专利名称：乳杆菌冻干产品及其制备方法
技术领域：
本发明涉及嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌的冻干粉制剂的制备方法。
背景技术：
嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌都属于乳酸菌，革兰氏染色阳性、无芽孢杆菌，在其冻干制剂的生产中，存在菌体死亡率较高及稳定性能差的缺点，致使产品中活菌含量少、用量大、发酵效果差，制造和使用成本均较高。此外，高密度发酵培养基组分及用量配制不合理，缺乏针对性，不利于高密度发酵，不利于冻干制品的制备。本发明的目的是为了解决上述问题，提供ー种适合嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或 鼠李糖乳杆菌高密度培养的培养基及其冻干产品的制备方法。
发明内容
具体技术方案之一特别优选的ー种培养基，一种适用于嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌高密度培养的培养基，培养基由以组分配制而成，80_120g的脱脂乳粉，50-70g的甜菜糖蜜，40-60g的玉米淀粉糖浆、O. 50-0. 70g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧唳和黄嘌呤、O. 005mg的生物素和叶酸、2. Omg的尼克酸和泛酸I丐、2. Omg的核黄素、I. Omg盐酸硫胺素、O. Olg的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸馏水并定容至IOOOmL ;其中，优选的，尿嘧啶和黄嘌呤的比例为I :2 ;生物素和叶酸的比例为I :1 ;尼克酸和泛酸钙的比例为I :3，这些配比带来了难以预料的技术效果。普通常规培养基也适用于本发明。具体技术方案之ニ 深冻保护剂，其组成及配制将150g的脱脂乳粉、20g的斯盘60、80g的海藻糖、50g的鹿糖糖蜜和15g的维生素C加入蒸懼水并定容至1000mL。具体技术方案之三嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌冻干产品的制备方法，按以下步骤进行
一、高密度培养
将按常规方法活化的菌株以2%的接种量接种于灭菌的培养基中进行发酵；发酵过程中PH采用两段式，总发酵时间10h，第一阶段将发酵液的pH用质量浓度10%的氨水控制在6. 0-6. 5，发酵7. Oh ;第二阶段不控制发酵液的pH，发酵3. Oh ;发酵过程中采用三段式变温培养模式，第一阶段将发酵温度控制在42. 5-45. (TC，发酵3. 5h ;第二阶段将发酵温度控制在35-37°C，发酵3. 5h ;第三阶段将发酵温度控制在37-40°C，发酵3h ;其中所述培养基为80-120g的脱脂乳粉，50-70g的甜菜糖蜜，40-60g的玉米淀粉糖浆、O. 50-0. 70g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧啶和黄嘌呤、O. 005mg的生物素和叶酸、2. Omg的尼克酸和泛酸钙、
2.Omg的核黄素、I. Omg盐酸硫胺素、O. Olg的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸懼水并定容至IOOOmL ;在发酵过程中搅拌速度为120rpm,直至发酵结束；其中；其中，优选,尿!1密啶和黄嘌呤的比例为I :2 ;生物素和叶酸的比例为I :1 ;尼克酸和泛酸钙的比例为I :3。ニ、洗脱发酵液在O 20°C时,加入与发酵液等重量的质量浓度为15%的朽1檬酸钠溶液或质量浓度为15%的磷酸钠溶液对发酵液进行蛋白洗脱。三、富集
洗脱结束后，将发酵液的温度降至4°C，依次采用膜过滤、连续式离心进行浓缩，具体膜浓缩操作为用孔径为100 200nm、面积为I. 0m2的陶瓷膜，在跨膜压カ为150KPa进行膜浓缩处理，至发酵液的浓缩倍数达到3 ;离心浓缩具体为以30kg/min的进料量用连续自动出料离心机式进行离心浓缩，控制出料量为5kg/min ；
