专利名称：可用作蛋白激酶抑制剂的噻吩甲酰胺的制作方法
技术领域：
多种蛋白激酶组成结构相关的酶的大家族，这些酶的作 用是控制细胞中多种信号转导处理(参见Hardie, G and Hanks, S. T7 e 尸rafe/"〖Z"ose Fa加So喊/ //, Academic Press, San Diego, CA: 1995)。据认为，由于它们的结构保守性和催化功能，蛋白激酶由共同 祖基因进化产生。几乎所有激酶含相似的250-300氨基酸催化域。可
按照它们进行磷酸化的相应底物(例如蛋白-酪氨酸、蛋白-丝氨酸/苏氨 酸、脂质等)将激酶分为多个家族。已鉴定出通常响应这些激酶家族中 各激酶的序列基元(参见例如Hanks, S.K.， Hunter, T., FASS5丄1995, 9, 576-596; Knighton et al., 1991, 253, 407-414; Hiles et al, Ce//
1992, 70, 419-429; Kunz et al, Cell 1993, 73, 585-596; Garcia-Bustos et al: J 1994, "， 2352-2361)。0005！—般而言，通过将三磷酸核苷的磷酰基转运到涉及信号 途径的蛋白受体上，蛋白激醉介导细胞内信号。这些磷酸化事件起分 子开/关转换的作用，分子开/关转换可调节或调控靶蛋白生物功能。 这些石舜酸化事件最终被触发，以响应多种细胞外和其它刺激。此类刺
激的实例包括环境和化学应激信号(例如休克、热休克、紫外线辐照、 细菌内毒素和H202)、细胞因子(例如白介素-l (IL-l)和肿瘤坏死因子-a CTNF-a),和生长因子(例如粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF) 和成纤维细胞生长因子(FGF))。细胞外刺激可影响一种或多种细胞反 应，这些反应与细胞生长、迁移、分化、激素分泌、转录因子激活、 肌肉收缩、葡萄糖代谢、蛋白合成控制、细胞周期的保留和调节有关。
00061 许多疾病与由上述蛋白激酶-介导的事件引发的异常细 胞反应有关。这些疾病包括但不限于癌症、自身免疫性疾病、炎性疾 病、骨病、代谢疾病、神经和神经变性疾病、心血管疾病、过壽i:和哮 喘、早老性痴呆和激素相关疾病。因此，已在药物化学中付出了大量 努力，以寻找作为有效治疗药物的蛋白激酶抑制剂。
00071 马球样(Polo-like)激酶(Plk)属于丝氨酸/苏氨酸激酶家 族，这些激酶在从酵母到人的不同种之间高度保守(在Lowery DM et al., Owcoge"e 2005， 24;248-259中的综述)。Plk激酶在细胞周期中具有 多种作用，这些作用包括控制进入有丝分裂和通过有丝分裂递进。
00081 Plkl是Plk家族成员中被最充分表征的一员。Plkl在有 丝分裂指数高的组织中广泛表达，且最丰富。在有丝分裂中，Plkl的 蛋白水平升高并达到峰值(Hamanaka， R et al., J所o/ C/ em 1995， 270, 21086-21091)。据^Ji, Plkl的底物是已知调节进入有丝分裂和通过 有丝分裂递进的所有分子，它们包括CDC25C、细胞周期蛋白B、 p53、 APC、 BRCA2和蛋白酶体。在多种类型的癌症中，Plkl上调，表达 水平与疾病的严重程度相关(Macmillan, JC et al.,爿朋5W"g Owco/ 2001， S， 729-740)。 Plkl是致癌基因，可转化NIH-3T3细胞(Smkh， MR et al.， 说oc/^m 5Zo/ / ^ Comm朋1997， 23《397-405)。通过siRNA、反义、
13显微注射抗体去除或抑制PM或将Plkl的显性负构件转染到细^^中， 可减少体外肿瘤细胞增殖和生存力(Guan, R et al.， Ca"cw/^j 2005， <15， 2698-2704; Liu, X et al.， Proc Natl Acad Sci U S A 2003， 100, 5789-5794， Fan, Y et al.， ffbrWJ GaWraeWero/ 2005， "， 4596-4599; Lane, HA et al.， JO//说o/1996， "5， 1701-1713)。去除Plkl的肺瘤细胞激活纺锤体关 卡，且在纺锤体形成、染色体排列和分离以及胞质分裂中造成缺陷。 据报道，生存力丧失是诱导凋亡的结果。相反，据报道，正常细胞在 去除Plkl后仍保持生存力。通过siRNA体内剔除Plkl或使用显性负 构件，导致异种移4直才莫型中肿瘤生长抑制或退化。 本文中所述本发明化合物可任选被一个或多个取代基 取代，例如以上一般性所述或通过本发明特定类、亚类和具体化合物 举例说明的那些。应认识到，短语"任选取代的"与短语"取代的或未^皮 取代的"可互换使用。 一般而言，术语"取代"无论位于术语"任选"之前 或之后，均指在给定结构中氢原子团被特定取代基置换。除另有说明 夕卜，任选取代的基团在基团的各可取代位置可具有取代基，且当在任 何给定结构中一个以上的位置可被选自指定基团的一个以上的取代 基取代时，在每个位置中的取代基可相同或不同。本发明设想的取代 基組合优选是导致形成稳定的或化学上可行的化合物的那些取代基 组合。
