专利名称：一种植物抗病调控基因uep及用途的制作方法
技术领域：
本发明属生物技术领域，涉及一种植物抗病调控基因(UEP)及其用途。
背景技术：
1、植物基因克隆技术
植物基因克隆方法很多，随着多种植物基因组序列的测定完成，基于数据库序列的植物基因克隆方法得到越来越广泛的应用。该方法操作步骤主要包括基于保守序列的引物设计，目的植物组织RNA提取，反转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)，PCR产物与载体的连接， 连接产物的细菌转化，质粒提取，酶切检验，测序分析等。2、植物转基因技术
用于将外源基因导入目的植物，从而获取携带外源基因的转基因植物。包括基因枪法， 农杆菌介导法等。农杆菌介导法包括将目的基因克隆入植物表达载体，表达载体对农杆菌的转化，携带表达载体的农杆菌对目的植物组织的感染，转基因植株的再生以及植株中基因转化和表达情况的检测分析等步骤。3、植物抗病性检测分析技术
植物病原物包括卵菌、真菌、细菌、病毒和线虫等多种类型。不同类型病原物的接种方法各不相同。对于卵菌，一般先在培养皿中湿润的滤纸上，18°C左右培养4 5d使产生大量抱子囊。后将收集到的抱子囊放在灭菌的蒸馏水中G00(T6000个/mL)，4°C下培养2 4h， 使之释放游动孢子，以游动抱子悬浮液接种植物。对于真菌，能产生分生孢子的，通常以分生孢子悬浮液喷雾接种植物。不产生分生孢子的，则以菌丝块等接种植物。对于细菌，常以菌体悬浮液剪叶、针刺、注射等法接种植物。对于病毒，常以提纯的病毒粒子或人工体外转录产物摩擦、注射、或通过昆虫等传播媒介接种植物。对于线虫，常以一定数量的二龄幼虫接触植物根部茎基部或根围土壤中接种植物。多数情况下，接种后需要保持较高的相对湿度，合适的温度和光照条件。接种后按不同时间点连续观察病害发生症状，统计发病率，发病严重度，计算病情指数。通过与感病对照植物发病情况的对比分析，明确目标植物的抗病性。4、植物抗病育种技术
主要可以分为传统抗病育种和通过基因工程抗病育种两大类。传统抗病育种因为有天然遗传隔离现象使抗病资源可用范围受到显著限制，只能应用遗传关系较近的抗病资源， 而且需要多次杂交和回交等，因此选育周期长，且需要大量人力物力。而基因工程育种方法是通过将外源的抗病调控基因通过农杆菌介导的方法等技术导入植物，使其获得原来不具有的抗病性。因此，基因工程育种方法打破了天然遗传隔离现象的限制，拓宽了抗病资源可用范围，而且具有操作相对简单方便、培育周期短、无需大量人工物力的特点。另外，可以导入一个广谱抗病调控基因，或者一种植物中可导入多个抗病调控基因，因此具有特别适宜培育广谱、持久抗病品种等优点。
发明内容
本发明的目的是提供一种植物抗病调控基因，命名为UEP，其核苷酸序列如SEQ ID 1所示，该基因的开放阅读框(ORF)长471bp，编码一种泛素延伸蛋白(WDiquitin extension protein)，由156个氨基酸组成，其序列如SEQ ID:2所示。该基因编码产物N端为76个氨基酸的泛素分子，C端则是80个氨基酸的40S核糖体蛋白s27a。本氏烟(Mco tiana ben thamiana ) 基因的过量表达增强烟草对黑胫病QPhytoph thora parasitica var. nicotianae)>Sf^i^Pl (.Pseudomonas syringae pv. ia办aei)以及病毒病 {Tobacco rattle rir^s)等多种病害的抗性(具体见实施例2中的说明)。本发明的另一个目的是提供所述基因在通过创制转UEP基因植物来获取广谱抗病材料中的应用。通过以下步骤实现
(1) 基因表达结构的构建和获取
将UEP基因ORF插入一个植物表达载体，使其受强启动子的驱使表达。(2)转化汲厂基因表达结构的农杆菌的获取
将 ^基因表达结构通过电击等方法转化对植物具有强侵染能力的农杆菌菌株。(3)转基因植物的创制和获取
通过农杆菌介导法将UEP基因导入目的植物，获取转基因的植物。(4)转汲厂基因植物纯合系的获取
