专利名称：一种治疗阿尔茨海默病药物组合物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗阿尔茨海默病的药物组合物及其制备方法和用途，属于中药领域。
背景技术：
阿尔茨海默病(Alzeimer’ s disease,AD)是老年人常见的一种神经退行性疾病， 俗称老年性痴呆或早老性痴呆。临床特征是进行性认知功能障碍，至疾病后期，患者生活不能自理。目前全球大约有两千多万老年人患有老年痴呆病，严重危害中老年人身心健康，但是给患者及其家属所带来的痛苦和负担要远高于上述两种疾病，成为现代化社会、经济、医学、家庭亟待解决的问题之一。全世界有MOO万病患，60岁以上人群的患病率是5. 1%,85 岁以上者患老年痴呆症的比例是30%。中国目前有5百万患病人口，相关的医护开支每年达1千亿元人民币。目前，人们对于AD的病理特征和临床表现已经有一定了解。发现在AD 患者脑内老年斑沉积，神经元纤维缠结和神经元丧失是AD重要的神经病理特征。并且从老年斑中提取出一种主要成分，β-淀粉样蛋白(amyloids-protein，Αβ)，同时证明Αβ对神经细胞有毒性作用，可能在AD发病中起重要作用，但对于AD的病因仍无定论。当前研究对于AD的病因和发病机制众说纷纭，无统一认识，同时造成临床上对AD的治疗没有突破性进展。如果人类不能找到有效的治疗方法，25年后全球预计有2200万人患上阿尔茨海默病，到2050年患此疾病的人数将达4500万人，阿尔茨海默病将成为人类社会的流行病。有人称其为21世纪家庭的灾难。这将是十分紧迫的社会和医学问题。也是医学界最棘手的难题。AD的特征病理产物——构成老年斑核心成分的Αβ和引起神经原纤维缠结的异常磷酸化tau蛋白一直被作为AD研究的重点，并且是目前设计和研发治疗AD相关药物的重要靶点。其中，Αβ对神经细胞的毒性作用在AD发病过程中起着关键性的作用，因此，寻找有效抑制A β毒性作用的药物是治疗AD的一个重点研究方向。中医认为痴呆多属肾阴亏虚、痰瘀阻窍等虚实夹杂之证，治疗时多以滋阴补肾治其本，活血化瘀、豁痰开窍治其标。因此临床多选择滋阴补肾药、活血化瘀药和豁痰开窍药进行组方配伍治疗痴呆，而且具有一定的疗效。然而从现代医药理论的角度来看，这些中药治疗老年性痴呆的作用机理仍不清楚，它们的中医功效用现代医学阐释是否恰当准确，或者还有更丰富的内涵，都需要我们利用现有的医学技术进行验证和探索。这种验证或者探索既丰富了中医理论，也有可能与现代医学碰擦出新的火花，扩大现代医学的认知领域，研究它们防治老年性痴呆的作用机制极具价值。
发明内容
本发明目的在于提供一种治疗阿尔茨海默病的药物组合物。本发明目的还在于提供一种治疗阿尔茨海默病的药物组合物的制备方法。本发明目的还在于提供一种药物组合物在制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用。
本发明目的还在于提供一种药物组合物在制备保护SH-SY5Y细胞药物中的应用。本发明目的还在于提供一种药物组合物在制备改善学习记忆能力药物中的应用。本发明目的还在于提供一种药物组合物在制备改善认知功能障碍药物中的应用。本发明目的还在于提供一种药物组合物在制备恢复阿尔茨海默病脑内葡萄糖代谢水平药物中的应用。本发明是由如下技术方案实现的一种治疗阿尔茨海默病的中药组合物，其原料药组成为(按重量比计)红芪多糖5-50重量份红景天提取物120重量份；本发明药物组合物的原料药组成为红芪多糖15-30重量份红景天提取物5-10重量份；本发明药物组合物的原料药组成为红芪多糖M重量份红景天提取物8重量份；本发明药物组合物的原料药组成为红芪多糖15重量份红景天提取物10重量份；本发明药物组合物的原料药组成为红芪多糖10重量份红景天提取物7重量份；本发明药物组合物的原料药组成为红芪多糖45重量份红景天提取物20重量份；本发明药物组合物的原料药组成为红芪多糖20重量份红景天提取物18重量份；本发明药物组合物的制备方法为红芪多糖由常规方法或由如下方法制备红芪根粉碎，加入8-12重量倍量的水，并加入纤维素酶(1%量)，调节PH到5，煎煮2-4次，每次1. 5-3小时，过滤，收集滤液。滤液调PH至中性，浓缩至相对密度1. 20以上 (60°C测定)，加入乙醇，使含醇量达到60%，静置18-36小时，倾弃上清液，离心收集沉淀， 沉淀用乙醇洗涤两次，冷冻干燥，即得。红景天提取物由常规方法或由如下方法制备红景天粉碎，加入8-15重量倍量水浸泡10-15小时，过滤，收集滤液。