00181 本文中使用的术语"稳定的"是指为了本文中公开的一个 和多个目的，当经历允许它们的制备、检测、回收、純化和使用的条 件时，基本上未改变的化合物。在某些实施方案中，稳定的化合物或
17化学上可行的化合物是当在40。C或更低温度下保存至少一周时，在无 水分存在或其它化学反应条件下基本上未改变的化合物。 术语"脂环族"(或"碳环"或"碳环基"或"环烷基")是指 完全饱和或含一个或多个不饱和单元的单环CrQ烃或双环C8-C2 烃，但这些烃不是芳族，与分子其余部分有一个连接点，其中在所 述双环环系统中的任何单个环具有3-7个成员。合适的脂环族基团包 括但不限于环烷基和环烯基。具体实例包括但不限于环己基、环丙 烯基和环丁基。
00211 本文中使用的术语"杂环"、"杂环基"或"杂环的，，表示 非芳族单环、双环或三环环系统，其中一个或多个环成员是独立选 择的杂原子。在某些实施方案中，"杂环"、"杂环基"或"杂环的，，基团 具有3-14个环成员，其中一个或多个环成员是独立选自氧、硫、氮 或磷的杂原子，且系统中的各环含3-7个环成员。
00221 合适的杂环包括但不限于3-lH-苯并咪唑-2-酮、3-(1-烷基)-苯并咪唑-2-酮、2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-四氢噻吩基、 3-四氬p塞吩基、2-吗啉代、3-吗啉代、4-吗啉代、2-硫代吗啉代、3-硫 代吗啉代、4-硫代吗啉代、l-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、1-四氢哌溱基、2-四氩哌嗪基、3-四氢哌嗪基、l-旅梵基、2-旅咬基、3-哌"定基、l-吡唑啉基、3-吡唑啉基、4-吡唑啉基、5-吡唑啉基、l,底咬 基、2-旅咬基、3-咪咬基、4-旅咬基、2-噻唑烷基、3-瘗唑烷基、4-噻 唑烷基、l-咪唑烷基、2-咪唑烷基、4-咪唑烷基、5-咪唑烷基、二氢吲 咮基、四氢唤啉基、四氢异会啉基、苯并辟L杂环戊烷(benzothiolane)、 苯并二噻烷和1,3-二氢-咪唑-2-酮。
0023] 环状基团(例如脂环族和杂环)可以是线型稠合环、桥 环或螺环。合钯(n)
TMS三曱基甲硅烷基
TMSI三甲基碘硅烷
TMSC1三曱基氯硅烷
DMF二曱基曱酰胺
EtOAc乙酸乙酯
DMSO二甲亚砜
MeCN乙腈
TFA三氟乙酸
TCA三氯乙酸
ATP三磷酸腺苷
EtOH乙醇
Ph苯基
Me甲基
Et乙基
Bu丁基
DEAD偶氮二羧酸二乙酯
HEPES4-(2-羟基乙基)-l-哌嗪乙磺酸BSA 牛血清白蛋白
DTT 二硫苏糖醇
MOPS 4-吗啉丙磺酸
NMR 核磁共振
HPLC 高效液相色谱
LCMS 液相色谱-质镨
TLC 薄层层析
Rt 保留时间 在其它实施方案中，A环是含l个氮原子的5元芳环。在 其它实施方案中，A环含2个氮原子。在某些实施方案中，A环是吡唑 基、吡咯基或咪唑基。在某些实施方案中，A环是吡哇基。在其它实 施方案中是吡咯基。在还其它实施方案中，是咪唑基。
00431 在某些实施方案中，B环是含0-3个杂原子的5元-6 元芳族单环环，所述杂原子选自O、 N和S。在某些实施方案中，B 环是5元环。在其它实施方案中，B环是6元环。在某些实施方案中， B环与环B'稠合。在某些实施方案中，B'环是含0-3个杂原子的5元 -6元芳族单环环，所述杂原子选自O、 N和S。
0044
在某些实施方案中，,为H、 Q-6脂族基团、Cw脂环 族基团、卤代(CM脂族基团)、-O(卤代C"脂族基团)、C3，6杂环基、 卣基、N02、 CN、 OH、 OR、 SH、 SR、 NH2、 NHR、 N(R)2、 COH、 COR、 CONH2、 CONHR、 CONR2、丽COR、 NRCOR、 NHCONH2、 NHCONHR、丽CON(R)2、 S02NH2、 S02NHR、 S02N(R)2、 NHS02R 或NRS02R。在某些实施方案中，,为H。
200451 在某些实施方案中，jb为H、 d-6脂族基团、(:3.6脂环 族基团、卤代(C"脂族基团)、-O(卤代Cw脂族基团)、(:3.6杂环基、 卣基、N02、 CN、 OH、 OR、 SH、 SR、 NH2、 NHR、 N(R)2、 COH、 COR、 CONH2、 CONHR、 CONR2、丽COR、 NRCOR、 NHCONH2、 NHCONHR、 NHCON(R)2、 S02NH2、 S02NHR、 S02N(R)2、 NHS02R 或NRS02R。以上流程1所示为制备本发明化合物的通用合成路线。在本领域技术人员已知的合适的卣化条件下，将原料3-曱氧基噻吩1二囟化。在合适的酰化条件下，将在2位卣素选择性转化为酯部分，得到2,其中X为卣基。使2的曱tt脱保护，然后在Mitsonobu条件下，将得到的3的3-羟基用合适的官能团衍生化，得到4，其中X为卤基。
或者，将在4的噻吩核的5位上的剩佘囟素转化为交叉偶联基团(CP),然后与ii发生交叉偶联反应，其中X为合适的离去基团，得到5。最后，在合适的酰胺形成条件下，将5的酯部分转化为酰胺，得到本发明化合物。
