专利名称：作为酪氨酸激酶抑制剂的喹唑啉衍生物的制作方法
专利说明作为酪氨酸激酶抑制剂的喹唑啉衍生物 本发明涉及具有抗肿瘤活性从而可用于治疗人或动物体的方法之中的某些新的喹唑啉衍生物或其可药用盐。本发明还涉及制备所述喹唑啉衍生物的方法，涉及含有所述喹唑啉衍生物的药物组合物，并且涉及所述喹唑啉衍生物在治疗方法中的应用，例如在制备用于在温血动物例如人中预防或治疗实体肿瘤疾病的药物中的应用。
真核细胞不断地对各种各样的细胞外信号作出反应，所述细胞外信号在有机体内实现细胞之间的信息传达。这些信号在细胞内调节各种各样的身体反应，包括增生、分化、细胞凋亡和能动性。细胞外信号采取各种各样的可溶性因子的形式，所述可溶性因子包括生长因子以及旁分泌和内分泌因子。通过结合到特异性跨膜受体，这些配体将细胞外信号整合到细胞内信号途径，因此转导信号通过质膜并使单个细胞对细胞外信号作出反应。许多这样的信号转导过程利用涉及促进这些各种各样的细胞反应的蛋白质磷酸化的可逆过程。靶蛋白的磷酸化状况是由特异性激酶和磷酸酶调节的，所述特异性激酶和磷酸酶决定着约三分之一由哺乳动物基因组编码的所有蛋白质的调节。由于磷酸化在信号转导过程中是如此重要的调节机制，因此毫不意外的是，在这些细胞内途径中的失常导致异常的细胞生长和分化，并因此促进细胞的变异(Cohen等人，Curr OpinChem Biol，1999，3，459-465中的综述)。
已经广为证明，若干这样的酪氨酸激酶被突变为组成型活性形式，并且/或者当被过度表达时导致各种人类细胞的变异。这些突变的和过度表达的激酶形式存在于很大比例的人类肿瘤中(Kolibaba等人，Biochimica et Biophysica Acta，1997，133，F217-F248中的综述)。由于酪氨酸激酶在各种组织的增生和分化中起着重要作用，所以在新的抗癌治疗的开发中，人们将大量精力集中在了这些激酶上面。这个家族的激酶分别被分成两组-受体和非受体酪氨酸激酶例如EGF受体和SRC家族。根据大量的研究包括人类基因组工程研究的结果，在人类基因组中已经发现了大约90种酪氨酸激酶，其中58种是受体类型而32种是非受体类型。可以将这些酪氨酸激酶划分为20种受体酪氨酸激酶和10种非受体酪氨酸激酶亚家族(Robinson等人，Oncogene，2000，19，5548-5557)。
受体酪氨酸激酶在启动细胞复制的促有丝分裂信号的传导中是特别重要的。这些跨越细胞质膜的大的糖蛋白，具有其特异配体的细胞内结合域(例如EGF受体的表皮生长因子(EGF))。配体的结合导致由受体的细胞内部分编码的受体激酶酶活性的激活。这种活性使靶蛋白中的关键酪氨酸氨基酸磷酸化，导致增生信号跨越细胞质膜转导。
已知erbB家族的受体酪氨酸激酶，包括EGFR、erbB2、erbB3和erbB4，常常与推动肿瘤细胞的增生和生存有关(Olayioye等人，EMBOJ.，2000，19，3159中的综述)。这种推动能够完成的一个机理是通过在蛋白质水平上的受体的过度表达进行的，通常是基因扩增的结果。这在很多普通人类癌症(Klapper等人，Adv.Cancer Res.，2000，77，25中的综述)例如乳癌(Sainsbury等人，Brit.J.Cancer，1988，58，458；Guerin等人，Oncogene Res.，1988，3，21；Slamon等人，Science，1989，244，707；Klijn等人，Breast Cancer Res.Treat.，1994，29，73和Salomon等人，Crit.Rev.Oncol.Hemato.，1995，19，183中的综述)、非小细胞肺癌(NSCLC)包括腺癌(Cerny等人，Brit.J.Cancer，1986，54，265；Reubi等人，Int.J.Cancer，1990，45，269；Rusch等人，CancerResearch，1993，53，2379；Brabender等人，Clin.Cancer Res.，2001，7，1850)以及其它肺癌(Hendler等人，Cancer Cells，1989，7，347；Ohsaki等人，Oncol.Rep.，2000，7，603)、膀胱癌(Neal等人，Lancet，1985，366；Chow等人，Clin.Cancer Res.，2001，7，1957，Zhau等人，Mol Carcinoz.，3，254)、食管癌(Mukaida等人，Cancer，1991，68，142)、胃肠癌症例如结肠、直肠或胃癌(Bolen等人，Oncogene Res.，1987，1，149；Kapitanovic等人，Gastroenterology，2000，112，1103；Ross等人，Cancer Invest.，2001，19，554)、前列腺癌(Visak或pi等人，Histochem.J.，1992，24，481；Kumar等人，2000，32，73；Scher等人，J.Natl.Cancer Inst.，2000，92，1866)、白血病(Konaka等人，Cell，1984，37，1035，Martin-Subero等人，Cancer Genet Cvtogenet.，2001，127，174)、卵巢(Hellstrom等人，Cancer Res.，2001，61，2420)、头和颈癌(Shiga等人，Head Neck，2000，22，599)或胰腺癌(Ovotny等人，Neoplasma，2001，48，188)中已经被观察到。随着对更多的人类肿瘤组织进行erbB家族受体酪氨酸激酶的表达测试，预计其广泛流行和重要性在将来会得到进一步提高。
作为一种或多种这些受体的错误调节的结果，普遍相信很多肿瘤会变得临床上更具侵袭性并因而与患者更差的预后相关(Brabender等人，Clin.Cancer Res.，2001，7，1850；Ross等人，Cancer Investigation，2001，19，554，Yu等人，Bioessavs，2000，22.7，673)。
除了这些临床发现以外，很多临床前报导认为，erbB家族的受体酪氨酸激酶与细胞变异有关。这包括这样的观察，即很多细胞系过度表达一种或多种erbB受体，以及EGFR或erbB2在被转染进非肿瘤细胞时具有转化这些细胞的能力。在过度表达erbB2的转基因小鼠自发生长出乳腺肿瘤时，这种肿瘤基因潜能得到进一步验证。此外，很多临床前研究已经证明，通过用小分子抑制剂、显性阴性或抑制性抗体去除一种或多种erbB活性，可以诱导抗增生效应(Mendelsohn等人，Oncogene，2000，19，6550中的综述)。因此已经认识到，这些受体酪氨酸激酶的抑制剂作为哺乳动物癌细胞增生的选择性抑制剂是有价值的(Yaish等人，Science，1988，242，933，Kolibaba等人，Biochimicaet Biophysica Acta，1997，133，F217-F248；Al-Obeidi等人，2000，Oncogene，19，5690-5701；Mendelsohn等人，2000，Oncogene，19，6550-6565)。
最近，小分子EGFR酪氨酸激酶抑制剂，Iressa(也被称作gefitinib和ZD1834)和Tarceva(也被称作erlotinib)已经被核准用于治疗晚期非小细胞肺癌。而且，用抗EGFR和erbB2的抑制性抗体(分别是c-225和trastuzumab)的研究成果已经证明对于临床治疗所选择的实体瘤是有利的(Mendelsohn等人，2000，Oncogene，19，6550-6565中的综述)。
最近，在非小细胞肺癌(NSCLCs)的某些亚型中，发现了EGF受体的细胞内催化结构域的ATP结合袋中的突变。尽管显然诸如gefitinib和erlotinib之类的化合物的临床利益不可能单独受EGFR突变的影响，但是受体中突变的存在似乎与对EGFR酪氨酸激酶抑制剂例如gefitinib的反应有关(Lynch等人，N Engl J Med 2004；3502129-2139；Paez等人，Science 2004；3041497-1500)。已经证明，与在野生型受体所观察到的相比，配体刺激在突变的受体中导致不同的磷酸化式样，并且认为突变型EGF受体选择性地转导NSCLCs所依赖的生存信号。通过诸如gefitinib之类的化合物来抑制这些信号，可以增强所述药物的功效(Sordella等人.Science 2004；3051163-1167)。因此，抑制野生型和突变的受体中的EGF赖氨酸激酶是预计提供抗癌作用的重要目标。
已经发现许多erbB受体酪氨酸激酶的扩增和/或活性，因而意味着其在若干非恶性增生失调例如牛皮癣(Ben-Bassat，Curr.Pharm.Des.，2000，6，933；Elder等人，Science，1989，243，811)、良性前列腺增生(BPH)(Kumar等人，Int.Urol.Nephrol.，2000，32，73)、动脉粥样硬化和再狭窄(Bokemeyer等人，Kidney Int.，2000，58，549)中起作用。因此预计erbB型受体酪氨酸激酶抑制剂将用于治疗这些或其它过度细胞增生的非恶性病症。
另外，抑制erbB型受体酪氨酸激酶例如EGFR酪氨酸激酶，可以用于治疗呼吸道疾病或病症，包括，例如，炎性疾病和慢性阻塞性肺疾病(COPD)(J.-H.Kim等人Chest 2004，126，888，K.Takeyama等人Proc.Natl.Acad.Sci USA 1999，96，3081和P.-R Burgel等人，Thorax 2004，59)。
专利申请公开号WO 96/33977、WO 96/33978、WO 96/3 3979、WO96/33980、WO 96/33981、WO 97/30034、WO 97/30035、WO 97/38994、WO 98/13354、WO 00/55141、WO 00/56720、WO 02/41882、WO03/82290、EP 566 226和EP 837 063公开了在4-位上携带苯胺基取代和在6-和/或7-位上携带取代基的某些喹唑啉衍生物，具有受体酪氨酸激酶抑制活性。
专利申请公开号WO 03/082831公开了在6-位上被杂环基氧基或杂环基烷氧基取代的4-(2，3-二卤代苯胺基)喹唑啉化合物，所述化合物是erbB尤其是EGFR酪氨酸激酶抑制剂。WO 03/082831公开了作为实施例25的化合物
以及实施例46中的其某些立体异构体。
WO 03/082831还公开了，作为实施例24和47，化合物
实施例24 实施例47 然而，仍然需要发现-较之已知的erbB酪氨酸激酶抑制剂-具有良好的体内活性以及改良的药理学特性的另外的化合物，尤其是选择性EGFR酪氨酸激酶抑制剂的化合物。例如，需要在(包括但不限于)以下方面具有有利的和/或改良的特性的化合物(i)物理性质；(ii)有利的DMPK性质，例如高生物利用度和/或有利的半量清理时间(halflife)和/或有利的分布体积和/或高吸收性；(iii)减少临床药物-药物相互作用(例如细胞色素P450酶抑制或诱导)的倾向性的因素；和(iv)具有患者中的QT间距延长的减少的倾向性的化合物，例如在HERG试验中是无活性的或微弱活性的化合物。
我们目前惊奇地发现，在喹唑啉环的C6位上携带某些碳取代了的哌啶-4-基氧基的某些4-卤代苯胺基喹唑啉化合物，表现出了如前文描述的有利特性的组合，例如高体内活性以及良好的DMPK特性，包括高生物利用度和良好的吸收。
虽然不希望意味着本发明公开的化合物仅通过对单一生物过程的作用而具有药理学活性，但是相信本发明化合物通过抑制一种或多种erbB家族的受体酪氨酸激酶而提供抗肿瘤作用，所述erbB家族的受体酪氨酸激酶涉及导致肿瘤细胞增生的信号转导步骤。特别是，相信本发明化合物通过选择性抑制EGFR酪氨酸激酶而提供抗肿瘤作用。
关于本文使用的erbB受体，尤其是EGFR，除非另外特别说明，意指包括野生型和突变了的受体。术语“突变”包括但不限于，框架中的核苷酸缺失或者编码受体例如EGFR的一个或多个外显子中的取代。
通常，本发明化合物，特别是通过抑制EGFR酪氨酸激酶，对erbB受体酪氨酸激酶家族具有有效的抑制活性，同时对其它激酶具有效力较低的抑制活性。相对于erbB2酪氨酸激酶，本发明化合物抗EGFR酪氨酸激酶的效力显著更好。因此，可以将本发明化合物以足够抑制EGFR酪氨酸激酶，同时对erbB2或其它酪氨酸激酶不具有显著的作用的剂量给药。本发明化合物提供的选择性抑制，可以提供治疗由EGFR酪氨酸激酶引起的疾病，同时，例如，减少与抑制其它酪氨酸激酶有关的不良副作用。
按照本发明的第一个方面，提供式I喹唑啉衍生物
其中 m是1、2或3； 每一R1，其可以相同或不同，是卤素； R2选自氢和(1-4C)烷基； R3是氢；并且 R4选自氢和(1-4C)烷基； 或其可药用盐。
在本发明的一个实施方案中，m是1、2或3；每一R1，其可以相同或不同，是卤素；R2是(1-4C)烷基；R3是氢；并且 R4选自氢和(1-4C)烷基；或其可药用盐。
在一个实施方案中，m是1、2或3并且每一R1，其可以相同或不同，选自氟、氯和溴。
在另一实施方案中，m是2或3，一个R1是氟且其它的R1选自氟、氯和溴。
在另一实施方案中，式I的喹唑啉环的4-位上的苯胺基选自3-氯-2-氟苯胺基、3-氯-5-氟苯胺基、3-氯-4-氟苯胺基、3-溴-2-氟苯胺基、3-氯-2，6-二氟苯胺基和3-氯-2，4-二氟苯胺基。
在另一实施方案中，式I的喹唑啉环的4-位上的苯胺基是3-氯-2-氟苯胺基。
在另一实施方案中，式I的喹唑啉环的4-位上的苯胺基是3-溴-2-氟苯胺基。
在另一实施方案中，式I的喹唑啉环的4-位上的苯胺基是3-氯-4-氟苯胺基。
在另一实施方案中，R2是(1-4C)烷基。
在另一实施方案中，R2是氢。
在另一实施方案中，R2是(1-3C)烷基。
在另一实施方案中，R2选自甲基、乙基和异丙基。
在另一实施方案中，R2选自氢和甲基。
在另一实施方案中，R2是甲基。
在另一实施方案中，R2和R4中至少一个是(1-4C)烷基，例如R2是氢和R4是甲基，或者R2是甲基且R4是氢。
在另一实施方案中，R4选自氢和(1-3C)烷基，例如R4选自氢、甲基、乙基和异丙基，更特别地，R4是甲基或R4是氢。
在另一实施方案中，R4是(1-3C)烷基，例如R4选自甲基、乙基和异丙基。
在另一实施方案中，R3和R4都是氢。
在另一实施方案中，R2是甲基且R4选自氢和(1-3C)烷基，例如R2是甲基且R4选自氢、甲基和乙基。在更加进一步实施方案中，R2和R4都是甲基。在另一实施方案中，R2是甲基且R4是氢。
在另一实施方案中，R2是甲基或氢且R4是甲基。
在另一实施方案中，提供式I喹唑啉衍生物，其中； m是1或2； R1选自氟、氯和溴； R2选自甲基、乙基和异丙基； R3是氢；并且 R4选自氢、甲基、乙基和异丙基(尤其R4是氢或甲基)； 或其可药用盐。
在另一实施方案中，提供式I喹唑啉衍生物，其中； R2是甲基； R3是氢； R4选自氢和甲基；和 式I的喹唑啉环的4-位上的苯胺基选自3-氯-2-氟苯胺基、3-氯-4-氟苯胺基和3-溴-2-氟苯胺基(尤其苯胺基是3-氯-2-氟苯胺基)； 或其可药用盐。
在另一实施方案中，提供式I喹唑啉衍生物，其中； R2是甲基； R3是氢； R4是甲基；和 其中式I的喹唑啉环的4-位上的苯胺基选自3-氯-2-氟苯胺基、3-氯-4-氟苯胺基和3-溴-2-氟苯胺基(尤其苯胺基是3-氯-2-氟苯胺基)； 或其可药用盐。
在另一实施方案中，提供式I喹唑啉衍生物，其中； R2是甲基； R3和R4都是氢；和 其中式I的喹唑啉环的4-位上的苯胺基选自3-氯-2-氟苯胺基、3-氯-4-氟苯胺基和3-溴-2-氟苯胺基(尤其苯胺基是3-氯-2-氟苯胺基)； 或其可药用盐。
在另一实施方案中，提供式I喹唑啉衍生物，其中； R4是甲基和R2是氢，或者 R4是氢和R2是甲基； R3是氢；和 式I的喹唑啉环的4-位上的苯胺基选自3-氯-2-氟苯胺基、3-氯-4-氟苯胺基和3-溴-2-氟苯胺基(尤其苯胺基是3-氯-2-氟苯胺基)； 或其可药用盐。
具体的式I喹唑啉衍生物是式Ia化合物
其中 R1a是氯或溴； R1b是氢且R1c是氟；或者 R1c是氢和R1b是氟；并且 R2、R3和R4具有前文所述的与式I化合物有关的任何值； 或其可药用盐。
另一实施方案是式Ia化合物，其中 R1a是氯或溴； R1b是氢和R1c是氟；或 R1c是氢和R1b是氟； R2选自氢和(1-3C)烷基(例如R2是(1-3C)烷基，尤其是甲基或者R2是氢)；并且 R3是氢； R4选自氢、甲基、乙基和异丙基(尤其R4是氢或甲基)； 或其可药用盐。
另一实施方案是式Ia化合物，其中 R2是甲基； R3是氢； R4是甲基；并且 其中式Ia中的喹唑啉环的4-位上的苯胺基选自3-氯-2-氟苯胺基和3-溴-2-氟苯胺基(尤其苯胺基是3-氯-2-氟苯胺基)； 或其可药用盐。
另一实施方案是式Ia化合物，其中 R2是甲基； R3和R4都是氢；并且 其中式Ia中的喹唑啉环的4-位上的苯胺基选自3-氯-2-氟苯胺基和3-溴-2-氟苯胺基(尤其苯胺基是3-氯-2-氟苯胺基)； 或其可药用盐。
另一实施方案是式Ia化合物，其中 R2是氢； R3是氢； R4是甲基；并且 其中式Ia中的喹唑啉环的4-位上的苯胺基选自3-氯-2-氟苯胺基和3-溴-2-氟苯胺基(尤其苯胺基是3-氯-2-氟苯胺基)； 或其可药用盐。
另一具体的式I喹唑啉衍生物是式Ib化合物
其中 R1a是氯或溴； R1b是氢和R1c是氟；或 R1c是氢和R1b是氟； R2是氢或(1-3C)烷基(例如R2是(1-3C)烷基，尤其是甲基或者R2是氢)； R3是氢；并且 R4是氢或甲基； 或其可药用盐。
在本实施方案中，适宜地R2和R4不都是氢。例如R2是氢和R4是甲基，或者R2是甲基和R4是氢。
具体的式Ib化合物是其中 R1a是氯或溴(尤其R1a是氯)； R1b是氟； R1c是氢； R2是甲基； R3是氢；并且 R4是氢或甲基； 或其可药用盐。
另一具体的式Ib化合物是其中 R1a是氯或溴(尤其R1a是氯)； R1b是氟； R1c是氢； R2是甲基；并且 R3和R4都是氢； 或其可药用盐。
另一具体的式Ib化合物是其中 R1a是氯或溴(尤其R1a是氯)； R1b是氟； R1c是氢； R2是氢； R3是氢；并且 R4是甲基； 或其可药用盐。
另一具体的式I喹唑啉衍生物是式Ic化合物
其中 R1a是氯或溴； R1b是氢和R1c是氟；或 R1c是氢和R1b是氟； R2是氢或(1-3C)烷基(例如R2是(1-3C)烷基，尤其是甲基，或者R2是氢)； R3是氢； R4是氢或甲基； 或其可药用盐。
在本实施方案中，适宜地R2和R4不都是氢。例如R2是氢和R4是甲基，或者R2是甲基和R4是氢。
具体的式Ic化合物是其中 R1a是氯或溴(尤其R1a是氯)； R1b是氟； R1c是氢； R2是甲基； R3是氢；并且 R4是氢或甲基； 或其可药用盐。
另一具体的式Ic化合物是其中 R1a是氯或溴(尤其R1a是氯)； R1b是氟； R1c是氢； R2是甲基； R3是氢；并且 R4是甲基； 或其可药用盐。
另一具体的式Ic化合物是其中 R1a是氯或溴(尤其R1a是氯)； R1b是氟； R1c是氢； R2是甲基；并且 R3和R4都是氢； 或其可药用盐。
