030] 注：1)其中TO22MIC即抗菌肽TO22的最小抑菌浓度，大肠杆菌09、大肠杆菌064 和大肠杆菌0141分别表示血清型为09、064和0141的致病大肠杆菌。
[0031] 2)所述结果为五次独立重复实验结果的平均值。
[0032] 实施例3 :抗菌肽TO22的细胞毒性实验
[0033] 猪小肠上皮细胞IPEC-I(中国科学院亚热带农业生态研究所提供）培养于含有 5%太牛血清、200U/mL双抗（青霉素和链霉素各100U/mL)，5ug/L表皮生长因子（EGF)的HAM'S/F12培养基中培养至对数期，用磷酸盐缓冲液（HyClone)清洗三遍后，加入0.25% (2. 5g/L)的胰蛋白酶消化至单个细胞，加入HAM'S/F12培养基后400g离心4分钟，弃上清 后用新鲜的HAM'S/F12培养基悬浮细胞，调整至细胞密度为IXIO6个/mL，然后往96孔细 胞培养板每孔中加入200uL，待细胞贴壁后加入不同浓度抗菌肽TO22,置于二氧化碳培养 箱（37°C、5%CO2)培养24小时后，每孔中加入20uLCCK-8 (碧云天）CCK-8溶液，继续培 养2小时，然后用酶标仪检测450nm波长的吸光值。检测结果如图1所示（其中ro22-300 表示 300ug/mL抗菌肽H)22 ;ro22-200 表示 200ug/mL抗菌肽H)22 ;PD22-100 表示IOOug/ mL抗菌肽TO22 ;PBS为磷酸盐缓冲液（对照组），所述实验结果为五次独立实验结果的平 均值，从图1中可以看出，虽然抗菌肽TO22细胞毒作用随着其添加浓度而增加，但是抗菌肽 TO22的细胞毒很小。即使在300ug/mL的浓度下，抗菌肽TO22对猪小肠上皮细胞IPEC-I也 存在很低（小于10% )的细胞毒副作用。
[0034]实施例4 :抗菌肽TO22对断奶仔猪（24日龄）大肠杆菌攻毒实验
[0035]选取24日龄杜洛克X长白X大白断奶仔猪240头，采用单因子试验设计，按体重 和性别随机分到4个处理组，阴性对照组为基础日粮，PD22-50组为基础日粮中添加50mg/ kg抗菌肽H)22 ;PD22-100组为基础日粮中添加100mg/kg抗菌肽TO22,阳性对照组为基础 日粮中添加l〇〇mg/kg金霉素，每组6个重复，每个重复10头猪，试验期为14天。各处理组 仔猪断奶当天开始饲喂不同日粮，4天后开始攻毒，每头仔猪按总大肠杆菌IXIO9个细胞分 早晚2次给服两次培养液（由接种大肠杆菌的LB培养液于37°C恒温培养箱中震荡培养48 小时获得）。抗菌肽TO22对大肠杆菌攻毒断奶仔猪腹泻率的影响见图3。其中TO22-50表 示基础日粮中添加50mg/kg抗菌肽TO22 ;PD22-300表示基础日粮中添加100mg/kg抗菌肽 PD22 ;阴性对照为基础日粮；阳性对照为基础日粮中添加100mg/kg金霉素。从图2的试验 结果可以看出：与阴性对照相比，抗菌肽TO22可显著降低断奶仔猪腹泻率。
[0036] 实施例5 :抗菌肽TO22对断奶仔猪生长性能和肠道健康的影响
[0037] 选取24日龄杜洛克X长白X大白断奶仔猪240头，采用单因子试验设计，按体 重和性别随机分到3个处理组，对照组不添加抗菌肽TO22,PD22-45组日粮中添加抗菌肽 H)22 45mg/kg;PD22-90组日粮中添加抗菌肽H)22 90mg/kg，每组8个重复，每个重复10头 猪，试验期10天。基础日粮配方见表2。抗菌肽TO22对断奶仔猪生产性能、腹泻率和肠道 形态结构的影响见图3和表3-4。从表2的试验结果可以看出抗菌肽TO22可显著提高断奶 仔猪日增重和降低料重比。从图3的试验结果可以看出抗菌肽TO22可显著降低断奶仔猪 腹泻率。从表3的试验结果可以看出抗菌肽TO22能够显著提高断奶仔猪空肠和回肠绒毛 高度及绒毛高度与隐窝深度的比值，说明抗菌肽TO22能够显著改善断奶仔猪肠道功能。
[0038] 表2:基础日粮组成表
[0039]
[0041] 复合维生素配方：维生素A4g，维生素D31g，维生素E16g，维生素k0. 6g，维生 素BI0. 8g，维生素B2 1.7g，维生素B6lg，维生素B12 1.3g，烟酸15g，D-泛酸钙5g，生物 素〇? 5g，补足沸石粉到1000g。
[0042] 复合矿物质配方：五水硫酸铜102g，硫酸亚铁61g，一水硫酸锌20g，硫酸猛30g，含 硒1 %的亚硒酸钠4g，含碘1 %的碘酸钙10g，补足沸石粉到1000g。
[0043] 表3 :抗菌肽TO22对24日龄断奶仔猪生长性能的影响表
[0047] 尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例 性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨 的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
【主权项】
1. 一种抗菌肽ro22,其特征在于：所述抗菌肽TO22的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所 不。2. 权利要求1所述抗菌肽TO22的用途，其特征在于，所述用途为抗菌的用途。3. 权利要求2所述抗菌肽TO22的用途，其特征在于，所述抗菌为抗大肠杆菌、沙门氏菌 和或魏氏梭菌。4. 权利要求1所述抗菌肽TO22的用途，其特征在于，所述用途为用于饲养家禽的用途。5. 权利要求4所述抗菌肽TO22的用途，其特征在于，所述家禽为猪、鸡、鸭或鹅。6. 权利要求5所述抗菌肽TO22的用途，其特征在于，所述猪为乳仔猪、断奶仔猪、生长 猪或种猪。7. 权利要求5所述抗菌肽TO22的用途，其特征在于，所述鸡为肉鸡或蛋鸡。8. 权利要求6所述抗菌肽TO22的用途，其特征在于，所述用途指的是提高断奶仔猪日 增重和降低料重比。9. 权利要求6所述抗菌肽TO22的用途，其特征在于，所述用途指的是降低断奶仔猪腹 泻率。10. 权利要求6所述抗菌肽TO22的用途，其特征在于，所述用途指的是改善断奶仔猪肠 道功能。
【专利摘要】本发明公开了一种抗菌肽PD22及其用途。所述抗菌肽PD22的氨基酸序列如SEQ？ID？NO:1所示。本发明中的抗菌肽PD22具有分子量小、人工合成方便且成本低、对大肠杆菌、沙门氏菌和魏氏梭菌等细菌杀菌作用强、细胞毒性低，在断奶仔猪饲料中应用能够显著降低断奶仔猪腹泻率和提高断奶仔猪的生长速度的优点。
【IPC分类】C07K7/08, A61P31/04, A23K1/17, A61K38/10, A23K1/18
【公开号】CN105001308
【申请号】CN201510519074
【发明人】杨焕胜, 肖丽萍, 施建成, 周盛昌, 杨林, 姜文, 叶俊标
【申请人】漳州傲农牧业科技有限公司
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2015年8月21日