流程00521以上流程2所示为制备本发明化合物的备选合成路线。使流程1中所述中间体2与i发生交叉偶联反应，其中CP为合适的交叉偶联基团，得到6。或者，使2的噻吩核5位上的卣素转化为适当的交叉偶联基团(CP)，然后与ii发生交叉偶联反应，其中X为合适
26的离去基团，得到6。将6的甲ll^脱保护，然后在Mitsunobu条件下，将得到的7的3-羟基用合适的官能团衍生化，得到5,在合适的酰胺形成条件下，将5转化为酰胺，得到本发明化合物。流程3
<formula>formula see original document page 27</formula>以上流程4所示为制备本发明化合物的通用合成路线，其中A环通过碳原子与噻吩核连接。在Mitsonobu条件下，将原料3-羟基-噻哈-2,5-二曱酸二甲酉旨11 (Fiesselmann, Schipprak C7jew."56，砂，1897-1900)用适当官能团衍生化，得到12。本发明的一个实施方案提供制备式I化合物的方法
其中G为O, W为H， A环、B环、JA、 r和L的定义同本文,该方法包括在合适的酰胺形成条件下，使式5化合物反应
其中G为O， W为Cw脂族基团，A环、B环、JA、 JB和L定义同本文，形成式I化合物。本领域技术人员已知合适的酰胺形成条件，可在"March's Advanced Organic Chemistry"中找到这些条件。合适的酰胺形成条件的实例包括但不限于在NH3/MeOH的存在下将甲酸甲酯
(JA)o-3
280059
一个实施方案还包括在合适的交叉偶联条件下，使式4化合物；
0
。CH3
H O
X^(jB)。-5
4;
其中X为卣素，B环、JB和L定义同本文；与式i化合物偶联的步骤，
(JA)0>3~(^)~CP
i
其中CP为交叉偶联基团，A环和JA定义同本文；形成式5化合物。
10060] 本文中使用的术语"交叉偶联反应"是指其中在金属催化剂的帮助下形成碳-碳键的反应。通常，碳原子中之一与官能团("交叉偶联基团，，)结合，同时其它碳原子与卣素结合。交叉偶联反应的实例包括但不限于Suzuki偶联、Stille偶联和Negishi偶联。 所有这3种偶联条件通常涉及使用催化剂、合适的溶 剂和任选的碱。Suzuki偶联条件涉及使用钇催化剂、合适的碱和合适 的溶剂。合适的钯催化剂的实例包括但不限于PdCl2(PPh3)2 、 Pd(Ph3)4 和PdCl2(dppf)。合适的碱包括但不限于K2C03和Na2C03。合适的溶 剂包括但不限于四氢呋喃、曱苯和乙醇。
00651 Stille偶联条件涉及使用催化剂(通常为钯，但有时为 镍)、合适的溶剂和其它任选的试剂。合适的催化剂的实例包括但不限 于PdCl2(PPh3)2、 Pd(Ph3)4和PdCl2(dppf)。合适的溶剂包括但不限于四 氢呋喃、甲苯和二甲基曱酰胺。 另一个实施方案还包括在合适的O-C键偶联条件下，使 式3化合物
0
H OH
3
其中X为卤基;
31(JB)05
偶联的步骤；其中LG为合适的离去基
团，L、 B环和jB定义同本文；形成式4化合物。合适的离去基团包 括但不限于卣基、三氟甲磺酸酯基、甲磺酸酯基和甲苯磺酸酯基。或 者，可通过Mitsunobu反应，由基团例如OH原位形成LG。合适的 O-C键偶联反应包括但不限于Mitsunobu反应(DEAD/PPh3/THF)和用 强碱例如KOtBu、 NaH或LiAlH4进行筒单的烷基化。本发明一个实施方案提供制备式5化合物的方法
其中G为O， A环、B环、JA、 r和L定义同本文， 该方法包括在合适的O-C键偶联条件下，使下式化合物:
(JA)o>3 人J
与 W^"M反应；其中LG为合适的离去基团，L、 B环
和JB定义同本文；形成式5化合物。 在本领域中熟知药学上可接受的盐。例如，S. M. Berge " a/.在丄尸/2crmacew"ca/&/e"CM， 1977, (56, 1-19中详细论述了药学上可 接受的盐，其通过引用结合到本文中。本发明化合物药学上可接受的 盐包括由合适的无机和有机酸和^5成衍生的那些盐。在化合物最后分离 和纯化期间，可原位制备这些盐。可通过1)使游离形式的纯化化合 物与合适的有机或无机酸反应，2)将由此形成的盐分离，制备酸加成 i卜盐。
本文中使用的术语"PLK介导的病症"表示PLK在其中 起作用的任何疾病或其它有害病症。此类病症包括但不限于增殖疾病 例如癌症、神经变性疾病、自'身免疫性疾病和炎性疾病，以及免疫介 导的疾病。 治疗需要的化合物的确切量因患者而异，取决于患者的 种族、年龄和一般状况；感染的严重程度、具体药物、给药^^式等。 优选将本发明化合物配制为便于给药和剂量均一性的剂量单位形式。 本文中使用的表述"剂量单位形式"是指适合所治疗患者的药物的物理 分离单位。但是，可以理解，本发明化合物和组合物的每日用法须由 主治医师在合理的医学判断范围内决定。对于任何具体患者或生物体 的特定有效剂量水平要取决于多种因素，这些因素包括所治疗的病症 和病症的严重程度；所使用的具体化合物的活性；所使用的具体组合 物；患者的年龄、体重、 一般健康、性别和饮食；给药时间、给药途 径和所使用的具体化合物的排泄途径；疗程；与所用的具体化合物联用或同时使用的药物；和医学领域中熟知的类似因素。本文中使用的 术语"患者"表示动物，优选哺乳动物，最优选人。