另一具体的式Ic化合物是其中 R1a是氯或溴(尤其R1a是氯)； R1b是氟； R1c是氢； R2是氢； R3是氢；并且 R4是甲基； 或其可药用盐。
式Ic化合物表现出有利的特性，包括高体内效力以及良好的DMPK特性例如高吸收和/或低排出。
另一具体的式I喹唑啉衍生物是式Id化合物
R1a是氯或溴； R1b是氢和R1c是氟；或 R1c是氢和R1b是氟； R2是氢或(1-3C)烷基(例如R2是(1-3C)烷基，尤其是甲基，或者R2是氢)； R3是氢； R4是氢或甲基； 或其可药用盐。
在本实施方案中，适宜的R2和R4不都是氢。例如R2是氢和R4是甲基，或者R2是甲基和R4是氢。
具体的式Id化合物是其中 R1a是氯或溴(尤其R1a是氯)； R1b是氟； R1c是氢； R2是甲基； R3是氢；并且 R4是氢或甲基； 或其可药用盐。
另一具体的式Id化合物是其中 R1a是氯或溴(尤其R1a是氯)； R1b是氟； R1c是氢； R2是甲基； R3是氢；并且 R4是甲基； 或其可药用盐。
另一具体的式Id化合物是其中 R1a是氯或溴(尤其R1a是氯)； R1b是氟； R1c是氢； R2是甲基；并且 R3和R4都是氢； 或其可药用盐。
另一具体的式Id化合物是其中 R1a是氯或溴(尤其R1a是氯)； R1b是氟； R1c是氢； R2是氢； R3是氢；并且 R4是甲基； 或其可药用盐。
另一具体式I喹唑啉衍生物是式Ie化合物
其中 R1a是氯或溴； R1b是氢和R1c是氟；或 R1c是氢和R1b是氟； R2是氢或(1-3C)烷基(例如R2是(1-3C)烷基，尤其是甲基，或者R2是氢)； R3是氢； R4是氢或甲基； 或其可药用盐。
在本实施方案中，适宜的R2和R4不都是氢。例如R2是氢和R4是甲基，或者R2是甲基和R4是氢。
具体的式Ie化合物是其中 R1a是氯或溴(尤其R1a是氯)； R1b是氟； R1c是氢； R2是甲基； R3是氢；并且 R4是氢或甲基； 或其可药用盐。
另一具体的式Ie化合物是其中 R1a是氯或溴(尤其R1a是氯)； R1b是氟； R1c是氢； R2是甲基； R3是氢；并且 R4是甲基； 或其可药用盐。
另一具体的式Ie化合物是其中 R1a是氯或溴(尤其R1a是氯)； R1b是氟； R1c是氢； R2是甲基；并且 R3和R4都是氢； 或其可药用盐。
另一具体的式Ie化合物是其中 R1a是氯或溴(尤其R1a是氯)； R1b是氟； R1c是氢； R2是氢； R3是氢；并且 R4是甲基； 或其可药用盐。
具体的本发明化合物是选自下列的式I喹唑啉衍生物 (2S，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺； (2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺； (2S，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺； (2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺； (2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N-甲基哌啶-2-甲酰胺； (2S，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺；和 (2R，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺； 或其可药用盐。
应当理解，某些式I化合物可以溶剂化的以及非溶剂化的形式例如水合式存在。应当理解，本发明包括对erbB受体酪氨酸激酶具有抑制作用例如抗增生活性的所有这样的溶剂化形式。
还应当理解，某些式I化合物可以表现出多态性，本发明包括对erbB受体酪氨酸激酶具有抑制作用例如抗增生活性的所有这样的形式。
还应当理解，本发明涉及对erbB受体酪氨酸激酶表现出抑制作用例如抗增生活性的式I化合物的所有互变异构体形式。
式I化合物的适宜的可药用盐是，例如，式I化合物的酸加成盐，例如与无机或有机酸形成的酸加成盐。适宜的无机酸包括，例如，盐酸、氢溴酸或硫酸。适宜的有机酸包括，例如，三氟乙酸、柠檬酸、马来酸、酒石酸、富马酸、甲磺酸或4-甲苯磺酸。具体的式I化合物的盐是与马来酸(顺式-丁烯二酸)形成的盐。在具体的实施方案中，提供式I化合物的马来酸氢盐。更特别地，4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺(及其立体异构体例如(2R，4R)、(2S，4S)、(2S，4R)和(2R，4S)异构体)与马来酸形成的盐(尤其马来酸氢盐，例如(2R，4R)4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐)，较之化合物的游离碱形式，表现出了有利的特性，例如一种或多种下列特性 (i)改善的溶解特性，例如高体内溶解率； (ii)高生物利用度；和/或 (iii)口服给药后在暴露状态下的低变异性。
盐可以是非晶形、半晶体或晶体。在具体的实施方案中，盐是晶体。本文所用术语“晶体”是指高度结晶的式I喹唑啉衍生物，例如约60％以上，合宜地约80％以上，例如约90％以上、更特别地约95％以上是晶体，而更具体约98％以上是晶体。结晶度可以用标准方法例如X-射线衍射法来测定。
本文关于“半晶体”是指含有晶体和非晶体(例如非晶形)化合物的本发明喹唑啉衍生物。例如约60％以下晶体，例如约50％以下，30％、20％、10％或5％以下是晶体的化合物。
当盐是式I喹唑啉衍生物的马来酸氢盐时，式I喹唑啉衍生物与马来酸盐抗衡离子的摩尔比率为约1∶2，例如1∶1.5-1∶2.5。特别是马来酸氢盐具有1∶2的式I喹唑啉∶马来酸盐抗衡离子的摩尔比率。
本发明具体盐例如马来酸氢盐的定性可以通过常规方法，例如质子核磁共振(NMR)分析来确认。
具体的盐是(2R，4R)4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐。如前文所述，马来酸氢盐可以是非晶形、半晶体或晶体。在具体的实施方案中，提供晶体(2R，4R)4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐。
在本发明另一实施方案中，提供晶体(2R，4R)4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐，其具有这样的X-射线粉末衍射花样，该X-射线粉末衍射花样在约5.2的2θ值具有至少一个峰。
在本发明另一实施方案中，提供晶体(2R，4R)4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐，其具有这样的X-射线粉末衍射花样，该X-射线粉末衍射花样在约5.2和8.2的2θ值具有特定峰。
在本发明另一实施方案中，提供晶体(2R，4R)4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐，其具有这样的X-射线粉末衍射花样，该X-射线粉末衍射花样在约5.2、8.2和10.3的2θ值具有特定峰。
在另一实施方案中，提供晶体(2R，4R)4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐，其具有这样的X-射线粉末衍射花样，该X-射线粉末衍射花样在约5.2、8.2、10.3和10.6的2θ值具有特定峰。
在另一实施方案中，提供晶体(2R，4R)4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐，其具有这样的X-射线粉末衍射花样，该X-射线粉末衍射花样在约表1中所示的2θ值具有特定峰 表1 表1 在本发明另一实施方案中，提供具有基本上与
图1所示相同的X-射线粉末衍射花样的晶体(2R，4R)4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐。
在定义本文描述的式I喹唑啉衍生物的晶体形式的X-射线粉末衍射峰的前述段落中，在辞句“...在约2-θ＝...”中使用了术语“在约”，来说明峰的准确位置(即列举的2-θ角值)不应当被理解为绝对值，因为，如本领域的技术人员所理解，峰的准确位置可以在一个机器与另一机器之间，从一个样本到另一样本，或者作为所使用测定条件的微小变化的结果，略有变化。还要说明，在前述段落中，晶体形式的(2R，4R)4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐提供具有基本上与图1所示的相同的X-射线粉末衍射花样，并且基本上具有表1所示的最显著峰(2-θ角值)。应当理解，在本上下文中使用术语“基本上”意图说明X-射线粉末衍射花样的2-θ角值可以在一个机器与另一机器之间，从一个样本到另一样本，或者作为所使用测定条件的微小变化的结果，略有变化，所以图1中所示或表1中或在别处所列举的峰的位置再次不应当被理解为绝对值。
在这方面，根据测定条件(例如所使用的设备或机器)，可以获得具有一个或多个测量误差的X-射线粉末衍射花样，这在本领域是已知的。尤其是，通常众所周知，X-射线粉末衍射花样的强度可以随测定条件和样本制备而变化。例如，X-射线粉末衍射本领域技术人员将认识到，峰的相对强度可以受例如以下因素的影响粒径大于30微米的颗粒以及非单一纵横比，这可以影响样本的分析。技术人员还将认识到，反射的位置可以受样本在衍射仪中放置的准确高度以及衍射仪的零校准影响。样本的表面平性也可能具有小的影响。因此本领域的技术人员将会理解，本文提供的衍射花样数据不应当被理解为绝对的(更多的知识参见Jenkins，R & Snyder，R.L.‘Introduction to X-rayPowder Diffractometry’John Wiley & Sons，1996)。因此，应当理解，本文描述的晶体形式的(2R，4R)4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐不限于提供和图1中所示完全一样的X-射线粉末衍射花样的晶体，并且提供与图1所示基本上一样的X-射线粉末衍射花样的(2R，4R)4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐的任何晶体，都属于本发明的范围以内。X-射线粉末衍射领域的技术人员能够鉴定基本相同的X-射线粉末衍射花样。
通常，X-射线粉末衍射图中的衍射角的测量误差为约2-θ＝0.5°或以下，并且，当考虑图1中的X-射线粉末衍射花样时，以及当解译在上文以及表1中提及的峰位置时，应当考虑这样的测量误差度。
如通过示差扫描量热法(DSC)分析所测定的那样，晶体(2R，4R)4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐具有起始温度在范围约175-182℃之间的熔化吸热线。如通过DSC分析所测定的那样，熔化吸热线的峰值通常在范围约180-187℃之间。
按照本发明的另一方面，如通过DSC分析所测定的那样，提供具有起始温度在范围约175℃-182℃之间的融化吸热线的晶体(2R，4R)4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐。
按照本发明的另一方面，如通过DSC分析所测定的那样，提供具有起始温度在范围约180℃-187℃之间的融化吸热线的晶体(2R，4R)4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐。
可以理解，通过DSC分析测定的起始和/或峰值温度可以从一个机器到另一机器、一种方法到另一方法或一个样本到另一样本而略有变化，因而所引用的值不应当被理解为是绝对的。通常，DSC分析中的特征温度的测量误差取决于所使用的加热速率。然而，在约10℃/分钟的加热速率的情况下，约±5℃或以下的测量误差是典型的。
应当理解，某些上面定义的某些式I喹唑啉衍生物由于一个或多个不对称碳原子而可以光活性或外消旋形式存在。本发明在其定义中包括具有本发明化合物的上述活性的任何这样的光活性或外消旋形式。尤其是，式I喹唑啉衍生物在哌啶基环上具有2个手性中心(4-位上的氧联接点和2-位上的R3R4NC(O)-基团)。本发明包括具有本文所述活性的所有这样的立体异构体，例如(2R，4R)、(2S，4S)、(2S，4R)和(2R，4S)异构体。还应当理解，在手性化合物的名称中，(R，S)表示任何scalemic或外消旋混合物，而(R)和(S)是指具体对映体。在名称中没有(R，S)、(R)或(S)的情况下，应当理解该名称表示任何scalemic或外消旋混合物，其中scalemic混合物含有任何相对比例的R和S对映体，而外消旋混合物含有比例为50∶50的R和S对映体。光活性形式的合成可通过本领域众所周知的有机化学标准技术来进行，例如通过由光活性原料合成或通过拆分外消旋形式来获得。
在本说明书中，一般术语“烷基”包括直链和支链烷基，例如丙基、异丙基和叔-丁基。然而对于个别烷基例如“丙基”，仅特指直链形式，对于个别支链烷基例如“异丙基”，仅特指支链形式。
本说明书中的前文或后文定义的任何可变基团的适宜的值包括对于卤素氟、氯、溴和碘； 对于(1-4C)烷基甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔-丁基和异丁基。
可以理解，本文式I喹唑啉中的苯胺基，表示位于下式的喹唑啉环的4-位上的基团
合成式I喹唑啉衍生物 本发明的另一方面提供制备式I喹唑啉衍生物或其可药用盐的方法。可以理解，在某些下列方法中，有些取代基可以需要保护以避免其发生非所要求的反应。熟练的化学工作者将会懂得何时需要这样的保护，以及如何引入这样的保护基以及过后如何将其除去。
有关保护基的实例，参见该主题的许多普通书籍之一，例如，Theodora Green编写的“有机合成中的保护基”(出版者John Wiley &Sons)。保护基可以通过文献中描述的或熟练的化学工作者已知的适于除去所述保护基的任何方便的方法来除去，对这样的方法加以选择，以便达到除去保护基的目的，而同时对分子中的其它基团的干扰最小化。
因此，如果反应物包含，例如，像氨基、羟基或羧基之类的基团，那么在本文提及的某些反应中最好将所述基团予以保护。为方便起见，下面给出保护基的具体实例，其中，例如低级烷基中的“低级”，表示其适用的基团优选具有1-4个碳原子。应当理解，这些实例不是穷举的。在下面给出除去保护基的方法的具体实例的情况下，这些实例同样不是穷举的。没有具体提及的保护基的使用和脱保护方法当然属于本发明的范围之内。
羧基保护基可以是形成酯的脂族或芳基脂族醇或者形成酯的硅烷醇残基(所述醇或硅烷醇优选含有1-20个碳原子)。羧基保护基的实例包括直链或支链(1-12C)烷基(例如异丙基和叔丁基)；低级烷氧基-低级烷基(例如甲氧基甲基、乙氧基甲基和异丁氧基甲基)；低级酰氧基-低级烷基(例如乙酰氧基甲基、丙酰氧基甲基、丁酰氧基甲基和新戊酰氧基甲基)；低级烷氧基羰基氧基-低级烷基(例如1-甲氧基羰基氧基乙基和1-乙氧基羰基氧基乙基)；芳基-低级烷基(例如苄基、4-甲氧基苄基、2-硝基苄基、4-硝基苄基、二苯甲基和2-苯并[C]呋喃酮基)；三(低级烷基)甲硅烷基(例如三甲基甲硅烷基和叔丁基二甲基甲硅烷基)；三(低级烷基)甲硅烷基-低级烷基(例如三甲基甲硅烷基乙基)；和(2-6C)烯基(例如烯丙基)。
羟基保护基的实例包括低级烷基(例如叔丁基)、低级烯基(例如烯丙基)；低级烷酰基(例如乙酰基)；低级烷氧基羰基(例如叔丁氧基羰基)；低级烯基氧基羰基(例如烯丙基氧基羰基)；芳基-低级烷氧基羰基(例如苄基氧基羰基、4-甲氧基苄基氧基羰基、2-硝基苄基氧基羰基和4-硝基苄基氧基羰基)；三(低级烷基)甲硅烷基(例如三甲基甲硅烷基和叔丁基二甲基甲硅烷基)和芳基-低级烷基(例如苄基)。
氨基保护基的实例包括甲酰基、芳基-低级烷基(例如苄基和取代了的苄基(例如α-甲基苄基)、4-甲氧基苄基、2-硝基苄和2，4-二甲氧基苄基、和三苯基甲基)；二-4-茴香基甲基和呋喃基甲基；低级烷氧基羰基(例如叔丁氧基羰基)；低级烯基氧基羰基(例如烯丙基氧基羰基)；芳基-低级烷氧基羰基(例如苄基氧基羰基、4-甲氧基苄基氧基羰基、2-硝基苄基氧基羰基和4-硝基苄基氧基羰基)；低级烷酰基氧基烷基(例如新戊酰氧基甲基)；三烷基甲硅烷基(例如三甲基甲硅烷基和叔丁基二甲基甲硅烷基)；亚烷基(例如亚甲基)和亚苄基取代了的亚苄基。
可以使用化学领域众所周知的常规技术，在合成中的任何合宜的阶段除去保护基。适于除去羟基和氨基保护基的方法包括例如，对于基团例如2-硝基苄基氧基羰基，采用酸催化、碱催化、金属催化或酶催化的水解，对于基团例如苄基，采用氢化，对于基团例如2-硝基苄基氧基羰基，采用光解法。例如，酰基保护基如烷酰基或烷氧基羰基或芳酰基可以，例如，通过用适宜的碱例如碱金属氢氧化物例如锂或钠的氢氧化物水解来除去。或者，酰基保护基如叔丁氧基羰基可以，例如，通过用适宜的酸如盐酸、硫酸或磷酸或三氟乙酸处理来除去，芳基甲氧基羰基如苄基氧基羰基可以，例如，通过用催化剂如披钯碳氢化，或者通过用路易斯酸例如三(三氟乙酸)硼处理来除去。特别适于除去羧基保护基的方法包括例如酸、碱、金属或酶催化的裂解。
读者参考J.March编写、John Wiley & Sons 1992出版的AdvancedOrganic Chemistry第四版，获取反应条件的一般指导，参考T.Green等人编写、同样由John Wiley & Son出版的Reagents and to ProtectiveGroups in Organic Synthesis第二版，获得保护基的一般指导。
式I喹唑啉衍生物或其可药用盐可以通过适于制备化学相关化合物的任何已知方法来制备，例如使用类似于WO 03/082831中描述的方法。这样的方法，当用来制备式I喹唑啉衍生物或其可药用盐时，是作为本发明的另一特征提供的，并且通过下面的代表性方法变体来予以举例说明。必需的起始材料可以通过有机化学的标准方法来获得(参见例如Advanced Organic Chemistry(Wiley-Interscience)，JerryMarch)。这样的起始材料的制备描述于附随的非限制实施例中。或者，必需的起始材料可以通过与举例说明的类似方法来获得，所述方法属于有机化学工作者的普通技能之内。
在下面制备式I喹唑啉衍生物或其可药用盐的方法中，除非另外说明，变量如上文所定义。
方法(a) 使式II化合物或其反应性衍生物
其中R1、R2和m具有前文定义的任何含义，并且其中如果有必要则将式II化合物中的任何官能团予以保护， 与式NH2R4化合物或其适宜的盐-其中R4如前文所定义-进行反应；或者 方法(b) 将式I’化合物
-其中R1、R3、R4和m具有前文定义的任何含义，并且其中如果有必要则将式I’化合物中的任何官能团予以保护-烷基化；或者 方法(c) 通过式式III化合物
-其中Lg是适宜的可置换基团；并且R2、R3和R4如前文所定义，并且并且其中如果有必要则将式III化合物中的任何官能团予以保护-与式IV化合物
