一种药物组合物在制备治疗或预防脑卒中的药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种药物组合物在制备治疗或预防脑卒中的药物中的应用，其中药物组合物是由贯叶金丝桃和刺五加组成，可与药学上可接受的载体或赋形剂制成各种剂型。药理研究表明该药物组合物对全脑缺血后的动物存活时间有明显提升，显著降低脑卒中后的缺血面积，对神经功能有保护作用，具有预防或治疗脑卒中的作用。
【专利说明】一种药物组合物在制备治疗或预防脑卒中的药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明属于医药领域，具体涉及一种药物组合物在制备治疗或预防脑卒中的药物中的应用。
【背景技术】
[0002]脑卒中是急性发生的血管或血流异常引起的脑血液循环障碍而致神经功能缺损综合征，具有高发病率、高致残率、高复发率及高致死率的特点，是仅次于心血管病和癌症的第三大“杀手”，已经成为威胁人类健康和生命的主要疾病。并且，随着全世界向老龄社会进入步伐的不断加快，脑卒中的发病率仍在进一步攀升，鉴于脑卒中的巨大危害，开发降低脑卒中死亡率、促进患者功能恢复、提高患者生活质量的治疗脑卒中的药物已经成为全球医药工作者的研究热点之一。
[0003]缺血性脑卒是指由于脑部血液供应障碍，缺血、缺氧引起的局限性脑组织的缺血性坏死或脑软化，病理生理过程极为复杂，受多种因素影响，其中能量代谢障碍、兴奋性氨基酸毒性作用、炎症反应、半暗带去极化及细胞凋亡等机制共同参与了其病理生理过程。目前对缺血性脑卒中的治疗，主要是从神经保护、抗凝、溶栓、增加血流量及降血压等角度进行，常用的脑卒中化学治疗药物包括:1)溶栓类药物，2)抗血小板药物，3)抗凝药物，4)神经细胞保护药物等。但这些药物多数都只能针对脑卒中的某一方面进行缓减和或治疗，治疗作用单一，效果不理想，且存在许多不良反应。例如，常用的溶栓治疗药物组织血纤维蛋白溶酶原激活剂(tPA)，虽然能够迅速溶解血栓，但是并不能改善由于缺血导致的神经元受损，且其不断被报道存在破坏血脑脊液屏障、增加出血风险、加剧兴奋性神经毒性等严重不良反应[黄隽波等，神经保护和缺血性脑卒中治疗，转化医学研究(电子版)2012，2 (I):40 - 53]，上述问题也是溶栓类药物在临床使用时普遍存在的缺陷。
[0004]此外，中药制剂在治疗脑卒中方面也取得了一定的进展，例如常见的具有改善心脑血管循环作用的银杏叶制剂，已被许多研究报道对于治疗急性缺血性脑卒中有着确切作用。但是，2010版药典中规定银杏叶提取物的总黄酮醇苷含量不得少于24.0%，萜类内酯含量不得少于6.0%，银杏酸含量不得超过10%，而在银杏叶药材中总黄酮醇苷含量和萜类内酯含量仅分别为0.4%和0.25%。因此，银杏叶制剂中相应活性成分含量的高标准必然对其原材料的质量、数量、提取工艺均有较高要求，从而造成较高的生产成本，此外，银杏叶提取物在临床使用上容易出现出血、致高血压、过敏等多种不良反应[王玉慧等，银杏叶提取物的不良反应，2001，3:184-186]。此外，CN1686299、CN10197242等中国专利中也公开了一些其它治疗脑卒中的中药药物组合物，但其组方复杂，生产成本高，药品质量控制难度大，不利于工业化生产。因此，寻求一种组方简单、疗效确切、安全性好、利于工业化大生产的治疗脑卒中的中药药物具有十分重要的意义。
