专利名称：一种β－琼胶酶基因aga及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种海洋假别单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)CY24的β-琼胶酶基因agaA。本发明还公开了含有该基因的载体和大肠杆菌重组株及其表达产物的生产方法和应用。
一种β-琼胶酶基因agaA，其特征在于它是编码假别单胞菌CY24的β-琼胶酶的基因。
一种β-琼胶酶基因agaA的制备方法，其特征在于以鸟枪法克隆假别单胞菌CY24的β-琼胶酶基因agaA。
将本发明的β-琼胶酶基因agaA用于制备大肠杆菌克隆载体pA5。
将本发明的β-琼胶酶基因agaA用于制备大肠杆菌重组株pA5/DH5α。
将本发明的β-琼胶酶基因agaA用于制备大肠杆菌表达载体pEAG。
将本发明的β-琼胶酶基因agaA用于制备大肠杆菌重组株pEAG/BL21。
将本发明的β-琼胶酶基因agaA用于制备重组β-琼胶酶。
将本发明的β-琼胶酶基因agaA用于降解琼脂糖制备新琼寡糖。
将本发明的β-琼胶酶基因agaA用于从琼脂糖凝胶中回收DNA。
本发明的β-琼胶酶基因agaA是编码假别单胞菌CY24的β-琼胶酶的基因，用其生产的重组β-琼胶酶温度和pH稳定性好，活性高，能降解琼脂糖，降解产物主要为聚合度2-6的新琼寡糖，因此可以用于新琼寡糖的制备以及从琼脂糖凝胶中回收DNA。本发明的大肠杆菌重组株pEAG/BL21所表达的重组β-琼胶酶占总蛋白的24％，表达水平高，易于纯化，且连续传代20代后表达量未有降低，所以通过本发明可以大量生产重组β-琼胶酶，成本较低。
附图
2为根据β-琼胶酶基因agaA的核苷酸序列推测的氨基酸序列。
权利要求
1.一种β-琼胶酶基因agaA，其特征在于它是编码假别单胞菌CY24的β-琼胶酶的基因。
2.一种β-琼胶酶基因agaA的制备方法，其特征在于以鸟枪法克隆假别单胞菌CY24的β-琼胶酶基因agaA。
3.将权利要求1所述的β-琼胶酶基因agaA用于制备大肠杆菌克隆载体pA5。
4.将权利要求1所述的β-琼胶酶基因agaA用于制备大肠杆菌重组株pA5/DH5α。
5.将权利要求1所述的β-琼胶酶基因agaA用于制备大肠杆菌表达载体pEAG。
6.将权利要求1所述的β-琼胶酶基因agaA用于制备大肠杆菌重组株pEAG/BL21。
7.将权利要求1所述的β-琼胶酶基因agaA用于制备重组β-琼胶酶。
8.将权利要求1所述的β-琼胶酶基因agaA用于降解琼脂糖制备新琼寡糖。
9.将权利要求1所述的β-琼胶酶基因agaA用于从琼脂糖凝胶中回收DNA。
全文摘要
本发明的β－琼胶酶基因agaA是编码假别单胞菌CY24的β－琼胶酶的基因，用其生产的重组β－琼胶酶温度和pH稳定性好，活性高，能降解琼脂糖，降解产物主要为聚合度2－6的新琼寡糖，因此可以用于新琼寡糖的制备以及从琼脂糖凝胶中回收DNA。本发明的大肠杆菌重组株pEAG/BL21所表达的重组β－琼胶酶占总蛋白的24％，表达水平高，易于纯化，且连续传代20代后表达量未有降低，所以通过本发明可以大量生产重组β－琼胶酶，成本较低。
文档编号C12N1/21GK1460716SQ0311251
公开日2003年12月10日 申请日期2003年6月4日 优先权日2003年6月4日
发明者褚艳, 韩峰, 李京宝, 路新枝 申请人:中国海洋大学