强剂的效力。在未治疗和 经MK-801治疗的啮齿动物（小鼠或大鼠）中评价新化合物的效果。MK-801为损害动物 在各种学习与记忆范例中的表现的N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA)受体的非竞争性拮抗 剂（Castellano C 等，Curr. Drug Targets 2001;2:273-83. ;Riedel G 等，Behav. Brain Res. 2003 ;140 :l-47)。MK-801也对啮齿动物行为产生多种影响，包括感觉处理的缺陷、运 动过强、刻板症（stereotypy)和共济失调。由MK-801处理诱导的行为表现已广泛用作认 知缺陷的动物模型（Bardgett ME 等，Brain Res. Bull. 2003;60:131-42 ;Van der Staay FJ 等，Behav. Brain Res. 2011 ;220 :215_29 ;Mutlu 0 等，Pharmacol. Biochem. Behav. 2011 ; 99 :557-65)〇
[0433] 为了确定所测试化合物是否可充当认知增强剂，通过广泛使用的如下测试来测试 其恢复正常认知行为的能力：新物体识别测试（X*ere E等，Neurosci.Biobehav. Rev. 2007 ; 31 :673-704 ;Boess FG 等，J. Pharmacol. Exp. Ther. 2007 ;321 :716-25);被动或抑制性 逃避任务（Sarter M 等，Psychopharmacology(Berl) 1992 ;107 :144_59) ;Morris 水迷宫 (D'Hooge R 等，fcain Res. Rev. 2001;36:60-90);以及 T 迷宫交替任务（Boess FG 等， Neuropharmacology 2004;47:1081-92 ;Spowart_Manning L 等，Behav. Brain Res. 2004; 151 :37-46)。
[0434] 作为用于评价新POP抑制剂的代表性实施例，描述了各个行为测试遵循的方案和 新物体识别测试以及被动逃避测试所获得的结果。
[0435] 新物体识别任务
[0436] 新物体识别（novel object recognition，N0R)任务基于嗤齿动物探宄新物体的 自然偏好（Ennaceur A等，Behav. Brain Res. 1988 ;31 :47_59)。其为用于研宄视觉学习和 记忆缺陷的相关非奖励测试。简言之，N0R任务过程由三个试验组成：适应、训练和保持。在 不存在物体的情况下，使各个动物适应于40cm直径的圆形台10分钟（适应期）。次日，将 动物在圆形台上放置10分钟进行训练实验，并且将两个相同物体放置在对称位置。该步骤 连续进行两天。在第三天，用不同的物体替代所述物体中的一个。将未用于训练实验的物体 用作保持实验中的新物体。然后允许动物自由探索10分钟，并且记录探索各个物体所花费 时间。期望动物花费更多时间探索新物体，这是完好识别记忆的标志。辨别力指数（index of discrimination)如下计算：探索新物体所花费的时间减去探索旧物体所花费的时间， 再除以探索两个物体所花费的总时间，并且乘以100。认为更高的辨别力指数反映更好的记 忆保持。
[0437] 将新鲜溶解于含5% Tween 80的PBS中的相应测试的POP抑制剂以5mg/Kg的剂量 (0. lmL体积/10g动物体重）皮下（s. c.)给予。十五分钟后，将溶于PBS缓冲液的MK-801 以0. 2mg/kg的剂量（0. lmL体积/10g动物体重）腹膜内（i. p.)注射。对照组i. p.施用 MK-801并s. c.施用相同体积的载剂（具有5% Tween 80的PBS)。另一个对照组i. p.接 受PBS并s.c.接受相同体积的载剂。根据示出药物具有预期效果的行为和神经化学研宄 来选择药物剂量。在训练期期间和测试期之前，每天向动物注射两种药物。
[0438] 在施用作为本发明代表性化合物的实施例4的化合物时，所得结果示出于图1。
[0439] 如实施例4的化合物所示，本发明化合物能够在N0R测试中逆转MK-801诱导的记 忆损伤。
[0440] 被动逃避任务
