一种对衣藻叶绿体表达载体进行构建的方法
【专利摘要】本发明公开了一种对衣藻叶绿体表达载体进行构建的方法。步骤如下：首先选取目标质粒，并以其为模版，用引物进行扩增psbA;在95摄氏度环境下进行变性，时间至少5分钟；随后，92-93摄氏度的环境下，变性1分钟；反复上述步骤3次；然后退火，时间至少2分钟，75摄氏度延伸至少一分钟；PCR产物经电泳检测；切胶回收目的条带；将回收的片段进行TA克隆，构件质粒；上述步骤循环3次即可；阳性菌落需要经过PCR和双酶切鉴定，选取鉴定正确的菌液留用；DNA连接酶连接回收的片段，需要在15摄氏度的环境下转化到感受态细胞中，并且在琼脂平板上培养过夜。本发明的有益效果是，成本较低、重复性好，与预期相符，说明质粒构建的合理性和成果性。
【专利说明】一种对衣藻叶绿体表达载体进行构建的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种生化实验室的试验方法，具体来说.一种对衣藻叶绿体表达载体进行构建的方法。
【背景技术】
[0002]衣藻,Chlamydomonas)亦称“单衣藻”。绿藻门，衣藻科。藻体为单细胞，球形或卵形，前端有两条等长的鞭毛，能游动。鞭毛基部有伸缩泡两个；另在细胞的近前端，有红色眼点一个。载色体大型杯状，具淀粉核一枚。无性繁殖产生游动孢子；有性生殖为同配、异配和卵式生殖。在不利的生活条件下，细胞停止游动，并进行多次分裂，外围厚胶质鞘，形成临时群体称“不定群体”。环境好转时，群体中的细胞产生鞭毛，破鞘逸出。广布于水沟、洼地和含微量有机质的小型水体中，早春晚秋最为繁盛。一些含蛋白质较丰富的种类，可培养作饲料或食用。叶绿体是绿色植物细胞内进行光合作用的结构，是一种质体。质体有圆形、卵圆形或盘形3种形态。叶绿体含有的叶绿素a、b吸收绿光最少，绿光被反射，故叶片呈绿色。容易区别於另类两类质体——无色的白色体和黄色到红色的有色体。叶绿素a、b的功能是吸收光能，通过光合作用将光能转变成化学能。叶绿体扁球状，厚约2.5微米，直径约5微米。具双层膜，内有间质，间质中含呈溶解状态的酶和片层。片层由闭合的中空盘状的类囊体垛堆而成，类囊体是形成高能化合物三磷酸腺苷(ATP)所必需。是植物的“养料制造车间”和“能量转换站”。
【发明内容】
[0003]为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案:
一种对衣藻叶绿体表达载体进行构建的方法，步骤如下:首先选取目标质粒，并以其为模版，用引物进行扩增psbA;在95摄氏度环境下进行变性，时间至少5分钟；随后，92-93摄氏度的环境下，变性I分钟；反复上述步骤3次；然后退火，时间至少2分钟，75摄氏度延伸至少一分钟；PCR产物经电泳检测；切胶回收目的条带；将回收的片段进行TA克隆，构件质粒；上述步骤循环3次即可。
[0004]本发明中，阳性菌落需要经过PCR和双酶切鉴定，选取鉴定正确的菌液留用。
[0005]本发明中，DNA连接酶连接回收的片段，需要在15摄氏度的环境下转化到感受态细胞中，并且在琼脂平板上培养过夜。
[0006]本发明的有益效果是，成本较低、重复性好，与预期相符，说明质粒构建的合理性和成果性。
【具体实施方式】
[0007]—种对衣藻叶绿体表达载体进行构建的方法，步骤如下:首先选取目标质粒，并以其为模版，用引物进行扩增PsbA;在95摄氏度环境下进行变性，时间5分钟；随后，92摄氏度的环境下，变性I分钟；反复上述步骤3次；然后退火，时间2分钟，75摄氏度延伸至少一分钟；PCR产物经电泳检测；切胶回收目的条带；将回收的片段进行TA克隆，构件质粒；上述步骤循环3次即可。阳性菌落需要经过PCR和双酶切鉴定，选取鉴定正确的菌液留用；DNA连接酶连接回收的片段，需要在15摄氏度的环境下转化到感受态细胞中，并且在琼脂平板上培养过夜。
[0008]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本【技术领域】的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变`，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种对衣藻叶绿体表达载体进行构建的方法，其特征在于，步骤如下:首先选取目标质粒，并以其为模版，用引物进行扩增PSbA;在95摄氏度环境下进行变性，时间至少5分钟；随后，92-93摄氏度的环境下，变性I分钟；反复上述步骤3次；然后退火，时间至少2分钟，75摄氏度延伸至少一分钟；PCR产物经电泳检测；切胶回收目的条带；将回收的片段进行TA克隆，构件质粒；上述步骤循环3次即可。
2.如权利要求1所述的一种对衣藻叶绿体表达载体进行构建的方法，其特征在于，阳性菌落需要经过PCR和双酶切鉴定，选取鉴定正确的菌液留用。
3.如权利要求1所述的一种对衣藻叶绿体表达载体进行构建的方法，其特征在于，DNA连接酶连接回收的片段，需要在15摄氏度的环境下转化到感受态细胞中，并且在琼脂平板上培养过夜。`
【文档编号】C12N15/64GK103757045SQ201310536134
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2013年11月4日 优先权日:2013年11月4日
【发明者】刘军 申请人:刘军