一种色原酮苷类化合物及其提纯方法及应用的制作方法

专利名称：一种色原酮苷类化合物及其提纯方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种色原酮苷类化合物，具体讲涉及一种从芦荟属植物中提取的具有 3-分泌酶抑制活性的色原酮苷类化合物。
背景技术：
老年痴呆症，又名阿尔兹海默氏症(Alzheimer ‘s disease, AD)的发病在人口老 龄化的中国成为越来越严重的问题，临床表现为认知障碍、记忆逐渐减退、最终丧失思考能 力、运动障碍以及生活不能自理。多年来临床应用的主要药物是胆碱酯酶抑制剂，这类药物 通过作用于胆碱能神经系统，起缓解症状的作用，但不能阻止疾病的发生和发展。现代病 理机制研究认为淀粉样蛋白(A0)的非正常堆积是老年痴呆症最重要的成因。分 泌酶是与老年痴呆症的发病和进行密切相关的一个新靶点。它是将淀粉样蛋白前体蛋白 (APP)裂解成A0的过程中的关键限速酶；在动物体内证明，分泌酶的抑制剂可以大大 降低A0的水平，并改善与AD类似的发病症状。现已报道的分泌酶抑制剂中大多数 是多肽和拟肽类化合物，仅有少数是合成的小分子杂环化合物。从天然产物中已发现数种
分泌酶抑制剂，例如儿茶酚类化合物、hispidin和鞣质类化合物tellimagrandin II等， 对3 -分泌酶抑制作用的IC50在10_5 10_6M。芦荟(Aloe vera var. chinensis)是百合科芦荟属多年生常绿肉质草本植物，原 产于非洲，大部分生长在热带和亚热带地区，我国广东、云南、福建及北方一些地区也有栽
培o芦荟是一种具有多种生物活性的食用和药用植物，作为民间传统草药已有千年的 历史，应用范围涉及内、外、妇、儿、皮肤、五官等各科。在我国的《神农本草经》、《本草纲目》， 欧洲的《希腊本草》，朝鲜的《东医宝鉴》等古典药物书中均有记载。我国1995年版药典收 载了库拉索芦荟和好望角芦荟作为常用中药，用于便秘、小儿疳积、惊风、湿藓等症。虽然对芦荟的化学成分已有研究，但还没有关于发现具有新结构的分泌酶抑 制剂的报道。在中国专利申请200610092036. 2中，公开了芦荟色苷D及主要含有芦荟色苷的芦 荟提取物的神经细胞保护作用、分泌酶抑制活性及其潜在的抗老年痴呆作用。而关于 芦荟中色原酮苷类化合物的药理活性及其潜在的医药用途却未见报道。

发明内容
本发明的要解决的技术问题在于提供一种色原酮苷类化合物。本发明的要解决的又一技术问题在于提供这种化合物的制备方法。本发明的要解决的又一技术问题在于提供一种组合物，包括至少一个所述的化合 物及药用载体和/或赋形剂。本发明的要解决的再一技术问题在于提供这种化合物的用途。为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为
本发明的色原酮苷类化合物如通式(I )所示 其中，礼选自羟基或(V6直链或支链烷氧基；R2选自氢、苯基上取代或未取代的苯丙烯酰基；苯基上的取代基选自羟基、Ch烷
氧基；R3选自取代或未取代的Cm直链或支链烷基、取代或未取代的CM直链或支链烯 基；取代基选自羟基、酮基。优选的队选自羟基、甲氧基；优选的R2选自氢、苯基上具有羟基或甲氧基取代的苯丙烯酰基；换而言之，即羟基和各种苯丙烯酸成酯，优选的苯丙烯酸选自香豆酸，咖啡酸，阿 魏酸，桂皮酸。优选的R3选自丙烯基，(S)_异丙醇基，(R)_异丙醇基，丙二醇基，丙酮基。根据本发明，优选的通式(I )所示的化合物包括，但不限定于通式(IA)所示的 化合物 其中，礼选自羟基或(V6直链或支链烷氧基；R3选自取代或未取代的Cm直链或支链烷基、取代或未取代的CM直链或支链烯
基；取代基选自羟基、酮基。根据本发明，优选的通式(IA)所示的化合物包括，但不限定于通式(IAa)所示的 化合物
其中，礼选自羟基或(V6直链或支链烷氧基。根据本发明，优选的通式(IA)所示的化合物包括，但不限定于通式(IAb)所示的 化合物 其中，礼选自羟基或(V6直链或支链烷氧基；R31和R32独立的选自氢、羟基、酮基。根据本发明，优选的通式(I )所示的化合物包括，但不限定于通式(IB)所示的 化合物 其中，礼选自羟基或(V6直链或支链烷氧基；
