述蛋白质。19. 如权利要求18所述的方法，其特征在于，在凝胶电泳之前，使所述蛋白质与所述环 糊精和所述试剂接触。20. 如权利要求19所述的方法，其特征在于，所述环糊精和试剂悬浮于缓冲液中，并且 所述接触包括使所述蛋白质与所述缓冲液接触。21. 如权利要求18所述的方法，其特征在于，在凝胶电泳之后，使所述蛋白质与所述环 糊精和所述试剂接触。22. 如权利要求21所述的方法，其特征在于，所述环糊精和试剂悬浮于缓冲液中，并且 使所述电泳凝胶与所述缓冲液接触，由此允许所述环糊精和试剂扩散进入所述电泳凝胶， 并使所述蛋白质与所述环糊精和试剂接触。23. 如权利要求18所述的方法，其特征在于，所述环糊精或试剂是所述电泳凝胶的组 成部分，并且在对所述蛋白质进行凝胶电泳之时，使所述蛋白质与所述环糊精或所述试剂 接触。24. 如权利要求18-23中任一项所述的方法，所述方法还包括： 将所述蛋白质转移出所述电泳凝胶并转移至印迹膜上；和 检测所述印迹膜上的蛋白质。25. 如权利要求24所述的方法，其特征在于，所述方法还包括从所述蛋白质移除环糊 精、试剂，或产物。26. 如权利要求24所述的方法，其特征在于，所述蛋白质包含亲和标签或抗体结合表 位，并且，检测所述印迹膜上的蛋白质包括：使所述印迹膜与所述亲和标签或抗体结合表位 的结合伴侣接触。27. 如权利要求26所述的方法，其特征在于，所述亲和标签或抗体结合表位包含色氨 酸残基。28. 如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述亲和标签是Strep-标签。29. -种组合物，其包含： 环糊精，其共价连接至至少一种标记物；和 试剂，其能与至少一种标记物发生化学相互作用，由此使所述标记物可检测。30. 如权利要求29所述的组合物，其特征在于，所述环糊精选自下组：α-环糊精、 β-环糊精、甲基-β-环糊精和γ-环糊精。31. 如权利要求29所述的组合物，其特征在于，所述至少一种标记物共价连接至一个 或多个吡喃葡萄糖单位的一个或多个6位处。32. 如权利要求29所述的组合物，其特征在于，所述至少一种标记物包含吲哚部分。33. 如权利要求32所述的组合物，其特征在于，所述至少一种标记物包含色氨酸残基。34. 如权利要求33所述的组合物，其特征在于，所述至少一种标记物包含多肽。35. 如权利要求32所述的组合物，其特征在于，所述至少一种标记物不包含色氨酸残 基。36. 如权利要求29所述的组合物，其特征在于，所述试剂是卤素取代的有机化合物。37. 如权利要求36所述的组合物，其特征在于，所述卤素取代的有机化合物选自下组： 氯仿、二氯乙醇、二氯乙酸酯，和3-溴-1-丙醇。38. 如权利要求29所述的组合物，其特征在于，所述至少一种标记物包含生物素部分。39. 如权利要求29所述的组合物，其特征在于，所述试剂包含选自下组的蛋白质：亲和 素、链霉亲和素和中性亲和素。40. 如权利要求29所述的组合物，其特征在于，每个环糊精的标记物的平均数量是至 少 1、2、3、4、5、6、7、8、12、14、16、18、21 或 24 个。41. 一种电泳凝胶，其包含如权利要求29-40中任一项所述的组合物。42. -种电泳凝胶，其包含共价连接至至少一种标记物的环糊精。43. 如权利要求42所述的电泳凝胶，其特征在于，所述环糊精选自下组：α-环糊精、 β-环糊精、甲基-β-环糊精和γ-环糊精。44. 如权利要求42所述的电泳凝胶，其特征在于，所述至少一种标记物共价连接至一 个或多个吡喃葡萄糖单位的一个或多个6位处。45. 如权利要求42所述的电泳凝胶，其特征在于，所述至少一种标记物包含吲哚部分。46. 如权利要求45所述的电泳凝胶，其特征在于，所述至少一种标记物包含色氨酸残 基。47. 