[0005]贯叶金丝桃，又叫圣约翰草，藤黄科金丝桃属多年生草本植物，是世界上分布最广的天然植物，在我国主要分布于湖北、四川、贵州、甘肃、山西、江西、江苏、山东等地。贯叶金丝桃的临床应用除传统的镇静、抗炎、伤口愈合等方面的作用外，还被报道可用于抑郁症、甲型和乙型肝炎、爱滋病、肿瘤等疾病的治疗。2006年又有研究报道贯叶金丝桃素对于脑卒中后的神经损伤具有保护作用[Kumar V, Mdzinarishvili A, Kiewert C，et al.NMDAreceptor-antagonistic properties of hyperforin, a constituent of St.John'sWort.J Pharmacol Sc1.2006, 102(1):47-54] ?此外，贯叶金丝桃制剂的大规模临床研究发现，其在使用过程中虽然存在一些副作用，如胃肠道刺激(0.6%)、过敏反应(0.5%)、疲劳(0.4%)等，但这些副反应是轻微的、暂时的，且相对无害的[杨得坡等，国外对贯叶连翘抗抑郁疗效的临床验证，中西医结合学报，2004，2 (3) =231-234]。
[0006]刺五加为五加科植物的根、根茎和茎，又名五加参、刺拐棒，主要分布在我国东北、华北地区，以及朝鲜、日本及俄罗斯等地。刺五加应用广泛、历史悠久，现代药理学研究表明其具有神经元保护、免疫调节、延缓衰老等多方面的作用，临床上应用广泛。周钦等的研究报道了使用刺五加注射液治疗缺血性脑卒中，结果表明刺五加注射液治疗组对于脑卒中患者的治疗效果明显优于不使用刺五加注射液的对照组[周钦.刺五加注射液治疗缺血性脑卒中228例临床分析，广西医学，2006，28(9): 1396-1397]。而刺五加注射液的长期毒性研究表明其高、低剂量组与生理盐水(空白)对照组比较，连续给药28d过程中，对脏器系数、动物血液学指标、生化指标等各项指标均无明显影响；停药后各组动物在饮食、活动、排泄、精神状态等方面均未见明显差异；病理组织切片无特异性改变，停药后无迟缓性毒性发生[宋艳春等，刺五加注射液对大鼠长期毒性试验的研究，药物评价研% , 2010, 33(1): 1-4] ο
[0007]贯叶金丝桃与刺五加均具有分布广泛、原料易得，作用靶点多，毒副作用小等优点。舒肝解郁胶囊是以贯叶金 丝桃和刺五加组方的中药组合物，用于治疗轻、中度单相抑郁症，是国内首个SFDA批准的用于治疗抑郁的中成药，治疗抑郁效果良好，且相关研究表明其在治疗过程中不良事件发生率小，无严重和重度不良事件发生[孙新宇等，舒肝解郁胶囊治疗轻中度抑郁症的随机双盲安慰剂对照研究，Chinese Journal ofNew Drugs, 2009,18
(5):413-416]。
[0008]目前未见将贯叶金丝桃和刺五加共同应用于治疗脑卒中，并获得疗效确切、安全性好的药物的报道。
【发明内容】
[0009]本发明的目的是提供一种含有贯叶金丝桃和刺五加的药物组合物在制备治疗或预防脑卒中药物中的应用，贯叶金丝桃和刺五加的重量百分比为:贯叶金丝桃35-65%，刺五加65-35% ;优选的重量百分比为贯叶金丝桃50-65%，刺五加50-35% ;更优选的重量百分比为贯叶金丝桃54.5%，刺五加45.5%。
[0010]所述的脑卒中优选为缺血性脑卒中。
[0011]本发明提供的药物组合物可与药学上可接受的载体或赋形剂制成药物制剂，该制剂可以是常规口服制剂，例如胶囊、片剂、颗粒剂等。
[0012]本发明采用双侧颈总动脉及迷走神经结扎所致的急性脑缺血小鼠模型考察药物组合物的作用，所述的小鼠模型造模方法为:于小鼠最后一次灌胃给药后0.5h，用乙醚对其进行浅表麻醉后，迅速结扎双侧颈总动脉和迷走神经，观察小鼠存活时间。该动物模型为急性脑缺血缺氧的常用模型，而急性脑缺血缺氧正是缺血性脑卒中的病理作用之一，因此，该动物模型给药后的存活时间能够初步反映该药物对脑缺血、缺氧的保护作用，可以作为缺血性脑卒中药物的筛选指标。实验结果表明本发明中所述药物组合物对双侧颈总动脉结扎致小鼠缺急性脑缺血后的存活时间与模型组相比显著延长，与单独使用刺五加或贯叶金丝桃组相比也有明显延长，说明该药物组合物对于脑缺血、缺氧保护作用明显，且具有显著的协同作用。