-其中R1和m如前文所定义-反应；或者 方法(d) 通过使式V化合物
-其中R1和m如前文所定义，并且并且其中如果有必要则将式V化合物中的任何官能团予以保护- 与式VI化合物
-其中Lg1是适宜的可置换基团并且R2、R3和R4如前文所定义，并且其中如果有必要则将式VI化合物中的任何官能团予以保护-反应；然后，如果有必要(在任何次序中) (i)除去任何保护基；并且 (ii)形成式I喹唑啉衍生物的可药用盐。
上述反应的具体条件如下。
方法(a)的反应条件 反应在适当的偶联剂例如碳二亚胺或适宜的肽偶联剂例如O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟-磷酸盐(HATU)或碳二亚胺例如二环己基碳二亚胺存在下，任选在催化剂例如二甲基氨基吡啶或4-吡咯烷子基吡啶存在下合宜地进行。
反应在适当的碱存在下合宜地进行。适当的碱是，例如，有机碱如，例如，吡啶、2，6-卢剔啶、可力丁、4-二甲基氨基吡啶、三乙胺、二-异丙基乙胺、N-甲基吗啉或二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯，或者，例如，碱金属或碱土金属碳酸盐，例如碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯或碳酸钙。
反应在适当的惰性溶剂或稀释剂存在下合宜地进行，所述惰性溶剂或稀释剂例如酯如乙酸乙酯，卤化溶剂例如二氯甲烷、氯仿或四氯化碳，醚例如四氢呋喃或1，4-二烷，芳族溶剂例如甲苯，或偶极非质子溶剂例如N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷-2-酮或二甲基亚砜。反应在温度范围例如0-120℃之间，合宜地在或接近室温，合宜地进行。
式II酸的“反应性衍生物”是与式NH2R4胺反应产生相应的酰胺的羧酸衍生物。式II羧酸的适宜的反应性衍生物是，例如，酰卤，例如通过酸与无机酸氯化物例如亚硫酰氯反应形成的酰氯；混合酐，例如通过酸与氯甲酸酯如异丁基氯甲酸酯反应形成的酐；活性酯，例如通过酸与酚如五氟酚反应形成的酯，酯例如五氟苯基三氟乙酸酯或醇例如甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇或N-羟基苯并三唑；酰叠氮，通过酸与叠氮例如二苯基磷酰叠氮反应形成叠氮；酰腈，例如通过酸与氰化物如二乙基磷酰腈反应形成的氰化物。羧酸的上述反应性衍生物与胺的反应是本领域众所周知的，例如其可以在如上文描述的碱存在下，在如上文描述的适宜的溶剂中反应。该反应可以在上文描述的温度下合宜地进行。
制备方法(a)的起始材料 式II化合物可以用常规技术或者与现有技术中制备类似化合物的类似方法，例如WO 03/082831中描述的方法来制备。例如，式II化合物可以按照反应方案1来制备
反应方案1 其中R1、R2和m如前文所定义；Lg是适宜的可置换基团，例如卤素(例如氯)；Pg是适宜的羟基保护基，例如烷酰基；并且Pg1是适宜的羧基保护基例如(1-4C)烷基，并且其中如果有必要，则将反应方案1中所示化合物中的任何官能团予以保护。
反应方案1的注释 步骤(i)反应在与本文描述的关于方法(c)的类似条件下适当地进行。
步骤(ii)Pg的裂解可以在这样的反应的标准条件下进行。例如当Pg是烷酰基如乙酰基时，其可以在甲醇氨溶液中通过加热来裂解。步骤(iii)使用Mitsunobu反应进行偶联。适宜的Mitsunobu条件包括，例如，在叔膦和偶氮二羧酸二烷基酯在有机溶剂例如THF或适宜地在二氯甲烷中的混合物存在下，并且在温度范围-15℃-60℃，而适宜地在或接近室温，进行反应。适宜的叔膦包括例如三-正丁基膦或者尤其是三-苯基膦。适宜的偶氮二羧酸二烷基酯包括例如偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)或偶氮二羧酸二叔丁酯(DTAD)。Mitsunobu反应的详细资料包含在Tet.Letts.，31，699，(1990)；The Mitsunobu Reaction，D.L.Hughes，Organic Reactions，1992，Vol.42，335-656和Progress in theMitsunobu Reaction，D.L.Hughes，Organic Preparations and ProceduresInternational，1996，Vol.28，127-164中。如果需要，可以使用式IIc化合物的特定立体异构体以产生式I化合物的特定立体异构体。
步骤(iv)使用常规方法来除去羧基保护基Pg1。例如当Pg1是(1-4C)烷基时，通过用众所周知的技术，例如在适宜的碱例如氢氧化锂存在下碱解，来水解式IId酯。
式IIa和IIc化合物是已知的，或者可以用制备类化合物的已知方法制备。例如其中Lg是氯并且Pg是乙酰基的式IIa化合物可以用反应方案2中说明的方法来制备
反应方案2 式IIc的旋光异构体，可以例如，用常规方法例如反应方案2a中所示的方法制备
反应方案2a 其中Pg1是烷基例如甲基；NaBH(OAc)3是三乙酰氧基硼氢化钠；MsCl是甲磺酰氯；Pg2是适宜的氨基保护基例如苄基或α-甲基苄基，例如(S)-α-甲基苄基或(R)-α-甲基苄基；Pg3是适宜的氮保护基例如叔-丁氧基羰基(BOC)；R2如前文所定义，并且R2’代表氢或(1-3C)烷基，并且其中如果有必要，可以将反应方案2a中所示化合物中的任何官能团予以保护。
反应方案2a的注释 (i)可以使内酯与适宜的式Pg1OH醇例如烷基醇(例如甲醇)，在酸例如HCl存在下，在适宜的溶剂例如二烷存在下，进行反应。该反应在高温例如在回流下适宜地进行。
(ii)可以认识到，在反应方案2a中，当哌啶的烷基化是通过还原性胺化进行时，使用适宜的式R2’C(O)H醛进行的哌啶的反应产生其中R2是(1-4C)烷基的式IIc化合物。还原性胺化的适宜的条件如同关于方法(b)所描述那样。
可以认识到，进行反应方案2a所示的内酯的开环反应，然后通过分离出另一异构体，说明制备(2R，4S)哌啶异构体的反应方案2a中的方法也可以用来制备(2S，4R)异构体。
除去氨基保护基Pg2可以用常规方法来实现。例如当Pg2是苄基或α-甲基苄基时，如上面反应方案2a中的说明，该保护基可以通过在适宜的催化剂存在下通过氢化来除去。
合宜地，其中R2是(1-4C)烷基的式IIc化合物也可以用反应方案2b来制备
反应方案2b 其中Pg1是羧基保护基例如烷基(例如甲基)；MsCl是甲磺酰氯；且R2代表(1-4C)烷基，并且其中如果有必要，可以将反应方案2a中所示化合物的任何官能团予以保护。
反应方案2a和2b中制备的内酯可以用已知的方法，例如Skiles等人.Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters(1996)，6(8)，963-966；和Gillard等Journal of Organic Chemistry(1996)，61(6)，2226-31中描述的方法来合成。
其中Pg1是烷基的式IIc化合物也可以通过将相应的市场上可以买到的4-羟基哌啶-2-羧酸酯化来制备。
或者，式II化合物可以按照反应方案Ia来制备
反应方案Ia 其中Lg是前文如关于反应方案1所定义的可置换基团(例如卤素例如氯)；R2’是氢或(1-3C)烷基；并且R1、R2和R4如前文所定义，并且其中如果有必要，可以将反应方案1a中所示化合物的任何官能团予以保护。
反应方案1a中所示式IIc”化合物是反应方案2a中描述的其中Pg1是甲基且Pg3是叔-丁基氧基羰基(BOC)的式IIc’化合物。如果需要，可以使用其它适宜的保护基来替代反应方案1a中所示的甲基和BOC基团。
可以认识到，通过使用式IIc”化合物的适宜的手性起始材料，反应方案1a可以用于制备式II化合物的特定立体异构体。例如，使用反应方案2a中所示式IIc”(2R，4S)哌啶，可以产生反应方案1a中所示式II化合物的(2R，4R)哌啶异构体。
反应方案1a中所示式IIe化合物可以用已知方法，例如通过用常规方法从反应方案1中所示式IIa化合物中除去保护基Pg，来制备。
方法(b)的反应条件 适宜的烷基化剂是，例如，本领域中将氨基烷基化为烷基氨基的任何剂，例如烷基卤，例如(1-6C)烷基氯、溴或碘，合宜地在如前文定义的适当的碱存在下，在适当的惰性溶剂或稀释剂中，并且在温度范围例如10-140℃，合宜地在或接近室温。
或者，可以通过用适宜的醛，例如甲醛(或多聚甲醛)，或(2-3C)烷基醛(例如乙醛或丙醛)，在适宜的还原剂存在下，进行还原性胺化反应，将式I’化合物烷基化。例如，对于制备其中R2是甲基的那些式I化合物，可以使相应的式I’化合物与甲醛在适宜的还原剂存在下进行反应。用于还原性胺化反应的适宜的还原剂是，例如氢化物还原剂，例如甲酸，氢化铝碱金属例如氢化铝锂，或者适宜地，碱金属硼氢化物例如硼氢化钠、氰基硼氢化钠、三乙基硼氢化钠、三甲氧基硼氢化钠和三乙酰氧基硼氢化钠。反应在适当的惰性溶剂或稀释剂中合宜地进行，所述惰性溶剂或稀释剂例如四氢呋喃和乙醚，用于较强还原剂例如氢化铝锂，以及，例如二氯甲烷或质子溶剂例如甲醇和乙醇，用于不太强的还原剂例如三乙酰氧基硼氢化钠和氰基硼氢化钠。反应在存在适当的酸例如盐酸或乙酸的酸性条件下适宜地进行，也可以使用缓冲液以便在反应过程中将pH保持在所需水平。反应在温度范围例如10-100℃，例如70-90℃或者，方便地，在或接近室温进行。或者，在与醛反应之后，所得化合物的还原可以通过氢化，例如在适宜的催化剂例如披钯碳存在下进行氢化来实现。
制备方法(b)的起始材料 除了式IIc化合物中的R2用适宜的胺保护基例如叔-丁氧基羰基(BOC)替代以外，式I’化合物可以使用与反应方案1中描述的类似方法来制备。然后可以用上文描述的方法(a)将所得羧酸转化为所需的酰胺。在酸转化为酰胺后，可以通过常规方法除去胺保护基。例如当胺保护基是BOC基团时，通过用适宜的酸例如三氟乙酸处理该化合物。
方法(c)的反应条件 Lg是适宜的可置换基团例如卤素，例如氯。
反应在适宜的惰性溶剂或稀释剂存在下合宜地进行，所述惰性溶剂或稀释剂例如醇或酯例如，异丙醇或乙酸乙酯，卤化溶剂例如二氯甲烷、氯仿或四氯化碳，醚例如四氢呋喃或1，4-二烷，芳族溶剂例如甲苯，或者偶极非质子溶剂例如N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷-2-酮乙腈或二甲基亚砜；乙腈为优选。反应在温度范围例如10-250℃，方便地在范围40-120℃或者在使用溶剂或稀释剂的情况下于回流温度，合宜地进行。合宜地，式III化合物可以在极性溶剂例如异丙醇存在下，合宜地在酸存在下，所述酸例如在乙醚或二烷中的氯化氢气体，或盐酸，例如氯化氢在二烷中的4M溶液，在上文描述的条件下，与式IV化合物反应。或者，该反应可以在非质子溶剂，例如二烷或偶极非质子溶剂例如N，N-二甲基乙酰胺或乙腈中，在酸例如在乙醚或二烷中的氯化氢气体或盐酸存在下，合宜地进行。式III化合物，其中Lg是卤素，可以在不存在酸的情况下与式IV化合物反应。在该反应中，卤素离去基团Lg的置换导致在原位形成酸HLg，并且自动催化该反应。反应在适当的惰性有机溶剂例如异丙醇、二烷或N，N-二甲基乙酰胺中合宜地进行。该反应的适宜的条件如上文所描述。
或者，式III化合物可以适宜的碱存在下与式IV化合物反应。用于该反应的适宜的碱如前文对于方法(a)所定义。该反应在惰性溶剂或稀释剂，例如上文关于方法(a)所描述的溶剂中合宜地进行。
制备方法(c)的起始材料 式III化合物可以用常规技术或者与现有技术中制备类似化合物所描述的类似方法来制备。例如，式III化合物可以按照反应方案3来制备
反应方案3 其中R2和R4如前文所定义；Lg是适宜的可置换基团，例如卤素，例如氯；Pg是适宜的羟基保护基，例如乙酰基；且Pg1是适宜的羧基保护基例如(1-4C)烷基。
反应方案3的注释 步骤(i)在与反应方案1对于步骤(ii)所描述的类似的条件下除去Pg。
步骤(ii)在与反应方案1步骤(iii)的类似的条件下进行Mitsunobu偶联。
步骤(iii)在与反应方案1步骤(iv)的类似的条件下除去羧基保护基。
Step(iv)用与上文对于方法(a)所描述的类似条件形成酰胺。
Step(vi)例如用关于反应方案1步骤(iii)所描述的Mitsunobu条件进行偶联。或者，可以首先将式VIa哌啶化合物转化为式VI化合物，如下面反应方案4中所描述，产生哌啶环上的可置换基团，然后用与关于方法(d)所描述的类似的方法，使其与式IIe化合物反应。
式VIa化合物可以用例如下面反应方案4中描述的方法来制备。
方法(d)反应条件 合宜的可置换基团Lg是，例如，卤素，烷磺酰基氧基或芳基磺酰基氧基，例如氯、溴、甲磺酰基氧基、4-硝基苯磺酰基氧基或甲苯-4-磺酰基氧基，尤其是甲磺酰基氧基、4-硝基苯磺酰基氧基或甲苯-4-磺酰基氧基。
反应在碱存在下有利地进行。适宜的碱是，例如，有机胺碱例如，吡啶、2，6-卢剔啶、可力丁、4-二甲基氨基吡啶、三乙胺、N-甲基吗啉或二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯，或者例如，碱金属或碱土金属碳酸盐或氢氧化物，例如碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钙、氢氧化钠或氢氧化钾。或者，上述碱是，例如，碱金属氢化物，例如氢化钠，碱金属碱土金属氨基化物，例如氨基化钠或二(三甲基甲硅烷基)氨基化钠，或者足够碱性的碱金属卤化物，例如氟化铯或碘化钠。反应在惰性溶剂或稀释剂存在下合宜地进行，所述惰性溶剂或稀释剂例如烷醇或酯例如甲醇、乙醇、2-丙醇或乙酸乙酯，卤化溶剂例如二氯甲烷、三氯甲烷或四氯化碳，醚例如四氢呋喃或1，4-二烷，芳香烃溶剂例如甲苯，或者(适宜地)偶极非质子溶剂例如N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷-2-酮或二甲基亚砜。反应在温度范围例如10-150℃(或者溶剂的沸点)，适宜地在20-90℃，合宜地进行。
制备方法(d)的起始材料 式V化合物可以用与WO 03/082831例如参考实施例2中描述的类似的方法来制备。
式VI化合物可以通过常规方法制备，例如其中R4是氢且Lg1是甲磺酸酯基团的式VI化合物可以用反应方案4中说明的方法来制备
反应方案4 其中Pg2是如前文关于反应方案2a所定义的适宜的氨基保护基；R2’是氢或(1-3C)烷基；MsCl是甲磺酰基；并且和R1、R2和R4如前文所定义，并且其中如果有必要，可以将反应方案所示化合物中的任何官能团予以保护。
反应方案4的注释 (i)在适宜的溶剂例如醚中如四氢呋喃中与式R4NH2胺反应。或者，可以使胺在适宜的溶剂例如四氢呋喃中与Grignard试剂例如异丙基氯化镁反应，然后与如J.Org.Chem.，1997，vol 62，p3440中描述的内酯反应。
(ii)在标准条件下脱去保护。例如当Pg2是苄基或α-甲基苄基时通过氢化催化。
(iii)烷基化，例如在标准条件下的还原性胺化，例如像关于方法(b)中的描述那样。
或者，其中R2是(1-4C)烷基的式VIa化合物可以用反应方案4a来制备
反应方案4a 其中R2是(1-4C)烷基；MsCl是甲磺酰氯；R4如前文所定义，并且其中如果有必要，可以将反应方案4a中所示化合物中的任何官能团予以保护。
反应方案4a的注释 (i)如同反应方案4中的注释(i)。
反应方案4和4a中所示内酯可以如同本文关于反应方案2a中描述的那样制备。
可以认识到，反应方案4和4a中的方法说明了一个特定立体异构体的制备方法。通过在内酯开环后分离出另一异构体，同样的方法也可以用于另一哌啶异构体。
合宜地，用作方法(d)中的起始材料的式VI化合物，可以通过使式VIa化合物与例如适宜的磺酰卤例如甲磺酰氯或甲苯磺酰氯反应，在方法(d)中原位由式VIa化合物来产生。然后如上文关于方法(d)所描述，使所得式VI化合物与式V化合物反应。
当需要式I喹唑啉衍生物的可药用盐时，例如酸加成盐，其可以通过，例如，使用常规方法，使所述喹唑啉衍生物与适宜的酸反应来获得。制备可药用盐的方法是本领域众所周知的，并且在本申请书的实施例中举例说明。例如，在式I喹唑啉衍生物与酸反应以后，通过使含有式I喹唑啉衍生物的溶液过饱和，可以从溶液中沉淀出所需的酸加成盐。过饱和可以用众所周知的技术来达到，例如通过使溶液冷却，通过蒸发除去溶剂，或通过加入适宜的反溶剂来沉淀出盐。
在其制备过程中，为了有利于式I喹唑啉衍生物的分离，可以该化合物以不是其可药用盐的盐的形式来制备。然后将所得盐用常规技术进行修饰以获得化合物的可药用盐。这样的盐的修饰技术是本领域众所周知的并且包括，例如离子交换技术，或者在上文描述的可药用抗衡离子存在下将化合物从溶液中再沉淀，例如通过在可药用酸的存在下再沉淀来获得所需的式I喹唑啉衍生物的可药用酸加成盐。
在特定实施方案中，式I喹唑啉衍生物的马来酸盐(例如(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐)可以通过将喹唑啉衍生物的游离碱形式与马来酸接触来制备。合宜地，首先把游离碱溶解在适宜的溶剂例如乙腈中，并与必需量的马来酸接触以产生所需的盐(例如约2∶1的马来酸式I喹唑啉衍生物的摩尔比率，或者略微更高的摩尔过量的马来酸，可以产生马来酸氢盐)。通过使如本文描述的溶液过饱和，例如通过将溶剂蒸发和/或将溶液冷却，可以使盐从溶液中沉淀出来。当需要晶体盐例如晶体(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐时，就需要将马来酸氢盐从适宜的有机溶剂中再结晶。例如，可以使马来酸氢盐在有机溶剂中成为浆液以促进结晶。用于浆液化的适宜的溶剂是，例如，有机溶剂，例如乙酸乙酯。浆化在高温，例如40-60℃，例如约50℃，合宜地进行。合宜地，将浆化进行1小时-3天。如果需要，可以通过使有机溶剂过饱和来促进结晶。过饱和可以如同前文描述那样进行，例如通过除去部分溶剂将混合物浓缩(例如通过蒸发)和/或将混合物冷却。结晶以后，可以用常规方法例如过滤和干燥来分离晶体马来酸氢盐。
式I喹唑啉衍生物的立体异构体可以用常规技术，例如色谱法或分级结晶来分离。对映体可通过分离外消旋体，例如通过分级结晶、拆分或HPLC来进行分离。非对映异构体可以利用非对映异构体的不同的物理特性来分离，例如通过分级结晶、HPLC或快速色谱法来分离。或者，具体的立体异构体可通过在不会引起外消旋作用或差向异构化作用的条件下，由手性起始原料经手性合成制备，或通过用手性试剂衍生化制备。当分离一种具体的立体异构体时，适宜地分离成基本上无其它立体异构体的该立体异构体，例如含少于20％，特别是少于10％且更特别是少于5％重量的其它立体异构体。
在上文及下文的制备方法章节中，术语“惰性溶剂”指不与起始原料、试剂、中间体或产物以不利地影响所需产物的产率的方式反应的溶剂。
本领域技术人员应该理解，为了在可供选择的和某些场合以更方便的方式获得本发明的化合物，此前所提及的各个方法步骤可以以不同的次序进行，和/或各个反应可以在整个路线的不同阶段进行(即化学转换可以根据此前与具体反应有关的不同中间体进行)。