0098可通过以下途径给予人和其它动物本发明药学上可接 受的组合物口服、直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如 通过散剂、软膏剂或滴剂)、含服、口腔或鼻喷雾或取决于所治疗感染 严重程度的类似方式。在某些实施方案中，可按约O.Ol mg/kg-约50 mg/kg，优选约lmg/kg-约25mg/kg患者体重/日剂量水平，口服或肠 胃外给予本发明化合物，每日一次或多次，得到需要的疗效。 用于口服给药的液体剂型包括但不限于药学上可接受 的乳液、微乳、溶液、混悬液、糖浆和酏剂。除活性化合物外，液体 剂型可含本领域中常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂；增溶剂和 乳化剂例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯曱醇、苯曱酸爷 酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二曱基曱酰胺、油(尤其棉籽、落花生、玉 米、胚芽、橄榄、蓖麻和芝麻的油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱 水山梨醇的脂肪酸酯及其混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物也可 包含助剂例如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香精。
00100可按照已知技术，用合适的分散或湿润剂和悬浮剂配制 注射制剂，例如无菌注射水或油混悬剂。无菌注射制剂也可是用无毒 肠胃外可接受的稀释剂或溶剂配制的无菌注射溶液、混悬液或乳液， 例如以1,3-丁二醇为溶剂的溶液。其中，可使用的可4妄受的溶々某和溶 剂是水、林格氏液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。另外，无菌非挥发性 油通常用作溶剂或悬浮介质。因此，可使用任何非刺激性非挥发油， 它们包括合成甘油单酯或甘油二酯。另外，脂肪酸例如油酸还用于制 备注射剂。
1001011例如通过除菌滤器或通过加入无菌固体组合物形式的 杀菌剂，将注射剂灭菌，临用前，可将无菌固体组合物溶于或分散于 无菌水或其它无菌注射^h质。
为延长本发明化合物的作用，通常需要延緩通过皮下或 肌内注射的化合物的吸收。可通过使用水溶性差的结晶或无定形物质 的液体混悬液实现。然后化合物的吸收速度取决于其溶出速度，溶出 速度又可取决于结晶大小和晶型。或者，可通过将化合物溶于或悬浮 于油溶媒，完成延迟吸收的肠胃外给药的化合物形式。通过在可生物 降解聚合物例如聚丙交酯-聚乙交酯中形成化合物的微嚢骨架制备注 射贮库形式。根据化合物与聚合物的比例和具体使用的聚合物的性 质，可控制化合物的释放速度。其它可生物降解的聚合物的实例包括 聚(原酸酯)和聚(酐)。也可通过用与身体組织相容的脂质体或微乳捕获 化合物，制备贮库注射制剂。
00103用于直肠或阴道给药的组合物优选为栓剂，可通过使本 发明化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体混合，制备栓剂，例如在
放活性化合物的可可豆酯、聚乙二醇或栓剂蜡。
00104用于口服给药的固体剂型包括胶嚢剂、片剂、丸剂、散 剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性化合物与至少一种惰性药学上 可接受的赋形剂或载体例如柠檬酸钠或磷酸氢二钙和/或以下物质混 合a)填充剂或补充剂例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅 酸，b)粘合剂例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、 蔗糖和阿拉伯胶，c)保湿剂例如甘油，d)崩解剂例如琼脂-琼脂、碳 酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶液阻滞 剂例如石蜡，f)吸收促进剂例如季铵化合物，g)湿润剂例如鲸蜡醇 和甘油单硬脂酸酯，h)吸收剂例如高呤土和皂土，和i)润滑剂例如 滑石粉、硬脂S交钩、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠及其 混合物。在胶嚢剂、片剂和丸剂的情况下，剂型也可包含緩冲剂。
001051相似种类的固体成分也可用作软和硬填充明胶月交嚢中 的填充剂，在此类胶嚢中使用此类赋形剂如乳糖或奶糖(milk sugar)和 高分子量聚乙二醇等。可用包衣剂和壳例如肠溶包衣剂和药剂领域中
42熟知的其它包衣剂制备固体剂量形式的片剂、糖锭剂、胶嚢剂、丸剂
和颗粒剂。它们可任选含遮光剂并也可为以下组合物该组合物仅在 或优先在肠道的某个部分任选以緩释方式释^:活性成分。可使用的包
埋成分的实例包括高分子物质和蜡。相似种类的固体成分也可用作软 和硬填充明胶胶嚢中的填充剂，此类胶嚢使用此类赋形剂如乳糖或奶