分别以抗生素抗性和 ’/7基因表达为观察指标，检测转基因植株后代的性状分离情况，获取后代性状不再分离的、并能稳定遗传的含单位点整合的转 ’/7基因的植物纯合系。(5 )高抗、持久、广谱抗病的转UEP基因植物纯合系的筛选鉴定和获取
以转 ^基因植物纯合系为材料，检测分析对由卵菌、真菌、细菌、病毒和线虫等各类病原物引起的病害的抗性，获取广谱抗病的转基因植物。本发明的优点(1)本发明提供的UEP基因是优质抗病调控基因资源，利用UEP基因获取的抗病材料具有抗性强烈，抗病谱广，并同时促进植物生长等优点。抗病育种经常面临获取的材料和品种抗病性不够强烈，抗病对象过于单一或狭窄，抗病性增强的同时伴随植物生长发育受到抑制等问题的困扰。本发明提供的 ’/7基因是一个由N端泛素分子和C 端40S核糖体蛋白s27a组成的泛素延伸蛋白(Ubiquitin extension protein)基因。该基因通过对各类靶标蛋白翻译和翻译后修饰的调节，广泛参与对各类病原物引起的多种病害的抗性的调控，而且参与对植物生长发育的调控，烟草基因的过量表达显著增强烟草 XiH ^ iPhytophthora parasitica var. nico tianae ) > Sf^i^Pl (.Pseudomonas syringae pv. tabaci) VXBiM毒病(Jobacco rattle rii^s)等多种病害的抗性。而且过量表达
基因的转基因植株生长和发育比对照更好。因此， P基因适用于创制抗性水平高，抗病对象广，并能促进植物生长的抗病植物材料和品种的创制和选育。(2)获取抗病材料周期短。 获取抗病植物材料和品种的方法主要有常规的传统育种方法和利用抗病调控基因的基因工程育种方法。传统育种方法具有可用抗病资源范围受天然遗传隔离限制，选育周期长，需要大量人工物力等缺点。而基因工程育种方法则具有可用抗病资源范围广、操作相对简单方便、培育周期短、无需大量人工物力、特别适宜培育广谱、持久抗病品种等优点。本发明利用抗病调控基因UEP,采用基因工程方法，创制培育广谱、持久抗病植物材料，具有周期短， 选育快速等特点。
图1为转基因烟草植株接种黑胫病菌(J%ytoph thora parasi tica var. nicotianae)菌丝块接种后2天的症状图。图2为转基因烟草植株接种野火病菌G^ei/i/offloaas SjTifl^ae pv. tabaci) 菌体悬浮液(0D·为0. 1)后2天的症状图。
具体实施例方式本发明结合附图和实施例作进一步的说明。实施例1
本发明建立了一套利用发明人克隆的一个优质抗病调控基因采用基因工程技术创制和获取抗性水平高，抗病对象广，并同时促进植物生长发育的抗病植物材料的技术体系。主要步骤包括
1)本氏烟OVicoiiaft3知基因的克隆和保存
本发明提供的本氏烟OVicoiiaaa知基因通过以下步骤克隆获得。先根据核酸数据库中烟草和番茄泛素延伸蛋白EST序列设计了引物NWbi-F(5’- gc ggatcc atg cag ate ttc gtg aaa acc_3，，斜体部分为召a H I酶切位点)(序列如SEQ ID :3所示)，以及 NbRlp-R (5，- gc gtcgac tea ate ggc acc ggc ctt gtt g _3，，斜体部分为 Sal I酶切位点)(序列如SEQ ID :4所示)。采用TRIZOL试剂提取本氏烟叶片总RNA，采用 RT-PCR方法扩增获取UEP cDNA,通过1%琼脂糖凝胶电泳后割胶纯化回收PCR产物，随后与 PGEM-T载体连接，热击转化大肠杆菌DH5 α，在LB培养基中摇菌培养过夜，提取质粒，采用 BamW I / Sal I酶切和利用NWbi-F/NbRlp-R的PCR检验所提取的质粒是否包含基因，最后送公司测序验证，从而成功克隆和获取本氏烟UEP基因cDNA全长序列。转化了携带有本氏烟 ^基因序列的载体的大肠杆菌，保存于一 80°C冰箱。因此， 可随时通过活化菌株，提取质粒，通过PCR扩增和酶切，将本氏烟UEP基因亚克隆至目的载体中，用于转基因等研究。2) 基因表达结构的构建和获取