如权利要求46所述的电泳凝胶，其特征在于，所述至少一种标记物包含多肽。48. 如权利要求45所述的电泳凝胶，其特征在于，所述至少一种标记物不包含色氨酸 残基。49. 如权利要求42所述的电泳凝胶，其特征在于，所述至少一种标记物包含生物素部 分。50. 如权利要求42所述的电泳凝胶，其特征在于，每个环糊精的标记物的平均数量是 至少 1、2、3、4、5、6、7、8、12、14、16、18、21 或 24 个。51. -种试剂盒，其包含如权利要求29-40中任一项所述的组合物。52. 如权利要求51所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含电泳凝胶，其中所述 组合物是所述电泳凝胶的组成部分。53. -种试剂盒，其包含如权利要求41-50中任一项所述的电泳凝胶。54. -种试剂盒，其包含： 环糊精，其共价连接至至少一种标记物；和 试剂，其能与至少一种标记物发生化学相互作用，由此使所述标记物可检测。55. 如权利要求54所述的试剂盒，其特征在于，所述环糊精选自下组：α-环糊精、 β-环糊精、甲基-β-环糊精和γ-环糊精。56. 如权利要求54所述的试剂盒，其特征在于，所述至少一种标记物共价连接至一个 或多个吡喃葡萄糖单位的一个或多个6位处。57. 如权利要求54所述的试剂盒，其特征在于，所述至少一种标记物包含吲哚部分。58. 如权利要求57所述的试剂盒，其特征在于，所述至少一种标记物包含色氨酸残基。59. 如权利要求58所述的试剂盒，其特征在于，所述至少一种标记物包含多肽。60. 如权利要求57所述的试剂盒，其特征在于，所述至少一种标记物不包含色氨酸残 基。61. 如权利要求54所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂是卤素取代的有机化合物。62. 如权利要求61所述的试剂盒，其特征在于，所述卤素取代的有机化合物选自下组： 氯仿、二氯乙醇、二氯乙酸酯，和3-溴-1-丙醇。63. 如权利要求54所述的试剂盒，其特征在于，所述至少一种标记物包含生物素部分。64. 如权利要求54所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包含选自下组的蛋白质：亲和 素、链霉亲和素和中性亲和素。65. 如权利要求54所述的试剂盒，其特征在于，每个环糊精的标记物的平均数量是至 少 1、2、3、4、5、6、7、8、12、14、16、18、21 或 24 个。66. 如权利要求54-65中任一项所述的试剂盒，其还包含电泳凝胶，其中，所述环糊精 是所述电泳凝胶的组成部分。67. 如权利要求54-65中任一项所述的试剂盒，其还包含电泳凝胶，其中，所述试剂是 所述电泳凝胶的组成部分。68. 如权利要求67所述的试剂盒，其特征在于，所述环糊精也是所述电泳凝胶的组成 部分。69. 如权利要求54-65中任一项所述的试剂盒，其还包含水性缓冲液，其中，所述环糊 精是所述水性缓冲液的组成部分。70. 如权利要求69所述的试剂盒，其特征在于，所述水性缓冲液是利姆里缓冲液。71. -种组合物，其包含共价连接至至少一种取代的吲哚部分的环糊精。72. 如权利要求71所述的组合物，其特征在于，所述环糊精选自下组：α-环糊精、 β-环糊精、甲基-β-环糊精和γ-环糊精。73. 如权利要求71所述的组合物，其特征在于，所述至少一种取代的吲哚部分共价连 接至一个或多个啦喃葡萄糖单位的一个或多个6位处。74. 如权利要求71所述的组合物，其特征在于，所述取代的吲哚部分的分子量与未取 代的吲哚部分相差28、44或58Da。75. 如权利要求71所述的组合物，其特征在于，所述取代的吲哚部分包含甲酰基、羧 酸、羟基乙酮或丙醇基团。76. 