四、冻干保护
将获得的菌体浓缩物与冻干保护剂以质量比为I :1_1 :2进行混合，然后进行冷贮；其中冻干保护剂的组成将150g的脱脂乳粉、20g的斯盘60、80g的海藻糖、50g的蔗糖糖蜜和 15g的维生素C加入蒸懼水并定容至IOOOmL ;将此混合物在4_15°C的环境中放置20h。五、菌体的干燥
将步骤四得到的混合物以2°C /min的降温速率降至_50°C，保持30min ;在真空度为
O.05MPa的条件下，以1°C /min的速率升温至_35°C，并维持此温度至真空度达到O. OlMPa完成主干燥阶段；以5°C /min的速率升温至10°C并维持此温度至真空度达到O. 03MPa完成解析干燥阶段，取出后用颗粒机粉碎，再用无菌铝箔纸盒包装并置于_20°C的环境中贮藏。申请人:先前研究了単一温度培养模式和变温培养模式对乳酸菌发酵活力和生物量的影响，结果表明采用两阶段的温度控制方式，发酵初期高温进行发酵，后期低温进行发酵，与単一温度发酵相比，乳酸菌的最大细胞生物量和最高发酵活力均有所提高。但是，发明人在研究过程中发现变温发酵虽然提高了细胞生物量和最高发酵活力，但是受PH影响很大，而且在该菌冷冻干燥后发酵活力和细胞生物量有明显下降，影响冻干制剂质量、提高了使用成本，単独使用两段式的温度控制模式而不对PH进行优化控制会导致在发酵过程中出现代谢产物的积累，导致乳酸菌的生长和繁殖受到抑制。単独使用两段式的PH控制模式而不对温度进行优化控制会导致由于温度不是菌体细胞的最佳生长模式，而造成乳酸菌的生长率过低。在高密度培养过程中，往往通过控制培养过程中培养液的pH值，以解除酸对菌体生长的抑制作用，促进菌株生长。但是该方法当菌体浓度达一定的数量吋，中和反应将不起作用。因此，本发明专利采用两段式的pH控制方式，此外第二阶段不控制pH，使菌体细胞处于应激的状态，从而产生应激蛋白，増加了菌体抵御不良条件的抗性和冻干存活率。最适温度随着菌体生长阶段变化而改变。温度通过影响蛋白质、核酸等生物大分子的结构和功能、细胞结构如细胞膜的流动性和完整性以及胞内酶的活性来影响微生物的生长、繁殖和新陈代谢。较低的接种温度导致活菌数量缓慢增加，有利于延长乳酸菌的对数期和稳定期，较高的培养温度将增加菌体细胞的生长速度。本发明专利发酵初期采用较高的发酵温度以缩短迟滞期使其快速进行对数生长期，当进入对数生长期时采用较低的发酵温度以延长乳酸菌的对数生长期，当到达对数生长期末期时，采用相对适中的温度以缩短到达稳定期的时间。本发明高密度培养基是针对嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌特别配制的，本发明专利在基础培养基中加入的甜菜糖蜜和玉米淀粉糖浆中含有的甜菜碱和多种糖类有效的缓解了菌种在增殖过程中由于高的滲透压对菌体细胞带来的损伤并为其生长提供了大量优质的碳源；尿嘧啶和黄嘌呤直接快速的为乳杆菌合成遗传物质提供了基本成分；生物素、叶酸、尼克酸、泛酸钙、核黄素和盐酸硫胺素是乳杆菌生长过程中重要酶的辅助因子，为乳杆菌在增殖过程中快速有效的合成蛋白和脂肪提供了有力的物质保障。增菌培养基中同时增加了黄嘌呤和尿嘧啶的使用量，为后续冻干产品的制备过程中増加了功能性益生性乳杆菌的存活率。黄嘌呤和尿嘧啶的用量比2:1效果好，可明显提高存活率。
与现有技术相比，本发明具有以下突出效果
(I)发明人将影响细菌发酵的两个关键因素相结合，创造性地在高密度发酵过程中采用两段式pH、三段式变温相结合的方式进行发酵，最大细胞生物量和最高发酵活力较单独的两阶段的温度或単独的两段式PH控制方式，得到明显提高，同时得到的冻干制剂中活菌数高、稳定性好。(2)本发明高密度培养基是针对嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌特别配制的，在先前研究的基础上，特别加入了 O. Olg的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁，甲酸是乳酸杆菌的促生长因子，乳糖是乳酸杆菌生长的优质碳源，麦芽汁中含有丰富的氨基酸和维生素，三者协同作用，为提供高质量的高密度培养基做出重要贡献，优选配制的培养基与两段式pH、三段式变温发酵的方式相结合产生了预料不到的技术效果。