一种玉米内生枯草芽孢杆菌及其生防应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种玉米内生枯草芽孢杆菌及其生防应用，属于玉米病害防治【技术领域】。本发明所述该菌株为Bacillus subtilis BS0521，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏起始日期为2014年11月16日，保藏号为CCTCC NO：M 2014566，保藏地址：中国武汉武汉大学。本发明菌株对健康玉米苗具有促生作用，同时能增加根系活力，可作为玉米苗期的生物肥料；在离体条件下对玉米多种病害的病原菌能产生抑制作用，可作为生物型种衣剂有效防治纹枯病，同时可作为玉米小斑病的诱抗剂；在防治玉米纹枯病和诱抗玉米小斑病中应用。CCTCC NO：M 201456620141116
【专利说明】-种玉米内生枯草芽抱杆菌及其生防应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于玉米病害防治【技术领域】，尤其设及一种玉米内生枯草芽抱杆菌及其生 防应用。
【背景技术】
[0002] 玉米是我国主要的粮食作物之一，种植面积和总产量仅次于小麦和水稻，居第= 位。近年来，玉米除供食用外，还用作发展畜牧业的优质饲料和轻工业、医药工业的重要原 料，因此玉米在国民经济的发展中处于重要地位。
[0003] 近年来，随着气候的变迁，栽培制度的变革和品种的更换W及高淀粉品种的大 面积种植，玉米的±传病害，尤其是纹枯病有逐年加重的趋势。一般年份发病率大约在 10 % -30 %，严重年份甚至可W达到60 % W上，致使玉米产量显著降低，所W上传病害已成 为玉米稳产、高产的主要制约因素之一。±传病害的综合防治方法主要有种子处理、清除病 残体、选育抗病品种及轮作等措施。但由于±传病害很难获得抗性材料，所W种子处理显得 尤为重要。在玉米叶斑病防治方面，除了应用抗性品种、保健栽培和化学防治之外，仍缺少 更为有效的防治技术，尤其是生物防治技术。因此，生物农药W其安全、无残毒、对人畜无害 和对环境无污染等特点备受国内外科学家的关注。而内生细菌W其存在于植物体内，生存 环境稳定，不易受到外界环境的影响等优势，在生物防治植物病害方面比叶际、根际的细菌 具有更大潜力。
[0004] 目前国内外的玉米生物防治研究基本上只针对单种病害，且防效不稳定，所W，本 领域技术人员迫切需要能够有效防治玉米相关病害的多功能微生物新制剂的出现。
【发明内容】
[0005] 为克服上述现有技术中存在的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种玉米 内生枯草芽抱杆菌。所述的玉米内生枯草芽抱杆菌能够有效防治玉米纹枯病和诱抗玉米小 斑病。
[0006] 本发明的另一目的在于提供上述玉米内生枯草芽抱杆菌的生防应用。
[0007] 本发明的目的通过下述技术方案实现；一种玉米内生枯草芽抱杆菌，该菌株为 Bacillus subtilis BS0521，保藏于中国典型培养物保藏中屯、，保藏起始日期为2014年11 月16日，保藏号为CCTCC NO ;M 2014566,保藏地址；中国武汉武汉大学。
[000引本发明玉米内生枯草芽抱杆菌对健康玉米苗具有促生作用，同时能增加根系活 力，可作为玉米苗期的生物肥料应用。
[0009] 上述的玉米内生枯草芽抱杆菌在防治玉米纹枯病和诱抗玉米小斑病中的应用。可 作为生物型种衣剂有效防治纹枯病，同时可作为玉米小斑病的诱抗剂。
[0010] 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0011] 本发明公开了一种防治玉米纹枯病和诱抗玉米小斑病的枯草芽抱杆菌菌株，经鉴 定命名为枯草芽抱杆菌炬acillus subtilis)BS0521，保藏于中国典型培养物保藏中屯、，保 藏号为CCTCC NO ;M 2014566。本发明菌株对健康玉米苗具有促生作用，同时能增加根系活 力，可作为玉米苗期的生物肥料；在离体条件下对玉米多种病害的病原菌能产生抑制作用， 可作为生物型种衣剂有效防治纹枯病，同时可作为玉米小斑病的诱抗剂。