[0441] 为了评价被动逃避任务，使用具有相同尺寸之亮隔室与暗隔室的两隔室盒。两个 隔室被可提升的闸门隔开。所用设备根据用于该测试的标准方法。给出由24小时的短期间 隔隔开的一段电击期和一段评价期。在电击期，将啮齿动物放置到亮隔室中。在20秒的适 应期后，将通向另一个隔室的闸门打开，并且一旦啮齿动物进入暗隔室便再次下降。然后， 施加短暂而微弱的足电击。在电击终止后60秒，将嗤齿动物从设备移开并且放回其养笼 中。在评价期，测定动物进入暗隔室花费的时间（以秒计），作为先前期期间在暗隔室中所 接受电击的记忆保持的标志。在最初电击期后一周实施第二评价期。在电击期前35分钟 以如物体识别测试所述的相同剂量和体积s. c.注射相应评价的化合物，15分钟后i. p.注 射MK-801 (或者在对照的情况下注射PBS)。仅用MK-801治疗的动物表现出电击期的较小 记忆保持，而另外接受POP抑制剂的动物表现出进入暗隔室的较长等待时间，预示记忆保 持更好。
[0442] 在施用作为本发明代表性化合物的实施例4的化合物时，所得结果示出于图2。
[0443] 如实施例4的化合物所示，本发明化合物能够在被动逃避测试中逆转MK-801诱导 的记忆损伤。
[0444] 水迷宫（Morris逃脱测试）
[0445] 根据用于该测试的标准方法和尺度，在约22°C温度的装有经乳胶染色的自来水 的水箱中评价Morris水逃脱表现。逃脱平台由灰色聚乙烯圆柱体组成，浸没在水面以下 1. 5cm处。在训练和测试期前35分钟以如物体识别测试所述的相同剂量和体积s. c.施用 相应评价的POP抑制剂，然后15分钟后i. p.注射MK-801 (或者在对照的情况下为PBS)。 在训练期以及评价期期间每天对动物注射两种化合物。
[0446] 啮齿动物接受两组连续三天的训练期，两组之间有两天的间隔。每一训练期由两 组三个实验组成，其是紧密连续地进行。实验通过将啮齿动物放入池中，面向水箱的壁开 始。以随机化顺序使用四个起始位置（北、东、南和西）。逃脱台始终处于同一象限中。一 旦动物爬上逃脱台或者在60秒过去后（无论哪个事件首先发生），即终止实验。一旦啮齿 动物达到平台，即允许其停留30秒以使得其能够将逃脱台与水箱上的特定位置相关联。然 后将其从平台移走并开始下一次实验。如果动物未在60秒内找到平台，则实验者将其放在 平台上并使其在那停留30秒。在第一训练期期间，放置视觉线索以标记平台的位置。在下 一个训练期移除该线索。在训练期期间，记录到达平台的等待时间。
[0447] 在第二组训练期结束之后的那天进行评价：移除平台，在60秒内测量啮齿动物在 训练期期间于布置有平台的水池象限（目标象限）中所花费时间。在探测实验中，从与目 标象限相反的相同起始位置释放所有动物。经MK-801治疗的动物不能有效学习与记忆平 台所处的地方，如表现出更长的游泳距离和逃脱等待时间以及这些动物花费在目标象限上 的时间（相比于其他象限约为平均）。经MK-801和相应POP抑制剂处理的动物在测试中表 现出更好的表现一一学习平台的位置（如反映为在目标象限所花费时间的更高百分比）， 因此示出MK-801的作用得以有效逆转。使动物保持休息一周后再训练4天。在第五天，移 除平台并且进行第二评价。
[0448] T迷宫交替任务
[0449] 采用T迷宫交替任务来测试工作记忆。根据一般的尺度和方法在由木材构成并涂 黑的T迷宫中进行实验。侧通道通过可移动的门与主通道隔离。在适应前一周，对所有动 物部分限食并在实验的整个剩余部分保持这样的方式，从而使动物保持其自由进食时体重 的85%。摄像机位于T迷宫上方约lm以对测试期进行录像。在不同动物之间对T迷宫进 行清洁而在不同实验之间不进行清洁。整个实验由三部分组成：适应、训练和测试。在适应 期间，将所有动物放置在T迷宫上直至其进食两块食物或90秒已逃脱。将此每天重复三次， 进行5天。在逝签期间，所有动物每天接受六次实验。每次实验由两种跑动组成：强迫跑动 和自由跑动。在强迫跑动中。强迫啮齿动物从T迷宫的一个目标支路（arm)(其他目标支 路被其门阻挡）获得一块食物。然后将动物放回起始支路，保持10秒的延迟时间。在自由 跑动开始时，允许动物选择任一目标支路。如果动物选择与其在强迫跑动期间被迫进入的 支路相反的支路，则其接收到食物奖励。如果动物选择其被迫进入的同一支路，则其接收不 到食物奖励。实验中间间隔为5分钟。对照动物在连续两天作出>70%的正确选择后，训 练期结束。动物需要7至12天来达到标准。从研宄中排除14天未达到标准的动物。然后 在10秒或40秒的延迟时间，测试啮齿动物的表现。在测试日期间，给予动物三次10秒延 迟实验和三次40秒延迟实验。对药物测试而言，在药物暴露15分钟之后，给予啮齿动物六 次10秒延迟实验。每天随机化延迟次序和强迫活动食物位置（左边或右边），只要没有将 相同的延迟或相同的被迫支路位置用于一组的三次实验。目标进入定义为四个脚爪放在支 路内。
