一种养生酱油及其制备方法与流程

文档序号:14456229阅读:233来源:国知局

技术领域
】本发明属于食品
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,具体涉及一种养生酱油及其制备方法。
背景技术
:酱油是中国传统的调味品,生产历史悠久,是一种咸味调味品,它是以蛋白质原料和淀粉质原料为主料,经微生物发酵配制而成的,酱油营养丰富,含有可溶性蛋白质、多肽、氨基酸等无机盐,而且酱油色泽红褐色,有独特酱香,滋味鲜美,有助于促进食欲,深受广大人民的喜爱。目前,为了提高改善酱油的质量及风味,国内出现了大量的各种特色化的风味酱油,如蒸鱼酱油、海鲜酱油、草菇酱油、生鱼酱油、铁强化酱油等。然而,随着生活的改善及人们对食品的保健功能的要求不断提高,上述只注重质量及风味的酱油,不能满足人们的保健需要。技术实现要素:本发明的目的是提供一种养生酱油及其制备方法,本发明的养生酱油不仅含有丰富的氨基酸、且微量元素含量提高、且能辅助降低血糖的养身效果,安全可靠,无任何毒副作用。为了实现上述目的,本发明采用的技术方案如下:一种养生酱油,包括基础酱料70-85%和养生添加剂15-30%;所述基础酱料按照重量百分数包括:芝麻1-5%、芹菜1-5%、小麦5-10%、花生5-12%、玉米8-15%、蚕豆10-15%、绿豆10-18%、大豆10-15%、盐水5-8%、柠檬酸0.2-0.5%、水15-35%;所述养生添加剂包括:灵芝提取物10-18%、紫藤提取物10-20%、辣木籽提取物8-15%、越桔提取物8-15%、马齿苋提取物5-10%、萹蓄提取物5-10%、铁皮石斛提取物5-10%、谷芽提取物3-10%、麦冬提取物5-12%、菊苣提取物5-10%。优选的,所述基础酱料按照重量百分数包括:芝麻3%、芹菜3%、小麦5%、花生12%、玉米12%、蚕豆12%、绿豆12%、大豆11%、盐水6%、柠檬酸0.3%、水23.7%;所述养生添加剂包括:灵芝提取物14%、紫藤提取物15%、辣木籽提取物11%、越桔提取物12%、马齿苋提取物7%、萹蓄提取物6%、铁皮石斛提取物8%、谷芽提取物8%、麦冬提取物10%、菊苣提取物9%。如上所述一种养生酱油的制备方法,具体包括以下步骤:(1)养生添加剂的制备:a、将灵芝洗净后进行超微粉碎、过筛后加入原料2-3倍重量的70-80%(v/v)乙醇溶液浸提2-3次,每次浸提的时间是30-40min,浸提中使用功率为100-200w功率的超声波进行辅助浸提,每次浸提后使用转速为1000-2000r/min的离心机进行离心,离心后使用三层纱布过滤,合并滤液,减压浓缩至原体积1.01倍得到灵芝活性提取物,待用;b、将1kg紫藤种子进行粉碎后,投入超临界co2萃取装置中,萃取3-4小时,收集提取液,将滤渣加入滤渣质量3-5倍的70-80%(v/v)乙醇溶液,进行回流提取20-30分钟,回流的温度为65-85℃下,接着以0.1-0.2m/s的流速倒入0.3μm陶瓷膜组件进行微滤,在0.1-0.2mpa压力差下,依次用截留分子量10000da、5000da的膜组件,以错流方式进行循环超滤处理,得到分子量范围为5000da-6000da的紫藤活性提取物,待用;c、辣木籽加入2-5倍体积的水捣碎,捣碎成浆后使用电场强度为25kv/cm的高压脉冲电场处理,脉冲的时间是5×10-6-10×10-6s,脉冲的频率为30-50赫兹,进行处理后加入5-10倍的70-80%(v/v)乙醇溶液使用超声仪进行超声提取10-20分钟,超声仪的电流强度为10a/25w-15a/25w,接着以0.1-0.25m/s的流速倒入0.5μm陶瓷膜组件进行微滤,在0.1-0.2mpa压力差下,依次用截留分子量5000000da、1o000da的膜组件,以错流方式进行循环超滤处理,得到分子量范围为10000da-15000da的辣木籽活性提取物,待用;d、将越桔果实进行捣碎,捣碎后加入原料质量3-5倍的水进行水提10-20分钟,接着过滤得到粗液,将粗液以0.1-0.3m/s的流速倒入聚酰胺层析柱经常层析,使用50-60%(v/v)乙醇溶液进行3次洗脱,洗脱的压力依次为-0.1mpa、0.1mpa、0.3mpa、洗脱的温度为60-70℃,接着进行浓缩过滤,减压浓缩后得到越桔活性提取物,待用;e、将马齿苋全草于上午8-9点采摘后除杂洗净,加入质量为全草3-5倍的水进行水提,过滤后得到粗液,粗液进行减压浓缩至原体积的1.01倍后,加入5-10倍体积的65-75%(v/v)乙醇溶液进行醇提20-30分钟,过滤后取滤液进行喷雾干燥得到马齿苋活性提取物,待用;f、将萹蓄茎干干燥后超微粉碎,称取1kg的粉末后加入提取罐内,加入65-75%(v/v)乙醇溶液进行回流提取3次,第一次加入粉末质量5倍的乙醇溶液回流提取60分钟,过滤取滤液,接着加入滤渣质量3倍的乙醇溶液回流提取50分钟,过滤取滤液,接着加入滤渣质量2倍的乙醇溶液回流提取30分钟,过滤取滤液,将三次的滤液合并,再进行减压浓缩至原体积1.01倍,接着使用减压干燥机