R3选自取代或未取代的Cm直链或支链烷基、取代或未取代的CM直链或支链烯
基；取代基选自羟基、酮基。根据本发明，优选的通式(IB)所示的化合物包括，但不限定于通式(IBa)所示的
化合物 其中，礼选自羟基或(V6直链或支链烷氧基。根据本发明，优选的通式(IB)所示的化合物包括，但不限定于通式(IBb)所示的
化合物 其中，礼选自羟基或(V6直链或支链烷氧基；R31和R32独立的选自氢、羟基、酮基。根据本发明，优选的化合物包括但不限定于以下化合物其中化合物1、2、3和4是
新发现的化合物； 其中，本发明化合物是从芦荟属植物中经提取、分离和纯化制备而成的，其中优选 拉索芦荟和高尚芦荟。本发明还提供了化合物的制备方法。本发明的化合物1、2、5、6、7、8、9和10制备方法包括以下步骤(1)取干燥的芦荟药膏以70 100%乙醇回流提取2 5次，合并提取液制成浸 膏；(2)将上述浸膏经硅胶柱层析，以体积比为75 80 15 25 1 3的氯仿-甲 醇_水洗脱分为5个组分Fr. I Fr. V ；(3)将步骤(2)中得到的Fr. II经硅胶柱层析，体积比为50 90 50 50的氯仿_甲醇梯度洗脱分为3组份Fr. II -l、Fr. II -2、Fr. II -3 ；(4)将步骤(3)中得到Fr. II _2经薄层层析制备得化合物1和化合物6 ；(5)将步骤(3)中得到的Fr. II _3经反相高效液相色谱得化合物5和化合物2，(6)将步骤(3)中得到Fr. II _3经反相高效液相色谱分析得化合物9和化合物 8 ；(7)将步骤⑵中得到的Fr. IV经羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，经体积比为1 0 0 1甲醇-水洗脱液梯度洗脱分为11个组份Fr. IV -1 IV -11 ；(8)将步骤(7)中分离得到的Fr. IV _8经硅胶柱层析，体积比为20 30 70 80的甲醇-水洗脱液洗脱分为三个组份Fr. IV -8-1 Fr. IV -8-3 ；(9)将步骤(8)中分离得到Fr. IV _8_2经薄层层析得化合物7和化合物10。本发明的化合物1、2、5、6、7、8、9和10的制备方法优选为(1)取干燥的芦荟药膏以质量百分比浓度90 98%乙醇回流提取3 5次，合并 提取液，减压回收溶剂，得到浸膏；(2)将步骤(1)制得的浸膏以60 100目硅胶柱层析，以浸膏重量40 80倍的 体积比为80 20 2氯仿-甲醇-水洗脱分为5个组分Fr. I Fr. V ；(3)将步骤⑵中得到的Fr. II经100 200目硅胶柱层析，用Fr. II重量50 80倍重量的、体积比为90 10,80 20,50 50的氯仿-甲醇梯度洗脱，分为三个组份 Fr. II -1 Fr. II -3 ；(4)将步骤(3)中得到Fr. II _2经展开系统为氯仿-甲醇-水85 15 1的薄 层层析制备得化合物1和化合物6 ；(5)将步骤(3)中得到的Fr. II _3经反相高效液相色谱制备得化合物5和化合物 2 ；反相高效液相色谱的条件为固定相250\20111111、1011111 Unicorn 0DS柱，流动相体积比 为55 45的甲醇-水，流速3. OmL/min ；(6)将步骤(3)中得到Fr. II _3经反相高效液相色谱分析得化合物9和化合物 8 ；反相高效液相色谱的条件为固定相为250X 20mm、10 iim Unicorn 0DS柱，流动相为体 积比为31 69 0. 