糖和高分子量聚乙二醇等。优选，用该方法治疗或预防选自例如以下癌症的病症:乳腺、结肠、前列腺、皮肤、胰腺、脑、泌尿生殖道、淋巴系统、胃、喉的癌症和包括肺腺癌和小细胞肺癌在内的肺癌；中风、糖尿病、骨髓瘤、肝肿大、心肥大、早老性痴呆、嚢性纤维变性和病毒性疾病，或上述任何具体疾病。用Bruker DPX 400仪，在400 MHz下记录^-NMR图 谱。如下制备并分析以下式I化合物。 实施例1:
3-[l-(2-氯-苯基)-乙氧基-5-咪唑-l-基-噻吩-2-曱酰胺(I-l)
48方法A: 3-羟基-5-咪唑-l-基-噢吩-2-甲酸甲酯-5-咪唑-1-基-噻吩-2-甲酸曱 酯(265 mg， 0.73 mmol, 1.0当量)悬浮于7M丽3的MeOH溶液(lO mL)， 在压力试管中加热至80。C，保持3天。将溶剂真空除去，产物经柱层 析(2。/。-5。/。MeOH/EtOAc)分离，然后用乙醚研磨，得到标题化合物， 为奶油色粉末(163 mg, 0.47腿ol, 64%); NMR (400 MHz, d-6 DMSO) S1.71 (3H, d)， 5.89 (1H, q), 7.03 (1H, br s), 7.11 (1H, s), 7.23 (1H, s), 7.36-7.42 (2H, m), 7.49 (1H, dd), 7.63 (1H d), 7.66 (1H, dd), 7.78 (1H, brs), 8.17(1H, s)
实施例2:
5-(5-氨基-2界吡唑-3-基)-3-[ 1-(2-氯-苯基)-乙氧基-噻吩-2-甲酰胺
(1-2)
50方法D: 3-[l-(2-氯-苯基)-乙氡基j-噻吩-2,5-二曱酸二曱酯在0。C下，在氮气下，搅拌下，将偶氮二羧酸二乙酯(1.29 g, 7.41 mmol, 1.3当量)加入1-(2國氯-苯基)-乙醇(893 mg, 5.70 mmol, 1.0 当量)、三苯基膦(1.94 g, 7.41 mmol, 1.3当量)和3-羟基噻吩-2，5-二甲酸 二曱酯(1.23 g, 5.70 mmol, 1.0当量)的无水THF (20 mL)溶液，让反应 物升温至环境温度过夜。将粗反应混合物真空浓缩，经柱层析(10% EtOAc/石油醚)纯化，得到副标题化合物，为白色固体(1.94 g, 5.6 mmol， 93%); NMR (400 MHz, CDC13) SI.71 (3H， d), 3.89 (3H, s)， 3.95 (3H, s), 5.80 (1H, q), 7.20-7.32 (3H, m), 7.39 (1H, d), 7.66 (1H, d).
方法E: 3-ll-(2-氯-笨基)-乙錄l-5-絲乙酜基-瘗吩-2-甲酸甲酯
-噻吩-2,5-二甲酸二曱酯(1.94 g, 5.62 mmol, 1.0当量)，将反应 物加热回流过夜。将反应物冷却至环境温度，用水淬灭，使其在EtOAc (lOOmL)和盐水(lOOmL)之间分配。将水相用EtOAc (2x50 mL)萃取， 将合并的有机萃取液干燥(MgS04),真空浓缩。粗产物经柱层析(50% EtOAc/石油醚)纯化，得到副标题化合物，为白色固体(115 mg, 0.32 mmol, 6%);H NMR (400 MHz, d画6 DMSO) 51,61 (3H， d), 3.82 (3H, s), 4.62-4.74 (2H, m). 5.88 (1H, q), 7.35 (1H, t), 7.40 (1H, t), 7.48 (1H, d), 7.73 (1H, d), 7.91 (1H, s).
方法F: 5-(5-氨基-2仏吡唑-3-基)-3-[l-(2-氯-苯基)-乙氧基卜噻吩 -2-甲酸甲酯
00142搅拌下，将水合肼(17.4 mg, 0.35 mmol, 1.1当量)加入 3-[1-(2-氯苯基)-乙氧基]-5-絲乙酰基-噻吩-2-甲酸曱酯(115 mg, 0.32 mmol， 1.0当量)的EtOH (4 mL)溶液中，将反应物在80。C下加热过夜。 将反应混合物真空浓缩，经柱层析(70/9/1 DCM/MeOH/NH3水溶液)纯 化，得到副标题化合物，为白色固体(35 mg, 0.09 mmol, 29%);
方法G: 5-(5-KJ^2仏吡唑-3-基)-3-[l-(2-氯-苯基)-乙l^l-噻吩 -2-甲酰胺N—NH O
00143]使5-(5-M-2/f-吡唑-3-基)-3-[l-(2-氯苯基)-乙氧基p塞 吩-2曙甲酸甲酯(47 mg, 0.124 mmol, 1.0当量)悬浮于7M NH3的MeOH 溶液(6 mL)，在压力试管中加热至IO(TC，保持3天。将溶剂真空除 去，产物经柱层析(70/9/lDCM/MeOH/NH3水溶液)分离，得到标题化 合物，为灰白色固体(15 mg， 0.041 mmol, 33%); ^NMR (400 MHz， d-4 MeOH) 51.73 (3H, d), 5.66 (1H, br s), 5.93 (1H, q), 6.88 (1H, s), 7.27-7.38 (2H, m), 7.44 (1H， d), 7.54 (1H, d).