加入乙醇， 使含醇量达到70%，静置4-6小时，离心收集沉淀，沉淀用无水乙醇洗涤1-2次，冷冻干燥， 即得到红景天提取物。上述药物组合物可以制备成胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、缓释、速释制剂或注射剂等临床可接受的剂型，为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如填充剂、崩解齐 、润滑剂、助悬齐 、粘合齐 、甜味齐 、矫味齐 、防腐齐 、基质等。填充剂包括淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等。本发明体外细胞实验部分以SH-SY5Y细胞作为研究的靶细胞，来源于一种神经脊源的恶性胚胎瘤，其形态、生理和生化功能与正常神经细胞相似，可用于神经退行性疾病的体外细胞模型的研究。通过A β 25_35诱导SH-SY5Y细胞损伤的老年性痴呆细胞模型被广泛应用于国内外老年性痴呆的研究。Αβ 25_35是整个A β肽链从第25位至第35位氨基酸顺序所组成的一个氨基酸肽段，其序列为GSNKGAIIGLM。尽管A β 存在缺乏与金属结合位点的缺点，但是它具有聚集的特性，并保留了 Αβ肽段的毒性作用，它被认为是Αβ的有效部位。本发明以国内外公认的实验模型为基础，采用MTT比色法为评价指标，证实了红芪多糖和红景天提取物配伍能显著保护A β 25_35对SH-SY5Y细胞的损伤，增加SH-SY5Y细胞的存活；通过Morris水迷宫实验，显示红芪多糖和红景天提取物配伍能显著改善AD模型大鼠的学习记忆能力及认知功能障碍；进一步检测发现，红芪多糖和红景天提取物配伍可以恢复痴呆AD大鼠模型脑内葡萄糖代谢水平，表明红芪多糖和红景天提取物配伍具有治疗阿尔茨海默病的功效，且效果显著。下述实验用于进一步说明本发明，但是对本发明范围的限制实验例1 SH-SY5Y细胞损伤模型的建立1.材料1. 1细胞来源人神经母细胞瘤株系SH-SY5Y细胞是由宣武医院神经药理实验室惠赠。1.2主要试剂低限基本培养基(MEM)和F-12营养混合物培养基(F12)培养基购于Gibco公司， 胎牛血清和青、链霉素购自于PAA公司，非必需氨基酸购自于Hyclone公司，胰蛋白酶、四甲基偶氮唑盐(MTT)购于Amresco公司，A β 25_35、十二烷基硫酸钠(SDS)购于Sigma公司，乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒购自南京建成试剂公司，其他试剂皆为国产分析纯。1. 3试验仪器酶标仪(美国Thermo Labsystems Multiskan MK3型)，倒置相差显微镜(德国 LeicaDMIRB型)，数码相机(德国Leica DC300型)，紫外分光光度计(日本岛津UV-2450)。2.方法2. 1培养基的配制基础培养基MEM和F12培养基按照公司说明书分别以三蒸水配制而成，用HEPES 调整PH值为7. 4，经0. 22 μ m微孔滤膜过滤除菌，4°C下保存。完全培养基的配置90%基础培养基(MEM和F12的比例为1:1)，10%胎牛血清， 同时还含有0. 非必需氨基酸和青、链霉素各10万u/L。2·2ΑβΜ_Μ溶液的配制用无菌的三蒸水溶解A β 25_35，配成lmmol/L浓度的母液，保存于_20°C冰箱。实验时取出融解后，用不含血清和双抗的基础培养基稀释至所需浓度，至C02培养箱内37°C孵育4 后使用。2. 3SH-SY5Y 细胞的培养SH-SY5Y细胞按照美国模式培养集存库(ATCC)的方法进行培养，即细胞以完全培养基置于37°C，5% C02培养箱中孵育，2天换液，3-4天传代。2. 4MTT比色测定方法
方法按照文献操作，但略有改动。具体操作为取对数生长期的SH-SY5Y细胞，使用0. 25%的胰酶消化液消化细胞后，用完全培养基将细胞悬液浓度调整至2. 5X104个/ ml，接种于96孔板内，每孔200ul。置于(X)2培养箱内孵育3 后，更换含一定浓度A β 25_35 的培养基，继续培养Mh，然后吸取并保存细胞培养液以备LDH测定，迅速加入含MTT (终浓度为50 μ g/ml)的培养基100 μ 1，置CO2培养箱内孵育4h，加入裂解液(5%异丙醇(ν/ν), 10% SDS (十二烷基硫酸钠)(m/v),0.01mol/L HCl) 100 μ 1，在C02培养箱内过夜培养，酶标仪(双波长检测570-630nm)读取OD值。所收集的数据以细胞的存活率(公式细胞存活率=所测细胞的OD值/空白组细胞的OD值X 100% )表示。2. 5LDH活性测定方法取细胞培养液，按照LDH试剂盒的说明进行操作。2. 6统计方法实验数据以平均值士标准差(χ + s)表示，采用SPSS13. 0软件做统计分析，ANOVA