如权利要求71所述的组合物，其特征在于，所述取代的吲哚部分是未取代的吲哚 部分与卤素取代的有机化合物的紫外光诱导的反应的产物。77. 如权利要求76所述的组合物，其特征在于，所述卤素取代的有机化合物选自下组： 氯仿、二氯乙醇、二氯乙酸酯，和3-溴-1-丙醇。78. 如权利要求71所述的组合物，其特征在于，每个环糊精的取代的吲哚部分的平均 数量是至少 1、2、3、4、5、6、7、8、12、14、16、18、21 或 24 个。79. -种电泳凝胶，其包含如权利要求71-78中任一项所述的组合物。80. -种试剂盒，其包含如权利要求71-78中任一项所述的组合物。81. 如权利要求80所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含电泳凝胶，其中所述 组合物是所述电泳凝胶的组成部分。82. -种试剂盒，其包含如权利要求79所述电泳凝胶。83. -种检测蛋白质的方法，所述方法包括： 使所述蛋白质与权利要求71-78中任一项所述的组合物接触； 使所述蛋白质暴露至紫外光； 检测荧光发射，由此检测所述蛋白质。84. 如权利要求83所述的方法，所述方法还包括对所述蛋白质进行凝胶电泳，并且其 中在电泳凝胶中检测所述蛋白质。85. 如权利要求84所述的方法，其特征在于，在凝胶电泳之前，使所述蛋白质与所述组 合物接触。86. 如权利要求85所述的方法，其特征在于，所述组合物悬浮在缓冲液中，并且所述接 触包括使所述蛋白质与所述缓冲液接触。87. 如权利要求84所述的方法，其特征在于，在凝胶电泳之后，使所述蛋白质与所述组 合物接触。88. 如权利要求87所述的方法，其特征在于，所述组合物悬浮在缓冲液中，并且使所述 电泳凝胶与所述缓冲液接触，由此允许所述组合物扩散进入所述电泳凝胶，并使所述蛋白 质与所述组合物接触。89. 如权利要求84所述的方法，其特征在于，所述组合物是所述电泳凝胶的组成部分， 并且，在对所述蛋白质进行凝胶电泳之时，使所述蛋白质与所述组合物接触。90. 如权利要求84-89中任一项所述的方法，所述方法还包括： 将所述蛋白质转移出所述电泳凝胶并转移至印迹膜上；和 检测所述印迹膜上的蛋白质。91. 如权利要求90所述的方法，其特征在于，所述方法还包括从所述蛋白质移除所述 组合物。92. 如权利要求90所述的方法，其特征在于，所述蛋白质包含亲和标签或抗体结合表 位，并且所述检测包括使所述印迹膜与所述亲和标签或抗体结合表位的结合伴侣接触。93. 如权利要求92所述的方法，其特征在于，所述亲和标签或抗体结合表位包含色氨 酸残基。94. 如权利要求93所述的方法，其特征在于，所述亲和标签是Strep-标签。
【专利摘要】提供采用共价连接至至少一种标记物的环糊精来检测蛋白质的方法。所述环糊精可通过将所述蛋白质的芳族氨基酸侧链掩蔽在其疏水腔中而与所述蛋白质相联。在使所述蛋白质与所述环糊精接触之后，标记物可直接检测，或可与试剂发生化学相互作用以形成可检测的产物。所述标记物可包含吲哚部分，其在暴露至紫外光下时能够与卤素取代的有机化合物反应，由此能够发荧光。或者，所述标记物可包含生物素部分，其能够结合至结合伴侣，例如亲和素或其变化形式，以形成可检测的分子复合物。
【IPC分类】C08B37/16
【公开号】CN105392804
【申请号】CN201480036597
【发明人】C·T·麦基, W·斯特朗, L·奥列奇, T·伯克曼, C·贝利斯勒
【申请人】生物辐射实验室股份有限公司
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2014年8月8日
【公告号】EP2986646A1, US9285359, US20150044705, WO2015021418A1