名称LCMS 质量+HPLC Rt(分钟)
I曙l3-[1-(2-氯-苯基)-乙氧基]-5-咪唑-1-基J塞吩-2-曱酰胺348.29.8
1-25-(5-氨基-27/-吡唑-3-基)-3-[1-(2-氯-苯基)-乙^]-噻吩-2-曱酰胺363.29.6
实施例4: PLK测定ATP (136mCi 33P ATP/mmol ATP, Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和 10pM肽(SAM68蛋白A332-443)。在25。C下，在15nMPlkl (A20-K338)
53的存在下进行测定。制备含除ATP和目的试验化合物外的上列所有试 剂的测定贮备緩冲液。将30^L贮备液放入96孔板中，然后按一式两 份(终DMSO浓度为5%),加入2|iL含系列稀释浓度的试验化合物的 DMSO贮备液(通常起始浓度为IO^iM终浓度，按2倍稀释倍数进行系 列稀释)。将板在2S。C下预温育10分钟，然后通过加入8pL [Y -33P]ATP (终浓度50pM)起动反应。将所有数据点的平均背景值扣除后，通过用Prism软件 包(Macintosh, GraphPad Software的GraphPad Prism 3.0cx片反本，San Diego California, USA)对初始速率数据进行非线性回归分析，计算 Ki(叩p)数据。
Plkl抑制测定
100148用放射性磷酸盐结合测定筛选具有抑制Plkl能力的化 合物。在25mM HEPES (pH 7.5)， 10mM MgCl2, 0.1% BSA和2mM DTT 的混合物中进行测定。底物终浓度为150nM[Y-33P]ATP(115mCi33P ATP/mmol ATP, Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和 300pM肽(KKKISDELMDATFADQEAK)。在25°C下，在4nM Plkl 的存在下进行测定。制备含除ATP和目的试验化合物外的上列所有试 剂的测定贮备緩冲液。将30^iL贮备液放入96孔板中，然后按一式两 份(终DMSO浓度为5%),加入2pL含系列稀释浓度的试验化合物的 DMSO贮备液(通常起始浓度为10pM终浓度，按2倍稀释倍数进行系
54列稀释)。将板在25。C下预温育10分钟，然后通过加入8jhL [y-33P]ATP
(终浓度150^M)起动反应。用放射性磷酸盐结合测定筛选具有抑制Plk2能力的化 合物。在25mM HEPES (pH 7.5), 10mM MgCl2, 0.1% BSA和2mM DTT 的混合物中进行测定。底物终浓度为200^iM [y-33P]ATP (57mCi 33P ATP/mmol ATP, Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和 300pM肽(KKKISDELMDATFADQEAK)。在25。C下，在25nM Plk2 的存在下进行测定。制备含除ATP和目的试验化合物外的上列所有试 剂的测定贮备緩冲液。将30pL贮备液放入96孔板中，然后按一式两 份(终DMSO浓度为5%),加入2pL含系列稀释浓度的试验化合物的 DMSO贮备液(通常起始浓度为10nM终浓度，按2倍稀释倍数进行系 列稀释)。将板在25。C下预温育10分钟，然后通过加入8pL [，33P]ATP (终浓度200nM)起动反应。
ATP (60mCi 33P ATP/mmol ATP, Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和 10|iM月太 (SAM68蛋白A332-443)。在25。C下，在5nM Plk3 (S38-A340)的存在 下进行测定。制备含除ATP和目的试验化合物外的上列所有试剂的测 定贮备緩冲液。将30pL贮备液放入96孔板中，然后按一式两份(终 DMSO浓度为5%),加入2pL含系列稀释浓度的试验化合物的DMSO 贮备液(通常起始浓度为10pM终浓度，按2倍稀释倍数进行系列稀 释)。将板在25。C下预温育10分钟，然后通过加入8pL [y-33P]ATP (终 浓度75pM)起动反应。用放射性磷酸盐结合测定筛选具有抑制Plk4能力的化 合物。在8mM MOPS (pH 7.5), 10mM MgCl2, 0.1% BSA和2mM DTT 的混合物中进行测定。底物终浓度为15|iM [y-33P]ATP (227mCi 33P ATP/mmol ATP， Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals)禾口 300pM肽(KKKMDATFADQ)。在25。C下，在25nM Plk4的存在下进 行测定。制备含除ATP和目的试验化合物外的上列所有试剂的测定贮 备緩冲液。将30^L贮备液放入96孔板中，然后按一式两份(终DMSO 浓度为5%)，加入2pL含系列稀释浓度的试验化合物的DMSO贮备 液(通常起始浓度为l(HiM终浓度，按2倍稀释倍数进行系列稀释)。 将板在25。c下预温育10分钟，然后通过加入8pL [y-33P]ATP (终浓度 15pM)起动反应。
180分钟后，通过加入10(^iL0.14M磷酸将反应终止。 用100(iL0.2M磷酸将多网磷酸纤维素过滤器96孔板(Millipore,分类 号MAPHN0B50)预处理，然后加入125^L终止反应的测定混合物。 将板用4x200pL 0.2M》寿酸漂洗。干燥后，将lOO^L Optiphase 'SuperMix'液体闪烁混合物(Perkin Elmer)加入孔中，然后进行闪烁计 数(1450 Microbeta液体闪烁计数器，Wallac)。
[00159将所有数据点的平均背景值扣除后，通过用Prism软件 包(Macintosh, GraphPad Software的GraphPad Prism 3.0cx版本,San
