下氧幾基（正下基）氨基赃晚（化合物IV-1)添加至1-((4-甲 基-哇挫嘟-2-基）甲基）-3-甲基-7- (2, 3-二甲基下-2-締-1-基）-8-氯-黄嚷岭 (化合物ΠΙ-1)与碳酸钢的二甲亚讽混合溶液中。将反应混合物于55°C下揽拌20小 时。为进行处理，将其与水混合，并抽滤所形成的沉淀物。使固体沉淀物溶于二氯甲烧 中，与Ξ氣醋酸混合，并于室溫下揽拌半小时。为进行处理，将反应混合物W二氯甲烧稀 释，并w饱和碳酸钟溶液洗涂，有机相用无水硫酸钢干燥，蒸干，并经过硅胶柱层析，w二 氯甲烧/甲醇（1:0至4:1)洗脱，得^(4-哇挫嘟-2-基甲基）-3-甲基-7-(2,3-二甲 基下-2-締-1-基）-8-(佩-3-(赃晚-3-基氨基）赃晚-1-基）-黄嚷岭（分子式： C32H43N9O2；)〇 阳 17引 质谱巧sr) :m/z= 586[M+H]+;
[0174]元素分析：C, 65. 62 化 7. 40 ;N, 21. 52 ;0, 5. 46 ; 阳 1 巧]iH-NMR(d6-DMS0) :8. 11 (1H)，7. 85 (2H)，7. 59 (1H)，4. 43 (2田，4. 39 (2H)，3. 49 (1H) ,3. 39(3H), 3. 31(1H), 3. 27 (2H), 3. 22(1H), 2. 94(3H), 2. 87(1H), 2. 76 (2H), 2. 71(1H), 2. 63 (2H)，2. 02 (IH)，1. 79 巧H)，1. 71 (2H)，1. 58 (4H)，1. 48 (2H)。 阳176] W类似方法还可制备得到W下化合物： 阳 177]
阳180] 麻用连施俩I:制备终产物 阳181] 1.制备^((4-甲基-哇挫嘟-2-基）甲基）-3-甲基-7-(2-下 烘-1-基）-8-((时-3- (N1-正下基双脈基）-赃晚-1-基）-黄嚷岭（化合物1-1) 阳 182]
[0183]将双氯胺溶于异丙醇中，加入佩-8-(3-正下基氨基赃晚-1-基）-7-(2-下 烘-1-基）-3-甲基-1-((4-甲基哇挫嘟-2-基）甲基）-3,7-黄嚷岭（化合物11-1)，用 36%肥1调节抑5~6,控制溫度在80~100°C反应6小时，反应完成后静置冷却，析出大 量白色晶体，抽滤，洗涂，干燥后用无水乙醇重结晶，得标题化合物（分子式：〔3而4斯2化;）。 阳184]质谱巧sr):m/z=613[M+H]+; 阳化5]元素分析：C, 60. 77 化 6. 58 ;N, 27. 43 ;0, 5. 22 ; 阳186]'H-NMR(d6-DMS0) ：8. 12 (IH), 7. 85 (2H,br), 7. 80 (2H), 7. 59 (IH), 6. 63 (2H,br), 4. 43 (4H)，3. 59 (IH)，3. 38 (3H)，3. 34 (IH)，3. 30 (2H)，3. 28 (2H)，2. 95 (3H)，2. 65 (IH)，2. 0 (IH, br)，1. 80 (3H)，1. 70 (IH)，1. 30-1. 58 (7H)，0. 89 (3H)。 阳187] 2. ^((4-甲基-哇挫嘟-2-基）甲基）-3-甲基-7-(2-氯基节 基）-8-((时-3- (N1-正下基双脈基）-赃晚-1-基）-黄嚷岭（化合物1-2)的制备阳18引