另外，使用其他常规的培养基，同时采用本申请中所述的两段式pH、三段式变温相结合的方式进行发酵，也能够取得好的技术效果。(3)冻干保护剂也是针对深冻产品配制的，是特别优选的。本发明专利充分的利用了乳蛋白对菌体细胞的包埋作用、斯盘60对细胞膜的保护作用、海藻糖防止大冰晶的形成和保水作用、甜菜糖蜜降低渗透压作用及维生素C保持适合的氧化还原电势的作用，上述保护体系増加了冷冻干燥对菌体的损伤，此外，在冷冻干燥前将菌体置于低温下，使菌体产生抗冻蛋白，也有效的提高了菌体的冻干存活率。其它常规冻干保护剂也可以被用于本发明。(4)本专利技术产品在冻藏的条件下可保存I年，活菌数不低于IX 1012cfu/g。(5)上述乳酸菌在优化的単一温度(42. 5°C)和pH (6. 2)的条件下培养的活菌数为2. 2X108CFU/mL。两段式变温培养第一阶段(42. 5-45. (TC )，第二阶段(35_37°C )的条件下培养的活菌数为8. 7X 108CFU/mL。与単一的温度和pH培养模式相比，活菌数増加了
3.9倍。然而，本申请中的两段式pH、三段式变温相结合的发酵方式中进行乳酸菌的高密度培养，乳酸菌的活菌数为7. 6X 109CFU/mL。与単一的培养模式相比活菌数増加了 34. 5倍，与两段式变温培养模式相比活菌数増加了 8. 7倍。两段式pH、三段式变温相结合的发酵方式与“两段式变温”的培养模式及常规单ー温度和PH的培养模式的活菌数相比差异显著(P < O. 001)。
具体实施例方式 实施例I、一种适用于嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌高密度培养的培养基，培养基由以组分配制而成，80g的脱脂乳粉，50g的甜菜糖蜜，40g的玉米淀粉糖浆、
O.50g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧啶和黄嘌呤、O. 005mg的生物素和叶酸、2. Omg的尼克酸和泛酸·丐、2. Omg的核黄素、I. Omg盐酸硫胺素、O. Olg的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸馏水并定容至IOOOmL ;其中，。实施例2、一种适用于嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌高密度培养的培养基，培养基由以组分配制而成，120g的脱脂乳粉，70g的甜菜糖蜜，60g的玉米淀粉糖浆、O. 70g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧啶和黄嘌呤、O. 005mg的生物素和叶酸、2. Omg的尼克酸和泛酸·丐、2. Omg的核黄素、I. Omg盐酸硫胺素、O. Olg的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸馏水并定容至IOOOmL ;其中，尿嘧啶和黄嘌呤的比例为I :2 ;生物素和叶酸的比例为I :1 ;尼克酸和泛酸钙的比例为I :3。实施例3、嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌冻干产品的制备方法，按以下步骤进行
I、高密度培养
将经过活化的菌株以2%的接种量接种于灭菌的培养基中进行发酵；发酵过程中pH采用两段式，总发酵时间10h，第一阶段将发酵液的pH用质量浓度10%的氨水控制在6. 0，发酵7. Oh ;第二阶段不控制发酵液的pH，发酵3. Oh ;发酵过程中采用三段式变温培养模式，第一阶段将发酵温度控制在42. 5°C，发酵3. 5h ;第二阶段将发酵温度控制在35°C，发酵