进行减压干燥、粉碎过100目筛,得到萹蓄活性提取物,待用;g、将铁皮石斛鲜茎放入搅拌机进行搅拌粉碎,接着使用65-75%(v/v)乙醇溶液于温度为-5--3℃下进行醇提过夜,隔夜后采用转速为200-500r/min的离心机进行离心分离过滤得到粗液,将粗液与蛋白酶混合后常温提取1-3小时,过滤得到铁皮石斛活性提取物,待用,蛋白酶的加入量占粗液总质量的0.05-0.1%;h、将谷芽进行除杂后使用搅拌机进行搅碎,接着加入5-10倍水进行回流提取3次,每次1-2小时,过滤将三次滤液合并,干燥浓缩至原体积1.01倍后,加入70-80%(v/v)乙醇溶液于5-8℃下进行醇提5-8小时,离心分离取沉淀喷雾干燥得到谷芽活性提取物,待用;i、将麦冬块茎进行粉碎后得到加入70-80%(v/v)乙醇溶液进行循环提取得到提取液,将提取液加入盐酸调节ph为2.0-3.0,接着一边搅拌一边水浴加热直至提取液中出现丝状物开始计时继续搅拌5-10分钟,及时过滤取滤液,滤渣重复上述提取步骤2次,将3次的滤液合并进行减压干燥、粉碎后即可得到麦冬活性提取物,待用;j、将菊苣的花进行干燥后,加入5-10倍体积的70-80%(v/v)乙醇溶液使用索氏提取器后进行索氏提取2-3小时,过滤取滤液加入滤液总质量的0.01-0.02%的壳聚糖溶液后搅拌直至滤液澄清,过滤去滤液进行加热浓缩,冷冻干燥即可得到菊苣活性提取物,待用;(2)基础酱料的制备:按照重量百分数计将芝麻、小麦、花生、玉米、蚕豆、绿豆、大豆进行粉碎后加入水,在压力为0.1-0.2mpa下进行蒸煮10-20小时,接着将拌入捣碎的芹菜,混合均匀后继续在压力为0.2-0.3mpa下进行蒸煮10-20小时,得到基础酱料;(3)养生酱油的制备:将步骤(1)、(2)待用的物质混合并加入盐水、现有菌种制曲混合加入发酵缸中,在25-30℃下封闭发酵10-15天,接着于太阳下晒缸30-40天,接着控制温度保持在30℃下发酵至酱料成熟,接着浸淋、过滤、灭菌后加入柠檬酸勾兑至浓度为28-30婆美度、沉淀即可得到养生酱油。进一步的说明,步骤(3)中所述盐水的浓度为15-20婆美度。进一步的说明,所述发酵时周围环境的湿度保持为30-40%。进一步的说明,所述紫藤种子中氰化物含量为2.56-3.12mg/kg。进一步的说明,所述马齿苋全草的粗多糖含量为10-15mg/g。灵芝,甘,平。归心、肺、肝、肾经。补气安神,止咳平喘。用于心神不宁,失眠心悸,肺虚咳喘,虚劳短气,不思饮食。收录在《中国药典》188页。紫藤,味甘、苦,性微温,小毒。归肾经。用于水癊病,浮肿,关节疼痛,肠寄生虫病。越桔,味酸、甘,平。用于止痢。用于肠炎,痢疾。马齿苋,味酸,寒。归肝、大肠经。清热解毒,凉血止血,止痢。用于热毒血痢,痈肿疔疮,湿疹,丹毒,蛇虫咬伤,便血,痔血,崩漏下血。收录在《中国药典》49页。萹蓄,味苦,性微寒,归膀胱经。用于热淋涩痛,小便短赤,虫积腹痛,皮肤湿疹,阴痒带下等证。铁皮石斛,滋肾阴,兼能降虚火,味甘,微寒。归胃、肾经。用于津伤口渴,食少便秘,虚热不退,目暗昏花。谷芽,性温,味甘。归脾经、胃经。用治食积不消、腹胀口臭、脾胃虚弱、不饥食少等。麦冬,性微寒,味甘、微苦。归心经、肺经、胃经。用治肺燥干咳、吐血、肺痈、虚劳烦热、消渴、热病津伤、咽干口燥、便秘等。菊苣,性凉,味微苦、咸。清肝利胆、健胃消食、利尿消肿。综上所述,由于采用了上述技术方案,本发明的有益效果是:1.本申请的基础料中添加了芝麻、小麦、花生、玉米、蚕豆、绿豆、大豆,丰富了基础料的元素含量,不仅改善了传统酱油的口感、且具有更加醇厚的酱料香气,使得基础料中含有大量的氨基酸,尤其是赖氨酸的含量相比较市面的酱油提高至少提高了0.6g/l,大大的提高了who/fao的比值,从而提高了酱油的品质;芹菜中富含有黄酮类物质、萜类物质能添加酱油的养生功能性,经过添加的养生添加剂使得酱油中富含有大量的无机质,添加的养生添加剂中富含大量的微量元素,铁元素参与血蛋白、细胞色素及各种酶的合成,促进生长,还在血液中起运输氧和营养物质的作用,锰元素对于人体机体能起到维持正常的糖代谢和脂肪代谢,并有抗衰老、抗氧化的作用,本申请中的养生作用主要是针对降血糖的保健作用,添加的基础料中无机质中的铁元素提高至少29g/100ml、锰元素提高至少2g/100ml、配加芹菜中的黄酮类、萜类物质起到了降低血糖的作用。2.本申请中添加的养生添加物是经过本申请人在研究传统中医辨证治疗的基础上参考现代药理研究成果,经过多年的试验,将多种配方进行筛选,找到了对气阴两虚型糖尿病治疗效果好的几种药物而完成了本发明。在本发明中设计的添加剂的组合中,灵芝,补气安神,止咳平喘;辣木籽,清火、退热、凉血、解毒;紫藤,止痛、祛风通络;越桔强化肾脏血管;马齿苋清热解毒,凉血止血;萹蓄善祛湿热;铁皮石斛,滋肾阴,兼能降虚火;谷芽,健脾开胃,和中消食;麦冬,养阴生津,润肺清心;菊苣,清热解毒,利尿消肿,健胃。