吡咯并三嗪类衍生物在预防或治疗乙肝病毒感染中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及化咯并=嗦类衍生物在预防或治疗乙肝病毒感染中的应用，属于制药 领域。
【背景技术】
[0002] 乙型肝炎化B)是由乙型肝炎病毒化BV)引起的并具有高传染性的世界性疾病。乙 肝病毒由核屯、和包围核屯、的外壳两个部分组成。内部的核屯、部分包括了双链脱氧核糖核酸 (DNA)和DNA聚合酶(病毒复制所需的酶）。而外部的外壳则由S种蛋白组成，分别命名为L蛋 白、M蛋白和S蛋白。病毒的复制是在受感染的肝细胞内完成，首先病毒进入肝细胞后，脱去 衣壳，病毒DNA进入肝细胞核并在DNA聚合酶的作用下复制DNA，然后含有双链DNA的内壳裹 上外壳，成为病毒体，最后从肝细胞浆释放至肝细胞外。病毒的外壳蛋白即乙肝表面抗原由 于过量产生W及不断的释放入血，因此可通过检测测试者血清中的表面抗原含量作为一种 判断是否感染的免疫学方法。
[0003] 乙肝病毒的传播途径多种多样，包括食物、体液传播、接触性传播、医源性传播、胎 源性传播等。据统计，大约有10%的急性乙肝患者会转变成慢性肝炎。全世界大约有20亿的 乙肝感染者，其中有3亿5千万为慢性肝炎患者并可能转变成肝硬化和肝细胞癌。
[0004] 目前治疗乙肝的方法就是注射a干扰素和给入核巧类聚合酶抑制剂，例如恩替卡 韦和阿德福韦，W及非核巧类聚合酶抑制剂(順TI),例如拉米夫定。从目前的治疗效果看， 运些治疗方法治疗周期长、副作用大且会出现耐药性，因此迫切需要研制可针对病毒周期 不同阶段的新的更好的制剂或方法。
[0005] 其中，一种可行的方法就是抑制病毒进入肝细胞。研究表明，外壳L蛋白的前S蛋白 区为感染的关键部位。基于运一发现和此处蛋白的结构，设计研发了全新的多肤类药物， Myrcludex B。在体外实验中，用运种多肤药物预处理后可有效防止病毒进入细胞。进一步 表明在病毒进入细胞的最初阶段，病毒外壳蛋白的运一区域可与肝细胞的特定部位发生作 用。还有研究表明，免疫抑制剂环抱素 A会通过各种机制抑制乙肝病毒的活性，其中一种可 能的机制为阻断钢离子/牛横胆酸共转运蛋白（NTCP)的转运，而NTCP是将胆酸从血液中转 运进入肝细胞的关键转运体。
[0006] 转运体是决定大多数药物和内源性物质转运和分布的关键性膜蛋白。钢离子/牛 横胆酸共转运蛋白（NTCP)就是胆酸盐的肝肠循环中的关键性膜蛋白转运体。NTCP蛋白由 335个氨基酸组成，具有9个跨膜多肤链，属于膜蛋白中可溶性物质载体(SLC)超家族。
【发明内容】
[0007] 本发明所要解决的技术问题是针对技术现状提供一种化咯并=嗦类衍生物在预 防或治疗乙肝病毒感染中的应用。
[0008] 本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为:一种化咯并=嗦类衍生物在预防 或治疗乙肝病毒感染中的应用，所述化咯并=嗦类衍生物的结构如式I所示：
[0010] 式I中，Ri的结构如式II或式HI所示：
[001引式^和式III中，R3、R4分别选自F、Cl、Br、I、硝基、横酸基、径基、簇基、氨基、甲氧 基、酷胺基或氯基；
[001引式忡，R2的选自如下基团：
[001引其中，Rs、R6分别为烧控基、締控基、烘控基、甲氧基或甲氨基，X为大于等于零且小 于等于5的整数，y为大于等于零且小于等于4的整数。
[0016] 拥有上述结构的化咯并S嗦类衍生物可充当NTCP抑制剂，运些衍生物既是IGF-IR 激酶抑制剂，也是NTCP转运体的抑制剂从而可阻断牛胆横酸进入肝细胞。运类NTCP抑制剂 可阻断NTCP的转运活性，因此可用于预防乙肝疾病、肝硬化和肝细胞癌的发生。
[0017] 其中，所述化咯并=嗦类衍生物的结构如式IV所示：
[0020] 上述结构的化合物为BMS-754807,结构为（S)-1-[4-[(5-环丙基-IH-化挫-3-基） 氨基M咯并[2，1-F][1，2,4]S嗦-2-基]-N-(6-氣-3-化晚基)-2-甲基化咯烧-2-甲酯胺。 其能更有效地阻断牛胆横酸进入肝细胞。
[0021] 其中，所述化咯并=嗦类衍生物与其他能预防和/或治疗乙肝病毒感染的药物配 合，形成药物组合物，所述药物组合物用于预防和/或治疗乙肝病毒感染。