3.5h ;第三阶段将发酵温度控制在37°C，发酵3h ;其中所述培养基为80-120g的脱脂乳粉，50-70g的甜菜糖蜜，40-60g的玉米淀粉糖浆、O. 50-0. 70g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿P密唳和黄嘌呤、O. 005mg的生物素和叶酸、2. Omg的尼克酸和泛酸I丐、2. Omg的核黄素、I. Omg盐酸硫胺素、O. Olg的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸懼水并定容至IOOOmL ;在发酵过程中搅拌速度为120rpm，直至发酵结束；其中，尿嘧啶和黄嘌呤的比例为I :2 ;生物素和叶酸的比例为I :1 ;尼克酸和泛酸钙的比例为I :3。2、洗脱
发酵液在O 20°C时,加入与发酵液等重量的质量浓度为15%的朽1檬酸钠溶液或质量浓度为15%的磷酸钠溶液对发酵液进行蛋白洗脱。3、富集
洗脱结束后，将发酵液的温度降至4°C，依次采用膜过滤、连续式离心进行浓缩，具体膜浓缩操作为用孔径为100 200nm、面积为I. 0m2的陶瓷膜，在跨膜压カ为150KPa进行膜浓缩处理，至发酵液的浓缩倍数达到3 ;离心浓缩具体为以30kg/min的进料量用连续自动出料离心机式进行离心浓缩，控制出料量为5kg/min ；
4、冻干保护
将获得的菌体浓缩物与冻干保护剂以质量比为I :1_1 :2进行混合，然后进行冷贮；其中冻干保护剂的组成将150g的脱脂乳粉、20g的斯盘60、80g的海藻糖、50g的蔗糖糖蜜和15g的维生素C加入蒸懼水并定容至IOOOmL ;将此混合物在4_15°C的环境中放置20h。5、菌体的干燥
将步骤四得到的混合物以2°C /min的降温速率降至_50°C，保持30min ;在真空度为
O.05MPa的条件下，以1°C /min的速率升温至_35°C，并维持此温度至真空度达到O. OlMPa完成主干燥阶段；以5°C /min的速率升温至10°C并维持此温度至真空度达到O. 03MPa完成解析干燥阶段，取出后用颗粒机粉碎，再用无菌铝箔纸盒包装并置于_20°C的环境中贮藏。实施例4、嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌冻干产品的制备方法，按以下步骤进行
I、高密度培养
将经过活化的菌株以2%的接种量接种于灭菌的培养基中进行发酵；发酵过程中pH采用两段式，总发酵时间10h，第一阶段将发酵液的pH用质量浓度10%的氨水控制在6. 5，发酵7. Oh ;第二阶段不控制发酵液的pH，发酵3. Oh ;发酵过程中采用三段式变温培养模式，第一阶段将发酵温度控制在45. (TC，发酵3. 5h ;第二阶段将发酵温度控制在37°C，发酵
3.5h ;第三阶段将发酵温度控制在40°C，发酵3h ;其中所述培养基为80-120g的脱脂乳粉，50-70g的甜菜糖蜜，40-60g的玉米淀粉糖浆、O. 50-0. 70g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿P密唳和黄嘌呤、O. 005mg的生物素和叶酸、2. Omg的尼克酸和泛酸I丐、2. Omg的核黄素、I. Omg盐酸硫胺素、O. Olg的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸懼水并定容至IOOOmL ;在发酵过程中搅拌速度为120rpm，直至发酵结束；其中，尿嘧啶和黄嘌呤的比例为I :2 ;生物素和叶酸的比例为I :1 ;尼克酸和泛酸钙的比例为I :3。2、洗脱
发酵液在O 20°C时,加入与发酵液等重量的质量浓度为15%的朽1檬酸钠溶液或质量浓度为15%的磷酸钠溶液对发酵液进行蛋白洗脱。
、
3、富集
洗脱结束后，将发酵液的温度降至4°C，依次采用膜过滤、连续式离心进行浓缩，具体膜浓缩操作为用孔径为100 200nm、面积为I. 0m2的陶瓷膜，在跨膜压カ为150KPa进行膜浓缩处理，至发酵液的浓缩倍数达到3 ;离心浓缩具体为以30kg/min的进料量用连续自动出料离心机式进行离心浓缩，控制出料量为5kg/min ；
4、冻干保护
将获得的菌体浓缩物与冻干保护剂以质量比为I :1_1 :2进行混合，然后进行冷贮；其中冻干保护剂的组成将150g的脱脂乳粉、20g的斯盘60、80g的海藻糖、50g的蔗糖糖蜜和15g的维生素C加入蒸懼水并定容至IOOOmL ;将此混合物在4_15°C的环境中放置20h。5、菌体的干燥
