专利名称：三氮唑并嘧啶类衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及三氮唑并嘧啶类衍生物，以及以该衍生物为活性成分的药物组合物，以及其在用于治疗和/或预防各种肿瘤疾病的药物中的用途。
背景技术：
恶性肿瘤是一种严重危害人类健康的常见病和多发病，它所引起的死亡率在所有疾病死亡率中排第二位，仅次于心脑血管疾病。经过几十年的研究，肿瘤治疗已经取得了相当的进步，肿瘤患者生存时间明显延长，特别是对白血病、恶性淋巴瘤等的治疗有了突破，然而，对危害人类生命健康最严重的、占恶性肿瘤90％以上的实体瘤的治疗仍未能达到满意的效果。到目前为止，临床上使用的大多数抗癌药物为细胞毒制剂，这类药物有着不可避免的缺点，如低选择性、毒副作用强和易产生抗药性等。
为寻找新的抗肿瘤药物，本发明人合成了一系列的三氮唑并嘧啶类衍生物，经体外抗肿瘤活性筛选，发现该类衍生物具有较强的抗肿瘤活性，从而完成了本发明。
发明内容
本发明涉及定义如下的一种通式I的化合物， 其中R1为氢、C1-C6烷基；Z为一个直接键或C1-C6亚烷基；m为1-6之间的整数；Ar1为苯基、萘基或5-10元杂芳基，所述杂芳基可以含有1-4个选自O、N和S的杂原子，且Ar1可任选的由1-3个相同或不同的R2取代；R2选自氢、卤素、羟基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、N，N-二C1-C4烷基氨基、C1-C4烷基硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、C1-C4烷氧基甲基、C1-C4烷基酰基、氨基甲酰基、N-C1-C4烷基氨基甲酰基、N，N-二C1-C4烷基氨基甲酰基、氨基磺酰基、N-C1-C4烷基氨基磺酰基、N，N-二C1-C4烷基氨基磺酰基、C1-C3亚烷基二氧基，以及吗啉基、吡咯烷基、哌嗪基、哌啶基、咪畔烷基和吡唑烷基的饱和杂环基，其中所述饱和杂环基可以带有1-2个选自氧代、羟基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、三氟甲基和硝基的取代基；Q为-Y-(CH2)n-Ar2，或者为 其中n为0-6之间的整数；Y选自-S-， Ar2选自苯基、萘基或5-10元杂芳基，所述杂芳基可以含有1-4个选自O、N和S的杂原子，且Ar2可任选1-3个相同或不同的R5取代；R5选自氢、卤素、羟基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基、氨基、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、N-C1-C4烷基氨基、N，N-二C1-C4烷基氨基、C1-C4烷基硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、C1-C4烷氧基甲基、C1-C4烷基酰基、氨基甲酰基、N-C1-C4烷基氨基甲酰基、N，N-二C1-C4烷基氨基甲酰基、氨基磺酰基、N-C1-C4烷基氮基磺酰基、N，N-二C1-C4烷基氨基磺酰基，或者R5为 ；其中R6和R7相同或不同，分别独立地选自氢、C1-C6烷基和C3-C6环烷基，它们可以被1-3个相同或不同的R2任选取代，或R6和R7与和它们所连接的氮原子一起形成5-10元饱和杂环基，所述饱和杂环基除了与R6和R7连接的氮原子外，可以含有1-3个选自O、N和S的杂原子，可以被1～3个相同或不同的R2任选取代；R3和R4相同或不同，分别独立地选自氢、C1-C10烷基、C3-C7环烷基、C2-C10烯基和C2-C10炔基，它们可以被1-3个相同或不同的R2任选取代；或R3和R4与和它们所连接的氮原子一起形成5-10元杂环基，所述杂环基除了与R3和R4连接的氮原子外，可以含有1-4个选自N、O和S的杂原子，除了R3和R4所连接的氮原子外，所述杂环基任选包括1或2个碳碳双键或叁键，可以被1～3个相同或不同的R2任选取代。
所述通式I的化合物，包括其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。
本发明优选涉及定义如下的通式I的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其特征在于
Ar1为苯基，且Ar1可任选1-3个相同或不同的R2取代；Ar2为5-10元杂芳基，所述杂芳基可以含有1-4个选自O、N和S的杂原子，且Ar2可任选1-3个相同或不同的R5取代。
本发明优选涉及定义如下的通式I的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其特征在于R1为C1-C4烷基；Z为一个直接键；Ar1为苯基，且Ar1可任选1-3个相同或不同的R2取代；m为1-4之间的整数；Q为-Y-(CH2)n-Ar2；n为0-4之间的整数；Y为-S-， Ar2为5元杂芳基，所述杂芳基可以含有1-4个选自O、N和S的杂原子，且Ar2可任选1-3个相同或不同的R5取代；本发明更优选涉及定义如下的通式I的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其特征在于R1为C1-C4烷基；Z为一个直接键；m为1-4之间的整数；Ar1为苯基，且Ar1可任选1-3个相同或不同的R2取代；Q为-Y-(CH2)n-Ar2；n为0-4之间的整数；Y为-