[0189]将双氯胺溶于异丙醇中，加入佩-8-(3-正下基氨基赃晚-1-基）-7-(2-下 烘-1-基）-3-甲基-1-((4-甲基哇挫嘟-2-基）甲基）-3,7-黄嚷岭（化合物11-1)，用 36%肥1调节抑5~6,控制溫度在80~100°C反应6小时，反应完成后静置冷却，析出大 量白色晶体，抽滤，洗涂，干燥后用无水乙醇重结晶，得标题化合物（分子式：〔35成术12〇2)。 阳190]质谱巧Sr):m/z=661[M+H]+ 阳191]元素分析：C, 63. 62 ;H, 6. 10 ;N, 25. 44 ;0, 4. 84。
[0192]'H-NMR(d6-DMS0) ：8. 06(1H), 8.Ol(lH), 7. 83 (2H), 7. 75(1H), 7. 63(1H), 7. 52 (3H) ,7. 46 (IH), 7. 30 (2H), 6. 62 (2H), 5. 47 (2H), 4. 76 (2H), 3. 61 (IH), 3. 39 (3H), 3. 34 (IH), 3. 30 (2H)，3. 25 (2H)，2. 63 (IH)，2. 15 (IH)，1. 83 (IH)，1. 48-1. 58 巧H)，1. 30 (2H)，0. 89 (3H)。 阳193] W类似方法制备W下化合物 阳194]
阳1河表2阳196]
阳197] 生物学实施例 阳198]1.DPP-IV检测 阳199] 使用人类结肠癌细胞系化C0-2的萃取物作为DPP-IV来源。为诱发DPP-IV表达， 细胞的分化按文献（Reiher等，"肠细胞系化C0-2的增加表达"，在Proc.化tl.Acad.Sci. 第90卷，第5757-5761页（1993))中所述进行。细胞萃取物是于4°C下，通过在35,OOOg下 离屯、30分钟（W去除细胞碎屑），将其溶解于缓冲剂（10μmTns肥1，0. 15M化C1，0. 04t. i.u.抑酶肤，0. 5%Nonidet-P40,p册.0)中而得到。 阳200] 将50微升最后浓度为100μπι的酷氨基-4-Ξ氣甲基香豆素（AFC)基质溶液放 置在黑色微滴定板中。将20微升检测缓冲液（最后浓度为50μmTns-HCl，抑7. 8, 50μm化Cl，1%DMSO)W吸移管吸取。反应是通过添加30微升已溶解的化CO-2蛋白质（每孔最 后浓度为0. 14微克蛋白质）开始。通常将要被研究的待测物质，预先稀释在20微升检测缓 冲液而再添加，其中检测缓冲液的体积相应减少。反应是在室溫下进行，培养60分钟。然 后，在Victorl4Multil油el计数器中测量蛋光，激发波长为405毫微米，而发射波长为535 毫微米。空白试验读数（相当于0%活性）是在没有任何Caco-2蛋白质（体积由检测缓冲 液置換）的混合物中获得，对照值（相当于100%活性）是在未添加物质的混合物中获得。 于讨论中的待测物质的药效，WICs。值代表，是由剂量/活性曲线计算，其在各情况中包含 11个测量点。 阳2〇U 本发明的实施例化合物1-1~13 (双脈衍生物）的ICw值《lOnM，并且其1CW值 显著低于相应的氨基衍生物，例如低于大约1/5~1/10。详细结果见下表2。 阳20引表2:本发明化合物对DPP-IV的抑制作用阳203]
[0204] 2.本发明化合物对四氧喀晚糖尿病小鼠血糖的影响 阳205] 选健康小鼠60只，随机分出10只作为正常对照组（生理盐水0. 5ml/只），其余50 只小鼠禁食不禁水24小时，各鼠均腹腔注射四氧喀晚180mg/kg，其后72小时眼眶采血测定 血糖，血糖浓度高于11.Immol/L者为糖尿病模型小鼠。将50只糖尿病模型小鼠随机分为 5组：实验性糖尿病空白组（生理盐水0. 5ml/只），利格列汀组巧mg/kg)，本发明化合物的 高剂量组巧mg/kg)、中剂量组（Img/kg)、低剂量组（0.2mg/kg)。每天上午8:00~9:00灌 胃给药，连续30d。禁食1化从后小鼠眼眶后静脉丛取血测血糖值。 阳206] 结果显示，本发明的实施例化合物1-1-13(双脈衍生物）均不同程度表现出比相 应的氨基衍生物更强烈的降血糖作用和显著延长的作用时间，而且不易出现低血糖。例如， 实施例化合物1-1-13的低剂量组均表现出具有比利格列汀组更强且更持久的降血糖能 力，具有显著性差异（p< 0.05)。