将步骤四得到的混合物以2°C /min的降温速率降至_50°C，保持30min ;在真空度为O. 05MPa的条件下，以1°C /min的速率升温至_35°C，并维持此温度至真空度达到O. OlMPa完成主干燥阶段；以5°C /min的速率升温至10°C并维持此温度至真空度达到O. 03MPa完成解析干燥阶段，取出后用颗粒机粉碎，再用无菌铝箔纸盒包装并置于_20°C的环境中贮藏。实施例5
嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌冻干产品的制备方法，按以下步骤进行
I、高密度培养
将经过活化的菌株以2%的接种量接种于灭菌的培养基中进行发酵；发酵过程中pH采用两段式，总发酵时间10h，第一阶段将发酵液的pH用质量浓度10%的氨水控制在6. 2，发酵7. Oh ;第二阶段不控制发酵液的pH，发酵3. Oh ;发酵过程中采用三段式变温培养模式，第一阶段将发酵温度控制在43. (TC，发酵3. 5h ;第二阶段将发酵温度控制在36°C，发酵
3.5h ;第三阶段将发酵温度控制在38°C，发酵3h ;其中所述培养基为80-120g的脱脂乳粉，50-70g的甜菜糖蜜，40-60g的玉米淀粉糖浆、O. 50-0. 70g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿P密唳和黄嘌呤、O. 005mg的生物素和叶酸、2. Omg的尼克酸和泛酸I丐、2. Omg的核黄素、I. Omg盐酸硫胺素、O. Olg的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸懼水并定容至IOOOmL ;在发酵过程中搅拌速度为120rpm，直至发酵结束；其中，尿嘧啶和黄嘌呤的比例为I :2 ;生物素和叶酸的比例为I :1 ;尼克酸和泛酸钙的比例为I :3。2、洗脱发酵液在O 20°C时,加入与发酵液等重量的质量浓度为15%的朽1檬酸钠溶液或质量浓度为15%的磷酸钠溶液对发酵液进行蛋白洗脱。3、富集
洗脱结束后，将发酵液的温度降至4°C，依次采用膜过滤、连续式离心进行浓缩，具体膜浓缩操作为用孔径为100 200nm、面积为I. 0m2的陶瓷膜，在跨膜压カ为150KPa进行膜浓缩处理，至发酵液的浓缩倍数达到3 ;离心浓缩具体为以30kg/min的进料量用连续自动出料离心机式进行离心浓缩，控制出料量为5kg/min ；
4、冻干保护
将获得的菌体浓缩物与冻干保护剂以质量比为I :1_1 :2进行混合，然后进行冷贮；其中冻干保护剂的组成将150g的脱脂乳粉、20g的斯盘60、80g的海藻糖、50g的蔗糖糖蜜和 15g的维生素C加入蒸懼水并定容至IOOOmL ;将此混合物在4_15°C的环境中放置20h。5、菌体的干燥
将步骤四得到的混合物以2°C /min的降温速率降至_50°C，保持30min ;在真空度为
O.05MPa的条件下，以1°C /min的速率升温至_35°C，并维持此温度至真空度达到O. OlMPa完成主干燥阶段；以5°C /min的速率升温至10°C并维持此温度至真空度达到O. 03MPa完成解析干燥阶段，取出后用颗粒机粉碎，再用无菌铝箔纸盒包装并置于_20°C的环境中贮藏。
权利要求
1.一种在制备嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌深冻产品过程中使用的培养基，培养基由以下组分及用量配制而成，80-120g的脱脂乳粉，50-70g的甜菜糖蜜，40-60g 的玉米淀粉糖浆、O. 50-0. 70g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧啶和黄嘌呤、O. 005mg的生物素和叶酸、2. Omg的尼克酸和泛酸|丐、2· Omg的核黄素、L Omg盐酸硫胺素、O. Olg的甲酸、20g 的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸馏水并定容至IOOOmL ;其中，尿嘧啶和黄嘌呤的比例为1:2 ； 生物素和叶酸的比例为I :1 ;尼克酸和泛酸钙的比例为I :3。