S-， Ar2为5元杂芳基，所述杂芳基可以含有1个选自O、N和S的杂原子，且Ar2可任选1-3个相同或不同的R5取代；R3和R4相同或不同，分别独立地选自氢、C1-C10烷基、C3-C7环烷基、C2-C10烯基和C2-C10炔基；或R3和R4与和它们所连接的氮原子一起形成5-6元杂环基，所述杂环基除了与R3和R4连接的氮原子外，可以含有1-4个选自N、O和S的杂原子，除了R3和R4所连接的氮原子外，所述杂环基任选包括1或2个碳碳双键或叁键，可以被1～3个相同或不同的R2任选取代；R2为氢、卤素、羟基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、N，N-二C1-C4烷基氨基、(C1-C4)烷基硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、C1-C4烷氧基甲基、C1-C4烷基酰基、氨基甲酰基、N-C1-C4烷基氨基甲酰基、N，N-二C1-C4烷基氨基甲酰基、氨基磺酰基、N-C1-C4烷基氨基磺酰基、N，N-二C1-C4烷基氨基磺酰基、C1-C3亚烷基二氧基，以及选自吗啉基、吡咯烷基、哌嗪基、哌啶基、咪唑烷基和吡唑烷基的饱和杂环基，并且该饱和杂环基可以带有1-2个选自氧代、羟基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、三氟甲基和硝基的取代基；R5为氢、卤素、羟基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基、氨基、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、N-C1-C4烷基氨基、N，N-二C1-C4烷基氨基、C1-C4烷基硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、C1-C4烷氧基甲基、C1-C4烷基酰基、氨基甲酰基、N-C1-C4烷基氨基甲酰基、N，N-二C1-C4烷基氨基甲酰基、氨基磺酰基、N-C1-C4烷基氨基磺酰基、N，N-二C1-C4烷基氨基磺酰基或者R5为 R6和R7相同或不同，分别独立地选自氢、C1-C6烷基和C3-C6环烷基，它们可以被1-3个相同或不同的R2任选取代，或R6和R7与和它们所连接的氮原子一起形成5-10元饱和杂环基，所述饱和杂环基除了与R6和R7连接的氮原子外，可以含有1-3个选自O、N和S的杂原子，可以被1～3个相同或不同的R2任选取代。
本发明更优选涉及定义如下的通式I的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其特征在于Ar2为呋喃基，且在5位上被 取代；R6、R7相同或不同，分别独立地选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基，或R6和R7与和它们所连接的氮原子一起形成吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、噻唑啉基和N-(C1-C4)烷基哌嗪基。
本发明非常优选涉及定义如下的通式I的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其特征在于n为1，Ar2为呋喃-2-基，且在5位上被 取代；-NR6R7选自二甲氨基、甲基异丙基氨基、二乙氨基、吡咯烷基、N-甲基哌嗪基、哌啶基和吗啉基。
本发明更优选涉及定义如下的通式I的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其特征在于Ar1为苯基，且Ar1可任选1-3个相同或不同的R2取代；R2为氢、卤素、三氟甲基、三氟甲氧基。
本发明特别优选如下的权利要求1的通式I的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其结构是N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N-甲基-N-异丙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N-甲基-N-丙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二乙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3，4-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二乙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋哺-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二甲基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(2，4-二氯苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(2，4-二氯苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；