【专利附图】
【附图说明】
[0012] 图1为菌株BS0521对玉米小斑病病原菌的括抗活性结果图；其中；A为仅接种病 原菌的对照组，B为接种BS0521后的处理组。
[001引 图2为BS0521诱导后PAUP0D和PP0活性结果图；其中；A为BS0521诱导后PAL 的活性结果图，B为BS0521诱导后POD的活性结果图，C为BS0521诱导后PP0的活性结果 图。
【具体实施方式】
[0014] 下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限 于此。
[0015] 如未特殊说明，实施例中的操作方法均为常规方法。
[0016] 实施例1 ;枯草芽抱杆菌BS0521的分离及鉴定
[0017] 本发明菌株枯草芽抱杆菌BS0521分离自甜玉米种子，具体操作方式如下：
[001引 （1)样品处理；准备浙凤甜2号玉米种子，经清水冲洗后，用30°C无菌水浸泡 30min ;
[0019] (2)表面灭菌；经无菌水冲洗后置于95%的酒精3min，消毒结束后立即用无菌水 漂洗4次，同时取最后一次漂洗水120化涂布于NA培养基（牛肉浸膏Ig，蛋白腺5g，酵母 膏5g，氯化钢5g，庶糖lOg，琼脂20g，水lOOOmL)，28°C培养72h，检测表面灭菌效果；
[0020] (3)分离；用灭菌剪刀将表面无菌材料剪成小块后，转入盛有ImL无菌水的离屯、管 中，充分震荡，吸取菌悬液0. 2血涂布于NA培养基上，重复3次，28°C培养2-3d ;
[0021] (4)纯化；挑取培养特征相异的单个菌落，经培养纯化后作为供试菌株。
[002引将待测内生细菌菌株接种到PDA(马铃馨200g，庶糖20g，水lOOOmL)培养基中央， 在平板四周接入纹枯病病原菌，W仅接种病原菌的处理为对照，每个处理重复3次，观察菌 落的生长变化，W抑菌圈大小判断括抗程度。
[0023] 挑选抑菌圈均大于10mm的供试菌，转接至NA培养基试管斜面上，连续接种，传代 5次，挑取仍对纹枯病菌有较强括抗效力的菌株进行温室盆栽筛选实验。具体如下；先用浓 度为l〇sCFU/ml的括抗菌悬液浸泡比，然后播种于花盆中，覆盖3%纹枯病菌的菌±。W不 同括抗菌处理作对照1，W括抗菌处理后不接纹枯菌作对照2。每处理播5盆，每盆保留10 株，20天后观察发病情况，选择防效最好的一株菌株保存于NA斜面上。
[0024] 上述分离得到的菌株主要菌落形态及生物学特征如下；菌落形态为规则圆型，灰 白色无光泽，不透明，菌落表面皱權粗趟，低拱起，中间呈火山口状，边缘不整齐。革兰氏阳 性，镜下视野内呈长丝状或链状。液体发酵2化后有芽抱出现，在液体基质中呈均匀混浊， 不形成菌膜和菌环。专性好氧，不具凝乳作用，过氧化氨酶实验、硝酸盐还原实验、V-P实验 阳性；苯丙氨酸脱氨酶实验、卵黄卵磯脂酶实验阴性；分解葡萄糖产酸不产气，能分解阿拉 伯糖、甘露醇、酪素、明胶、淀粉。
[0025] 结合如下的16S rDNA序列测定，将该菌鉴定为枯草芽抱杆菌任acillus subtilis)，命名为Bacillus subtilis BS0521，保藏于中国典型培养物保藏中屯、，保藏起 始日期为2014年11月16日，保藏号为CCTCC NO ;M 2014566,保藏地址：中国武汉武汉大 学。
[0026] 枯草芽抱杆菌BS0521 16S rDNA的序列测定结果0如下；
【权利要求】
1. 一种玉米内生枯草芽孢杆菌，其特征在于：该菌株为BacillussubtilisBS0521，保 藏于中国典型培养物保藏中心，保藏起始日期为2014年11月16日，保藏号为CCTCCNO:M 2014566,保藏地址：中国武汉武汉大学。
2. 权利要求1所述的玉米内生枯草芽孢杆菌作为玉米苗期的生物肥料应用。
3. 权利要求1中所述的玉米内生枯草芽孢杆菌在防治玉米纹枯病和诱抗玉米小斑病 中应用。
【文档编号】A01N63/00GK104513802SQ201410777685
【公开日】2015年4月15日 申请日期:2014年12月15日 优先权日:2014年12月15日
【发明者】苏婷, 王桂跃, 韩海亮, 赵福成, 谭禾平, 包斐 申请人:浙江省东阳玉米研究所