[0450] 在测试期前35分钟，以如物体识别测试所述的相同剂量和体积s. c.注射相应评 价的POP抑制剂，接着15分钟后i.P.注射MK-801抑制剂（或者在对照的情况下为PBS)。
[0451] 对照动物在第1天至第4天的训练之间表现出具有接近偶然水平（chance level) 表现（约50%的正确支路进入）的学习曲线，并且训练的第11天至第14天之间逐步改进 直至达到70%的正确支路进入的平台期。其表现在10秒和40秒延迟实验中保持稳定。经 MK-801处理的动物不能有效学习交替任务并表现低于延迟实验的偶然水平。经MK-801和 相应POP抑制剂处理的动物在测试中表现出更好的性能，具有与对照动物类似的学习曲线 并且在延迟实验中保持记忆，因此示出MK-801的影响得以有效逆转。
【主权项】
1. 式（I)化合物或其可药用盐、异构体、前药或溶剂合物：其中 R1、R2、R3和R 4独立地选自C η烷氧基、C η烷基羰基氧基、苄基氧基、苯基羰基氧基、萘 基幾基氧基、卩奎琳基幾基氧基、异卩奎琳基幾基氧基、二氣甲基、卤素和氣； R5选自卤素、臆、C n烷氧基、C n烷基硫基、C n烷基、苯基、苯氧基、苯硫基和二氣甲基； R6选自氢、氟和甲基。2. 根据权利要求1所述的化合物，其中R2和R4独立地选自氢、卤素、三氟甲基和C η烷 氧基。3. 根据权利要求2所述的化合物，其中R2选自氢和甲氧基，并且R4选自氟、三氟甲基 和甲氧基。4. 根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中R 3是苄基氧基。5. 根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中R 5是氟。6. 根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中R6是氢或氟。7. 根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自： ? (S)-1-((2S，4R)-1-(4-(苄基氧基）-3,5_二甲氧基苯甲酰基）-4-甲氧基吡咯 烧_2_幾基）R比略烧-2-甲腈 ? (S) -I- ((2S，4R) -1- (4-(苄基氧基）-3, 5-二甲氧基苯甲酰基）-4-氟吡咯烷-2-羰 基）吡咯烷-2-甲腈 ? (S) -I- ((2S，4S) -1- (4-(苄基氧基）-3，5-二甲氧基苯甲酰基）-4-苯基吡咯烷-2-羰 基）吡咯烷-2-甲腈 ? (S) -I- ((2S) -1- (4-(苄基氧基）-3，5-二甲氧基苯甲酰基）-4,4-二氟吡咯烷-2-羰 基）吡咯烷-2-甲腈 ? (S) -I- ((2S，4S) -1- (4-(苄基氧基）-3，5-二甲氧基苯甲酰基）-4-(甲基硫基）吡咯 烧_2_幾基）R比略烧-2-甲腈 ? (S) -I- ((2S，4S) -1- (4-(苄基氧基）-3，5-二甲氧基苯甲酰基）-4-甲基吡咯烷-2-羰 基）吡咯烷-2-甲腈 ? (S) -I- ((2S，4R) -1- (4-(苄基氧基）-3，5-二甲氧基苯甲酰基）-4-氰基吡咯烷-2-羰 基）吡咯烷-2-甲腈 ?⑶-I- ((2S，4S) -1- (4-(苄基氧基）-3，5-二甲氧基苯甲酰基）-4-(三氟甲基）-吡 咯烷-2-羰基）吡咯烷-2-甲腈 ? (S) -I- ((2S，4R) -I- (4-(苄基氧基）-3，5-二甲氧基苯甲酰基）-4-(叔丁氧基）吡咯 烧_2_幾基）R比略烧-2-甲腈 ? (S)-1-((2S，4R)-1-(4-(苄基氧基）-3,5_二甲氧基苯甲酰基）-4-乙酰氧基吡咯 烧_2_幾基）R比略烧-2-甲腈 ? (S) -I- ((2S) -1- (4-乙酰氧基-3, 5-二甲氧基苯甲酰基）-4,4-二氟吡咯烷-2-羰 基）吡咯烷-2-甲腈 ?