对携带有本氏烟 /7基因序列的载体进行I / Sal I双酶切，通过电泳和割胶回收汲厂基因ORF序列，亚克隆入植物表达载体中的强启动子——花椰菜花叶病毒(CaMO35S 启动子之后，获取能强烈表达 ’/7基因的植物表达结构。3)转化 )0基因表达结构的农杆菌的获取
将基因表达结构通过电击等方法转化对植物具有强侵染能力的农杆菌菌株，获取携带 ^基因表达结构的农杆菌。4)转 /7基因植物的创制和获取
通过农杆菌介导法将汲厂基因导入目的植物。先以携带基因表达结构的农杆菌感染目的植物组织外植体。再通过抗性芽的筛选，生根，抗性植株的获取和鉴定等步骤，获取再生的转汲厂基因植物Ttl代。5)转 )0基因植物纯合系的筛选鉴定和获取
分别以抗生素抗性和 ’/7基因表达为观察指标，检测转基因植株后代的性状分离情况，获取后代性状不再分离的、并能稳定遗传的单位点整合的转 ’/7基因植物纯合系。6)广谱抗病的转基因植物纯合系的筛选鉴定和获取
以转 ^基因植物纯合系为材料，检测分析对由真菌、细菌和病毒等各类病原物引起的病害的抗性，获取广谱抗病的转基因植物。实施例2高水平、持久、广谱抗病的转 )0基因烟草植株的获取主要操作步骤包括
1) 基因表达结构的构建和获取
对发明人实验室拥有的携带本氏烟基因序列的载体进行I / Sal I双酶切，通过电泳和割胶回收基因ORF序列，亚克隆入植物表达载体pCHF3中的强启动子——花椰菜花叶病毒(CaMV) 35S启动子之后，获取能强烈表达基因的植物表达结构 pCHF3\UEP。2)转化 )0基因表达结构的农杆菌的获取
吸取广2 μ 1 基因表达结构pCHF3: :"￡Ρ,加入40 μ 1 ΕΗΑ105农杆菌感受态细胞中，迅速混勻，以Bio-fcid Gene Pulser II电激仪在电压12. 5kV/cm、电容25 μ F和电阻 400 Ω条件下电激约9ms，迅速加入Iml YEP培养基，下180rpm摇动恢复培养lh。吸取 100 μ 1菌液均勻涂布含100mg/L链霉素和100mg/L壮观霉素的YEP培养基，获取可能转化子，以PCR进一步验证表达载体和目的基因UEP的存在。获取携带UEP基因表达结构的 EHA105农杆菌。3)转 /7基因烟草植株的创制和获取
携带基因表达结构pCHF3 UEP的EHA105农杆菌对烟草组织外植体的感染——烟草种子经表面消毒后，播于不含激素的1/2MS培养基上，发芽生长后的无菌苗的叶片切成 0. 5^1 cm大小，作为无菌外植体。先置于含1.0mg/L 6-BA的分化培养基预培养2_3d，再转入终浓度为OD6J). 2^0. 5的农杆菌菌液中，浸泡纩15min，吸干后将外植体重新转入分化培养基中共培养2d，洗净后置于含100mg/L卡那霉素和500mg/L头孢霉素的转基因选择培养基中继续培养。转以少基因烟草植株的再生——待转基因选择培养基中培养的外植体上长出的不定芽长2 3cm时，将不定芽转入含100mg/L卡那霉素和250mg/L头孢霉素的生根培养基中， 培养至长出主根后，将无菌苗开盖炼苗，最后移入土壤正常培育，获取种子。同时对抗性植株进行PCR扩增检测目的基因UEP的存在，以及Southern和Northern分析转基因的拷贝数和表达。获取再生的转汲厂基因烟草Ttl代。4)转 )0基因烟草纯合系的筛选鉴定和获取
将Ttl代转基因烟草植株上收获的种子进行表面消毒，播种于加有200mg/L卡那霉素的 1/2MS培养基上，筛选出抗性苗，同时对抗性苗采用PCR检测基因的存在和表达。收获种子后，播种于同样抗性培养基上，选择抗性与非抗性呈接近3 :1比例分离的后代，对该代苗进行同样筛选和分析。选择获取后代没有产生转基因分离现象、并能稳定遗传的单位点整合的转 ’/7基因烟草纯合系。5)高水平、持久、广谱抗病的转基因烟草纯合系的筛选鉴定和获取
以转基因烟草纯合系为材料，分别接种各类病原物，检测分析转基因烟草对这些病害的抗性。检测分析的病原物包括卵菌类一烟草黑胫病菌(/^FioMiAoraparasitica var. nicotianae) ；^lif^-烟草赤星病菌(Jyieraaria alternaia)> jfl
草白星病菌(Cercospora nico tianae )、烟草炭疽病菌trichum des true turn )、 烟草立枯病菌O^izoc■so/a/ji)、烟草猝倒病菌O0FiAi腫spp.)、烟草菌核病菌