N-(3-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二乙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二乙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(4-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(哌啶-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(4-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(4-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(2-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(哌啶-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-氯苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-溴苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-溴苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二甲基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺。
而且，按照本发明所属领域的一些通常方法，本发明的上式I的化合物三氮唑并嘧啶类衍生物可以与酸生成它的药学上可接受的盐。酸可以包括无机酸或有机酸，与下列酸形成的盐是特别优选的盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、马来酸、柠檬酸、富马酸、草酸、洒石酸、苯磺酸、苯甲酸或对甲苯磺酸等。
本发明的化合物可以以立体异构体形式存在，这些立体异构形式可以是对映体或非对映体。本发明既涉及对映体或非对映体，也涉及它们各自的混合物，象非对映体一样，可按照自身已知的方法将外消旋形式分离成为立体异构的单一组分。
此外，本发明还包括本发明的化合物的前药。依据本发明，前药是通式I的化合物的衍生物，它们自身可能具有较弱的活性或甚至没有活性，但是在给药后，在生理条件下(例如通过代谢、溶剂分解或另外的方式)被转化成相应的生物活性形式。
除非另外指出，本发明所用的术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘；“烷基”是指直链或支链的烷基；“亚烷基”是指直链或支链的亚烷基；“环烷基”是指取代或未取代的环烷基；“杂芳基”包括含有一个或多个选自O、N和S的杂原子，其中每个杂芳基的环状体系可以是单环或多环的，环状体系是芳香性的，可以举出例如咪唑基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、(1，2，3)-和(1，2，4)-三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噁唑基、吡唑基、吡咯基、噻唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、吲哚基、喹啉基等；饱和杂环基包括含有一个或多个选自O、N和S的杂原子，环状体系可以是单环或多环的，可以举出例如吡咯烷基、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、吡唑烷基、咪唑烷基和噻唑啉基等。
本发明的特定的化合物可具有不对称中心，因此以不同的对映体和非对映体的形式存在。本发明涉及本发明的化合物的所有旋光异构体、消旋体及其混合物。“消旋体”是指含有等量的一对对映异构体的混合物。
本发明包括药物组合物，该组合物含有上式I的化合物，及其分离或混合物形式的顺式或反式异构体，其对映体或非对映异构体或消旋体，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物作为活性成分，以及药学上可接受的赋型剂。所述药学上可接受的赋型剂是指任何可用于药学领域的稀释剂、辅助剂和/或载体。本发明的衍生物可以与其他活性成分组合使用，只要它们不产生其他不利的作用，例如过敏反应。
本发明的药物组合物可配制成若干种剂型，其中含有药学领域中常用的一些赋形剂；例如，口服制剂(如片剂，胶囊剂，溶液或混悬液)；可注射的制剂(如可注射的溶液或混悬液，或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入注射用水可立即使用)；局部制剂(例如软膏或溶液)。
用于本发明药物组合物的载体是药学领域中可得到的常见类型，包括口服制剂用的粘合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稀释剂、稳定剂、悬浮剂、无色素、矫味剂等；可注射制剂用的防腐剂、加溶剂、稳定剂等；局部制剂用的基质、稀释剂、润滑剂、防腐剂等。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(例如静脉内、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下是不稳定的，可将其配制成肠衣片剂。