(幻-1-((2幻-1-(4-苯甲酰氧基-3,5-二甲氧基苯甲酰基）-4,4-二氟吡咯烷-2-羰 基）吡咯烷-2-甲腈 ? (S) -I- ((2S) -1- (3,4-二苄基氧基-5-甲氧基苯甲酰基）-4,4-二氟吡咯烷-2-羰 基）吡咯烷-2-甲腈 ? (S) -I- ((2S) -1- (3,4-二苯甲酰氧基-5-甲氧基苯甲酰基）-4,4-二氟吡咯烷-2-羰 基）吡咯烷-2-甲腈 ? (S) -I- ((2S) -1- (3-乙酰氧基-4, 5-二甲氧基苯甲酰基）-4,4-二氟吡咯烷-2-羰 基）吡咯烷-2-甲腈 ? (S) -I- ((2S) -1- (3-特戊酰氧基-4, 5-二甲氧基苯甲酰基）-4,4-二氟吡咯烷-2-羰 基）吡咯烷-2-甲腈 ? (S)-I-((S)-1-(4-(苄基氧基）苯甲酰基）-4,4-二氟吡咯烷-2-羰基）吡咯烷-2-甲 腈 ? (S)-1-((S)-1-(3-(苄基氧基）苯甲酰基）-4,4-二氟吡咯烷-2-羰基）吡咯烷-2-甲 腈 ? (S)-1-((S)-1-(2-(苄基氧基）苯甲酰基）-4,4-二氟吡咯烷-2-羰基）吡咯烷-2-甲 腈 ? (S) -I- ((S) -1- (4-(苄基氧基）-3-(三氟甲基）苯甲酰基）-4,4-二氟吡咯烷-2-羰 基）吡咯烷-2-甲腈 ? (S)-1-( (S)-1-(4-(苄基氧基）-3-氟苯甲酰基）-4,4-二氟吡咯烷-2-羰基）吡咯 烷-2-甲腈 或其可药用盐、异构体、前药或溶剂合物。8.用于制备根据权利要求1至7中任一项所限定的式（I)化合物或其可药用盐、异构 体、前药或溶剂合物的方法，其包括： a)使式（IX)化合物与式（XI)化合物反应：在式（IX)化合物中R1、R2、R3、R4、R 5和R6如上式⑴中所限定，以产生式（XII)化合 物；b) 使所述式（XII)化合物水解以产生式（XIV)化合物 以及c) 使所述式（XIV)化合物处于能够将甲酰胺基团转化为腈基团的条件，以产生所述式 ⑴化合物； 其中步骤b)和c)可分开或以一釜式反应进行。9. 用于制备根据权利要求1至7中任一项所限定的式（I)化合物或其可药用盐、异构 体、前药或溶剂合物的方法，其包括使式（IX)化合物与式（IV)化合物反应：其中H R3、R4、R5和R 6如上式（I)中限定；10. 药物组合物，其包含至少一种根据权利要求1至7中任一项所述的式（I)化合物或 其可药用盐、异构体、前药或溶剂合物，以及可药用载体、辅药或载剂。11. 如权利要求1至7中任一项所限定的式（I)化合物，其用作药物。12. 如权利要求1至7中任一项所限定的式（I)化合物，其用于治疗和/或预防认知障 碍。13. 如权利要求12中所限定使用的化合物，其中所述认知障碍是与选自以下的疾病相 关的认知障碍：精神分裂症、双相情感障碍、阿尔茨海默病和帕金森病。14. 用于在哺乳动物中治疗或预防认知障碍的方法，其中向有所述治疗之需要的患者 施用治疗量的根据权利要求1至7中任一项所限定的化合物。15. 如权利要求14所限定的方法，其中所述认知障碍是与选自以下的疾病相关的认知 障碍：精神分裂症、双相情感障碍、阿尔茨海默病和帕金森病。16. 如权利要求1至7中任一项所限定的式（I)化合物用于制备药物的用途。17. 如权利要求1至7中任一项所限定的式（I)化合物在制备用于治疗和/或预防认 知障碍的药物中的用途。18. 如权利要求17所限定的用途，其中所述认知障碍是与选自以下的疾病相关的认知 障碍：精神分裂症、双相情感障碍、阿尔茨海默病和帕金森病。
【专利摘要】本发明涉及具有药理活性的式(I)的1-[1-(苯甲酰基)-吡咯烷-2-羰基]-吡咯烷-2-甲腈衍生物，制备这类化合物的方法，包含其的药物组合物及其在治疗和/或预防认知障碍中的用途。
【IPC分类】C07D403/06, A61K31/401, A61P25/00
【公开号】CN104903314
【申请号】CN201380059126
【发明人】埃内斯特·希拉尔特列多, 特里萨·塔拉戈克卢瓦, 罗格·普拉德斯科萨诺, 索莱达·罗约格拉西亚
【申请人】巴塞罗纳大学, 生物医药研究基金会机构(Irb巴塞罗那), 伊普罗透斯有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2013年11月11日
【公告号】CA2890042A1, EP2730571A1, EP2917209A1, WO2014072498A1