[0022] 因上述结构的化咯并=嗦类衍生物能预防哺乳类动物感染乙肝病毒，所W，上述 的给药方案包含了一种或多种具有类似BMS-754807结构特点的并有治疗效果的化合物，其 治疗效果更佳。
[0023] 其中，所述其他能预防和/或治疗乙肝病毒感染的药物为干扰素 a、乙肝病毒的闭 合环状DNA转录调节剂、CCC DNA生物合成抑制剂、天然抑制剂W及乙肝病毒外壳组装抑制 剂中的一种或两种的组合。
[0024] 其中，所述天然抑制剂为木兰醇和/或青叶胆提取物。
[0025] 与现有技术相比，本发明的优点在于：化咯并S嗦类衍生物可通过抑制NTCP转运 体活性来抑制牛胆横酸进入肝细胞，因此运些化合物也可用于抑制乙肝病毒进入肝细胞， 从而预防病毒感染和乙肝疾病的发生。本化咯并=嗦类衍生物可用于预防在乙肝早期阶段 时接触病毒的人群感染乙肝W及治疗早后期的乙肝疾病。
【附图说明】
[0026] 图1为本发明实施例BMS-754807对批次为FY015的人肝细胞NTCP抑制的抑制曲线；
[0027] 图2为本发明实施例BMS-754807对批次为ZS006的人肝细胞NTCP抑制的抑制曲线； [002引图3为本发明实施例BMS-754807对批次为FY016的人肝细胞NTCP抑制的抑制曲线；
[0029] 图4为本发明实施例BMS-754807在hNTCP-293细胞上摄取的Km和Vmax;
[0030] 图5为本发明实施例BMS-754807对人NTCP-293抑制的抑制曲线。
【具体实施方式】
[0031] W下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
[0032] 本实施例建立了一种抗乙肝病毒的药物的鉴定方法，为的是考察运些药物是否通 过祀向作用于病毒和牛胆横酸进入肝细胞的通道。进而为了通过体外实验测试化合物抑制 牛胆横酸进入肝细胞的能力来鉴定和研发可阻断乙肝病毒进入细胞的且口服有效的药物。 该体外实验模型须能表达正常生理水平的NTCP转运体，并包含无抑制剂组和有抑制剂组从 而比较抑制剂对牛胆横酸肝摄取的影响。
[0033] 本实施例又提供了一种评估在特定培养条件下肝细胞转运体功能的方法。该方法 是W新鲜或冻存的人、大鼠、黑猩猩或者树駒的肝细胞为模型，采用摄取实验研究待测化合 物对牛胆横酸的肝摄取的影响，并可计算有抑制效果的化合物的半数抑制浓度(I巧0)。
[0034] 本实施例还提供了一种化合物的随机筛选或者对化合物进行有选择性的结构分 析的方法。此方法是通过W悬浮或贴壁肝细胞为模型，测试化合物对肝摄取的抑制能力来 筛选可抑制NTCP活性的化合物。而对潜在抑制剂的结构分析可筛选一组类药化合物来进行 悬浮或贴壁细胞对牛胆横酸肝摄取的抑制实验，运样有利于提高筛选效率和总结规律。
[0035] 本实施例设及一种化咯并=嗦类衍生物在预防或治疗乙肝病毒感染中的应用，本 实施例具体采用的化咯并S嗦类衍生物为BMS-754807，CAS号为1001350-96-4,化学名为 (S)-1-[4-[(5-环丙基-IH-化挫-3-基)氨基]邮咯并[2，l-F][l，2,4]S嗦-2-基]-N-(6-氣-3-化晚基)-2-甲基化咯烧-2-甲酯胺，其结构式如下：
[0037] 下面逐步对BMS-754807的性能进行分析。
[003引 一、BMS-754807对NTCP转运体的抑制作用
[0039] 1、W大鼠肝细胞为模型，研究BMS-754807对大鼠 NTCP的抑制作用。
[0040] 肝摄取抑制实验的方法具体为:采用新鲜制备的雄性Sprague-Dawl巧大鼠肝细胞 为研究载体，W浓度范围为100到0.化M的化合物BMS-754807作用于悬浮的或者贴壁的大鼠 肝细胞，WNTCP特异性底物気代的牛胆横酸钢为检测指标，研究化合物BMS-754807对肝摄 取的抑制。结果显示该化合物在此浓度范围内可不同程度的抑制牛胆横酸进入肝细胞。W BMS-754807的作用浓度和对应的抑制率做曲线，从而计算出对悬浮和贴壁细胞的半数抑制 浓度（I巧0)分别为51.1和1.9iiM。
[0041 ] 2、W人肝细胞为模型，研究BMS-754807对人NTCP的抑制作用。
[0042]方法同大鼠肝细胞模型方法，W新鲜制备的人肝细胞通过=明治培养24h后，加入 浓度范围为100到0.1 yM的化合