我们已发现本发明的通式I的化合物具有抑制肿瘤细胞生长的活性，因此本发明化合物可以用于提供抗增生作用的肿瘤疾病的的治疗，可以用作制备治疗和/或预防各种肿瘤疾病的药物，如肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、中枢神经系统癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、乳腺癌、头颈部鳞癌、食管癌、肾细胞癌、胰腺癌、膀胱癌和口腔癌等等。
根据本发明的衍生物可作为活性成分用于制备治疗和/或预防各种肿瘤疾病，本发明也提供治疗或预防上述疾病的方法，包括给予患有或易患有此病的病人治疗有效量的根据本发明的的化合物。上式I的三氮唑并嘧啶类衍生物用于患者的临床剂量必需依赖被治疗的主体、给药的具体途径、被治疗疾病的严重性而变化，而最佳剂量由治疗具体患者的医生确定。
本发明活性化合物可作为唯一的抗癌药物使用，或者可以与一种或多种其它抗肿瘤药物联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、顺序或隔开给药来实现。
下面合成路线1-2描述了本发明的通式I的化合物的制备，所有的原料都是通过这些示意图中描述的方法、通过有机化学领域普通技术人员熟知的方法制备的或者可商购。本发明的全部最终的化合物都是通过这些示意图中描述的方法或通过与其类似的方法制备的，这些方法是有机化学领域普通技术人员熟知的。这些示意图中应用的全部可变因数如下文的定义或如权利要求中的定义。
按照本发明的通式I化合物，在路线1中，取代基如发明内容部分所定义，以化合物a为起始原料，在吡啶中与氨基胍碳酸盐反应，得到化合物b再与烷酰乙酸乙酯环合，得到化合物c。继而与然后与三氯氧磷发生氯代反应，制得化合物d。化合物d与取代的胺发生取代反应得到化合物e。化合物e与胺进行取代反应，可制得化合物I-i。化合物e与取代的硫醇或硫酚发生到代反应，可制得化合物f，继而选择不同的氧化剂制备得到化合物I-ii，I-iii和，I-iv。
按照本发明的通式I化合物，在路线2中，Q为-Y-(CH2)n-Ar2，Y为-S-， M为O，S，N，其它取代基如发明内容部分所定义，以按照路线1制得的化合物e为原料，与取代的硫醇f发生取代反应，制得化合物I-v，继而与甲醛、HNR6R7进行Mannich反应，制得化合物I-vi，再选择合适的氧化剂可以得到化合物I-vii和化合物I-viii。
本发明的另一个主题涉及通式II的化合物的制备方法，该方法包括在极性溶剂中，使通式III的化合物与甲醛、HNR6R7进行反应，式中，R1、Z、Ar1、m、n、R6、R7如前所述，Y为-S-。
此处，极性溶剂包括甲醇、乙醇、醋酸或者它们的水溶液等。
本发明的另一个主题涉及通式IV化合物的制备方法，该方法包括使通式V的化合物与化合物VI 在碱存在下反应，其中，R1、Z、Ar1、m、n，Ar2如前所述，X为卤素，Y为-S-。
此处，碱包括氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠和碳酸钾等。
以上通式II和通式VI化合物都是通式I化合物中的部分化合物。
本发明化合物的药效学实验数据列在本发明实施例中。
具体实施例方式
实施例旨在阐述而不是限制本发明的范围。衍生物的核磁共振氢谱用BrukerARX-300测定，质谱用Agilent 1100 LC/MSD测定；所用试剂均为分析纯或化学纯。
实施例1N-(3，5-二氟苯基)-2-[3-(二甲氨基)丙基]-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺盐酸盐的制备
(1)3-(3-氯丙基)-5-氨基-4H-[1，2，4]三氮唑的制备将4-氯丁酸61.3g(0.5mol)、氨基胍碳酸盐65.0g(0.55mol)加入吡啶900mL中，加热回流反应10h。反应毕，浓缩反应液，加入乙醇150mL，搅拌，抽滤，干燥，得到固体33.2g，收率41.5％。
(2)2-(3-氯丙基)-5-甲基-7-羟基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶的制备将乙酰乙酸乙酯41.8g(0.25mol)、3-(3-氯丙基)-5-氨基-4H-[1，2，4]三氮唑33.2g(0.21mol)加至二氧六环500mL中，加热回流反应10h。反应毕，冷却，析出固体，抽滤，干燥，得固体42.1g，收率88.8％。
(3)2-(3-氯丙基)-5-甲基-7-氯-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶的制备将2-(3-氯丙基)-5-甲基-7-羟基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶42.1g(0.19mol)加至三氯氧磷133g(0.87mol)中，加热回流反应3h。反应毕，将反应液浓缩，所得残余液倒入冰水中，二氯甲烷(250mL×3)提取，合并有机相，水洗，干燥，蒸干，得固体42.5g，收率93.4％。
(4)7-(3，5-二氟苯基氨基)-2-(3-氯丙基)-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶的制备将2-(3-氯丙基)-5-甲基-7-氯-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶5.0g(0.02mol)、3，5-二氟苯胺3.2g(0.024mol)加至甲醇100mL中，室温反应3h。反应毕，将反应液静置，冷却，抽滤，干燥，得固体6.1g，收率90.4％。