【主权项】
1. 如下式（II)所示的化合物、其立体异构体，或者其盐： 其中，Ri代表CIS烷基，所述CIS烷基可被RI2-CO-取化并且Ri2代表二（C16烷基）氨基、化 咯烧-1-基、赃晚-1-基或Ce1。芳基； R2代表C1S烷基或Ce1。芳基； R3代表苄基、C2S締基、C2S烘基或CsS环締基甲基，其中苄基中的苯环可被1个或多个 面素或氯基取代； R4代表C1S烷基、C3巧烷基、C3 8兀杂环烷基、C6 1。芳基或C5 1。兀杂芳基； R5代表氨或者代表氨基保护基。2. 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，Ri代表二甲氨基幾基甲基、化咯 烧-1-基幾基甲基、苯基幾基甲基。3. 根据权利要求1或2任一项所述的化合物，其特征在于，R2代表甲基、异丙基或苯基。4. 根据权利要求1-3任一项所述的化合物，其特征在于，R3代表2-甲基-2-丙 締-1-基、2-了締-1-基、2, 3-二甲基-2- 了締-1-基、2-了烘-1-基、1-环戊締-1-基甲 基、1-环己締-1-基甲基、苄基、2-氯基苄基或2, 6-二氯基苄基。5. 根据权利要求1-4任一项所述的化合物，其特征在于，R4代表正下基、环己基、苯基、 赃晚基或化晚基。6. 根据权利要求1-5任一项所述的化合物，其特征在于，所述的氨基保护基选自甲氧 幾基、乙氧幾基、叔下氧基幾基、节氧幾基、2-联苯基-2-丙氧幾基、对甲苯横酷基、=氣乙 酷基、赞甲氧幾基、締丙氧幾基、=甲基娃乙氧幾基、邻苯二甲酯基、对甲苯横酷基、=氣乙 酷基、邻或对硝基苯横酷基、特戊酷基、苯甲酯基、=苯甲基、2, 4-二甲氧基苄基、对甲氧基 苄基或苄基。7. 根据权利要求1所述的化合物，选自： 表18.根据据权利要求1-7任一项所述的化合物作为中间体在制备用于预防或治疗与DPP-IV相关的疾病的药物中应用。
【专利摘要】本发明涉及一种制备作为二肽基肽酶-4抑制剂的化合物的中间体化合物，所述双胍衍生物可用于治疗可因抑制DPP-IV活性而受益的所有症状或病症，例如I型和II型糖尿病、糖尿病并发症及其它相关疾病。
【IPC分类】A61P1/04, A61P25/16, A61P27/02, A61P11/00, A61P17/06, A61P25/28, A61P35/00, A61P37/02, A61P13/12, A61P19/02, A61P3/04, A61P25/18, A61P25/06, A61P3/10, A61P9/12, A61P19/10, A61P35/02, C07D473/06, A61P7/10, A61P37/06, A61P9/10, A61P3/06, A61P31/18, A61P25/00, C07D473/04, A61P25/24
【公开号】CN105367572
【申请号】CN201510889559
【发明人】王莺妹, 何人宝
【申请人】浙江永太科技股份有限公司
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2014年12月26日
【公告号】CN104592235A, CN104592235B