10味药共同作用,相辅相成,10味药中含有大量的活性成分,经过本申请的技术手段进行提取中药中的部位活性物质,活性物质中富含大量的能对血糖起到降低的作用的有效活性成分和微量元素,微量元素能够对人体的机能起到平衡体内营养环境的作用,方能更好的进行降低血糖的治疗;灵芝活性提取物中含甾醇1.25-1.69mg/g、酸性蛋白质1.36-2.95mg/g、水溶性蛋白质1.65-1.96mg/g、多种氨基酸、灵芝醇0.56-0.84mg/g、灵芝酸0.69-0.78mg/g、赤芝酸0.68-1.12mg/g、多肽、生物碱1.10-1.21mg/g及水溶性多糖类、三萜化合物等成分。紫藤活性提取物中含双丙酮醇0.25-0.43mg/g、松脂醇0.34-0.46mg/g、β-谷甾醇0.53-0.65mg/g、β-胡萝卜苷、星鱼甾醇0.19-0.32mg/g;越桔活性提取物中含果胶、花色苷0.56-0.75mg/g、单宁、熊果苷0.35-0.48mg/g、维生素c和b族维生素。马齿苋活性提取物中含茶酚胺类0.34-0.65mg/g。萹蓄活性提取物中含含萹蓄甙0.26-0.36mg/g、大黄素0.24-0.53mg/g和钾0.46-0.78mg/g;铁皮石斛活性提取物中含多糖121.21-135.20mg/g、生物碱2.35-6.32mg/g、多种氨基酸及微量元素。谷芽活性提取物中含酵母菌、淀粉酶、维生素、淀粉、麦芽糖、胆碱、多种氨基酸等成分。麦冬活性提取物中含麦冬皂苷a32-42%,麦冬皂苷b25-37%;此外含多种高异黄酮类化合物。菊苣活性提取物中含马栗树皮素、马栗树皮苷、野莴苣苷、山莴苣素和山莴苣苦素。辣木籽活性提取物中含总糖含量为8.2%-11.1%,蛋白质含36.7%-38.5%,脂肪含量为34.2%-38.3%,钾的含量是552.4-610.5mg/100g,钙含量为98.2-132.1mg/100g,铁含量为2.95-3.14mg/100g。活性物质之间相互作用,相辅相成,配伍得当,起到了本发明的养生酱油及其制备方法不仅能对糖尿病患者空腹血糖值、血糖曲线下面积以及胆固醇,甘油三酯的指标降低均具有显著效果,与阳性药组比效果相当并在部分指标上略优于阳性药组。而且通过辨证论治的方法采用综合措施解除糖尿病患者的临床症状,防治糖尿病的多种并发症,治疗效果显著,可实现标本兼治,安全可靠,无任何毒副作用。【具体实施方式】在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施,本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进,因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。实施例1:一种养生酱油,包括基础酱料70%和养生添加剂30%;所述基础酱料按照重量百分数包括:芝麻5%、芹菜5%、小麦6.8%、花生5%、玉米8%、蚕豆10%、绿豆10%、大豆10%、盐水5%、柠檬酸0.2%、水35%;所述养生添加剂包括:灵芝提取物10%、紫藤提取物10%、辣木籽提取物8%、越桔提取物15%、马齿苋提取物5%、萹蓄提取物10%、铁皮石斛提取物10%、谷芽提取物10%、麦冬提取物12%、菊苣提取物10%。如上所述一种养生酱油的制备方法,具体包括以下步骤:(1)养生添加剂的制备:a、将灵芝洗净后进行超微粉碎、过筛后加入原料2倍重量的70%(v/v)乙醇溶液浸提2次,每次浸提的时间是30min,浸提中使用功率为100w功率的超声波进行辅助浸提,每次浸提后使用转速为1000r/min的离心机进行离心,离心后使用三层纱布过滤,合并滤液,减压浓缩至原体积1.01倍得到灵芝活性提取物,待用;b、将1kg氰化物含量为2.56mg/kg的紫藤种子进行粉碎后,投入超临界co2萃取装置中,萃取3小时,收集提取液,将滤渣加入滤渣质量3倍的70%(v/v)乙醇溶液,进行回流提取20分钟,回流的温度为65℃下,接着以0.1m/s的流速倒入0.3μm陶瓷膜组件进行微滤,在0.1mpa压力差下,依次用截留分子量10000da、5000da的膜组件,以错流方式进行循环超滤处理,得到分子量范围为5000da的紫藤活性提取物,待用;c、辣木籽加入2倍体积的水捣碎,捣碎成浆后使用电场强度为25kv/cm的高压脉冲电场处理,脉冲的时间是5×10-6s,脉冲的频率为30赫兹,进行处理后加入5倍的70%(v/v)乙醇溶液使用超声仪进行超声提取10分钟,超声仪的电流强度为10a/25w,接着以0.1m/s的流速倒入0.5μm陶瓷膜组件进行微滤,在0.1mpa压力差下,依次用截留分子量5000000da、1o000da的膜组件,以错流方式进行循环超滤处理,得到分子量范围为10000da的辣木籽活性提取物,待用;d、将越桔果实进行捣碎,捣碎后加入原料质量3倍的水进行水提10分钟,接着过滤得到粗液,将粗液以0.1m/s的流速倒入聚酰胺层析柱经常层析,使用50%(v/v)乙醇溶液进行3次洗脱,洗脱的压力依次为-0.1mpa、0.1mpa、0.3mpa、洗脱的温度为60℃,接着进行浓缩过滤,减压浓缩后得到越桔活性提取物,待用;e、将粗多糖含量为10mg/g的马