(5)N-(3，5-二氟苯基)-2-[3-(二甲氨基)丙基]-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺盐酸盐的制备将7-(3，5-二氟苯基氨基)-2-(3-氯丙基)-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶2.5g(0.007mol)溶于DMF中，再分别加入30％二甲胺氨2.0g(0.014mol)、碳酸钾2.0g(0.014mol)，于50℃反应8h，然后倒入水中，抽滤干燥得到产品1.8g，收率69％。
按照实施例1的方法，选择合适的原料，可制得实施例2-10化合物(表1)。
表1实施例1-10化合物
实施例11 N-(3，5-二氟苯基)-2-[3-[(呋喃-2-基)甲硫基]丙基]-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺按照实施例1的中(1)、(2)、(3)、(4)的操作方法，可制得7-(3，5-二氟苯基氨基)-2-(3-氯丙基)-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶。
将NaH 0.15g(0.006mol)于常温下加入N，N-二甲基甲酰胺20mL中，然后将糠硫醇0.7g(0.006mol)加入上述混悬液中，5min后加入7-(3，5-二氟苯基氨基)-2-(3-氯丙基)-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶2.0g(0.006mol)，然后于30℃反应5h，将反应液到倒入水中，搅拌，静置，析出固体，得到实施例11化合物2.1g，收率85.4％。
选择合适的原料，按照实施例11的制备方法，可制得实施例12-16化合物(表2)。
表2实施例11-16化合物
实施例17N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[2-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]乙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺盐酸盐的制备按照实施例1的中(1)、(2)、(3)、(4)的操作方法，可制得7-(3，5-二氟苯基氨基)-2-(2-氯乙基)-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶，然后按照实施例11的制备方法，可制得7-(3，5-二氟苯基氨基-2-[3-[(呋喃-2-基)甲硫基]乙基]-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶。
将四氢吡咯0.5g(0.007mol)、甲醛0.3g(0.0036mol)依次加入冰乙酸中，于30℃搅拌10min，再加入N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[2-(呋喃-2-基甲硫基)乙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶1.0g(0.0024mol)，然后升温至80℃，反应4h完毕，浓缩后加水，然后用饱和氢氧化钠水溶液调pH至9，然后用氯仿50mL×3萃取，水洗，硫酸镁干燥，浓缩，所得油状物用丙酮溶解，然后滴加盐酸乙醚，得到固体0.55g，收率60.7％。
按照实施例17的制备方法，可制得实施例18-65的化合物。化合物名称、结构式及MS、1H-NMR数据见表3。
表3实施例17-65化合物
实施例66N-(3，5-二氟苯基)-2-[3-[5-(吡咯烷-1-基)甲基-呋喃-2-基甲基亚磺酰基]丙基]-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺盐酸盐按照实施例17的制备方法，制得N-(3，5-二氟苯基)-2-[3-[5-(吡咯烷-1-基)甲基-呋喃-2-基甲硫基]丙基]-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺。
将上述化合物1.0g(0.002mol)溶于10mL冰乙酸中，加入30％过氧化氢0.23(0.002mol)，于室温反应6h，再用饱和氢氧化钠水溶液调pH至9，抽滤，干燥得到实施例66化合物0.8g，收率80％。
按照实施例66的制备方法，选择合适的原料，可制得实施例67-68化合物。
表4实施例66-68化合物
实施例69N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲基磺酰基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺按照实施例17的制备方法，制得N-(3，5-二氟苯基)-2-[3-[5-(吡咯烷-1-基)甲基-呋喃-2-基甲硫基]丙基]-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺。
将上述化合物0.5g(0.001mol)溶于冰醋酸10mL中，再加入催化量的钨酸钠，然后将30％双氧水1.1g(0.01mol)滴加到上述溶液中，室温搅拌8h，再用饱和氢氧化钠水溶液调pH至9，所得油状物用氯仿提取、干燥、浓缩，再用柱层析分离得到产品0.2g，收率37.6％。