57Diego California, USA)对初始速率数据进行非线性回归分析，计算 Ki(app)数据。
权利要求
1. 一种式I化合物其中R1为H、C1-6脂族基团或C3-6脂环族基团；G为-C(R)2-或-O-；L为任选被0-3个JL取代的C0-3脂族基团；A环为含1-2个氮原子的5元芳族单环环；A环任选被0-3个JA取代；B环为含0-3个杂原子的5元-6元芳族单环环，所述杂原子选自O、N和S；B环任选被0-5个JB取代，且任选与B′环稠合；B′环为含0-3个杂原子的5元-8元芳族或非芳族单环环，所述杂原子选自O、N和S；B′环任选被0-4个JB′取代；JA、JB和JB′各自独立为C1-6卤代烷基、卤基、NO2、CN、Q或-Z-Q；Z独立为C1-6脂族基团，其中0-3个亚甲基单元任选被以下基团置换-NR-、-O-、-S-、-C(O)-、-C(＝NR)-、-C(＝NOR)-、-SO-或-SO2-；各Z任选被0-2个JZ取代Q为H；C1-6脂族基团；具有0-3个杂原子的3元-8元芳族或非芳族单环环，所述杂原子独立选自O、N和S；或具有0-5个杂原子的8元-12元芳族或非芳族双环环系统，所述杂原子独立选自O、N和S；各Q任选被0-5个JQ取代；JL和JZ各自独立为H、卤基、C1-6脂族基团、C3-6脂环族基团、NO2、CN、-NH2、-NH(C1-4脂族基团)、-N(C1-4脂族基团)2、-OH、-O(C1-4脂族基团)、-CO2H、-CO2(C1-4脂族基团)、-O(卤代C1-4脂族基团)或卤代(C1-4脂族基团)；各JQ独立为M或-Y-M；各Y独立为未被取代的C1-6脂族基团，其中0-3个亚甲基单元任选被以下基团置换-NR-、-O-、-S-、-C(O)-、-SO-或-SO2-；各M独立为H、C1-6脂族基团、C3-6脂环族基团、卤代(C1-4脂族基团)、-O(卤代C1-4脂族基团)、C3-6杂环基、卤基、NO2、CN、OH、OR′、SH、SR′、NH2、NHR′、N(R′)2、COH、COR′、CONH2、CONHR′、CONR′2、NHCOR′、NR′COR′、NHCONH2、NHCONHR′、NHCON(R′)2、SO2NH2、SO2NHR′、SO2N(R′)2、NHSO2R′或NR′SO2R′；R为H或未被取代的C1-6脂族基团；R′为未被取代的C1-6脂族基团；或两个R′基团和它们连接的原子一起形成未被取代的具有0-1个杂原子的3元-8元非芳族单环环，所述杂原子独立选自O、N和S。
2. 权利要求l的化合物，其中G为-C(R)2-。
3. 权利要求l的化合物，其中G为O。
4. 权利要求l-3中任一项的化合物，其中W为H。
5. 权利要求1 -4中任一项的化合物，其中A环为吡唑基、吡p各基或 咪唑基。
6. 权利要求5的化合物，其中A环为吡唑基。
7. 权利要求5的化合物，其中A环为吡咯基。
8. 权利要求5的化合物，其中A环为咪唑基。
9. 权利要求l-8中任一项的化合物，其中B环为含0-2个氮原子的6 元芳环。
10. 权利要求l-9中任一项的化合物，其中B环与B'环稠合。
11. 权利要求10的化合物，其中B'环为含0-3个杂原子的5元-6元芳 环，所述杂原子选自O、 N和S。
12. 权利要求l-ll中任一项的化合物，其中JA为H、 Cw脂族基团、C3—6脂环族基团、卤代(Cw脂族基团)、-O(卤代CM脂族基团)、Cw杂环基、卣基、N02、 CN、 OH、 OR、 SH、 SR、 NH2、 NHR、 N(R)2、 COH、 COR、 CONH2、 CONHR、 CONR2、 NHCOR、 NRCOR、 NHCONH2、 NHCONHR、 NHCON(R)2、 S02NH2、 S02NHR、 S02N(R)2、 NHS02R 或NRS。2R。
13. 权利要求12的化合物，其中JA为H。
14. 权利要求1-13中任一项的化合物，其中jB为H、 d-6脂族基团、C^6脂环族基团、卤代(Cw脂族基团)、-O(卤代C"脂族基团)、C3—6杂环基、卣基、N02、 CN、 OH、 OR、 SH、 SR、 NH2、 NHR、 N(R)2、 COH、 COR、 CONH2、 CONHR、 CONR2、 NHCOR、 NRCOR、 NHCONH2、 NHCONHR、 NHCON(R)2、 S02NH2、 S02NHR、 S02N(R)2、 NHS02R 或NRS02R。
15. 权利要求1-14中任一项的化合物，其中jB'为H、 d-6脂族基团、C3—6脂环族基团、卤代(Cw脂族基团)、-O(卤代C"脂族基团)、C3—6杂环基、囟基、N02、 CN、 OH、 OR、 SH、 SR、 NH2、 NHR、 N(R)2、 COH、 COR、 CONH2、 CONHR、 CONR2、丽COR、 NRCOR、 NHCONH2、 NHCONHR、 NHCON(R)2、 S02NH2、 S02NHR、 S02N(R)2、 NHS02R 或NRS02R。
16. 以下化合物1-2
17. —种组合物，所述組合物包含权利要求1-16中任一项的化合 物和药学上可接受的载体、助剂或溶4某。
18. —种在患者中抑制蛋白激酶活性的方法，所述方法包括给予 所述患者a) 权利要求17的组合物；或b) 权利要求1-16中任一项的化合物。
19. 一种在生物样品中抑制蛋白激酶活性的方法，所述方法包括 使所述生物样品与以下物质接触a) 权利要求17的组合物；或b) 权利要求1-16中任一项的化合物。
20. 权利要求18或权利要求19的方法，其中所述蛋白激酶为PLK。
21. 权利要求20的方法，其中所述蛋白激酶为PLK1。
22. —种在患者中治疗以下病症的方法增殖病症、神经变性病 症、自身免疫性病症、炎性病症或免疫介导的病症，所述方法包括给 予患者以下物质的步骤a) 权利要求17的组合物；或b) 权利要求1-16中任一项的化合物。
