场条件下HGF作用下Hep-G2-GFP细胞系迀移照片，A与B为同一区域不同光场下照片；
C为荧光场条件下无HGF作用下Hep-G2-GFP细胞系迀移照片；
D为明场下野生型Hep-G2细胞系在HGF作用下细胞迀移照片(经结晶紫染色)；
B与A比较，细胞分辨率明显升高，B与D比较，细胞分辨率没有显著差异，证明Hep-G2-GFP细胞系在无需染色的情况下即可达到野生型Hep-G2细胞系经结晶紫染色后的细胞分辨率。
[0025]图5:Hep-G2-GFP细胞系与野生型Hep_G2细胞系在HGF作用下细胞迀移效应比较。其中横坐标为不同细胞系名称，纵坐标为细胞迀移率(迀移率XHep-GS-GFP细胞系与野生型Hep-G2细胞系比较，在HGF作用下细胞迀移效应更加显著，证明Hep-G2-GFP细胞系具有良好的生物学活性，对照为不含HGF对照组。
[0026]图6:Hep-G2-GFP细胞系在不同浓度HGF作用下的细胞迀移效应及细胞活性；
A为Hep-G2-GFP细胞系在不同浓度HGF作用下的细胞迀移数量，其中横坐标为HGF浓度(HGF: ng/ml)，纵坐标为迀移细胞数量(细胞数量)；
B为Hep-G2-GFP细胞系在不同浓度HGF作用下的细胞活性，其中横坐标为HGF浓度(HGF:ng/ml)，纵坐标为450nm单波长条件下测定的光度吸收值(波长450nm)o
[0027]图7: Hep-G2_GFP细胞系在不同浓度PF04217903作用下的细胞迀移效应及细胞活性； A为Hep-G2-GFP细胞系在不同浓度PF04217903作用下的细胞迀移数量，其中横坐标为PF04217903浓度(PF04217903: μΜ)，纵坐标为迀移细胞数量(细胞数量)，对照为不含HGF，不含PF04217903对照组，其他各组均含有100ng/ml的HGF;
B为Hep-G2-GFP细胞系在不同浓度PF04217903作用下的细胞活性:其中横坐标为PF04217903浓度(PRM217903: μΜ)，纵坐标为450nm单波长条件下测定的光度吸收值(波长450nm)。
[0028]图8:不同细胞接种数量对细胞迀移效应的影响；
A为不同细胞接种数量对细胞迀移率的影响，其中横坐标为Hep-G2-GFP细胞系每孔铺板细胞数(铺板细胞数量)，纵坐标为细胞迀移率(迀移率)，对照为不含HGF对照组；
B为不同细胞接种数量对细胞迀移数量的影响，其中横坐标为Hep-G2-GFP细胞系每孔铺板细胞数，纵坐标为迀移细胞数量(细胞数量)。
[0029]图9:不同孵育时间对细胞迀移效应的影响；
A为不同孵育时间对细胞迀移率影响，其中横坐标为Hep-G2-GFP细胞系不同孵育时间(孵育时间)，纵坐标为细胞迀移率(迀移率)，对照为不含HGF对照组；
B为不同孵育时间对细胞迀移数量影响，其中横坐标为Hep-G2-GFP细胞系不同孵育时间(孵育时间)，纵坐标为迀移细胞数量(细胞数量)。
[0030]图10:不同浓度DMS0对细胞迀移效应和细胞活性的影响；
A为不同浓度DMS0对细胞迀移数量的影响，其中横坐标为不同浓度(体积比)DMS0(DMS0:浓度)，纵坐标为迀移细胞数量(细胞数量)，对照为含HGF( 100ng/ml)，不含DMS0对照组；
B为不同浓度DMS0对细胞活性的影响，其中横坐标为不同浓度DMS0(DMS0:浓度)，纵坐标为450nm单波长条件下测定的光度吸收值(波长450nm)o
[0031]
【具体实施方式】
[0032]药品与试剂:各种限制性核酸内切酶、T4DNA连接酶购自NEB公司，胶回收试剂盒、小量质粒抽提试剂盒购自丽公司;转染试剂M40为实验室自主制备;DMEM培养基，抗生素，胰酶，D-PBS购自hyclone公司，胎牛血清购自GIBC0公司；HGF，PF04217903购自RD公司，CCK-8试剂盒购自Do jindo公司；其他试剂均为进口和国产分析纯试剂。