齿苋全草于上午8点采摘后除杂洗净,加入质量为全草3倍的水进行水提,过滤后得到粗液,粗液进行减压浓缩至原体积的1.01倍后,加入5倍体积的65%(v/v)乙醇溶液进行醇提20分钟,过滤后取滤液进行喷雾干燥得到马齿苋活性提取物,待用;f、将萹蓄茎干干燥后超微粉碎,称取1kg的粉末后加入提取罐内,加入65%(v/v)乙醇溶液进行回流提取3次,第一次加入粉末质量5倍的乙醇溶液回流提取60分钟,过滤取滤液,接着加入滤渣质量3倍的乙醇溶液回流提取50分钟,过滤取滤液,接着加入滤渣质量2倍的乙醇溶液回流提取30分钟,过滤取滤液,将三次的滤液合并,再进行减压浓缩至原体积1.01倍,接着使用减压干燥机进行减压干燥、粉碎过100目筛,得到萹蓄活性提取物,待用;g、将铁皮石斛鲜茎放入搅拌机进行搅拌粉碎,接着使用65%(v/v)乙醇溶液于温度为-5℃下进行醇提过夜,隔夜后采用转速为200r/min的离心机进行离心分离过滤得到粗液,将粗液与蛋白酶混合后常温提取1小时,过滤得到铁皮石斛活性提取物,待用,蛋白酶的加入量占粗液总质量的0.05%;h、将谷芽进行除杂后使用搅拌机进行搅碎,接着加入5倍水进行回流提取3次,每次1小时,过滤将三次滤液合并,干燥浓缩至原体积1.01倍后,加入70%(v/v)乙醇溶液于5℃下进行醇提5小时,离心分离取沉淀喷雾干燥得到谷芽活性提取物,待用;i、将麦冬块茎进行粉碎后得到加入70%(v/v)乙醇溶液进行循环提取得到提取液,将提取液加入盐酸调节ph为2.0,接着一边搅拌一边水浴加热直至提取液中出现丝状物开始计时继续搅拌5分钟,及时过滤取滤液,滤渣重复上述提取步骤2次,将3次的滤液合并进行减压干燥、粉碎后即可得到麦冬活性提取物,待用;j、将菊苣的花进行干燥后,加入5倍体积的70%(v/v)乙醇溶液使用索氏提取器后进行索氏提取2小时,过滤取滤液加入滤液总质量的0.01%的壳聚糖溶液后搅拌直至滤液澄清,过滤去滤液进行加热浓缩,冷冻干燥即可得到菊苣活性提取物,待用;(2)基础酱料的制备:按照重量百分数计将芝麻、小麦、花生、玉米、蚕豆、绿豆、大豆进行粉碎后加入水,在压力为0.1mpa下进行蒸煮10小时,接着将拌入捣碎的芹菜,混合均匀后继续在压力为0.2mpa下进行蒸煮10小时,得到基础酱料;(3)养生酱油的制备:将步骤(1)、(2)待用的物质混合并加入浓度为15婆美度的盐水、现有菌种制曲混合加入发酵缸中,在周围环境的湿度保持为30%、25℃下封闭发酵10天,接着于太阳下晒缸30天,接着控制周围环境的湿度保持为30%、温度保持在30℃下发酵至酱料成熟,接着浸淋、过滤、灭菌后加入柠檬酸勾兑至浓度为28婆美度、沉淀即可得到养生酱油。实施例2:一种养生酱油,包括基础酱料85%和养生添加剂15%;所述基础酱料按照重量百分数包括:芝麻1%、芹菜1%、小麦10%、花生9.5%、玉米15%、蚕豆15%、绿豆10%、大豆15%、盐水8%、柠檬酸0.5%、水15%;所述养生添加剂包括:灵芝提取物18%、紫藤提取物20%、辣木籽提取物15%、越桔提取物8%、马齿苋提取物10%、萹蓄提取物5%、铁皮石斛提取物5%、谷芽提取物4%、麦冬提取物5%、菊苣提取物10%。如上所述一种养生酱油的制备方法,具体包括以下步骤:(1)养生添加剂的制备:a、将灵芝洗净后进行超微粉碎、过筛后加入原料3倍重量的80%(v/v)乙醇溶液浸提3次,每次浸提的时间是40min,浸提中使用功率为200w功率的超声波进行辅助浸提,每次浸提后使用转速为2000r/min的离心机进行离心,离心后使用三层纱布过滤,合并滤液,减压浓缩至原体积1.01倍得到灵芝活性提取物,待用;b、将1kg氰化物含量为3.12mg/kg的紫藤种子进行粉碎后,投入超临界co2萃取装置中,萃取4小时,收集提取液,将滤渣加入滤渣质量5倍的80%(v/v)乙醇溶液,进行回流提取30分钟,回流的温度为85℃下,接着以0.2m/s的流速倒入0.3μm陶瓷膜组件进行微滤,在0.2mpa压力差下,依次用截留分子量10000da、5000da的膜组件,以错流方式进行循环超滤处理,得到分子量范围为6000da的紫藤活性提取物,待用;c、辣木籽加入5倍体积的水捣碎,捣碎成浆后使用电场强度为25kv/cm的高压脉冲电场处理,脉冲的时间是10×10-6s,脉冲的频率为50赫兹,进行处理后加入10倍的80%(v/v)乙醇溶液使用超声仪进行超声提取20分钟,超声仪的电流强度为15a/25w,接着以0.25m/s的流速倒入0.5μm陶瓷膜组件进行微滤,在0.2mpa压力差下,依次用截留分子量5000000da、1o000da的膜组件,以错流方式进行循环超滤处理,得到分子量范围为15000da的辣木籽活性提取物,待用;d、将越桔果实进行捣碎,捣碎后加入原料质量5倍的水进行水提20分钟,接着过滤得到粗液,将粗液以0.3m/s的流速倒入聚酰胺层析柱经常层析,使用60%(v/v)乙醇溶液进行3次洗脱,洗脱的压力依次为-0.1mpa、0.1mpa、0.3mpa、洗脱的温度为70℃,接着进行浓缩过滤,减压浓缩后得到越桔活性提取物,待用;e、将粗多