上面方法中使用的某些新的中间体及其制备方法构成本发明的另一特征。因此本发明另外提供上文定义的式I’、II、IId、IIf、IIg、IIh、III、IIIa和IIIb化合物。式I’、II、IId、IIg和IIh的具体中间体是其中亚-式(i)基团
是3-氯-2-氟苯基或3-溴-2-氟苯基、更特别是2-氟-3-氯苯基的中间体。
本文描述的方法中使用的另外的新中间体包括选自式(IV’)、(VIa)和(VI)的化合物及其立体异构体
其中R2和R4如前文所定义；Pg2是适宜的胺保护基，例如苄基或取代了的苄基，尤其是α-甲基苄基，例如(S)-α-甲基苄基或(R)-α-甲基苄基；Lg1是如前文所定义的可置换基团，例如卤素、烷磺酰基氧基或芳基磺酰基氧基，例如氯、溴、甲磺酰基氧基、4-硝基苯磺酰基氧基或甲苯-4-磺酰基氧基，尤其是甲磺酰基氧基、4-硝基苯磺酰基氧基或甲苯-4-磺酰基氧基。更特别地，Lg1是甲磺酰基氧基。合宜地，R4是甲基。合宜地，R2是甲基或氢，尤其R2是甲基。在另一实施方案中，R2和R4都是甲基。
式IV’、VIa和VI化合物的具体立体异构体包括
其中R2、R4、Pg2和Lg1如同前文关于上面式IV’、VIa和VI化合物所定义。
生物学试验 可以使用以下试验来测定本发明作为erbB酪氨酸激酶抑制剂的作用，在体外作为KB细胞(人肿瘤细胞系)抑制剂的作用，以及在体内作为LoVo肿瘤细胞(结肠直肠腺癌)的异种移植物在裸鼠中生长的抑制剂的作用。
a)蛋白酪氨酸激酶磷酸化试验 该试验测定受试化合物通过erbB酪氨酸激酶抑制包含多肽底物的酪氨酸的磷酸化的能力。
将EGFR和erbB2(登记号分别是X00588和X03363)的重组细胞内碎片克隆并表达于杆状病毒(baculovirus)/Sf21系统中。活性ErbB4(表达于Sf21昆虫细胞中的重组蛋白)商购自Upstate Catalogue number14-569，Lot number PP023 reference JT09030402Dnd。通过用冰冷的溶解缓冲液(20mM N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸(HEPES)pH 7.5、150mMNaCl、10％甘油、1％Triton X-100、1.5mM MgCl2、1mM乙二醇-双(β-氨基乙醚)N′，N′，N′，N′-四乙酸(EGTA))加上蛋白酶抑制剂处理这些细胞，然后通过离心法清除，由这些细胞制备溶胞产物。
通过其磷酸化一种合成肽(由谷氨酸、丙氨酸和酪氨酸以6∶3∶1的比率的随机的共聚体组成)的能力来测定这些重组蛋白的构成的激酶的活性。特别地，以合成肽(在100μl磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶液中的0.2μg肽，并在4℃下孵化过夜)涂覆MaxisorbTM 96孔免疫板。在室温下，在PBS-T(磷酸盐缓冲的含有0.05％聚山梨醇酯20的盐水)中然后在50mM HEPES(pH 7.4)中洗涤各板以除去任何多余的非结合的合成肽。通过在肽涂层的板中，在22℃下将100mM HEPES(pH 7.4)、各相应的酶的Km浓度的三磷酸腺苷(ATP)、2.5mM MnCl2、0.05mM Na3VO4、0.1mM DL-二硫苏糖醇(DTT)、0.1％Triton X-100中，与在DMSO中的受试化合物(终浓度2.5％)一起培养20分钟，以评估EGFR、ErbB2或ErbB4酪氨酸激酶的活性。通过除去该试验的液体成分而终止反应，并继之以PBS-T洗涤各板。
通过免疫方法检测该反应的固定化的磷酸化肽产物。首先，在室温下，将各板与来源于小鼠的抗磷酸酪氨酸初级抗体(4G10，得自Upstate Biotechnology)一起培养90分钟。彻底地洗涤后，于室温下，将各板以辣根过氧化酶(HRP)结合的绵羊抗小鼠二级抗体(NXA 931，来自Amersham)处理60分钟。进一步地洗涤后，应用2，2′-连氮基-双[3-乙基苯并噻唑啉磺酸酯(6)]二铵盐晶体(ABTSTM，来自Roche)作为底物，通过比色法测量在该板每个孔中的HRP活性。
通过在Molecular设备ThermoMax微板读板器上测量于405nm处的吸光率，显色定量，并得到相应的酶的活性。用IC50值来表示一种给定的化合物的激酶抑制作用。50％磷酰化的抑制所需的化合物的浓度而测定出来。由阳性对照值(载体加上ATP)和阴性对照值(载体减去ATP)计算出磷酰化的范围。
b)EGFR引起的KB细胞增生的试验 此试验测量受试化合物抑制KB细胞(人肿瘤细胞系ATCC CCL-17)增生的能力。
在37℃、7.5％CO2的空气培养箱内，在含10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺和非必需氨基酸的Dulbecco′s改良的Eagle′s培养基(DMEM)中培养KB细胞。应用胰蛋白酶/乙二胺四乙酸(EDTA)，从贮藏烧瓶中收获细胞。应用血细胞计数器测量细胞密度，并应用锥虫蓝溶液计算其生存力，然后在37℃、7.5％CO2下，以每孔1.25×103个细胞的密度，将细胞接种于96孔板内的含2.5％经炭吸附的血清、1mM谷氨酰胺和非必需氨基酸的DMEM中，然后使其沉降4小时。
在吸附于板上后，将所述细胞用或不用上皮生长因子(EGF)(终浓度1ng/ml)和用或不用在二甲亚砜(DMSO)中的一定浓度范围的化合物(终浓度0.1％)处理，然后培养4天。培养期后，通过加入50μl 3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化物(MTT)(储备液5mg/ml)来测定2小时细胞数量。然后倒干净MTT溶液，轻轻敲打该板，使细胞溶解在添加的100μl DMSO中。
应用Molecular装置ThermoMax微板读板器，在540nm读取溶解的细胞的吸光率。用IC50值来表示增生的抑制。这可通过计算在此试验中得到50％增生的抑制所需的化合物的浓度而计算出来。由阳性(载体加上ATP)对照值和阴性(载体减去ATP)对照值计算出磷酸化的范围。
c)克隆24磷酸-erbB2细胞试验 此免疫荧光终点试验测定受试化合物在MCF 7(乳腺癌)衍生的细胞系中抑制erbB2的磷酰化的能力，该细胞系是通过应用标准方法以全长erbB2基因转染MCF7细胞，得到一种过表达全长野生型erbB2蛋白的细胞系而获得的(在下文中称为‘克隆24’细胞)。
于37℃下，在7.5％CO2空气培养箱中，在生长培养基(GrowthMedium)(含10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺和1.2mg/ml G418的无酚红的Dulbecco′s修饰的Eagle′s培养基(DMEM))中，培养克隆24细胞。
通过在PBS(磷酸盐缓冲盐水，pH 7.4，Gibco No.10010-015)中洗涤一次，从T75储备烧瓶中收获细胞，然后应用2ml胰蛋白酶(1.25mg/ml)/乙二胺四乙酸(EDTA)(0.8mg/ml)溶液收获细胞。将所述细胞再悬浮在生长培养基中。应用血细胞计数器测量细胞密度，然后应用锥虫蓝溶液计算其生存力，然后将细胞再稀释于生长培养基中，并以每孔1×105个细胞的密度(在100μl中)，将其接种于透明底96孔板(Packard，No.6005182)中。
3天后，从各孔中除去生长培养基，代之以带有或不带有erbB抑制剂化合物的100μl测试培养基(Assay Medium)(无酚红的DMEM，2mM谷氨酰胺)。将板放回培养箱4小时，然后在每孔中加入20μl的20％的PBS中的甲醛溶液，将板置于室温下20分钟。用多道移液管除去此固定液，在每孔中加入100μl PBS，然后用多道移液管除去，再在每孔中加入50μl PBS。然后封闭板并在4℃下储存至多2周。
在室温下进行免疫染色。使用洗板器，用200μl PBS/Tween 20(通过将1袋PBS/Tween干粉料(Sigma，No.P 3563)加入到1L重蒸馏的H2O中制成)洗涤各孔一次。然后用在PBS中的100μl 0.5％Triton X-100透化处理10分钟，将板用200μl PBS/Tween 20洗涤一次，然后加入100μl封闭溶液(在PBS/Tween 20中的5％Marvel干燥脱脂乳(Nestle))并培养15分钟。使用洗板器除去封闭溶液。除去封闭溶液后，向各孔中加入30μl在封闭溶液中以1∶250稀释的兔多克隆抗磷酸ErbB2 IgG抗体(表位磷酸-Tyr 1248，SantaCruz，No.SC-12352-R)，然后培养2小时。然后使用洗板器除去此初级抗体溶液，再使用洗板器用200μlPBS/Tween 20洗涤两次。然后在每孔中加入30μl以1∶750稀释于封闭溶液中的Alexa-Fluor 488山羊抗兔IgG二级抗体(Molecular Probes，No.A-11008)。从现在起，在此阶段以黑色底带封闭，将板尽可能避光保护。培养各板45分钟，然后从孔中除去二级抗体溶液，再使用洗板器用200μl PBS/Tween 20洗涤三次。然后把50μl PBS加到每个孔中，并将板用黑色底带再封闭，并立即在Acumen上读取数据。
应用Acumen Explorer Instrument(Acumen Bioscience Ltd.)，一种可通过激光扫描快速定量测定图像特征的读板器，测定每孔中的荧光信号。设定该仪器以测量超过预设阈值的荧光目标的数量，从而提供了一种测量erbB2蛋白的磷酰化状态的方法。将由每种化合物得到的荧光剂量响应数据输入一个合适的软件包(如Origin)中以进行曲线拟合分析。用IC50值来表示erbB2磷酰化的抑制。erbB2的50％磷酰化信号的抑制所需的化合物的浓度而测定出来。
d)体内异种移植物试验 该试验测定受试化合物对雌性Swiss无胸腺小鼠(Alderley Park，nu/nu基因型)的LoVo肿瘤(从ATCC获得的结肠直肠腺癌)生长的抑制能力。
雌性Swiss无胸腺(nu/nu基因型)小鼠在Alderley Park的负压隔离器(PFI Systems Ltd.)中繁殖并饲养。将小鼠置于12小时光照/黑暗循环的屏蔽设施中并提供自由进食无菌食物和饮水。所有程序均用至少8周龄小鼠进行。通过每只动物皮下注射100μl无血清培养基中的1×107个新鲜培养细胞，在供体小鼠后胁建立LoVo肿瘤细胞(从ATCC获得的结肠直肠腺癌)异种移植物。在移植后第5天，在用化合物或介质对照以0.1ml/10g体重每天给药一次处理之前，将小鼠随机分组，7只一组。用双侧游标卡尺每周测量两次来评价肿瘤体积，使用公式(长度×宽度)×√(长度×宽度)×(π/6)，其中长度为穿过肿瘤的最大直径，宽度为相应的垂线。通过比较对照组和治疗组肿瘤体积的平均变化计算从研究开始时的生长抑制，并用Students t检验评价两组间的统计学意义。
e)体内抑制排卵试验 EGF及其受体EGFR在卵泡成熟和排卵中起着关键作用(Park，J-Y.等人，Science，303682-684，2004)。据信EGF/EGFR调节粒膜细胞的生长，所述粒膜包衬卵泡，环绕着卵，并且是产生卵泡流体的原因。在卵泡发育时，卵泡流体的产生增加，在卵泡内形成压力。同时，发生卵泡膜细胞外层的EGF/EGFR调节的组织重建。在卵泡内形成压力以及卵泡外层重建一起最终导致卵泡破裂和是否出卵。
在大鼠中测定EGF受体抑制剂扰乱排卵的能力。以前报道了在大鼠中卵泡围绕的卵母细胞的EGF-介导的成熟(Dekel，N.和Sherizly，I.，Endocrinology，116406-409，1985)。将发情前(周期第4天)雌性AlderleyPark(AP)Wistar大鼠分配到各个组中，每个治疗组4只大鼠。在周期第4天下午4点，给大鼠单次口服一定剂量的EGF受体抑制剂或载体。
在接下来一天的早晨，在mortem后计数载体和EGF受体抑制剂治疗的大鼠输卵管中存在的卵数目。对于每一组，将计数的卵总数目除以检测的动物数目，以获得平均(每只大鼠的卵)值。将每一EGF受体抑制剂治疗组的平均数据与对照(载体治疗)组的平均数据进行比较，以确定排卵抑制百分比。
f)hERG-编码的钾通道抑制试验 该试验测定受试化合物对尾电流流经人ether-a-go-go-related-gene(hERG)-编码的钾通道的抑制能力。
使表达hERG-编码通道的人中肾(HEK)细胞生长于Eagle极限必需培养基(EMEM；Sigma-Aldrich目录编号M2279)中，补充10％胎牛血清(Labtech International；产品编号4-101-500)、10％ M1无血清补充(Egg Technologies；产品编号70916)及0.4mg/ml遗传霉素(Geneticin)G418(Sigma-Aldrich；目录编号G7034)。各试验前一天或两天，用Accutase(TCS Biologicals)、以标准组织培养方法从组织培养瓶中分离细胞。然后将它们置于放在12孔板的孔上的玻璃盖玻片上，并用2ml生长培养基覆盖。
对每个已记录的细胞而言，将含细胞的玻璃盖玻片于室温(～20℃)置于含浴液(见下)的Perspex室的底部。将该室固定于反转的相衬(phase-contrast)显微镜台上。将盖玻片置于该室之后，立即将浴液从增加重力的储器中以～2ml/min的速率灌注进该室2分钟。之后，停止灌注。
将带P-97微量移液管拔出器(Sutter Instrument Co.)的、由硼硅酸盐玻璃管制备的膜片移液管(GC120F，Harvard Apparatus)充满移液管溶液(见下文)。将移液管与膜片钳放大器顶台(Axopatch 200B，AxonInstruments)通过银/氯化银丝连接。该顶台基与地电极连接。它由植入含0.85％氯化钠的3％琼脂的银/氯化银丝组成。
细胞以膜片钳术的全细胞结构记录。在-80mV的支持电压(由放大器设置)及合适调节串联电阻和电容控制器下完成“插入(break-in)”后，用电生理学软件(Clampex，Axon Instruments)设置支持电压(-80mV)及传送电压方案。该方案每15秒应用一次并由1秒间距至+40mV接着由1秒间距至-50mV组成。电流对各强加电压方案的响应由放大器以1kHz低通过滤。然后获得过滤的信号，在线用类似于数字转化器的设备将来自放大器中的该模拟信号数字化。然后在运行Clampex软件(Axon Instruments)的计算机上捕获该数字化信号。在支持电压和间距至+40mV期间，电流以1kHz采样。然后对剩余电压方案设置采样速率至5kHz。
浴液和移液管溶液的组成、pH和渗量列表如下。
用Clampex软件(Axon Instruments)在线记录在+40mV至-50mV间距之后的hERG-编码的钾通道尾电流振幅。尾电流振幅稳定之后，将含受试物质介质的浴液应用于细胞。条件是介质的应用对尾电流振幅无明显影响，那么就建立该化合物的累积浓度效应曲线。
在载体存在下，一定比例的受试化合物特定浓度存在下，各浓度的受试化合物的作用由尾电流振幅的表达来定量。
通过使用标准数据拟合软件包，将构成浓度-效应曲线的抑制百分比值拟合到四参数Hill方程，确定受试化合物的效力(IC50)。如果在最高试验浓度所见的抑制水平未超过50％，那么就未产生效力值因此引用该浓度下的抑制百分比值。
g)抑制粘液产生的预测性试验 可在使用通过TGF-α刺激的NCI-H292细胞的试验中，测定本发明喹唑啉衍生物对粘液生成的抑制，NCI-H292细胞是一种人粘液表皮样肺癌细胞系。将细胞培养至汇合，并用各种浓度的TGF-α或载体对照进行刺激。TGF-α将刺激上皮细胞增殖并分化为产生粘液素的细胞。粘液素，例如MUC5AC和MUC2，形成粘液分泌物的主要成分，并且在一些粘液高分泌疾病状态例如COPD中是上调的。在用TGF-α刺激的时间，通过向NCI-H292细胞培养物中加入浓度不断增加的本发明喹唑啉衍生物，来测定本发明喹唑啉衍生物的粘液抑制性质。在刺激后48小时，收获细胞，并且进行染色以测量细胞内MUC5AC含量，通过流式血细胞技术法来进行分析。试验的喹唑啉衍生物抑制MUC5AC的程度可以以例如EC50值来度量。MUC5AC粘液素产生的抑制被认为表现为粘液分泌的减少。
虽然式I化合物的药理性质如预期的随结构变化而变化，一般而言，式I化合物所具有的活性可在上述试验(a)、(b)、(c)、(d)和(e)中的一个或多个中以下列浓度或剂量证明 试验(a)-IC50(EGFR)在，例如，0.001-0.1μM范围内； 试验(b)-IC50在，例如，0.001-0.1μM范围内； 试验(c)-IC50在，例如，0.1-10μM范围内； 试验(d)和(e)-活性在，例如，1-200mg/kg/日范围内； 通过实施例，用试验(b)(EGFR引起的KB细胞增生的试验)，本文实施例1-3中描述的化合物给出了下面表A中所示的IC50结果 表A 在表A中，n代表对于每一种化合物所进行的试验次数，所示IC50值代表所测定的IC50值的几何平均值。
根据本发明的另一方面，提供了一种药用组合物，该组合物包含如上文所定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐以及可药用稀释剂或载体。
本发明组合物可为合适的口服使用形式(例如片剂、锭剂、硬胶囊或软胶囊、水性或油性混悬剂、乳剂、可分散粉剂或颗粒剂、糖浆剂或酏剂)，局部使用形式(例如软膏、乳膏、凝胶剂或水性或油性溶液剂或混悬剂)，吸入给药形式(例如微分散剂或液体气雾剂)，吹入给药形式(例如微分散剂)或肠胃外给药形式(例如静脉内、皮下、肌内给药的无菌水性或油性溶液剂或肌内给药或直肠给药的栓剂)。
本发明组合物可通过使用本领域众所周知的常规药用赋形剂以常规方法获得。因此，用于口服使用的组合物可含例如一种或多种着色剂、甜味剂、调味剂和/或防腐剂。
与一种或多种赋形剂组合产生单一剂型的活性成分的量将必要地随所治疗的宿主和具体的给药途径而变化。例如，将用于人口服给药的制剂一般含例如与合适且方便量的赋形剂混合的0.5mg-0.5g活性剂(更合适地0.5-100mg，例如1-30mg)，赋形剂的量可在组合物总重量的约5％至约98％范围内变化。
用于治疗或预防目的的式I喹唑啉衍生物剂量的大小自然地将根据病症的性质和严重性、动物或患者的年龄和性别及给药途径、根据医学上众所周知的原则而变化。
在使用式I喹唑啉衍生物用于治疗或预防目的时，一般以接受的日剂量范围在例如0.1mg/kg-75mg/kg体重给药，如果必要以分剂量给药。一般而言，当采用肠胃外给药途径时，将给予较低剂量。因此，例如静脉内给药的剂量范围例如一般将采用0.1mg/kg-30mg/kg体重。类似地，吸入给药的剂量范围例如将采用0.05mg/kg-25mg/kg体重。然而优选口服给药，特别是以片剂形式。典型地，单位剂型将含约0.5mg-0.5g本发明化合物。
我们发现本发明化合物具有抗增生性质例如抗癌性质，该性质据认为由其erbB家族受体酪氨酸激酶抑制活性产生，尤其是抑制EGF受体(erbB1)酪氨酸激酶。此外，相比抗其他酪氨酸激酶例如erbB2，某些本发明的化合物具有显著更强的抗EGF受体酪氨酸激酶效力。此类化合物具有足够的抗EGF受体酪氨酸激酶效力，以致于它们可以足够抑制EGF受体酪氨酸激酶的量使用，同时显示很小或明显较低的抗其他酪氨酸激酶例如erbB2的活性。此类化合物可能用于选择性抑制EGF受体酪氨酸激酶并可能用于有效治疗，例如EGF引起的肿瘤。