[0013]大脑中动脉闭塞模型被公认为标准局灶性脑梗死动物模型，其中线栓法大脑中动脉脑缺血模型是研究缺血性脑损伤动物模型的首选造模方法[线栓法大鼠局灶脑缺血模型的改进与评价，中南医学科学杂志，2012，40 (3): 291-294]。因此本发明采用线栓法所致的大鼠脑卒中模型进一步对药物组合物的预防或治疗脑卒中作用及剂量进行研究，所述的线栓法造模方法为:于大鼠最后一次灌胃给药后lh，用10%戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔注射麻醉，仰卧固定，颈部正中切口，分离并暴露左侧颈总动脉及颈内、外动脉，结扎颈总动脉及颈外动脉近心端，于颈总动脉远心端开一小口(距离颈外、颈内动脉分叉处约5_)，插入MACO栓线2.0±0.2cm，感到有轻微阻力时停止，扎紧并固定插线，缝合皮肤，阻断血流2h后，拔线实现再灌注，大鼠在脑缺血再灌注48h处死，处死前进行神经功能缺损评分；断头处死后取脑切片观察大鼠脑缺血体积。模型大鼠给药后的神经运动功能缺损评分结果表明该药物组合物各剂量组均能显著改善缺血性脑卒中大鼠的神经运动功能，其缺血体积研究结果显示该药物组合物各剂量组均能够明显减少因缺血再灌注导致的脑组织死亡区域与体积。
[0014]本发明提供的药物组合物的提取制备方法为:将贯叶金丝桃药材加70%乙醇回流提取2次，每次I小时，合并提取液，滤过，减压回收乙醇，浓缩至相对密度约1.10 (700C )的浸膏，喷雾干燥得干浸膏粉，得到贯叶金丝桃提取物；将刺五加药材粉碎成碎块，加水煎煮3次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度约1.18 (70°C)的浸膏，喷雾干燥得干浸膏粉，得到刺五加提取物；取上述 两种提取物，均匀混合即得药物组合物。该提取方法所需设备、试剂简单，操作方便，生产成本较低。
[0015]本发明与现有技术相比，具有以下优点:
[0016]1、本发明提供的药物组合物中在治疗或预防脑卒中过程中，由于贯叶金丝桃和刺五加的协同作用，该药物组合物对双侧颈总动脉结扎致小鼠缺血后的存活时间与单独使用刺五加或贯叶金丝桃组相比均有显著延长作用；并且该药物组合物对于脑卒中后的神经运动功能、缺血再灌注后损伤均有显著的治疗作用，治疗效果确切。
[0017]2、现有技术中的化学药物毒副作用较大，而本发明的药物组合物中的刺五加及贯叶金丝桃的相关毒性研究均表明二者毒性小，不良反应发生少，安全性高。
[0018]3、现有技术中的中药制剂存在提取过程或处方成分复杂、生产成本高、质量控制难度大等问题，而本发明中的药物组合物仅由两味药组成，处方简单、更易于质量控制，且提取方法简单，生产成本更低，适合大规模生产。
【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1是实施例二中各实验组的大鼠全脑切片图，其中I为实施例二中阴性对照组(正常大鼠)全脑切片，2为实施例二中脑卒中空白对照组(模型大鼠)全脑切片,3为实施例二中阳性对照组(脑卒中模型大鼠经银杏叶片治疗)全脑切片，4为实施例二中药物组合物低剂量组全脑切片，5为实施例二中药物组合物高剂量组全脑切片【具体实施方式】
[0020]以下实施例是对本发明的进一步解释，不能限制本发明的保护范围。
[0021]实施例1药物组合物对结扎双侧颈总动脉及迷走神经致脑缺血后小鼠存活时间的影响
[0022]1.实验材料