糖含量为15mg/g的马齿苋全草于上午9点采摘后除杂洗净,加入质量为全草5倍的水进行水提,过滤后得到粗液,粗液进行减压浓缩至原体积的1.01倍后,加入10倍体积的75%(v/v)乙醇溶液进行醇提30分钟,过滤后取滤液进行喷雾干燥得到马齿苋活性提取物,待用;f、将萹蓄茎干干燥后超微粉碎,称取1kg的粉末后加入提取罐内,加入75%(v/v)乙醇溶液进行回流提取3次,第一次加入粉末质量5倍的乙醇溶液回流提取60分钟,过滤取滤液,接着加入滤渣质量3倍的乙醇溶液回流提取50分钟,过滤取滤液,接着加入滤渣质量2倍的乙醇溶液回流提取30分钟,过滤取滤液,将三次的滤液合并,再进行减压浓缩至原体积1.01倍,接着使用减压干燥机进行减压干燥、粉碎过100目筛,得到萹蓄活性提取物,待用;g、将铁皮石斛鲜茎放入搅拌机进行搅拌粉碎,接着使用75%(v/v)乙醇溶液于温度为-3℃下进行醇提过夜,隔夜后采用转速为500r/min的离心机进行离心分离过滤得到粗液,将粗液与蛋白酶混合后常温提取3小时,过滤得到铁皮石斛活性提取物,待用,蛋白酶的加入量占粗液总质量的0.1%;h、将谷芽进行除杂后使用搅拌机进行搅碎,接着加入10倍水进行回流提取3次,每次2小时,过滤将三次滤液合并,干燥浓缩至原体积1.01倍后,加入80%(v/v)乙醇溶液于8℃下进行醇提8小时,离心分离取沉淀喷雾干燥得到谷芽活性提取物,待用;i、将麦冬块茎进行粉碎后得到加入80%(v/v)乙醇溶液进行循环提取得到提取液,将提取液加入盐酸调节ph为3.0,接着一边搅拌一边水浴加热直至提取液中出现丝状物开始计时继续搅拌10分钟,及时过滤取滤液,滤渣重复上述提取步骤2次,将3次的滤液合并进行减压干燥、粉碎后即可得到麦冬活性提取物,待用;j、将菊苣的花进行干燥后,加入10倍体积的80%(v/v)乙醇溶液使用索氏提取器后进行索氏提取3小时,过滤取滤液加入滤液总质量的0.02%的壳聚糖溶液后搅拌直至滤液澄清,过滤去滤液进行加热浓缩,冷冻干燥即可得到菊苣活性提取物,待用;(2)基础酱料的制备:按照重量百分数计将芝麻、小麦、花生、玉米、蚕豆、绿豆、大豆进行粉碎后加入水,在压力为0.2mpa下进行蒸煮20小时,接着将拌入捣碎的芹菜,混合均匀后继续在压力为0.3mpa下进行蒸煮20小时,得到基础酱料;(3)养生酱油的制备:将步骤(1)、(2)待用的物质混合并加入浓度为20婆美度的盐水、现有菌种制曲混合加入发酵缸中,在周围环境的湿度保持为40%、30℃下封闭发酵15天,接着于太阳下晒缸40天,接着控制周围环境的湿度保持为40%、温度保持在30℃下发酵至酱料成熟,接着浸淋、过滤、灭菌后加入柠檬酸勾兑至浓度为30婆美度、沉淀即可得到养生酱油。实施例3:一种养生酱油,包括基础酱料80%和养生添加剂20%;所述基础酱料按照重量百分数包括:芝麻3%、芹菜3%、小麦5%、花生12%、玉米12%、蚕豆12%、绿豆12%、大豆11%、盐水6%、柠檬酸0.3%、水23.7%;所述养生添加剂包括:灵芝提取物14%、紫藤提取物15%、辣木籽提取物11%、越桔提取物12%、马齿苋提取物7%、萹蓄提取物6%、铁皮石斛提取物8%、谷芽提取物8%、麦冬提取物10%、菊苣提取物9%。如上所述一种养生酱油的制备方法,具体包括以下步骤:(1)养生添加剂的制备:a、将灵芝洗净后进行超微粉碎、过筛后加入原料2倍重量的75%(v/v)乙醇溶液浸提3次,每次浸提的时间是35min,浸提中使用功率为150w功率的超声波进行辅助浸提,每次浸提后使用转速为1500r/min的离心机进行离心,离心后使用三层纱布过滤,合并滤液,减压浓缩至原体积1.01倍得到灵芝活性提取物,待用;b、将1kg氰化物含量为2.96mg/kg的紫藤种子进行粉碎后,投入超临界co2萃取装置中,萃取3.5小时,收集提取液,将滤渣加入滤渣质量4倍的75%(v/v)乙醇溶液,进行回流提取25分钟,回流的温度为70℃下,接着以0.15m/s的流速倒入0.3μm陶瓷膜组件进行微滤,在0.15mpa压力差下,依次用截留分子量10000da、5000da的膜组件,以错流方式进行循环超滤处理,得到分子量范围为5500da的紫藤活性提取物,待用;c、辣木籽加入3倍体积的水捣碎,捣碎成浆后使用电场强度为25kv/cm的高压脉冲电场处理,脉冲的时间是7×10-6s,脉冲的频率为40赫兹,进行处理后加入8倍的77%(v/v)乙醇溶液使用超声仪进行超声提取15分钟,超声仪的电流强度为12a/25w,接着以0.2m/s的流速倒入0.5μm陶瓷膜组件进行微滤,在0.15mpa压力差下,依次用截留分子量5000000da、1o000da的膜组件,以错流方式进行循环超滤处理,得到分子量范围为12000da的辣木籽活性提取物,待用;d、将越桔果实进行捣碎,捣碎后加入原料质量4倍的水进行水提15分钟,接着过滤得到粗液,将粗液以0.2m/s的流速倒入聚酰胺层析柱经常层析,使用55%(v/v)乙醇溶液进行3次洗脱,洗脱的压力依次为-0.1mpa、0.1mpa、0.3mpa、洗脱的温度为65℃,接着进行浓缩过滤,减压浓缩后