因此，预计本发明化合物可用于治疗由erbB受体酪氨酸激酶(尤其EGF受体酪氨酸激酶)单独或部分介导的疾病或医学病症，即此类化合物可用于在有此治疗需要的温血动物中产生erbB受体酪氨酸激酶抑制作用。因此本发明化合物提供以抑制erbB家族中一种或多种受体酪氨酸激酶为特征、治疗恶性细胞的方法。特别是本发明化合物可用于产生由抑制erbB受体酪氨酸激酶单独或部分介导的抗增生和/或前-细胞凋亡和/或抗侵袭作用。特别是，本发明化合物预期可用于预防或治疗对抑制一种或多种erbB受体酪氨酸激酶敏感的那些肿瘤，例如涉及引起这些肿瘤细胞增生和生存信号转导步骤的EGF和/或erbB2和/或erbB4受体酪氨酸激酶(尤其EGF受体酪氨酸激酶)。因此本发明化合物预期可通过提供抗增生作用用于治疗高增生疾病，包括银屑病、良性前列腺增生(BPH)、动脉粥样硬化及再狭窄和/或癌症，特别是治疗erbB受体酪氨酸激酶敏感癌症。此类良性或恶性肿瘤可影响任何组织并包括非实体瘤例如白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤，也包括实体瘤例如胆管、骨、膀胱、脑/CNS、乳腺、结肠直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺、神经细胞、食管、卵巢、胰腺、前列腺、肾、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫及外阴癌。
另外，本发明化合物可用于治疗呼吸性疾病和病症，包括，例如阻塞性气道疾病，包括哮喘，包括支气管、过敏性、内源性、外源性、运动引起的、药物引起的(包括阿司匹林和NSAID引起的)和灰尘引起的哮喘，所述哮喘是间歇性的和持续性的，并且皆为严重性的，以及气道反应过度的其它原因；慢性阻塞性肺疾病(COPD)；支气管炎，包括传染性和嗜红细胞性支气管炎；肺气肿；支气管扩张；囊性纤维化；结节病；农民肺及相关疾病；过敏性肺炎；肺纤维化，包括隐源性纤维性肺泡炎，特发性间质性肺炎，纤维化复杂性抗瘤形成治疗和慢性感染，包括肺结核和曲霉病以及其它真菌感染；肺移植并发症；肺脉管系统的脉管炎和血栓形成疾病，以及肺动脉高压；镇咳活性，包括治疗与气道的炎症和分泌性疾病有关的慢性咳嗽，以及医原性咳嗽；急性和慢性鼻炎，包括药物性鼻炎和血管运动性鼻炎；常年性和季节性应变性鼻炎，包括rhinitis nervosa(枯草热)；鼻息肉；急性病毒感染，包括普通感冒，由呼吸道合胞病毒、流感、冠状病毒(包括SARS)和腺病毒引起的感染。尤其是，本发明化合物可以用于治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)。
根据本发明的这一方面，提供了用作药物的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐。
根据本发明的另一方面，提供了式I化合物或其可药用盐在温血动物例如人中产生抗增生作用的用途。
因此根据本发明的这一方面，提供了如上文所定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐在制备用于在温血动物例如人中产生抗增生作用的药物中的用途。
根据本发明这一方面的进一步特征，提供了在有此治疗需要的温血动物例如人中产生抗增生作用的方法，该方法包括给予所述动物有效量的如上文所定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐。
根据本发明的另一方面，提供了如上文所定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐在制备药物中的用途，该药物用于预防或治疗对抑制涉及导致肿瘤细胞增生信号转导步骤的erbB受体酪氨酸激酶例如EGFR和/或erbB2和/或erbB4(尤其EGFR)敏感的那些肿瘤。
根据本发明这一方面的进一步特征，提供了在有此治疗需要的温血动物例如人中预防或治疗对抑制一种或多种涉及导致肿瘤细胞增生和/或存活信号转导步骤的erbB家族受体酪氨酸激酶例如EGFR和/或erbB2和/或erbB4(尤其EGFR)敏感的那些肿瘤的方法，该方法包括给予所述动物有效量的如上文所定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐。
根据本发明这一方面的进一步特征，提供了用于预防或治疗对抑制erbB受体酪氨酸激酶例如EGFR和/或erbB2和/或erbB4(尤其EGFR)敏感的那些肿瘤的式I化合物或其可药用盐，这类酪氨酸激酶涉及导致肿瘤细胞增生的信号转导步骤。
根据本发明另一方面，提供了如上文所定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐在制备药物中的用途，该药物用于提供EGFR和/或erbB2和/或erbB4(尤其EGFR)酪氨酸激酶抑制作用。
根据本发明这一方面的进一步特征，提供了在有需要的温血动物例如人中提供EGFR和/或erbB2和/或erbB4(尤其EGFR)酪氨酸激酶抑制作用的方法，该方法包括给予所述动物有效量的如上文所定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐。
根据本发明这一方面的进一步特征，提供了用于提供对EGFR和/或erbB2和/或erbB4(尤其EGFR)酪氨酸激酶抑制作用的式I化合物或其可药用盐。
根据本发明的进一步特征，提供了如上文所定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐在制备用于提供选择性EGFR酪氨酸激酶抑制作用的药物中的用途。
根据本发明这一方面的进一步特征，提供了提供选择性EGFR酪氨酸激酶抑制作用的方法，该方法包括给予所述动物有效量的如上文所定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐。
根据本发明这一方面的进一步特征，提供了用于提供选择性EGFR酪氨酸激酶抑制作用的式I化合物或其可药用盐。
所谓“选择性EGFR激酶抑制作用”是指式I喹唑啉衍生物对EGF受体酪氨酸激酶比对其他激酶更有效。特别是某些本发明的化合物对EGF受体激酶比对其他酪氨酸激酶例如其他erbB受体酪氨酸激酶如erbB2更有效。例如，本发明的选择性EGFR激酶抑制剂对EGF受体酪氨酸激酶比对erbB2酪氨酸激酶更有效至少5倍，优选是至少10倍，该效力由在合适试验中的相对IC50值确定(例如，对于给定的上文描述的受试化合物，通过将得自KB细胞试验的IC50值与得自克隆24磷酸-erbB2细胞试验的IC50值进行比较)。
根据本发明的另一方面，提供了如上文所定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐在制备药物中的用途，该药物用于治疗癌症(例如癌症选自白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤，胆管、骨、膀胱、脑/CNS、乳腺、结肠直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺、神经细胞、食管、卵巢、胰腺、前列腺、肾、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫及外阴癌)。
根据本发明这一方面的进一步特征，提供了在有此需要的温血动物例如人中治疗高增生性疾病，例如癌症(例如癌症选自白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤，胆管、骨、膀胱、脑/CNS、乳腺、结肠直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺、神经细胞、食管、卵巢、胰腺、前列腺、肾、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫及外阴癌)的方法，该方法包括给予所述动物有效量的如上文所定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐。
根据本发明的另一方面，提供了用于治疗高增生性疾病，例如癌症(例如癌症选自白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤，胆管、骨、膀胱、脑/CNS、乳腺、结肠直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺、神经细胞、食管、卵巢、胰腺、前列腺、肾、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫及外阴癌)的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐。
按照本发明的另一方面，提供了如前文定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐在制备用于治疗前文描述的呼吸道疾病例如COPD的药物中的应用。
按照本发明这一方面的进一步特征，提供了在需要这样治疗的温血动物例如人中治疗呼吸道疾病例如COPD的方法，所述方法包括给予所述动物有效量的如上文所定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐。
按照本发明的另一方面，提供了用于治疗前文所述的呼吸道疾病或病症例如COPD的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐。
如上所述，治疗或预防特定疾病所需剂量的大小必然会变化，其中取决于所治疗的宿主、给药途径及治疗疾病的严重性。
用于治疗高增生性疾病的联合治疗法 前文所定义的抗增生治疗可以用作唯一的治疗或者可以，除了如前文定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐之外，还包括常规手术或放射疗法或化学疗法。该化学疗法可包括一种或多种下列类别的抗肿瘤药物 (i)如用于内科肿瘤学的抗增殖/抗肿瘤药及其组合，例如烷化剂(例如顺铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安和亚硝基脲)；抗代谢物(例如抗叶酸剂例如氟嘧啶类，如5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲塞、甲氨蝶呤、阿糖胞苷和羟基脲)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环类如阿霉素、博来霉素、多柔比星、正定霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C、更生霉素及光神霉素)；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱如长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨及紫杉醇类如泰素和泰索帝)；及拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素类如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、托泊替康和喜树碱)； (ii)细胞生长抑制剂例如抗雌激素剂(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和iodoxyfene)，雌激素受体下调剂(例如氟维司群)，抗雄激素剂(例如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙孕酮)，LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(如戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)，孕激素(例如醋酸甲地孕酮)，芳化酶抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑、vorazole和依西美坦)及5α-还原酶抑制剂例如非那雄胺； (iii)抑制癌细胞侵入的药物(例如金属蛋白酶抑制剂如马立马司他和尿激酶纤溶酶原活化剂受体功能抑制剂)； (iv)生长因子功能抑制剂，例如此类抑制剂包括生长因子抗体、生长因子受体抗体(例如抗-erbb2抗体曲妥单抗[HerceptinTM]和抗-erbb1抗体西妥昔单抗[C225])、法尼基转移酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂，例如其他表皮生长因子家族抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(gefitinib，AZD1839)，N-(3-乙炔基苯基)-6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(erlotinib，OSI-774)及6-丙烯酰氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI 1033))，例如血小板-来源的生长因子家族抑制剂及例如肝细胞生长因子家族抑制剂； (v)例如那些抑制血管内皮细胞生长因子作用的抗血管形成剂(例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗[AvastinTM]，例如那些在国际专利申请WO 97/22596、WO 97/30035、WO 97/32856和WO 98/13354中公开的化合物)及通过其他机制起作用的化合物(例如利诺胺、整合蛋白αvβ3功能抑制剂和血管生长抑素)； (vi)血管破坏剂例如考布他汀A4及在国际专利申请WO 99/02166、WO 00/40529、WO 00/41 669、WO 01/92224、WO 02/04434和WO02/08213中公开的化合物； (vii)反义疗法，例如直接作用于如上所列靶的那些疗法，例如抗-ras反义药物ISIS 2503； (viii)基因治疗方法，包括例如取代异常基因例如异常p53或异常BRCA1或BRCA2方法，GDEPT(基因导向酶前药治疗)方法例如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的那些方法，及增加患者对化学疗法或放射疗法例如多重耐药基因疗法耐受性的方法；及(ix)免疫疗法，包括例如增加患者肿瘤细胞免疫原性的离体和体内方法，例如用细胞因子例如白介素2、白介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子转染，降低T-细胞无变应性的方法，使用转染免疫细胞例如细胞因子转染的树枝状细胞的方法，使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法及使用抗基因型抗体的方法。
该联合治疗可通过同时、相续或分别给予治疗的各组分来实现。此类组合产品在上文中所描述的剂量范围内应用本发明化合物及在其批准的剂量范围内应用其他活性药物。
根据本发明的这一方面，提供了包含如上文中所定义的式I喹唑啉衍生物及如上文中所定义的另外抗肿瘤剂的药品，用于联合治疗癌症。
用于治疗呼吸道疾病或病症的联合治疗法 本发明还涉及联合治疗法，其中将如前文定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐，或者包含如前文定义的式I喹唑啉衍射或其可药用盐的药物组合物或制剂与另一治疗剂同时、相续或作为组合制剂给药，用于治疗本文所述的一种或多种呼吸道疾病或病症例如(但不限于)，哮喘、过敏性鼻炎和慢性阻塞性肺病(COPD)，本发明化合物可以与下面所列的药物联合。
本发明还涉及如前文定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐与趋化因子受体功能调节剂例如CCR1、CCR2、CCR2A、CCR2B、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10和CCR11(对于C-C家族)；CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4和CXCR5(对于C-X-C家族)和对于C-X3-C家族的CX3CR1拮抗剂的联合。
本发明化合物还涉及如前文定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐与基质金属蛋白酶(MMPs)即基质溶素、胶原酶和明胶酶以及aggrecanase；特别是胶原酶-1(MMP-1)、胶原酶-2(MMP-8)、胶原酶-3(MMP-13)、基质溶素-1(MMP-3)、基质溶素-2(MMP-10)和基质溶素-3(MMP-11)以及MMP-9和MMP-12，包括像强力霉素之类的药物的联合。
本发明还涉及如前文定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐与磷酸二酯酶(PDE)抑制剂例如甲基叶黄制菌素(xanthanine)，包括茶碱和氨茶碱；选择性PDE同功酶抑制剂包括PDE4抑制剂和异构(isoform)PDE4D抑制剂或PDE5抑制剂的联合。
本发明还涉及如前文定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐与组胺1型受体拮抗剂例如西替利嗪、氯雷他定、地氯雷他定、非索非那定、阿伐斯汀、特非那定、阿司咪唑、氮斯汀、左卡巴斯汀、氯苯那敏、异丙嗪、塞克力嗪或咪唑斯汀；口服、局部或肠胃外联合使用。
本发明还涉及如前文定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐与抗胆碱能药物包括毒蕈碱受体(M1、M2和M3)拮抗剂例如阿托品、东莨菪碱glycopyrrrolate、异丙托溴铵、塞托溴铵、氧托溴铵、哌仑西平或替仑西平的联合。
本发明还涉及如前文定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐与β-肾上腺素受体激动剂(包括β受体亚型1-4)例如异丙肾上腺素、沙丁胺醇、福莫特罗、沙甲胺醇、特布他林、奥西那林、甲磺酸比托特罗或吡布特罗或者其手性对映体的联合。
本发明还涉及如前文定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐与色酮例如色甘酸钠或奈多罗米钠的联合。