23. 权利要求18或权利要求22的方法，所述方法包括给予所述患 者选自以下的其它治疗药物化疗或抗增殖药物、抗炎药物、免疫调 节或免疫抑制药物、神经营养因子、治疗心血管疾病的药物、治疗破 坏性骨病的药物、治疗肝病的药物、抗病毒药物、治疗血液病的药物、 治疗糖尿病的药物或治疗免疫缺陷疾病的药物，其中所述其它治疗药物适合所治疗的疾病；和 将所述其它治疗药物和所述组合物作为单一剂量形式一起给予， 或作为多剂量形式的一部分与所述组合物分别给予。
24. —种在患者中治疗黑素瘤、骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、成神 经细胞瘤或癌症的方法，所述癌症选自结肠癌、乳腺癌、胃癌、卵巢 癌、宫颈癌、肺癌、中枢神经系统(CNS)癌、肾癌、前列腺癌、膀胱 癌或胰腺癌，其中所述方法包括给予所述患者a)权利要求17的组合物；或
25. —种在患者中治疗癌症的方法，其中所述方法包括给予所述患者a) 权利要求17的组合物；或b) 权利要求1-16中任一项的化合物。
26. 权利要求25的方法，其中所述方法包括用以下物质通过抑制 PLK破坏癌细胞有丝分裂的步骤a) 权利要求17的组合物；或b) 权利要求1-16中任一项的化合物。
27. —种制备式I化合物的方法其中G为O， W为H,且A环、B环、JA、 jB和L同权利要求l-16中 任一项定义，所述方法包括在合适的酰胺形成条件下，使式5化合物反应 <formula>formula see original document page 6</formula>其中A环、B环、JA、 JB和L同权利要求1-16中任一项定义， 形成式I化合物。
28.权利要求27的方法，所述方法还包括在合适的交叉偶联条件 下，使式4化合物；b)权利要求1-16中任一项的化合物。4其中X为面基，且B环、JB和L同权利要求1-16中任一项定义; 与式i化合物偶联(JA)M-a卜cp其中CP为交叉偶联基团，且A环和r同权利要求1 -16中任一项定义;形成式5化合物的步骤。
29.权利要求27的方法，所述方法还包括在合适的偶联基团形成 条件下，使式4化合物；ox、,s、h o、B >"(JB)o_54其中X为卤基，且B环、JB和L同权利要求1-16中任一项定义；与偶联基团前体偶联，形成式5a化合物的步骤ocp、,\\ 、och3h oB )~(JB)0-55a其中CP为交叉偶联基团，且B环、jB和L同权利要求l-16中任一项定义。
30.权利要求29的方法，所述方法还包括在合适的交叉偶联条件 下，使式5a化合物与式ii化合物偶联(JA)o-3~^Vx其中X为合适的离去基团，且A环和JA同权利要求1 -16中任一项中 定义；形成式5化合物的步骤，其中L、 A环、B环、JA和JB同权利要求 l-16中任一项定义。
31.权利要求28或权利要求29的方法，所述方法还包括在合适的 O-C键偶联条件下，使式3化合物其中LG为合适的离去基团，且L、 B环和JB同权利要求1-16中任一 项定义；形成式4化合物的步骤。
32. —种制备式I化合物的方法I其中G为O， W为H,且A环、B环、JA、 JB和L同权利要求1-16中 任一项定义，所述方法包括在合适的O-C键偶联条件下，使式7化合物其中X为卣基;反应；其中LG为合适的离去基团，且L、 B环和JB同权利要求1-16中任一 项中定义；形成式I化合物。
33.权利要求32的方法，所述方法还包括以下步骤 a)在合适的交叉偶联条件下，使式2化合物其中CP为交叉偶联基团，且A环和jA同权利要求l-16中任一项中 定义，形成式6化合物H OCH3b)在合适的脱保护条件下，使式6化合物脱保护，形成式7化合物。
34.权利要求32的方法，所述方法还包括以下步骤 a)在合适的偶联基团形成条件下，使式2化合物与式i化合物偶联<formula>formula see original document page 10</formula>与偶联基团前体偶联，形成式5b化合物:<formula>formula see original document page 10</formula>其中CP为交叉偶联基团；b)使式5b化合物与(^M"^卜x偶联；其中X为合适的离去基团，且A环和JA定义同本文，形成式6化合物<formula>formula see original document page 10</formula>c)在合适的脱保护条件下，使式6化合物脱保护，形成式7化合物。
35.权利要求32的方法，所述方法还包括通过合适的共辄加成条件，将( "0，其中A环为含能够亲核进攻的氮原子的芳环，且户同权利要求 l-16中任一项定义；加入式8化合物<formula>formula see original document page 10</formula>形成式7化合物的步骤。
36.权利要求27的方法，其中A环为吡唑，G为O，且B环、 产和L同权利要求1-16中任一项定义； 所述方法还包括以下步骤 (a)将式12化合物加入乙腈阴离子；<formula>formula see original document page 11</formula>然后在肼的存在下，使中间体环合，形成式5化合物。
37.权利要求35的方法，所迷方法还包括在合适的O-C键偶联条 件下，使式ll化合物<formula>formula see original document page 11</formula> 与 V^"^B^偶联；其中LG为合适的离去基团，且L、 B环和JB同权利要求1 -16中任一项定义； 形成式12化合物的步骤。
全文摘要
本发明涉及可用作蛋白激酶抑制剂的式I化合物。本发明还提供含所述化合物的药学上可接受的组合物，和用这些组合物治疗各种疾病、病症或障碍的方法。本发明还提供制备本发明化合物的方法。
文档编号C07D409/04GK101466708SQ200780021663
公开日2009年6月24日 申请日期2007年4月12日 优先权日2006年4月13日
发明者G·布伦奇利, J·-D·沙里耶, R·克内特尔, S·拉马亚, S·杜兰特, S·萨迪克 申请人:弗特克斯药品有限公司