得到越桔活性提取物,待用;e、将粗多糖含量为12mg/g的马齿苋全草于上午8点采摘后除杂洗净,加入质量为全草4倍的水进行水提,过滤后得到粗液,粗液进行减压浓缩至原体积的1.01倍后,加入8倍体积的70%(v/v)乙醇溶液进行醇提25分钟,过滤后取滤液进行喷雾干燥得到马齿苋活性提取物,待用;f、将萹蓄茎干干燥后超微粉碎,称取1kg的粉末后加入提取罐内,加入70%(v/v)乙醇溶液进行回流提取3次,第一次加入粉末质量5倍的乙醇溶液回流提取60分钟,过滤取滤液,接着加入滤渣质量3倍的乙醇溶液回流提取50分钟,过滤取滤液,接着加入滤渣质量2倍的乙醇溶液回流提取30分钟,过滤取滤液,将三次的滤液合并,再进行减压浓缩至原体积1.01倍,接着使用减压干燥机进行减压干燥、粉碎过100目筛,得到萹蓄活性提取物,待用;g、将铁皮石斛鲜茎放入搅拌机进行搅拌粉碎,接着使用70%(v/v)乙醇溶液于温度为-4℃下进行醇提过夜,隔夜后采用转速为300r/min的离心机进行离心分离过滤得到粗液,将粗液与蛋白酶混合后常温提取2小时,过滤得到铁皮石斛活性提取物,待用,蛋白酶的加入量占粗液总质量的0.08%;h、将谷芽进行除杂后使用搅拌机进行搅碎,接着加入7倍水进行回流提取3次,每次1小时,过滤将三次滤液合并,干燥浓缩至原体积1.01倍后,加入76%(v/v)乙醇溶液于6℃下进行醇提6小时,离心分离取沉淀喷雾干燥得到谷芽活性提取物,待用;i、将麦冬块茎进行粉碎后得到加入77%(v/v)乙醇溶液进行循环提取得到提取液,将提取液加入盐酸调节ph为2.5,接着一边搅拌一边水浴加热直至提取液中出现丝状物开始计时继续搅拌8分钟,及时过滤取滤液,滤渣重复上述提取步骤2次,将3次的滤液合并进行减压干燥、粉碎后即可得到麦冬活性提取物,待用;j、将菊苣的花进行干燥后,加入8倍体积的75%(v/v)乙醇溶液使用索氏提取器后进行索氏提取2.5小时,过滤取滤液加入滤液总质量的0.015%的壳聚糖溶液后搅拌直至滤液澄清,过滤去滤液进行加热浓缩,冷冻干燥即可得到菊苣活性提取物,待用;(2)基础酱料的制备:按照重量百分数计将芝麻、小麦、花生、玉米、蚕豆、绿豆、大豆进行粉碎后加入水,在压力为0.15mpa下进行蒸煮15小时,接着将拌入捣碎的芹菜,混合均匀后继续在压力为0.25mpa下进行蒸煮15小时,得到基础酱料;(3)养生酱油的制备:将步骤(1)、(2)待用的物质混合并加入浓度为18婆美度的盐水、现有菌种制曲混合加入发酵缸中,在周围环境的湿度保持为36%、28℃下封闭发酵13天,接着于太阳下晒缸35天,接着控制周围环境的湿度保持为35%、温度保持在30℃下发酵至酱料成熟,接着浸淋、过滤、灭菌后加入柠檬酸勾兑至浓度为29婆美度、沉淀即可得到养生酱油。养生添加剂的养生效果试验验证:1.1原理本发明实施例1-3、对比例、0.9%生理盐水(广西南宁百会药业集团有限公司)、四氧嘧啶(美国sigma公司)、盐酸二甲双胍片(中美上海施贵宝制药有限公司)、血糖仪及血糖试纸(日本欧姆龙株式会社)、医用淀粉(郑州华耀生物科技有限公司)。1.2建组购入健康雄性大鼠(150±20g)广西中医药大学实验动物中心提供,普通维持料适应饲养5天,禁食4小时,取尾血,测定空腹即给葡萄糖前(0小时)血糖值,给2.5g/kgbw葡萄糖后测定0.5、2小时血糖值,作为该批次动物基础值。以0、0.5小时血糖水平分14个组,折合2g/kg生药量给药,蒸馏水溶解,每天灌胃给药一次,每个实验组见下,每组10只。空白对照组不做处理,11个实验组灌胃给予不同受试样品,模型对照组给予同体积溶剂,连续35天。各组给予维持料饲养1周后除空白对照组外更换高脂饲料,继续喂饲3周后,除空白对照组外禁食24小时(不禁水),给予stz30mg/kgbw腹腔注射,注射量1ml/100g体重。注射后继续给予高脂饲料喂饲5天。试验结束,各组动物禁食4小时,检测空腹血糖、糖耐量、血清胰岛素及胆固醇、甘油三脂水平。实验组的情况如下:1个模型对照组(高脂饲料喂养,给予同体积溶剂灌胃给药,每日一次)1个空白对照组(不做处理);1个阳性药对照组(消渴丸,给药剂量0.5g/kg,大鼠的等效剂量相当于人体推荐量的5倍,相当于成人剂量6g/每日,每日一次);1个a灵芝提取物对照组(折合2g/kg生药量给药,每日1次);1个b紫藤提取物对照组(折合2g/kg生药量给药,每日1次);1个c辣木籽提取物对照组(折合2g/kg生药量给药,每日1次);1个d越桔提取物对照组(折合2g/kg生药量给药,每日1次);1个e马齿苋提取物对照组(折合2g/kg生药量给药,每日1次);1个f萹蓄提取物对照组(折合2g/kg生药量给药,每日1次);1个g铁皮石斛提取物对照组(折合2g/kg生药量给药,每日1次);1个h谷芽提取物对照组(折合2g/kg生药量给药,每日1次);1个i麦冬提取物对照组(折合2g/kg生药量给药,每日1次);1个j菊苣提取物对照组(折合2g/kg生药量给药,每日1次);1个实施例1养生添加剂组合物(折合2g/kg生药量给药,每日1次)。