本发明还涉及如前文定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐与糖(肾上腺)皮质激素例如氟尼缩松、曲安奈德、丙酸倍氯米松、布地奈德、丙酸氟替卡松、环索奈德或莫米松糠酸酯的联合。
本发明还涉及如前文定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐与下列药物的联合 (i)丝氨酸/苏氨酸激酶(例如MAP激酶如p38，JNK，蛋白激酶A、B或C或IKK抑制剂)；(ii)肿瘤坏死因子转变酶抑制剂(TACE)；(iii)诱导一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂；(iv)在TH2细胞上表达的趋化因子受体同源分子，(例如CRTH2拮抗剂)；(iv)P38抑制剂；或(v)调节purinergic受体例如P2X7的活性的药物。
虽然式I喹唑啉衍生物的主要价值是作为治疗药物用于温血动物(包括人)，但任何时候需要抑制erbB(尤其EGF)受体酪氨酸蛋白激酶的作用时，它们也有用。因此，它们作为药理学标准可用于新生物试验方法的开发及用于新药理学试剂的研究。
现在，将通过下列非限定性实施例举例说明本发明，其中除非另外说明 (i)温度以摄氏度(℃)表示；操作在室温或环境温度下进行，即温度在18-25℃范围内； (ii)有机溶液用无水硫酸镁或硫酸钠干燥；溶剂的蒸发用旋转蒸发仪、减压(600-4000帕斯卡；4.5-30mmHg)、浴温最高达60℃下进行； (iii)色谱指快速硅胶色谱；薄层色谱(TLC)在硅胶板上进行； (iv)一般而言，反应过程用TLC和/或分析型LC-MS跟踪，反应时间仅示例性给出； (v)终产物具有满意的质子核磁共振(NMR)光谱和/或质谱数据； (vi)产率仅示例性给出，并且未必是通过勤奋工艺开发获得的那些产率；如果需要更多的原料可重复制备； (vii)当给出时，主要诊断质子的NMR数据为δ值形式，以相对于内标四甲基硅烷(TMS)的百万分数(ppm)表示，除非另外说明，否则用全氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)为溶剂在300MHz进行测定；使用下列缩写s，单峰；d，双重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；b，宽峰； (viii)化学符号具有其通常的含义；使用SI单位和符号； (ix)溶剂比例用体积体积(v/v)术语表示；并且 (x)质谱(MS)使用Waters或Micromass电喷雾LC-MS以正或负离子方式运行；一般而言，仅报告表示母体质量的离子；除非另外说明，否则所引用的质量离子为(MH)+； (x)质谱(MS)是用70电子伏特的电子能，采用化学电离(CI)方式，使用直接暴露探针进行的，并且电离是通过电雾化进行的；给出m/z的值；一般而言，仅报告表示母体质量的离子；除非另外说明，否则所引用的质量离子为(MH)+； (xi)当合成被描述为类似于前面实施例所描述的方法时，所用的量为与用于前述实施例的量等同的毫摩尔比率； (xii)当化合物被描述为在标准碱性条件下使用Mass-TriggeredPreparative LCMS(液相色谱-质谱分析)纯化时，使用以下条件 柱ThermoHypersil Keystone B-Basic 5μ21mm×100mm；洗脱剂7.5分钟，梯度20％-95％乙腈在水中的混合物(缓冲液2g/l(NH4)2CO3，pH 8.9)； 流速25ml/min； 和 (xiii)使用下列缩写 AcOH乙酸 DCM 二氯甲烷 DEAD偶氮二碳酸二乙酯 DIPEA 二异丙基乙胺 DMA N，N-二甲基乙酰胺 DMF N，N-二甲基甲酰胺 DTAD偶氮二碳酸二叔丁酯 EtOAc 乙酸乙酯 Et3N三乙胺 HATUO-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐 IBCF氯甲酸异丁酯 MeOH甲醇 MeNH2 甲胺 NMM N-甲基吗啉 NMP N-甲基吡咯烷-2-酮 SCX 强阳离子交换柱 TFA 三氟乙酸 THF 四氢呋喃 TLC 薄层色谱法 RP-HPLC 反相高效液相色谱法 附图的简要描述 图1实施例6中描述的(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐的X-射线粉末衍射花样，2θ值标在x-轴上，相对线强度(计数)标在y-轴上。
图2由实施例6中描述的(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐获得的示差扫描量热法(DSC)痕迹，x-轴表示温度，y-轴表示强度(mW)。
实施例1 (2S，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺
本标题化合物如同方案A中所示那样制备
方案A 于室温把分子筛(5g)继之以甲醛水溶液(10ml)加到搅拌着的(2S，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酰胺(5)(3.1g，6.97mmol)在DCM-AcOH(100∶10ml)中的溶液内。该反应混合物搅拌1-2分钟，然后用5分钟分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.93g，13.9mmol)。加入所有三乙酰氧基硼氢化钠还原剂后，反应基本上完成。加入DCM(100ml)，并将反应小心地用NaHCO3饱和水溶液(aq)中和。有机萃取液用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩成黄色泡沫状物。残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，DCM-NH3/MeOH2％)，获得了本标题产物，为白色固体(1.8g，56％)1H NMR谱(DMSOd6)1.86-1.91(m，3H)，2.07-2.09(m，1H)，2.20(s，3H)，2.47-2.49(m，1H)，2.71-2.81(m，2H)，3.96(s，3H)，4.82(m，1H)，7.02(s，1H)，7.23(s，1H)，7.26-7.29(m，2H)，7.47-7.53(m，2H)，7.82(s，1H)，8.37(s，1H)，9.60(s，1H)；质谱(M+H)+460.1。
起始材料(2S，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酰胺(5)制备如下 于-15℃(丙酮/冰)用10分钟把溶解在50ml DCM中的DTAD(13.3g，57.9mmol)加到搅拌着的4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-醇(1)(4.94g，15.5mmol，如WO 03/082831中所描述制备，其中的参考实施例2)、三苯膦(18.3g，69.5mmol)和(2A，4R)-N-(叔-丁氧基羰基)-4-羟基哌啶-2-甲酸甲酯(ex ACROS，6g，23.2mmol)在DCM(150ml)中的悬浮液内。将反应混合物加热至室温并搅拌2小时，浓缩至大约50ml并用快速色谱法进行纯化(硅胶，用梯度100％DCM-DCM/EtOAc(80/20)-DCM/EtOAc(50/50)洗脱)，获得了(2S，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1，2-二甲酸1-叔-丁基2-甲基酯(2)(6g，69％)，为白色泡沫状物；1H NMR谱(DMSOd6)1.47-1.53(m，11H)，1.86-1.91(m，1H)，2.25-2.36(m，1H)，2.95-3.13(m，1H)，3.70(s，3H)，3.95(s，3H)，3.98-4.04(m，1H)，4.45(m，1H)，4.86-4.94(m，1H)，7.31(t，1H)，7.51-7.64(m，3H)，7.80(s，1H)，8.39(s，1H)，9.54(s，1H)；质谱(M+H)+561.1。
于室温制备(2S，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1，2-二甲酸1-叔-丁基2-甲基酯(2)(6g，10.7mmol)在THF(30ml)和水(30ml)中的溶液，然后冷却至0℃，并加入固体LiOH.H2O(0.54g，12.9mmol)。反应混合物于室温搅拌3小时，用乙酸酸化，并用DCM萃取。将所得残余物蒸发至干，用甲苯(3×50ml)共沸，并干燥至恒定重量，获得了(2S，4S)-1-(叔-丁氧基羰基)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酸(3)(5.27g，90％)，其不进一步纯化而使用；质谱(M+H)+547.1。
将搅拌着的(2S，4S)-1-(叔-丁氧基羰基)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酸(3)(5g，9.16mmol)在THF(50ml)中的溶液冷却至-15℃(丙酮/冰)。把NMM(1.5ml，13.7mmol)加到该溶液中，继之加入IBCF(1.54ml，11.9mmol)。将反应混合物保持在-15℃(用TLC(THF)监测混合酐的形成)。5-10分钟后，将反应混合物于-15℃用浓氨水(3ml)处理，并加热至室温。将反应混合物用DCM(250ml)稀释，用水(2×20ml)洗涤并浓缩，获得了(2S，4S)-2-(氨基羰基)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(4)(5g，100％)，为浅黄色泡沫状物，其不进一步纯化而使用；质谱(M+H)+546.1。
于0℃用5分钟把TFA(15ml)加到搅拌着的(2S，4S)-2-(氨基羰基)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(4)(5g，9.16mmol)在DCM(15ml)中的溶液内。将反应混合物加热至室温并搅拌1小时，该时间以后，反应完成。反应混合物浓缩至干，与甲苯共沸两次，并且残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，DCM-NH3/MeOH5％)，获得了(2S，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酰胺(5)(3.1g，76％)，为白色固体1H NMR谱(DMSO d6)1.72-1.89(m，2H)，1.91(m，1H)，2.03(m，1H)，2.78(m，1H)，2.92(m，1H)，3.47(m，1H)，3.95(s，3H)，4.84(m，1H)，7.06(s，1H)，7.27(s，1H)，7.30(m，2H)，7.49-7.55(m，2H)，7.84(s，1H)，8.37(s，1H)，9.56(s，1H)；质谱(M+H)+446.1。
实施例2 (2S，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺
于室温把分子筛(5g)继之甲醛水溶液(10ml)加到搅拌着的(2S，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N-甲基哌啶-2-甲酰胺(3.0g，6.52mmol)在DCM-AcOH(100∶10ml)中的溶液内。反应混合物搅拌1-2分钟，然后用5分钟分批加入固体三乙酰氧基硼氢化钠(2.77g，13.1mmol)。在所有乙酰氧基硼氢化钠还原剂全部加入后，反应基本上完成。加入DCM(100ml)，并将反应小心地用NaHCO3饱和水溶液(aq)中和。有机萃取液用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩成黄色泡沫状物。残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，DCM-NH3/MeOH 2％)，获得了本标题产物，为白色固体(2g，65％)1H NMR谱(DMSOd6)1.85-1.96(m，3H)，2.07(m，1H)，2.15(s，3H)，2.45-2.50(m，1H)，2.59(d，3H)，2.71(m，1H)，2.84(m，1H)，3.96(s，3H)，4.81(m，1H)，7.23(s，1H)，7.28(t，1H)，7.47-7.53(m，2H)，7.81(s，2H)，8.37(s，1H)，9.59(s，1H)；质谱(M+H)+474.1。
起始材料(2S，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N-甲基哌啶-2-甲酰胺制备如下 将搅拌着的(2S，4S)-1-(叔-丁氧基羰基)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酸(4g，7.31mmol，如实施例1中所描述制备)在THF(50ml)中的溶液冷却至-15℃(丙酮/冰)。加入NMM(1.21ml，11.0mmol)，继之加入IBCF(1.24ml，9.51mmol)。
将反应混合物保持在-15℃(用TLC(THF)监测混合酐的形成)。5-10分钟后，将反应混合物于-15℃用2.0M甲胺在THF(10ml)中的溶液处理，然后使之升到室温。反应混合物用DCM(250ml)稀释，用水(2×20ml)洗涤并浓缩，获得了(2S，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-2-[(甲基氨基)羰基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(4.1g，100％)为浅黄色泡沫状物，其不进一步纯化而使用；质谱(M+H)+560.1。
于0℃用5分钟把TFA(15ml)加到搅拌着的(2S，4A)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-2-[(甲基氨基)羰基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(4.1g，7.31mmol)在DCM(15ml)中的溶液内。反应混合物加热至室温并搅拌1小时，该时间以后，反应完成。反应混合物浓缩至干，与甲苯共沸两次，获得了(2S，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N-甲基哌啶-2-甲酰胺(3.0g，89％)，该粗产物不进一步纯化而使用；质谱(M+H)+460.1。
实施例3 (2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺
于室温把分子筛(5g)继之甲醛水溶液(10ml)加到搅拌着的(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N-甲基哌啶-2-甲酰胺(3.6g，7.84mmol)在DCM-AcOH(100∶10ml)中的溶液内。反应混合物搅拌1-2小时，然后用5分钟分批加入固体三乙酰氧基硼氢化钠(3.31g，15.7mmol)。在所有三乙酰氧基硼氢化钠还原剂全部加入以后，反应基本上完成。加入DCM(100ml)，并将反应小心地用NaHCO3饱和水溶液(aq)中和。有机萃取液用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩成黄色泡沫状物。残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，DCM-NH3/MeOH 2％)，获得了本标题产物，为白色固体(1.8g，49％)1H NMR谱(DMSOd6)1.85-1.96(m，3H)，2.07(m，1H)，2.15(s，3H)，2.45-2.50(m，1H)，2.59(d，3H)，2.71(m，1H)，2.84(m，1H)，3.96(s，3H)，4.81(m，1H)，7.23(s，1H)，7.28(t，1H)，7.47-7.53(m，2H)，7.81(s，2H)，8.37(s，1H)，9.59(s，1H)；质谱(M+H)+474.1。
起始材料(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N-甲基哌啶-2-甲酰胺制备如下 于-15℃(丙酮/冰)用10分钟，把溶解在50ml DCM中的DTAD(7.26g，31.5mmol)加到搅拌着的4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-醇(5.00g，15.7mmol)、三苯膦(8.57g，62.6mmol)和(2R，4S)-N-(叔-丁氧基羰基)-4-羟基哌啶-2-甲酸甲酯(ex ACROS，5.42g，20.9mmol)在DCM(150ml)中的溶液内。将反应混合物加热至室温并搅拌2小时，浓缩至大约50ml，并直接用快速色谱法进行纯化(硅胶，用梯度100％DCM-DCM/EtOAc(80/20)-DCM/EtOAc(50/50)洗脱)，获得了(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1，2-甲酸1-叔-丁基2-甲基酯(5.5g，81％)，为白色泡沫状物；1HNMR谱(DMSOd6)1.47-1.53(m，11H)，1.86-1.91(m，1H)，2.25-2.36(m，1H)，2.95-3.13(m，1H)，3.70(s，3H)，3.95(s，3H)，3.98-4.04(m，1H)，4.45(m，1H)，4.86-4.94(m，1H)，7.31(t，1H)，7.51-7.64(m，3H)，7.80(s，1H)，8.39(s，1H)，9.54(s，1H)；质谱(M+H)+561.1。
于室温制备搅拌着的(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1，2-二甲酸1-叔-丁基2-甲基酯(6.5g，11.6mmol)在THF(35ml)和水(35ml)中的溶液，然后冷却至0℃，并加入固体LiOH.H2O(0.53g，12.7mmol)。反应于室温搅拌3小时，用乙酸酸化，并用DCM萃取。所得残余物蒸发至干，与甲苯(3×50ml)共沸，并干燥至恒定重量，获得了(2R，4R)-1-(叔-丁氧基羰基)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酸(5.35g，84％)，其不进一步纯化而使用；质谱(M+H)+547.1。