检验进行统计。3.结果3. 1不同浓度的A β 25_35对SH-SY5Y细胞影响的形态观察光镜下可见随A β 25_35浓度的增加SH-SY5Y细胞活力降低，胞浆混浊，细胞突起明显减少。A β 25_35浓度达到40 μ mol/L时大部分细胞萎缩坏死，细胞贴壁不充分，有脱落。3. 2不同浓度的A β 25_35对SH-SY5Y细胞影响的活性检测选取不同浓度的A β 25_35作用于SH-SY5Y细胞，通过MTT比色法检测SH-SY5Y细胞的存活率，选择较为合适者作为老年性痴呆细胞模型的A β 25_35浓度(表1)。SH-SY5Y细胞的存活率随着A β 2Μ5的浓度增高而呈下降趋势。同时，测定经处理后的细胞外液的LDH含量，发现LDH的漏出量也随着A β Μ_35的浓度增高而上升，说明了细胞的受损程度在加重。表1不同浓度A β 25_35对SH-SY5Y细胞活性的影响
权利要求
1.一种抗阿尔茨海默病的药物组合物，其特征在于该组合物的原料药组成为 红芪多糖5-50重量份红景天提取物1-20重量份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该组合物的原料药组成为 红芪多糖15-30重量份红景天提取物5-10重量份。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该组合物的原料药组成为 红芪多糖M重量份红景天提取物8重量份；或红芪多糖15重量份红景天提取物10重量份； 或红芪多糖10重量份红景天提取物7重量份； 或红芪多糖45重量份红景天提取物20重量份； 或红芪多糖20重量份红景天提取物18重量份。
4.如权利要求1-3所述的药物组合物，其特征在于红芪多糖由如下方法制备红芪根粉碎，加入8-12重量倍量的水，并加入量的纤维素酶，调节PH到5，煎煮2-4次，每次1. 5-3小时，过滤，收集滤液。滤液调PH至中性，浓缩至60°C测定相对密度1. 20以上，加入乙醇，使含醇量达到60%，静置18-36小时，倾弃上清液，离心收集沉淀，沉淀用乙醇洗涤两次，冷冻干燥，得红芪多糖。 红景天提取物由如下方法制备红景天粉碎，加入8-15重量倍量水浸泡10-15小时，过滤，收集滤液，加入乙醇，使含醇量达到70%，静置4-6小时，离心收集沉淀，沉淀用无水乙醇洗涤1-2次，冷冻干燥，得红景天提取物。
5.如权利要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于在药物组合物中加入常规的剂型辅料，按照常规剂型制备方法，制成胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、缓释、速释制剂或注射剂等临床可接受的剂型。
6.如权利要求1-3所述的药物组合物在制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用。
7.如权利要求1-3所述的药物组合物在制备保护SH-SY5Y细胞药物中的应用。
8.如权利要求1-3所述的药物组合物在制备改善学习记忆能力药物中的应用。
9.如权利要求1-3所述的药物组合物在制备改善认知功能障碍药物中的应用。
10.如权利要求1-3所述的药物组合物在制备恢复阿尔茨海默病脑内葡萄糖代谢水平药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了红芪多糖及红景天提取物的组合物和制备方法及其配伍在制备治疗老年性痴呆药物中的用途，本发明中红芪多糖和红景天提取物配伍能显著保护Aβ25-35对SH-SY5Y细胞的损伤，增加SH-SY5Y细胞的存活；通过Morris水迷宫实验，显示红芪多糖和红景天提取物能显著改善AD模型大鼠的学习记忆能力及认知功能障碍；进一步检测发现，红芪多糖和红景天提取物配伍可以恢复痴呆AD大鼠模型脑内葡萄糖代谢水平，表明红芪多糖和红景天提取物配伍具有治疗阿尔茨海默病的功效，且效果显著。
文档编号C12P19/04GK102379914SQ20111031795
公开日2012年3月21日 申请日期2011年10月19日 优先权日2011年10月19日
发明者张占军, 王永炎, 王燕平, 谢宁, 马涛 申请人:张占军