2.1观察指标2.1.1空腹血糖、糖耐量各组动物禁食4小时,测定空腹血糖即给葡萄糖前(0小时)血糖值,剂量组给予不同浓度受试样品,模型对照组给予同体积溶剂,空白对照组不做处理,20分钟后各组经口给予葡萄糖2.5g/kgbw,测定给葡萄糖后各组0.5、2小时的血糖值,若模型对照组0.5小时血糖值≥10mmol/l,或模型对照组0.5小时、2小时任一时间点血糖升高或血糖曲线下面积升高,与空白对照组比较,差异有显著性,判定模型糖代谢紊乱成立,在此基础上,观察模型对照组与受试样品组空腹血糖、给葡萄糖后(0.5、2小时)血糖及0、0.5、2小时血糖曲线下面积的变化。血糖下降率%=(实验前血糖值-实验后血糖值)/实验前血糖值×100%血糖曲线下面积==1/2×(0小时血糖+0.5小时血糖)×0.5+1/2×(0.5小时血糖+1小时血糖)×0.5+1/2×(1小时血糖+2小时血糖)×1+1/2×(2小时血糖+3小时血糖)×12.1.2胆固醇、甘油三脂各组动物禁食4小时,检测血清胆固醇、甘油三脂,若模型对照组血清胆固醇或甘油三酯明显升高,与空白对照组比较,差异有显著性,判定模型脂代谢紊乱成立,在此基础上,观察模型对照组与受试样品组血脂变化。2.1.3胰岛素各组动物禁食4小时,检测血清胰岛素,模型对照组与空白对照组比较胰岛素抵抗指数无明显下降,且动物糖/脂代谢紊乱成立,判定胰岛素抵抗糖\脂代谢紊乱模型成功。观察模型对照组与受试样品组胰岛素抵抗情况。胰岛素抵抗指数=胰岛素/22.5e-㏑血糖≈(血糖×胰岛素)/22.52.1.4数据处理及结果判定采用方差分析,但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验,方差齐,计算f值,f值<f0.05,结论:各组均数间差异无显著性;f值≥f0.05,p≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计。3.1数据处理及结果判定饲养5天,禁食4小时的空腹血糖值见表1:表1组别血糖值(mmol/ml)空白5.01±1.09**阳性药组20.23±2.01*模型组24.02±4.21a21.01±4.24#*b22.14±4.05c23.21±4.18d22.00±4.57e23.58±3.24f21.35±3.42#*g23.01±3.52h23.94±3.04i22.38±3.21j23.48±4.36实施例117.98±2.27##**显著性分析:*:与模型组比*p<0.05,**p<0.01;#:与阳性药组比#p<0.05,##p<0.01。耐糖量的检测结果表见表2:表2显著性分析:*:和模型比*p<0.05,**p<0.01;#:与阳性药组比#p<0.05,##p<0.01。总胆固醇、甘油三酯测定结果交表3表3组别总胆固醇(mmol/ml)甘油三酯(mmol/ml)空白1.42±1.11**1.06±0.12**阳性药组2.21±0.212.12±0.21模型组2.26±0.232.02±0.22a1.87±0.22*#1.67±0.23*#b2.02±0.201.86±0.21c1.98±0.221.75±0.25d2.10±0.241.79±0.23e1.97±0.241.86±0.24f1.74±0.23*#1.53±0.25*#g2.54±0.251.85±0.23h1.96±0.221.87±0.24i2.01±0.231.86±0.23j2.05±0.211.85±0.24实施例11.54±0.20**##1.12±0.20**##显著性分析:*:和模型比*p<0.05,**p<0.01;#:与阳性药组比#p<0.05,##p<0.01。由表1-3由空腹血糖值、糖耐量、胆固醇、甘油三酯等测定结果可以看出。空腹血糖值中,组合物高低剂量组与模型组比均有显著性差异。采用本申请的养生添加剂具有很好的降血糖的作用,相比较实施例1与a-j组,单一添加灵芝提取物、紫藤提取物、辣木籽提取物、越桔提取物、马齿苋提取物、萹蓄提取物、铁皮石斛提取物、谷芽提取物、麦冬提取物或菊苣提取物在降血糖中均到不到实施例1的效果显著。本发明中的发酵酱油过程中添加养生添加剂进行原料,10味药进行提取活性部后合用,可有效达到降低血糖,预防和改善糖尿病并发症的作用。4.1毒理试验:急性毒性试验:小鼠、大鼠空腹灌胃本发明产品,观察7天,雌雄小鼠和大鼠均未见中毒症状,无死亡,本发明产品雌雄小鼠和大鼠经口急性毒性试验mtd>10.0g/kg.bw,属实际无毒级。以本申请中e1组的药剂给小鼠、大鼠空腹灌胃,观察14天后物死亡,对雌雄小鼠和大鼠均未见中毒症状,无死亡,观察期未将受试动物处死进行解剖检查,肝、牌、肾、胃、肠、心、肺等主要脏器,未见明显异常改变。本发明产品雌雄小鼠和大鼠经口急性毒性试验mtd>10.0g/kg.bw,根据《保健食品检验与评价技术规范))(2003年版)中的急性毒性分级标准,属无毒级。本发明产品ames试验,小鼠骨髓细胞微核试验及小鼠精子畸变试验结果均为阴性,提示本发明产品安全。