按照实施例69的方法，制得实施例70-71化合物(表5)。
表5实施例70-71化合物
体外抗肿瘤细胞活性测试(1)将人肝癌细胞Bel-7402、人纤维肉瘤细胞HT-1080、人肺癌细胞A549细胞复苏并传代2-3次稳定后，用胰蛋白酶溶液(0.25％)使其从培养瓶底部消化下来。将细胞消化液倒入离心管中而后加入培养液以终止消化。将离心管在1300r/min下离心3mins，轻轻弃去上清液后加入5mL培养液，吹打混匀细胞，吸取10uL细胞混悬液加入细胞计数板中计数，调整细胞浓度为104个/孔。96孔板中除A1孔为空白孔不加细胞外，其余皆加入100uL细胞混悬液。将96孔板放入培养箱中培养24h。
(2)用50μl二甲基亚砜溶解受试样品，然后加入适量培养液，使样品溶解成2mg/mL药液。然后在24孔板中将样品稀释为16，8，4，2，1μg/mL。每个浓度加入3孔，其中周围两行两列细胞长势受环境影响较大，只作为空白细胞孔使用。将96孔板放入培养箱中培养24h。
(3)将96孔板中带药培养液弃去，用磷酸缓冲溶液(PBS)将细胞冲洗两遍，在每孔中加入MTT(四氮唑)(0.5mg/mL)100uL放入培养箱中4h后，弃去MTT溶液，加入二甲基亚砜100uL。在磁力振荡器上振荡使存活细胞与MTT反应产物甲臜充分溶解，放入酶标仪中测定结果。通过Bliss法可求出药物IC50值。
化合物的抑制人肝癌细胞Bel-7402、人纤维肉瘤细胞HT-1080、人肺癌细胞A549活性结果见下表(IC50活性数据单位为μmol/L)
从上述试验结果可以清楚地看出，本发明所要保护的通式I的化合物，具有良好的抗肿瘤活性，相当或者优于已上市药物Iressa和顺铂。
权利要求
1.一种通式I的化合物， 其中R1为氢、C1-C6烷基；Z为一个直接键或C1-C6亚烷基；m为1-6之间的整数；Ar1为苯基、萘基或5-10元杂芳基，所述杂芳基可以含有1-4个选自O、N和S的杂原子，且Ar1可任选的由1-3个相同或不同的R2取代；R2选自氢、卤素、羟基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、N，N-二C1-C4烷基氨基、C1-C4烷基硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、C1-C4烷氧基甲基、C1-C4烷基酰基、氨基甲酰基、N-C1-C4烷基氨基甲酰基、N，N-二C1-C4烷基氨基甲酰基、氨基磺酰基、N-C1-C4烷基氨基磺酰基、N，N-二C1-C4烷基氨基磺酰基、C1-C3亚烷基二氧基，以及吗啉基、吡咯烷基、哌嗪基、哌啶基、咪唑烷基和吡唑烷基的饱和杂环基，其中所述饱和杂环基可以带有1-2个选自氧代、羟基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、三氟甲基和硝基的取代基；Q为-Y-(CH2)n-Ar2，或者为 其中n为0-6之间的整数；Y选自-S-， Ar2选自苯基、萘基或5-10元杂芳基，所述杂芳基可以含有1-4个选自O、N和S的杂原子，且Ar2可任选1-3个相同或不同的R5取代；R5选自氢、卤素、羟基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基、氨基、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、N-C1-C4烷基氨基、N，N-二C1-C4烷基氨基、C1-C4烷基硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、C1-C4烷氧基甲基、C1-C4烷基酰基、氨基甲酰基、N-C1-C4烷基氨基甲酰基、N，N-二C1-C4烷基氨基甲酰基、氨基磺酰基、N-C1-C4烷基氨基磺酰基、N，N-二C1-C4烷基氨基磺酰基，或者R5为 其中R6和R7相同或不同，分别独立地选自氢、C1-C6烷基和C3-C6环烷基，它们可以被1-3个相同或不同的R2任选取代，或R6和R7与和它们所连接的氮原子一起形成5-10元饱和杂环基，所述饱和杂环基除了与R6和R7连接的氮原子外，可以含有1-3个选自O、N和S的杂原子，可以被1～3个相同或不同的R2任选取代；R3和R4相同或不同，分别独立地选自氢、C1-C10烷基、C3-C7环烷基、C2-C10烯基和C2-C10炔基，它们可以被1-3个相同或不同的R2任选取代；或R3和R4与和它们所连接的氮原子一起形成5-10元杂环基，所述杂环基除了与R3和R4连接的氮原子外，可以含有1-4个选自N、O和S的杂原子，除了R3和R4所连接的氮原子外，所述杂环基任选包括1或2个碳碳双键或叁键，可以被1～3个相同或不同的R2任选取代。所述通式I的化合物，包括其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。
2.权利要求1的化合物，其特征在于其中，Ar1为苯基，且Ar1可任选1-3个相同或不同的R2取代；Ar2为5-10元杂芳基，所述杂芳基可以含有1-4个选自O、N和S的杂原子，且Ar2可任选1-3个相同或不同的R5取代。
3.权利要求2的化合物，其特征在于其中，R1为C1-C4烷基；Z为一个直接键；Ar1为苯基，且Ar1可任选1-3个相同或不同的R2取代；m为1-4之间的整数；Q为-Y-(CH2)n-Ar2；其中n为0-4之间的整数；Y为-S-， Ar2为5元杂芳基，所述杂芳基可以含有1-4个选自O、N和S的杂原子，且Ar2可任选1-3个相同或不同的R5取代。