{ScIerotinia sclerotiorum)；细菌类-烟草青才古病菌(TfeyiSioflia soIanacearum)>jfl
草里予火病菌(/^ewoWftas syringae pv. iaAaci)；病毒类-烟草花叶病病毒(TbAacco
mosaic virus, Cucumber mosaic rir"5·)、烟草脉带病病毒(/biaio virus 10、烟草脆裂病病毒(Tobacco rattle virus)、烟草曲叶病病毒(Tobacco leaf curl virus)；以及线虫类——烟草根结线虫病incognita)等。通过检测分析对由卵菌、真菌、细菌、病毒和线虫等各类病原物引起病害的抗性， 获取抗性水平高、广谱持久抗病的转 ’/7基因烟草。有关转 ^基因烟草纯合系表现对烟草黑胫病和烟草野火病的强烈抗性的检测结果参见图1和图2。图1为 /7转基因烟草植株接种黑胫病菌(/^FioMiAora parasitica var. nico tianae)菌丝块接种后2天的症状图。A和B为UEP转基因烟草植株的叶片；C 和D为只转空载体的对照植株的叶片；对照植株的叶片(C，D)已经表现十分严重的病害症状，大半叶已经坏死，而UEP转基因烟草植株的叶片(A，B)还只表现微弱的坏死症状。表明 UEP转基因烟草植株表现了对黑胫病的强烈抗性。图2为转基因烟草植株接种野火病菌G^ewi/offloaas SjTiz^ae pv. tabaci) 菌体悬浮液(006(1(1为0. 1)后2天的症状图。A和B为UEP转基因烟草植株的叶片；C和D为只转空载体的对照植株的叶片；对照植株的叶片(C，D)已经表现十分严重的病害症状，接种部位已经严重坏死，而UEP转基因烟草植株的叶片(A，B)没有表现明显的坏死症状。表明UEP转基因烟草植株表现了对野火病的强烈抗性。实施例3高水平、持久、广谱抗病的转 )0基因番茄植株的获取主要操作步骤包括
1) 基因表达结构的构建和获取
对发明人实验室拥有的携带本氏烟基因序列的载体进行I / Sal I双酶切，通过电泳和割胶回收基因ORF序列，亚克隆入植物表达载体pCHF3中的强启动子——花椰菜花叶病毒(CaMV) 35S启动子之后，获取能强烈表达基因的植物表达结构 pCHF3\UEP。2)转化 /7基因表达结构的农杆菌的获取
吸取广2 μ 1 基因表达结构pCHF3: :"￡Ρ,加入40 μ 1 ΕΗΑ105农杆菌感受态细胞中，迅速混勻，以Bio-fcid Gene Pulser II电激仪在电压12. 5kV/cm、电容25 μ F和电阻 400 Ω条件下电激约9ms，迅速加入Iml YEP培养基，下180rpm摇动恢复培养lh。吸取 100 μ 1菌液均勻涂布含100mg/L链霉素和100mg/L壮观霉素的YEP培养基，获取可能转化子，以PCR进一步验证表达载体和目的基因UEP的存在。获取携带UEP基因表达结构的 EHA105农杆菌。3)转 /7基因番茄植株的创制和获取
无菌番茄苗和外植体的获取——取番茄种子，先用水冲洗10 min并漂去干瘪种子，用纱布包好，55°C水浴30 min，加吐温冲洗以增加消毒剂的效果。在超净工作台上75%的酒精消毒30 s，再用10%的次氯酸钠(NaClO)表面灭菌25 min，其间不停的摇晃，并用无菌水冲洗四次，洗净种子表面的残留消毒剂。无菌滤纸上吸干，将种子播于1/2MS培养基上，28°C 黑暗条件下培养3 d后，番茄种子破种皮露白。改为光下培养无菌苗(25°C，16/8 h、3000 Ix光照条件下培养)，3-4 d后两片子叶完全展开，真叶尚未长出，即为实验所需的无菌苗。 取其子叶作为外植体，供农杆菌感染所用。携带基因表达结构pCHF3 UEP的EHA105农杆菌对番茄组织外植体的感染——将子叶外植体在预培养基上预培养3 d后，用农杆菌感染5 10 min，在灭菌滤纸上吸干菌液，置于共培养培养基(不加抗生素)上培养2 d，随后把外植体转入含50 mg/L卡那霉素的选择分化培养基上诱导不定芽，每2周继代一次直至芽高度达0.5 cm。转 ^基因番茄植株的再生——将不定芽从愈伤组织基部切下，转移至茎伸长培养基上，培养2周。再移至生根培养基，直至梢高度达3 cm或根达3 cm;开瓶炼苗，并移栽至营养土中，正常管理至开花结果，获取种子。同时对抗性植株进行PCR扩增检测目的基因 UEP的存在，以及Southern和Northern分析转基因的拷贝数和表达。获取再生的转UEP基因番茄T0代。4)转 )0基因番茄纯合系的筛选鉴定和获取