2.嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌冻干产品的制备方法，按以下步骤进一、高密度培养将按常规方法活化的嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌以2%的接种量接种于灭菌的培养基中进行发酵；发酵过程中pH采用两段式，总发酵时间10h，第一阶段将发酵液的PH用质量浓度10%的氨水控制在6. 0-6. 5，发酵7. Oh ;第二阶段不控制发酵液的pH，发酵3. Oh ;发酵过程中采用三段式变温培养模式，第一阶段将发酵温度控制在42. 5-45. (TC， 发酵3. 5h ;第二阶段将发酵温度控制在35-37°C，发酵3. 5h ;第三阶段将发酵温度控制在 37-40°C，发酵3h ;其中所述培养基为80-120g的脱脂乳粉，50_70g的甜菜糖蜜，40_60g的玉米淀粉糖浆、O. 50-0. 70g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧啶和黄嘌呤、O. 005mg的生物素和叶酸、2. Omg的尼克酸和泛酸|丐、2· Omg的核黄素、I. Omg盐酸硫胺素、O. Olg的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸懼水并定容至IOOOmL ;在发酵过程中搅拌速度为120rpm,直至发酵结束；其中，尿嘧啶和黄嘌呤的比例为I :2 ;生物素和叶酸的比例为I :1 ;尼克酸和泛酸钙的比例为I :3 ;二、洗脱三、富集四、冻干保护将获得的菌体浓缩物与冻干保护剂以质量比为I :1_1 :2进行混合，然后进行冷贮；其中冻干保护剂的组成将150g的脱脂乳粉、20g的斯盘60、80g的海藻糖、50g的蔗糖糖蜜和 15g的维生素C加入蒸懼水并定容至IOOOmL ;将此混合物在4_15°C的环境中放置20h ；五、菌体的干燥将步骤四得到的混合物以2°C /min的降温速率降至_50°C，保持30min ;在真空度为O.05MPa的条件下，以1°C /min的速率升温至_35°C，并维持此温度至真空度达到O. OlMPa 完成主干燥阶段；以5°C /min的速率升温至10°C并维持此温度至真空度达到O. 03MPa完成解析干燥阶段，取出后用颗粒机粉碎，再用无菌铝箔纸盒包装并置于_20°C的环境中贮藏。
3.根据权利要求2任一项所述的方法，其中的所述的洗脱步骤具体为发酵液在O 20°C时，加入与发酵液等重量的质量浓度为15%的柠檬酸钠溶液或质量浓度为15%的磷酸钠溶液对发酵液进行蛋白洗脱。
4.根据权利要求3任一项所述的方法，其中所述的富集步骤具体为洗脱结束后，将发酵液的温度降至4°C，依次采用膜过滤、连续式离心进行浓缩，具体膜浓缩操作为用孔径为100 200nm、面积为I. Om2的陶瓷膜，在跨膜压力为150KPa进行膜浓缩处理，至发酵液的浓缩倍数达到3 ;离心浓缩具体为以·30kg/min的进料量用连续自动出料离心机式进行离心浓缩，控制出料量为5kg/min。
5.嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌的冻干产品，按权利要求1-4任一项所述的方法制备。
全文摘要
本发明涉及嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌的冻干粉制剂的制备方法，提供了一种在制备嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌冻干产品过程中使用的培养基；发明人将影响细菌发酵的两个关键因素相结合，创造性地在高密度发酵过程中采用两段式pH、三段式变温相结合的方式进行发酵，最大细胞生物量和最高发酵活力较单一方式得到明显提高，同时得到的冻干制剂中活菌数高、稳定性好；同时还提供了一种优良的冻干保护剂。
文档编号C12N1/04GK102978143SQ201210560900
公开日2013年3月20日 申请日期2012年12月21日 优先权日2012年12月21日
发明者张兰威, 韩雪, 冯镇, 易华西, 杜明, 张英春, 张莉丽, 单毓娟, 焦月华 申请人:哈尔滨工业大学