4.权利要求3的化合物，其特征在于其中，Y为-S-， Ar2为5元杂芳基，所述杂芳基可以含有1个选自O、N和S的杂原子，且Ar2可任选1-3个相同或不同的R5取代。
5.权利要求1至4中任一项所述的化合物，其特征在于Ar2为呋喃基，且在5位上被 取代；R6和R7相同或不同，分别独立地选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基，或R6和R7与和它们所连接的氮原子一起形成吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、噻唑啉基和N-(C1-C4)烷基哌嗪基。
6.权利要求1至5中任一项所述的化合物，其特征在于n为1，Ar2为呋喃-2-基，且在5位上被 取代；-NR6R7选自二甲氨基、甲基异丙基氨基、二乙氨基、吡咯烷基、N-甲基哌嗪基、哌啶基和吗啉基。
7.权利要求1至6中任一项所述的化合物，其特征在于Ar1为苯基，且Ar1可任选1-3个相同或不同的R2取代；R2为氢、卤素、三氟甲基、三氟甲氧基。
8.权利要求1的化合物，是以下化合物N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N-甲基-N-异丙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N-甲基-N-丙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二乙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3，4-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二乙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二甲基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(2，4-二氯苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(2，4-二氯苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二乙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二乙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(4-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(哌啶-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(4-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(4-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(2-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(哌啶-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-氯苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-溴苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-溴苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二甲基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺。
9.权利要求1的化合物的制备方法，其特征在于，其中的结构如下的通式II的化合物的制备包括以下步骤在极性溶剂中，使通式III的化合物与甲醛、HNR6R7进行反应， 其中，R1、Z、Ar1、m、n、R6、R7如权利要求1所定义，Y为-S-，
10.权利要求1的化合物的制备方法，其特征在于，其中的结构如下的通式通式IV的化合物的制备，包括以下步骤使通式V的化合物与 化合物VI在碱存在下反应， 其中，R1、Z、Ar1、m、n如权利要求1所定义，Y为-S-，其中，Ar2，n如权利要求1所定义，其中，R1、Z、Ar1、m如权利要求1所定义，X为卤素，
11.一种药用组合物，包含权利要求1-8中任何一项的化合物。
12.权利要求1-8中任何一项的化合物在制备治疗和/或预防各种肿瘤疾病的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及通式I所示的三氮唑并嘧啶类衍生物，及其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其中取代基R
文档编号A61K31/519GK101016301SQ20071008025
公开日2007年8月15日 申请日期2007年2月15日 优先权日2007年2月15日
发明者史秀兰 申请人:沈阳中海生物技术开发有限公司