[0023]实验动物:昆明小鼠(KM小鼠)，批号SCXK (川)2004-15，由四川省医学科学院提供；
[0024]实验药品:银杏叶片(达纳康)，规格40mg/片，生产批号C02191，生产厂家为博福-益普生工业公司(法国)；刺五加浸膏粉，批号110302，贯叶金丝桃浸膏粉，批号110303均由成都康弘药业集团股份有限公司提供；
[0025]实验试剂:乙醚(分析纯，天津市富宇精细化工有限公司)
[0026]手术器械:手术剪、止血钳、持针钳。
[0027]2.实验方法
[0028]实验分组:
[0029]取昆明小鼠108只，雌雄各半，按照体重和性别平均分成以下9组:`[0030]阴性对照组:仅给予按10ml/kg小鼠体重计算所得体积的蒸馏水。
[0031]阳性对照组:给予达纳康20mg/kg。
[0032]刺五加组:给予刺五加提取物480mg/kg。
[0033]贯叶金丝桃组:给予贯叶金丝桃提取物480mg/kg。
[0034]药物组合物1:贯叶金丝桃:刺五加=35:65(重量百分比)的药物组合物，按480mg/kg给药。
[0035]药物组合物2:贯叶金丝桃:刺五加=50:50(重量百分比)的药物组合物，按480mg/kg给药。
[0036]药物组合物3:贯叶金丝桃:刺五加=54.5:45.5 (重量百分比)的药物组合物，按480mg/kg 给药。
[0037]药物组合物4:贯叶金丝桃:刺五加=62:38(重量百分比)的药物组合物，按480mg/kg给药。
[0038]药物组合物5:贯叶金丝桃:刺五加=65:35(重量百分比)的药物组合物，按480mg/kg给药。
[0039]药物溶液配制:将以上各实验组中的药物或药物组合物中的各组分根据重量配比及小鼠体重计算出总给药剂量后，以蒸馏水为溶剂将其配制成溶液，溶剂体积为10ml/kg
小鼠体重。
[0040]按照上述实验分组及各组药物溶液体积，对小鼠进行灌胃给药，每日2次，连续灌胃给药7次。于末次灌胃后0.5h，将小鼠用乙醚浅表麻醉，迅速结扎双侧颈总动脉和迷走神经，观察并记录各组的小鼠存活时间(s)，结果见表1。
[0041]3.实验结果
[0042]表1药物组合物对结扎小鼠双侧颈总动脉及迷走神经所致脑缺血后存活时间的影响(Χ±.s)
[0043]
【权利要求】
1.一种药物组合物在制备预防或治疗脑卒中药物中的用途，所述药物组合物含有贯叶金丝桃和刺五加。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述药物组合物中贯叶金丝桃和刺五加的重量百分比为:贯叶金丝桃35-65%，刺五加65-35%。
3.根据权利要求2所述的用途，其中所述药物组合物中贯叶金丝桃和刺五加的重量百分比为:贯叶金丝桃50-65%，刺五加50-35%。
4.根据权利要求3所述的用途，其中所述药物组合物中贯叶金丝桃和刺五加的重量百分比为:贯叶金丝桃54.5%，刺五加45.5%。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的用途，其特征在于所述脑卒中为缺血性脑卒中。
6.权利要求1-4的中任意一项所述的药物组合物与药学上可接受的载体或赋形剂制成药物制剂。
7.根据权利要求6所述的药物制剂，其特征在于所述的药物制剂为口服制剂。
8.根据权利要求7所述的药物制剂， 其特征在于所述口服制剂为胶囊、片剂、颗粒剂。
【文档编号】A61K36/254GK103768114SQ201210405870
【公开日】2014年5月7日 申请日期:2012年10月23日 优先权日:2012年10月23日
【发明者】柯潇, 董庆, 高小平 申请人:成都康弘药业集团股份有限公司