将搅拌着的(2R，4R)-1-(叔-丁氧基羰基)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酸(5.35g，9.80mmol)在THF(50ml)中的溶液冷却至-15℃(丙酮/冰)。把NMM(1.49ml，14.9mmol)加到该溶液中，继之加入IBCF(2.0ml，12.75mmol)。将反应混合物保持在-15℃(用TLC(THF)监测混合酐的形成)。5-10分钟后，将反应混合物于-15℃用2.0M甲胺在THF(10ml)中的溶液处理，并加热至室温。反应混合物用DCM(250ml)稀释，用水(2×20ml)洗涤并浓缩，获得了(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-2-[(甲基氨基)羰基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(5.94g，100％)，为浅黄色泡沫状物，其不要进一步纯化而使用；质谱(M+H)+560.1。
于0℃用5分钟，把TFA(25ml)加到搅拌着的(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-2-[(甲基氨基)羰基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(5.94g，10.63mmol)在DCM(25ml)中的溶液内。将反应化合物加热至室温并搅拌1小时，在该时间以后，反应完成。反应混合物浓缩至干，与甲苯共沸两次，并且残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，DCM-NH3/MeOH 5％)，获得了(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N-甲基哌啶-2-甲酰胺(3.6g，74％)，为白色固体；1H NMR谱(DMSO d6)1.60-2.03(m，4H)，2.50-2.58(m，1H)，2.59(d，3H)，2.78(m，1H)，3.53(m，1H)，3.84(s，1H)，3.96(s，3H)，4.84(m，1H)，7.27(s，1H)，7.35(t，1H)，7.47-7.60(m，2H)，7.85(m，2H)，8.38(s，1H)，9.56(s，1H)；质谱(M+H)+460.1. 实施例4 (2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺
本标题化合物是如方案B中所示制备的
方案B 于室温把分子筛(0.5g)继之甲醛水溶液(1ml)加到搅拌着的(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酰胺(9)(0.102g，0.23mmol)在DCM-AcOH(10∶1ml)中的溶液内。反应混合物搅拌1-2分钟，然后用5分钟分批加入固体三乙酰氧基硼氢化钠(0.10g，0.463mmol)。在所有三乙酰氧基硼氢化钠还原剂全部加入以后，反应基本上完成。加入DCM(20ml)，并将反应小心地用NaHCO3饱和水溶液(aq)中和。有机萃取液用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩成黄色泡沫状物。残余物通过制备LCMS(标准碱性条件)，获得了本标题产物，为白色固体(0.85g，80％)1H NMR谱(DMAOd6)1.87-1.92(m，3H)，2.07-2.09(m，1H)，2.20(s，3H)，2.43-2.47(m，1H)，2.71-2.80(m，2H)，3.96(s，3H)，4.82(m，1H)，7.03(s，1H)，7.23(s，1H)，7.26-7.30(m，2H)，7.47-7.54(m，2H)，7.82(s，1H)，8.37(s，1H)，9.60(s，1H)；质谱(M+H)+459.9。
起始材料(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酰胺(9)制备如下 于-15℃(丙酮/冰)用10分钟，把溶解在50ml DCM中的DTAD(7.26g，31.5mmol)加到搅拌着的4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-醇(5.00g，15.7mmol)，三苯膦(8.57g，62.6mmol)和(2R，4S)-N-(叔-丁氧基羰基)-4-羟基哌啶-2-甲酸甲酯(ex ACROS，5.42g，20.9mmol)在DCM(150ml)中的溶液内。将反应混合物加热至室温并搅拌2小时，浓缩至大约50ml，并用快速色谱法进行纯化(硅胶，用梯度100％DCM-DCM/EtOAc(80/20)-DCM/EtOAc(50/50)洗脱)，获得了(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1，2-二甲酸1-叔-丁基2-甲基酯(6)(5.5g，81％)，为白色泡沫状物；1HNMR谱(DMSO d6)1.47-1.53(m，11H)，1.86-1.91(m，1H)，2.25-2.36(m，1H)，2.95-3.13(m，1H)，3.70(s，3H)，3.95(s，3H)，3.98-4.04(m，1H)，4.45(m，1H)，4.86-4.94(m，1H)，7.31(t，1H)，7.51-7.64(m，3H)，7.80(s，1H)，8.39(s，1H)，9.54(s，1H)；质谱(M+H)+561.1。
于室温制备得搅拌着的(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1，2-二甲酸1-叔-丁基2-甲基酯(6)(6.5g，11.6mmol)在THF(35ml)和水(35ml)中的溶液，然后冷却至0℃，并加入固体LiOH.H2O(0.53g，12.7mmol)。反应于室温搅拌3小时，用乙酸酸化，并用DCM萃取。所得残余物蒸发至干，与甲苯(3×50ml)共沸，并干燥至恒定重量，获得了(2R，4R)-1-(叔-丁氧基羰基)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酸(7)(5.35g，84％)，其不进一步纯化而使用；质谱(M+H)+547.1。
搅拌着的(2R，4R)-1-(叔-丁氧基羰基)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酸(7)(0.13g，0.232mmol)在THF(5ml)溶液冷却至-15℃(丙酮/冰)。加入NMM(0.035g，0.348mmol)，继之加入IBCF(0.041g，0.301mmol)。反应混合物保持在-15℃(用TLC(THF)监测混合酐的形成)。5-10分钟后，反应混合物于-15℃用氨水在THF(0.2ml)中的溶液处理，并加热至室温。反应化合物用DCM(20ml)稀释，用水(2×2ml)洗涤并浓缩，获得了(2R，4R)-2-(氨基羰基)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(8)(0.13g，100％)，为浅黄色泡沫状物，其不进一步纯化而使用；质谱(M+H)+544.0。
于0℃用5分钟把TFA(2ml)加到搅拌着的(2R，4R)-2-(氨基羰基)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.13g，0.232mmol)在DCM(2ml)中的溶液内。反应混合物加热至室温并搅拌1小时，在该时间后，反应完成。反应混合物浓缩至干，与甲苯共沸两次，并且残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，DCM-NH3/MeOH 5％)，获得了(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酰胺(9)(0.102g，100％)，为黄色固体；质谱(M+H)+446.1。
实施例5 (2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N-甲基哌啶-2-甲酰胺
本标题化合物是如方案C中所示制备的
方案C 于室温把4M氯化氢(7.5ml)在二烷中的溶液，加到搅拌着的(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-2-[(甲基氨基)羰基]哌啶-1-甲酸叔-丁基酯(4.17g)在乙腈(10ml)中的溶液(1)内，并搅拌2小时。加入第二份4M氯化氢(3.75ml)在二烷中的溶液，并将混合物再搅拌小时。反应混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。将有机物用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发。残余物通过柱色谱法纯化，用二氯甲烷/甲醇(用氨饱和的)(96/4)洗脱。
合并含有所需产物的级分并蒸发。所得固体用异己烷/二氯甲烷研制，过滤，并于50℃在高真空下干燥，获得了本标题产物，为白色固体(1.94g，57％)；1H NMR谱(DMSO d6)1.67-1.82(m，2H)；1.83-1.94(m，1H)；1.98-2.08(m，1H)；2.59(d，3H)；2.74-2.83(m，1H)；2.90-3.01(m，1H)；3.48-3.55(m，1H)；3.94(s，3H)；4.83(br s，1H)；7.22(s，1H)；7.23-7.30(m，1H)；7.43-7.57(m，2H)；7.75-7.81(m，1H)；7.84(s，1H)；8.37(s，1H)；9.52(s，1H)；质谱(M+H)+460。
起始材料(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-2-[(甲基氨基)羰基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(10)制备如下 将(2R，4R)-1-(叔-丁氧基羰基)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酸(4.73g)(如实施例4中方案B(7)所描述制备)在NMP(47ml)中的溶液冷却至0℃。加入盐酸甲胺(1.75g)、三乙胺(4.8ml)和二异丙基乙胺(1.5ml)。分批加入HATU(4.93g)以便使内部温度保持在＜10℃，并将反应混合物放置过夜。加入另一份HATU(3.0g)和二异丙基乙基胺(1.5ml)。20分钟后，将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液中止，并用乙酸乙酯(x2)萃取。
合并的有机物用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发。残余物通过柱色谱法纯化，用二氯甲烷/甲醇(用氨饱和的)(98.4/1.6)洗脱。合并含有所需产物的级分并蒸发，获得了(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-2-[(甲基氨基)羰基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(10)，为黄色油状物(4.18g，86.3％)；1H NMR谱(DMSO d6)1.52(s，10H)；1.91-2.16(m，3H)；2.33-2.41(t，1H)；2.90(d，3H)；2.95-3.16(m，1H)；3.33-3.41(t，1H)；4.02(s，3H)；4.28(br s，0.5H)4.81(br s，0.5H)；5.07(br s，1H)；7.07-7.18(m，2H)；7.27(s，1H)；8.13-8.34(m，3H)；8.66(s，1H)；质谱(M-H)-558。
实施例6 (2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺马来酸氢盐 把(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺(10.0g21.1mmol，如实施例3中所描述制备)在回流下溶解在乙腈(500ml)中。加入1M马来酸在丙酮中的溶液(43ml，43.0mmol)。将混合物浓缩以除去丙酮，冷却至室温，并过滤收集固体。将该非晶形材料在乙酸乙酯(400ml)中调成浆液，并在50℃加热过周末(大约65小时)。然后把混合物浓缩至体积，并在50℃搅拌过夜。把所得悬浮液冷却，过滤，用冷的乙酸乙酯(100ml)洗涤，并于50℃在高真空下干燥过夜，获得了(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺的马来酸氢盐，为白色晶状固体(12.7g，85.2％)；1H NMR谱(300MHzDMSO-D6)δ2.01-2.19(m，3H)；2.41-2.46(m，1H)；2.66-2.70(d，3H)；2.78(s，3H)；3.23-3.35(m，1H)；3.36-3.45(m，1H)；3.91-4.00(m，1H)；3.99(s，3H)；4.88(s，1H)；6.12(s，4H)；7.24-7.33(m，2H)；7.46-7.55(m，2H)；7.90(s，1H)；8.43(s，1H)；8.67-8.74(br q，1H)；9.46-9.92(br s，1H)。
马来酸氢盐的X-射线粉末衍射花样是这样测定将结晶盐样本固定在Siemens单硅晶(SSC)圆片固定物上，并且借助于显微镜载玻片把样本摊成薄层。使所述样品以每分钟30转(rpm)的速度旋转(以改善计数统计)，并用X-射线照射，X-射线是在Bruker D5000粉末X-射线衍射计上通过在40kV和40mA下操作的铜制细长聚焦管产生的，波长为1.5406埃。校准的X-射线源在V20通过自动可变发散狭缝，并且直接通过2mm反散射狭缝和0.2mm探测器狭缝反射辐射。将样本在2°2θ-40°2θ范围内，以θ-θ模式，曝光1秒钟/0.02°2θ增量(连续扫描方式)。操作时间为31分41秒。仪器配备闪烁计数器作为探测器。控制和数据获取是通过用Diffract+软件运转的Dell Optiplex 686NT 4.0Workstation来进行的。在2θ2-40°范围内，以2θ0.02°的增量，每一增量4s来收集数据。
马来酸氢盐的X-射线粉末衍射花样显示于图1。
使用Mettler DSC820e，对马来酸氢盐进行示差扫描量热法(DSC)分析。将包含在装配有刺穿盖的40mml铝盘中的一般小于5mg的样本在25℃-325℃温度范围内，以10℃/分钟的恒定加热速度加热。使用氮气作为清除气体-流速为100ml/分钟。
DSC痕迹显示于图2。熔化吸热线的起始温度为175-182℃。熔化吸热线的峰值为180-187℃。
实施例7 (2S，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺
本标题化合物是如方案D中所示制备的
方案D 把(2S，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-1-甲基哌啶-2-甲酸(15)(145mg，0.32mmol)于氮气下溶解在DMF(10ml)中。加入三乙胺(0.13ml，0.95mmol)、继之加入DIPEA(0.055ml，0.32mmol)和盐酸甲胺(0.043g，0.63mmol)。该混合物在冰/水浴中冷却，然后分批加入HATU(180mg，0.47mmol)以便使温度保持在＜10℃。反应混合物于室温搅拌过夜，并蒸发至干。残余物溶解在EtOAc中，用水(10ml)、盐水(10ml)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。粗产物通过柱色谱法纯化，用极性逐渐增加的二氯甲烷/甲醇的混合物(100/0-90/10)洗脱。合并含有所需产物的级分并蒸发。所得固体溶解在甲醇中，负载到SCX柱上，并用MeOH(20ml)继之用7N NH3在MeOH中的混合物洗脱。合并适当的级分并蒸发，，获得了本标题产物，为白色固体(69mg，40％)1H NMR谱(DMSO-d6)δ1.63-1.69(2H，m)，2.15-2.21(6H，m)，2.55-2.62(4H，m)，2.93-2.98(1H，m)，3.94(3H，s)，4.43-4.51(1H，m)，7.23(1H，s)，7.28-7.33(1H，m)，7.49-7.56(2H，m)，7.68-7.72(1H，m)，7.86(1H，s)，8.39(1H，s)，9.57(1H，s)；质谱(M+H)+474。
起始材料(2S，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-1-甲基哌啶-2-甲酸(15)制备如下 把(2S，4S)-N Boc-4-羟基哌啶-2甲酸苄基胺盐(0.5g)溶解在甲醇中，并负载到SCX柱上。将其用甲醇(20ml)洗脱。合并的滤液在真空中蒸发，获得了树胶状物(405mg)。将其溶解在DMF(5ml)中。加入碘甲烷(0.107ml，1.7mmol)，并将所得混合物冷却至0℃。一次性加入碳酸铯(647mg，1.98mmol)，并将混合物于室温搅拌过夜。反应混合物在水(10ml)和DCM(3×10ml)之间分配。合并的有机物用盐水(10ml)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并蒸发，获得了(2S，4S)-4-羟基哌啶-1，2-二甲酸1-叔-丁基2-甲基酯(11)，为清澈树胶状物(347mg，81％)1H NMR谱(CDCl3)δ1.39-1.50(10H，m)，1.60-1.66(1H，m)，1.86-1.96(2H，m)，2.40-2.49(1H，m)，2.96-3.10(1H，m)，3.65(1H，t)，3.73(3H，s)，3.95-4.18(1H，m)，4.82-5.06(1H，m)。
把DEAD(0.329ml，2.08mmol)在DCM(2ml)中的溶液加到搅拌着的4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-醇(283mg，1.74mmol，如WO03/082831的实施例实施例16中所描述制备)、(2S，4S)-4-羟基哌啶-1，2-二甲酸1-叔-丁基2-甲基酯(11)(450mg，2.08mmol)和三苯膦(547mg，2.098mmol)在DCM(10ml)中的悬浮液中，以便使内部温度保持在＜30℃。反应混合物搅拌过夜，并蒸发至干。残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用极性逐渐增加的DCM/甲醇的混合物(100/0-95/5)洗脱。合并含有所需产物的级分并蒸发，获得了(2S，4R)-4-[(4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-基)氧基]哌啶-1，2-二甲酸1-叔-丁基2-甲基酯(12)，为树胶状物(478mg，79％)1HNMR谱(DMSO-d6)δ1.39-1.46(10H，m)，1.73-1.84(1H，m)，1.92-2.03(1H，m)，2.10-2.18(1H，m)，2.60-2.69(1H，m)，3.15-3.40(3H，m)，3.74-3.85(1H，m)，4.01(3H，s)，4.61-4.73(1H，m)，5.06(1H，s)，7.43(1H，s)，7.47(1H，s)，8.89(1H，s)，8.97(1H，s)；质谱(M+H)+452。