在本发明产品30天喂养试验期间,动物的活动、摄食、排便等一般情况未见明显异常,且对动物的体重、进食量、血常规指标、脏器重量无明显影响,在雌雄性大鼠高剂量组为20.00g/kg.bw(相当于人体推荐量的500倍)时各项检测指标均未观察到异常变化。5.1临床试验对本发明治疗气阴两虚症消渴病患者的疗效进行临床观察,通过对比服药前后患者使用胰岛素的量分析本发明的降糖效果。5.1.1纳入标准凡具有口渴多饮、消谷易饥、尿多而甜、形体渐见消瘦证候者即可确诊为消渴病(糖尿病);凡倦怠乏力,自汗盗汗、气短懒言、口渴喜饮、五心烦热、心悸失眠、溲赤便秘、舌红少津、舌体胖大、苔薄或花剥,脉弦细或数者,即为气阴两虚型糖尿病;有糖尿病症状,任何时间血糖>11.1mmol/l或空腹血糖>7.0mmol/l;已确定为2型糖尿病,长期服用二甲双胍的患者或长期注射胰岛素的患者;所有患者均符合上述4条中的1条或1条以上。5.1.2病例选择凡同时符合上述西医分类标准、中医证候诊断标准患者;年龄18-65岁者;愿意接受2周治疗者;签署进入临床研究知情同意书者。5.1.3治疗药物按实施例1中的养生添加剂10g,溶于100ml水中得到试验溶剂a;胰岛素注射液:江苏万邦生化医药股份有限公司,批号:1007217。5.1.4临床试验分组对比例组:胰岛素;试验例组:试验溶剂a+胰岛素。5.1.5观测指标:观察主要临床症状及体征的变化情况,空腹及餐后2小时血糖检测;胰岛素用量的减少量。5.1.6治疗方法:5.1.6.1开始给药前必须连续3次检查血糖均值为空腹血糖>7.0mmol/l,餐后血糖为>11.1mmol/l;符合入组标准的100例病人服用开展临床试验前必须停用其他任何降糖的中西药。5.1.6.2对比例组的100例病人继续用胰岛素;试验例组100例病人服用试验溶剂a,每次20ml,每日3次,饭前30分钟口服,2周为1个疗程,治疗过程配合使用胰岛素控制血糖在标准范围内。5.1.6.3治疗过程严格进行饮食疗法。5.1.7结果:试验组患者在服药2周左右血糖逐渐下降,胰岛素使用量逐步减少,降糖作用平稳,对安全性指标的观察表明,本发明药物无不良反应。临床治疗后胰岛素用量见下表。表4治疗后胰岛素用量(x±s)(n=100)组别胰岛素用量对比组50±3.5u实验组28±2.4u试验例组与对比例组相比,p<0.01。结果表明:使用本发明治疗的同时配合使用胰岛素的用量,与单独使用胰岛素治疗时的用量相比,有极显著差异(p<0.01),说明本发明中药组合物对气阴两虚型消渴症患者有显著降血糖作用,对胰岛素依赖型病人有显著减少其胰岛素用量的作用。且对100例服用试验溶剂a的患者进行两个疗程服用后体检,试验结果表明,服用两个疗程后,能明显改善气阴两虚型消渴症患者临床症状,降低空腹血糖及餐后2h血糖(p<0.05);试食前后血、尿、大便及肝肾功能各项检测指标均在正常范围,提示试验溶剂a的药物对受试患者健康无明显损害,具有治疗糖尿病作用。二、酱油的品质检测:待检测的样品为:实施例1、实施例2、实施例3、对照组:市面上采购的某一袋装包装酱油。检测的项目如下:全氮、总固形物及食盐含量按照gb18186-2000《酿造酱油》标准方法检测。无盐固形物计算方式为总固形物减去盐含量。氨基态氮含量的检测参考gb/t5009.39-2003测定;总酸根据gb/t12456-2008测定。还原糖含量根据gb/5009.7-2008测定。铁元素、锰元素含量使用原子吸收光谱法测定。表5成分比较表g/100ml实施例1实施例2实施例3对照组可溶性无盐固形物18.25±0.0619.86±0.0218.97±0.0313.86±0.02全氮1.84±0.041.91±0.061.92±0.041.64±0.03氨基态氮1.37±0.021.53±0.011.32±0.021.12±0.01总酸1.59±0.081.49±0.121.58±0.081.41±0.04食盐12.68±0.0111.92±0.0212.68±0.0113.48±0.00还原糖4.32±0.024.86±0.014.75±0.013.37±0.00铁元素38.68±0.2339.58±0.3239.84±0.1210.26±0.15锰元素20.25±0.1919.87±0.2221.35±0.3017.29±0.21赖氨酸g/l3.12±0.053.59±0.123.18±0.082.58±0.02由上表可知,采用本申请工艺与原料制备得到的养身酱油品质上在可溶性无盐固形物、还原糖、铁元素、锰元素、赖氨酸上均有优异的提高,相比较对照组,本申请的养身酱油在铁元素提高至少29g/100ml、锰元素提高至少2g/100ml;赖氨酸至少提高了0.6g/l,大大的提高了who/fao的比值,从而提高了酱油的品质。以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明的保护范围应以所附权利要求为准。当前第1页12
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