将Ttl代转基因番茄植株上收获的种子进行表面消毒，播种于加有200mg/L卡那霉素的 1/2MS培养基上，筛选出抗性苗，同时对抗性苗采用PCR检测基因的存在和表达。收获种子后，播种于同样抗性培养基上，选择抗性与非抗性呈接近3 :1比例分离的后代，对该代苗进行同样筛选和分析。选择获取后代没有产生转基因分离现象、并能稳定遗传的单位点整合的转 ’/7基因番茄纯合系。5)高水平、持久、广谱抗病的转基因番茄纯合系的筛选鉴定和获取
以转 ^基因番茄纯合系为材料，分别接种各类病原物，检测分析转汲厂基因番茄对这些病害的抗性。检测分析的病原物包括卵菌类——番茄晚疫病菌
iPhytophthorainfestans)-#βlif iBotrytis cinerea)> #
1^iAlternaria solani)>#55 ^ lif iFusarium oxysporium f. sp. lycopersici)># 莲基腐病菌 iRhizoctonia solani )、番菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)；细
菌类-番55青才古病菌(/fe/sioflia soIanacearum)；病毒类-番病毒病病毒(Tbfflaici
mosaic virus, Tobacco mosaic virus, Cucumber mosaic；以及线虫类-番根
(,Meloidogyne incognita)等。通过检测分析对由卵菌、真菌、细菌、病毒和线虫等各类病原物引起病害的抗性， 获取抗性水平高、广谱持久抗病的转 ’/7基因番茄。实施例4高水平、持久、广谱抗病的转汲^基因马铃薯植株的获取主要操作步骤包括
1) 基因表达结构的构建和获取
对发明人实验室拥有的携带本氏烟基因序列的载体进行I / Sal I双酶切，通过电泳和割胶回收基因ORF序列，亚克隆入植物表达载体pCHF3中的强启动子——花椰菜花叶病毒(CaMV) 35S启动子之后，获取能强烈表达基因的植物表达结构 pCHF3\UEP。2)转化 )0基因表达结构的农杆菌的获取
吸取广2 μ 1 基因表达结构pCHF3: : Ρ，加入40 μ 1 ΕΗΑ105农杆菌感受态细胞
8中，迅速混勻，以Bio-fcid Gene Pulser II电激仪在电压12. 5kV/cm、电容25 μ F和电阻 400 Ω条件下电激约9ms，迅速加入Iml YEP培养基，下180rpm摇动恢复培养lh。吸取 100 μ 1菌液均勻涂布含100mg/L链霉素和100mg/L壮观霉素的YEP培养基，获取可能转化子，以PCR进一步验证表达载体和目的基因UEP的存在。获取携带UEP基因表达结构的 EHA105农杆菌。3)转 )0基因马铃薯植株的创制和获取
无菌马铃薯苗和外植体的获取——以含3%蔗糖的MS培养基培养无菌马铃薯试管苗。 选取苗龄3周的试管苗，剪取不带腋芽的约0. 5cm茎段作为转化的受体材料。携带基因表达结构pCHF3 UEP的EHA105农杆菌对马铃薯组织外植体的感染——将茎段外植体培养于愈伤组织诱导培养基上。培养基PH值5. 8，培养温度为 18-20°C，光照为1500—20001UX，每日光照16小时。3周后在25°C黑暗下进行预培养2d。 预培养的培养基为含0. 2 mg/L BA、0. 5 mg/L GA3以及2 mg/L玉米素的MS培养基。外植体在0D_约为0. 5的农杆菌悬浮液中浸泡10 min，取出外植体，用无菌滤纸吸干表面菌液， 然后转入黑暗、28°C条件下共培养2 d，然后将外植体转入含50 mg/L卡那霉素和300mg/L 头孢霉素的选择分化培养基上，25°C连续光照下诱导不定芽分化。每2 3周继代一次，直至芽高度达1 1. 5 cm。转 ^基因马铃薯植株的再生——将不定芽从愈伤组织基部切下，转移至含50 mg/L卡那霉素和250mg/L头孢霉素的生根培养基，直至梢高度达3 cm或根达3 cm ；开瓶炼苗，并移栽至营养土中，正常管理至开花结果，获取种子和种薯。同时对抗性植株进行PCR 扩增检测目的基因的存在，以及Southern和Northern分析转基因的拷贝数和表达。获取再生的转UEP基因马铃薯Ttl代。4)转 /7基因马铃薯无性系的获取和繁育