把(2S，4R)-4-[(4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-基)氧基]哌啶-1，2-二甲酸1-叔-丁基2-甲基酯(12)(0.45g，1.0mmol)于氮气下溶解在MeCN(11ml)中。加入3-氯-2-氟苯胺(153mg，1.05mmol)，继之加入4M HCl在二烷(1.2ml)中的混合物。所得混合物于60℃加热过夜。所得混合物冷却至-8℃，过滤收集所得固体，并用乙醚洗涤。把该固体溶解在甲醇中，负载到SCX柱上，并用甲醇继之用7N NH3在MeOH中的混合物洗涤。合并适当的级分并蒸发。残余物通过SiO2柱色谱法纯化，用极性逐渐增加的DCM/甲醇的混合物(100/0-95/15)洗脱。合并含有所需产物的级分并蒸发，获得了(2S，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酸甲酯(13)，为清澈树胶状物(316mg，69％)1H NMR谱(DMSO-d6)δ1.45-1.58(2H，m)，2.02-2.11(1H，m)，2.32-2.40(1H，m)，2.57-2.67(1H，m)，3.08-3.13(1H，m)，3.42-3.48(1H，m)，3.64(3H，s)，3.95(3H，s)，4.54-4.64(1H，m)，7.05-7.10(1H，m)，7.23(1H，s)，7.28-7.33(1H，m)，7.48-7.57(2H，m)，7.85(1H，s)，8.38(1H，s)，9.56(1H，s)；质谱(M+H)+461。
把(2S，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酸甲酯(13)(0.35g，0.76mmol)溶解在15％乙酸/二氯甲烷(6.1ml)的溶液中。然后向该混合物中加入粉状4A°分子筛(0.63g)，并将所得悬浮液搅拌5分钟。滴加37％甲醛在水(0.56ml)中的混合物，并将混合物再搅拌2分钟。一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.29g)。
反应混合物于室温再搅拌2小时，过滤并蒸发。残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。合并的有机物用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。粗产物通过SiO2柱色谱法纯化，用极性逐渐增加的DCM/甲醇的混合物(100/0-95/5)洗脱。合并含有所需产物的级分并蒸发，获得了(2S，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-1-甲基哌啶-2-甲酸甲酯(14)，为泡沫状物(252mg，70％)1HNMR谱(DMSO-d6)δ1.72-1.78(2H，m)，2.05-2.35(6H，m)，2.95-3.04(2H，m)，3.63(3H，s)，3.94(3H，s)，4.51-4.59(1H，m)，7.23(1H，s)，7.29-7.31(1H，m)，7.49-7.56(2H，m)，7.84(1H，s)，8.39(1H，s)，9.55(1H，s)；质谱(M+H)+475。
把2N NaOH(1.3ml，2.66mmol)加到(2S，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-1-甲基哌啶-2-甲酸甲酯(14)(0.252g，0.53mmol)在THF(5ml)和甲醇(1ml)中的溶液内。反应混合物于室温搅拌过夜，并蒸发至干。残余物溶解在水(10ml)中，并且该溶液用2N HCl酸化至pH6。过滤收集所得固体，用水(5ml)继之用乙醚(5ml)洗涤，并在真空下干燥，获得了(2S，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-1-甲基哌啶-2-甲酸(15)，为奶油状固体(145mg，59％)1H NMR谱(DMSO-d6)δ1.72-1.90(2H，m)，2.20-2.31(1H，m)，2.40-2.55(1H+DMSO，m)，2.66(3H，s)，2.84-2.94(1H，m)，3.10-4.10(2H，m)，3.95(3H，s)，4.56-4.60(1H，m)，7.18-7.25(2H，m)，7.48-7.55(2H，m)，8.05(1H，s)，8.40(1H，s)；质谱(M+H)+461。
实施例8 (2R，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺
本标题化合物是如方案E中所示制备的
方案E 与实施例7中的相同步骤类似，将(2R，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-1-甲基哌啶-2-甲酸(20)与盐酸甲胺偶联，获得了标题化合物(2R，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺1H NMR谱(DMSO-d6)δ1.63-1.72(2H，m)，2.15-2.21(6H，m)，2.55-2.62(4H，m)，2.93-2.98(1H，m)，3.94(3H，s)，4.43-4.51(1H，m)，7.23(1H，s)，7.28-7.33(1H，m)，7.49-7.56(2H，m)，7.68-7.72(1H，m)，7.86(1H，s)，8.39(1H，s)，9.57(1H，s)；质谱(M+H)+474。
起始材料(2R，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-1-甲基哌啶-2-甲酸(20)制备如下 将(2R，4R)-N Boc-4-羟基哌啶-2甲酸苄胺盐与实施例7中的相同步骤类似地进行反应，获得了(2R，4R)-4-羟基哌啶-1，2-二甲酸1-叔-丁基2-甲基酯(16)；1H NMR谱(CDCl3)δ1.30-1.50(10H，m)，1.60-1.65(2H，m)，1.89-1.94(1H，m)，2.40-2.49(1H，m)，2.95-3.05(1H，m)，3.63-3.70(1H，m)，3.73(3H，s)，3.96-4.18(1H，m)，4.84-5.02(1H，m)。
与实施例7中的相同步骤类似，将(2R，4R)-4-羟基哌啶-1，2-二甲酸1-叔-丁基2-甲基酯(16)与4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-醇偶联，获得了(2R，4S)-4-[(4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-基)氧基]哌啶-1，2-二甲酸1-叔-丁基2-甲基酯(17)1H NMR谱(DMSO-d6)δ1.39-1.46(10H，m)，1.73-1.84(1H，m)，1.92-2.03(1H，m)，2.10-2.18(1H，m)，2.60-2.69(1H，m)，3.15-3.40(3H，m)，3.74-3.85(1H，m)，4.01(3H，s)，4.61-4.73(1H，m)，5.06(1H，s)，7.43(1H，s)，7.47(1H，s)，8.89(1H，s)，8.97(1H，s)；质谱(M+H)+452。
与实施例7中的相同步骤类似，将(2R，4S)-4-[(4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-基)氧基]哌啶-1，2-二甲酸1-叔-丁基2-甲基酯(17)与3-氯-2-氟苯胺反应，获得了(2R，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酸甲酯(18)1H NMR谱(DMSO-d6)δ1.45-1.56(2H，m)，2.03-2.12(1H，m)，2.31-2.38(1H，m)，2.60-2.67(1H，m)，3.08-3.15(1H，m)，3.44-3.48(1H，m)，3.64(3H，s)，3.95(3H，s)，4.55-4.63(1H，m)，7.23(1H，s)，7.26-7.32(1H，m)，7.48-7.58(2H，m)，7.85(1H，s)，8.38(1H，s)，9.56(1H，s)；质谱(M+H)+461。
将(2R，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-2-甲酸甲酯(18)按照与实施例7中的相同步骤类似地进行反应，获得了(2R，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-1-甲基哌啶-2-甲酸甲酯(19)1H NMR谱(DMSO-d6)δ1.68-1.77(2H，m)，2.07-2.14(1H，m)，2.17-2.21(5H，m)，2.91-3.03(2H，m)，3.63(3H，s)，3.94(3H，s)，4.50-4.59(1H，m)，7.22(1H，s)，7.28-7.32(1H，m)，7.48-7.57(2H，m)，7.83(1H，s)，8.38(1H，s)，9.54(1H，s)；质谱(M+H)+475。
与实施例6中的相同步骤类似，将(2R，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-1-甲基哌啶-2-甲酸甲酯(19)水解，获得了(2R，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-1-甲基哌啶-2-甲酸(20)1H NMR谱(DMSO-d6)δ1.72-1.90(2H，m)，2.20-2.31(1H，m)，2.45-2.55(1H+DMSO，m)，2.66(3H，s)，2.84-2.94(1H，m)，3.27-3.34(1H，m)，3.48-3.49(1H，m)，3.95(3H，s)，4.56-4.60(1H，m)，7.18-7.25(2H，m)，7.48-7.55(2H，m)，8.05(1H，s)，8.40(1H，s)；质谱(M+H)+461. 预测性药物组合物 下列举例说明用于人的治疗或预防之用的本文定义的本发明代表性药物剂型(活性组分被称作“化合物X”) (a)片剂I gm/片 化合物X............................................ 100 乳糖Ph.Eur....................................................... 182.75 交联羧甲基纤维素钠............................... 12.0 玉米淀粉糊(5％w/v糊)............................ 2.25 硬脂酸镁............................................................. 3.0 (b)注射剂I(50mg/ml) 化合物X............................................ 5.0％w/v 1M氢氧化钠溶液.............................. 15.0％v/v 0.1M盐酸(调节pH至7.6) 聚乙二醇400.................................... 4.5％w/v 注射用水至100％. 上面制剂可以通过药学领域众所周知的常规方法来制备。例如，片剂可以通过将各组分混合在一起，并将混合物压制成片来制备。
权利要求
1.式I喹唑啉衍生物
其中
m是1、2或3；
每一个R1，其可以相同或不同，是卤素；
R2选自氢和(1-4C)烷基；
R3是氢；并且
R4选自氢和(1-4C)烷基；
或其可药用盐。
2.权利要求1的喹唑啉衍生物，或其可药用盐，其中R2是(1-4C)烷基。
3.权利要求1的喹唑啉衍生物，或其可药用盐，其中R2和R4是甲基。
4.前述权利要求中的任何一项权利要求的喹唑啉衍生物，或其可药用盐，其中式I的喹唑啉环的4-位上的苯胺基选自3-氯-2-氟苯胺基、3-氯-4-氟苯胺基和3-溴-2-氟苯胺基。
5.前述权利要求中的任何一项权利要求的喹唑啉衍生物，或其可药用盐，其中式I的喹唑啉环的4-位上的苯胺基是3-氯-2-氟苯胺基。
6.式Ic的权利要求1的喹唑啉衍生物
其中
R1a是氯或溴；
R1b是氢且R1c是氟；或者
R1c是氢且R1b是氟；
R2是氢或(1-3C)烷基；
R3是氢；
R4是氢或甲基；
或其可药用盐。
7.权利要求6的喹唑啉衍生物，或其可药用盐，其中R2是甲基。
8.权利要求6或7的喹唑啉衍生物，或其可药用盐，其中R4是甲基。
9.权利要求6-8中的任何一项权利要求的喹唑啉衍生物，或其可药用盐，其中R1a是氯，R1b是氟并且R1c是氢。
10.权利要求1的喹唑啉衍生物，所示喹唑啉衍生物是4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺，或其可药用盐。
11.选自下列的权利要求1的喹唑啉衍生物；
(2S，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺；
(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺；
(2S，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺；
(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺；
(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N-甲基哌啶-2-甲酰胺；
(2S，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺；和
(2R，4S)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺；
或其可药用盐。
12.前述权利要求中的任何一项权利要求的式I喹唑啉衍生物与马来酸形成的盐。
13.(2R，4R)-4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)-N，1-二甲基哌啶-2-甲酰胺与马来酸形成的盐。
14.权利要求12或13的盐，所述盐是马来酸氢盐。
15.权利要求12-14中的任何一项权利要求的呈晶体的盐。
16.药物组合物，所述药物组合物包含如前述权利要求中的任何一项权利要求中所定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐，以及结合的可药用稀释剂或载体。
17.用作药物的前述权利要求中的任何一项权利要求中所定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐。
18.权利要求1-15中的任何一项权利要求中所定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐，在制备用于在温血动物例如人中产生抗增生作用的药物方面的应用。
19.权利要求1-15中的任何一项权利要求中所定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐，在制备用于预防或治疗对抑制涉及导致肿瘤细胞增殖的信号转导步骤的EGF受体酪氨酸激酶敏感的那些肿瘤的药物方面的应用。
20.在需要这样治疗的温血动物中产生抗增生作用的方法，该方法包括向所述动物给药有效量的如权利要求1-15中的任何一项权利要求中定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐。
21.在需要这样治疗的温血动物中预防或治疗对抑制涉及导致肿瘤细胞增殖和/或生存的信号转导步骤的EGF受体酪氨酸激酶敏感的肿瘤的方法，该方法包括向所述动物给药有效量的如权利要求1-15中的任何一项权利要求中定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐。
22.在有此需要的温血动物中提供选择性EGFR酪氨酸激酶抑制作用的方法，该方法包括向所述动物给药有效量的如权利要求1-15中的任何一项权利要求中定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐。
23.在需要这样治疗的温血动物中治疗高增生性疾病的方法，该方法包括向所述动物给药有效量的如权利要求1-15中的任何一项权利要求中定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐。
24.制备如权利要求1中定义的式I喹唑啉衍生物或其可药用盐的方法，所述方法包括
方法(a)
使式II化合物或其反应性衍生物
其中R1、R2和m如权利要求1中所定义，并且其中如果有必要，可以将式II化合物中的任何官能团予以保护，
与式NH2R4化合物或其适宜的盐，其中R4如权利要求1中所定义，反应；或者
方法(b)
将式I’化合物烷基化
其中R1、R3、R4和m如权利要求1中所定义，其中如果有必要，可以把式I’化合物中的任何官能团予以保护；或者
方法(c)
通过使式III化合物
其中R2、R3和R4如权利要求1中所定义，Lg是可置换基团，并且其中如果有必要，可以将式III化合物中的任何官能团予以保护，
与式IV化合物
其中R1和m如权利要求1中所定义，反应；或者
方法(d)
通过使式V化合物
其中R1和m如权利要求1中所定义，并且其中如果有必要，可以将式V化合物中的任何官能团予以保护，
与式VI化合物
其中Lg1是可置换基团，并且R2、R3和R4如权利要求1中所定义，并且其中如果有必要，可以将式VI化合物中的任何官能团予以保护，反应；
并且其后，如果有必要(以任何次序)
(i)除去任何保护基；并且
(ii)形成式I喹唑啉衍生物的可药用盐。
全文摘要
本发明涉及式I喹唑啉衍生物或其可药用盐，其中每一R1、R2、R3、R4和m如说明书中所定义；式I喹唑啉衍生物或其可药用盐的制备方法；含有式I喹唑啉衍生物及其可药用盐的药物组合物，以及I喹唑啉衍生物或其可药用盐在制备提供抗增生作用的药物中的应用。I喹唑啉衍生物预期可用于治疗像由erbB受体酪氨酸激酶尤其是EGFR酪氨酸激酶介导的某些癌症之类的疾病。
文档编号A61P35/00GK101128456SQ200680006067
公开日2008年2月20日 申请日期2006年2月24日 优先权日2005年2月26日
发明者C·T·哈尔萨尔, L·F·A·亨尼奎因, A·T·普洛赖特, R·斯托里, K·伦农 申请人:阿斯利康(瑞典)有限公司