[0033]仪器:倒置荧光显微镜Ti，尼康公司。
[0034]本发明的高效表达细胞模型可稳定表达绿色荧光蛋白，因此可以在荧光显微镜下直接观察。
[0035]实施案例一绿色荧光蛋白(GFP)基因载体的选择
绿色焚光蛋白(Green Fluorescent Pro te in，简称GFP)的基因是从Aequoreavictoria水母的基因组中提取获得的，蛋白全长238AA，其65-67氨基酸残基(丝氨酸一酪氨酸一甘氨酸)可自发的形成荧光发色团，在蓝色波长范围的光线激发下，可以发出绿色荧光，吸收光谱的最大峰值为395nm，发射光谱最大峰值为509nm。如今GFP已作为报告基因被广泛应用于免疫学，神经生物学，遗传学，器官移植等各个领域。而在肿瘤相关的基础研究和药物研发领域，GFP也发挥了极大的作用。
[0036]本发明中使用慢病毒表达载体prrl-CMV作为GFP的表达载体，制备方法使用现有的公认技术，其中GFP的CDNA序列为SEQ ID N0.1所示。
[0037]实施案例二装载GFP基因的慢病毒的包装和纯化
在真核细胞转染和基因治疗领域，病毒载体正越来越受到重视。目前常用的病毒载体包括腺病毒载体、腺相关病毒载体、疱疹病毒载体和逆转录病毒载体等，其中逆转录病毒中的慢病毒载体因其表达的稳定性，包装容量大以及能够实现多基因共感染等优势被广泛使用于科研中。慢病毒感染能够将目的基因整合入细胞的基因组，所以不用再培养基中加入筛选压力就能稳定表达目的蛋白，大大简化了实验过程，降低了成本。因此本发明使用慢病毒包装、感染的方法获得最终的稳定转染细胞株。
[0038]目前使用的慢病毒包装体系是由HIV病毒的基因组改造而成的。使用最广泛的为第三代慢病毒，是一种三质粒系统，能用于感染非分裂期的细胞。通过改造去除了不相关基因序列，并使用异源的部分基因代替同源基因(如:envelope-coding质粒)来增加其安全性，同时对启动子等序列进行修饰改造提高了病毒滴度和转染效率。最后通过改造得到了自身失活型慢病毒载体(self-1nactivat1n，SIN)有着较高的滴度，转染效率和安全性。而病毒获得后除了能用于细胞的感染外，也能用于基因治疗。
[0039]本发明中以人肾上皮细胞(293T)为受体细胞进行慢病毒的包装。
[0040]使用prrl-CMV-GFP为重组包装质粒。
[0041 ]使用的包装质粒为 pMD2.G，pMD-PRRE 和 pRSV-REV。
[0042]试验过程如下:
(1)细胞培养
用含抗生素和10%血清的完全DMEM培养基接种细胞于35mm细胞培养皿，细胞浓度为6 X105/孔。待细胞完全贴壁后，用转染试剂M40进行转染。
[0043](2)转染过程
DNA和转染试剂混合物的配制 A溶液:
prrl-CMV-GFP1.7μg
包装质粒混合物 1.8yg
无血清无抗生素DMEM培养基补充至ΙΟΟμΙ，震荡混匀。
[0044]Β 溶液:
转染试剂 16μ1
无血清无抗生素DMEM培养基补充至ΙΟΟμΙ，轻柔混匀。
[0045]将Α液与Β液轻柔混匀，室温静置lOmin，将混合液加入到细胞中。37°C，5%C02培养箱内培养，次日换为含血清含抗生素的DMEM培养基。
[0046](3)慢病毒的收集和纯化
收集转染后第4天和第5天的细胞上清，将第四天和第五天收集的病毒液4000g，室温离心lOmin;离心后的病毒液经0.45μηι滤膜过滤后转入超滤管内(ufc910024，MILLIP0RE)，常温，4000g，离心15min ；收集病毒浓缩液，分装，冻存于