继续培养经过PCR扩增、以及Southern和Northern分析UEP转基因后获取的转UEP 基因马铃薯植株，获取种薯。该种薯可用于无性繁殖。5)高水平、持久、广谱抗病的转汲厂基因马铃薯的筛选鉴定和获取
以转基因马铃薯无性繁殖系为材料，分别接种各类病原物，检测分析转UEP基因马铃薯对这些病害的抗性。检测分析的病原物包括卵菌类——马铃薯晚疫病菌
(,Phytoph thorainfes tans )；真菌类-马铃薯早疫病菌ternaria solani )、马铃
薯枯萎病菌(/^sariws spp.)、马铃薯灰霉病菌(彻iiTiis ci/^rea)、马铃薯黑痣病菌
{Rhizoctonia solani )；细菌类-M'MM (Corynebacterium sepedonicum)；病
毒类——马铃薯皱缩花叶病病毒G0Oiaio virus J, Potato virus 7);以及线虫类——马铃薯根腐线虫病(/"raij^eflt^As coffeae)等。通过检测分析对由卵菌、真菌、细菌、病毒和线虫等各类病原物引起病害的抗性， 获取抗性水平高、广谱持久抗病的转 ’/7基因马铃薯。
权利要求
1.一种植物抗病调控基因，命名为UEP，其核苷酸序列如SEQ ID :1所示，该基因的开放阅读框长471bp，编码一种泛素延伸蛋白，由156个氨基酸组成，其序列如SEQ ID :2所示，该基因编码产物N端为76个氨基酸的泛素分子，C端是80个氨基酸的40S核糖体蛋白s27a。
2.根据权利要求1所述的一种植物抗病调控基因在通过创制转UEP基因植物来获取广谱抗病材料中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，通过以下步骤实现(1)基因表达结构的构建和获取将UEP基因ORF插入一个植物表达载体，使其受强启动子的驱使表达，(2)转化 ^基因表达结构的农杆菌的获取将 ^基因表达结构通过电击方法转化对植物具有强侵染能力的农杆菌菌株，(3)转汲厂基因植物的创制和获取通过农杆菌介导法将UEP基因导入目的植物，获取转基因的植物，(4)转 ^基因植物纯合系的获取分别以抗生素抗性和 ’/7基因表达为观察指标，检测转基因植株后代的性状分离情况，获取后代性状不再分离的、并能稳定遗传的含单位点整合的转 ’/7基因的植物纯合系，(5)高抗、持久、广谱抗病的转UEP基因植物纯合系的筛选鉴定和获取以转 ^基因植物纯合系为材料，检测分析对由卵菌、真菌、细菌、病毒和线虫等各类病原物引起的病害的抗性，获取广谱抗病的转基因植物。
全文摘要
本发明提供一种植物抗病调控基因，该基因的开放阅读框长471bp，编码一种泛素延伸蛋白，由156个氨基酸组成。该基因编码产物N端为76个氨基酸的泛素分子，C端是80个氨基酸的40S核糖体蛋白s27a。本发明提供的基因是优质抗病调控基因资源，利用该基因获取的抗病材料具有抗性强烈，抗病谱广，并同时促进植物生长。该基因通过对各类靶标蛋白翻译和翻译后修饰的调节，广泛参与对各类病原物引起的多种病害的抗性的调控，且参与对植物生长发育的调控，烟草UEP基因的过量表达显著增强烟草对黑胫病、野火病以及病毒病等多种病害的抗性，适用于创制抗性水平高，抗病对象广，并能促进植物生长的抗病植物材料和品种的创制和选育。
文档编号C12N15/29GK102191253SQ201110083858
公开日2011年9月21日 申请日期2011年4月3日 优先权日2011年4月3日
发明者宋哓毅, 程维舜, 蔡新忠, 赖亿玉, 赵媛 申请人:浙江大学