1的甲醇-水-三氟乙酸，流速3. OmL/min ；(7)将步骤(2)中得到的Fr. IV先经s印hadex LH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析， 经甲醇-水梯度洗脱梯度洗脱，甲醇-水的体积比依次为0 10，1 9,2 8,3 7,4 6， 5 5,6 4,7 3,8 2,9 1,10 0，，洗脱分为 11 个组分，分别为Fr. IV _1 IV-11; 其中；(8)将步骤(7)中分离得到的Fr. IV _8用反相C_18硅胶柱层析，体积比为30 70 甲醇-水洗脱，分为三个组份Fr. IV -8-1 Fr. IV -8-3 ；(9)将步骤⑶中得到Fr. IV _8_2经展开系统为氯仿-甲醇-水75 25 2薄 层层析制备得化合物7和化合物10。本发明的化合物3、4、11、12和13制备方法包括以下步骤(1)取新鲜芦荟在低级醇中浸泡6 8天，过滤，减压浓缩后得芦荟浸膏，(2)将步骤(1)得的浸膏悬浮于4 5倍的水中，用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分 别萃取3 5次；(3)将乙酸乙酯萃取物经100 200目硅胶柱层析，用体积比为92 8 90 10氯仿_甲醇梯度洗脱，分为11个组分Fr. I Fr. XI ；(4)将组分Fr. IV经羟丙基葡聚糖凝胶电泳，用体积比为1 9 2 8的甲醇-水 洗脱，得五个组分Fr. IV 1-至Fr. IV _5 ；(5)将步骤(4)所得的Fr. IV _3经反相高效液相色谱制得化合物13，(6)将步骤(3)所得的组分Fr. YD经羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，用体积比为 10 90 20 80的甲醇-水洗脱分为11个组份Fr. VII _1 Fr. W-11 ；(7)将步骤(6)所得的组分Fr. W -10经薄层层析得化合物4、化合物11和化合 物12 ；(8)将步骤(3)所得的组分Fr. IX经羟丙基葡聚糖凝胶柱层析脱色后，用薄层层析 制备得化合物3。本发明的化合物3、4、11、12和13制备方法优选为(1)取新鲜芦荟在低级醇中室温浸泡6 8天，过滤，减压浓缩后得芦荟浸膏，(2)将步骤(1)得的浸膏悬浮于4 5倍的水中，用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分 别萃取3 5次；(3)将乙酸乙酯萃取物经100 200目硅胶柱层析，用体积比为92 8,90 10 氯仿_甲醇梯度洗脱，分为11个组分Fr. I Fr. XI ；(4)将组分Fr. IV经羟丙基葡聚糖凝胶电泳，用体积比为20 80的甲醇-水洗 脱，得五个部分Fr. IV 1至Fr. IV 5 ；(5)将步骤⑷所得的Fr. IV _3经反相高效液相色谱制得化合物13，反相高效液 相色谱的条件为固态相为10iim、250X20mm Unicorn 0DS柱，液态相为体积比为27 73 的乙腈/水，流速为3. OmL/min ；(6)将步骤(3)所得的组分Fr. YD经羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，用体积比为 20 80的甲醇-水洗脱分为11和组份Fr. VII -1 Fr. W-11 ；(7)将步骤(6)所得的组分Fr. YD-10经展开系统为体积比为85 15 1的氯 仿_甲醇_水薄层层析制备得化合物4，化合物11和化合物12 ；(8)将步骤(3)所得的组分Fr. IX经羟丙基葡聚糖凝胶柱层析脱色后，用展开系统 体积比为氯仿-甲醇-水80 20 2的薄层层析制备得化合物3。本发明还涉及所述化合物在抑制0 -分泌酶、抗氧化和保护神经细胞中的应用。本发明还涉及所述的化合物在治疗老年痴呆症和制备治疗老年痴呆症药物中的 应用。本发明以分泌酶为活性指标，采用活性追踪的方法，利用多种提取、分离手 段，包括溶剂提取法、溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、正反硅胶柱层析、sephadex LH-20柱层 析和制备高效液相等方法，系统研究了库拉索芦荟和高尚芦荟的化学成分，从中得到13个 具有0 _分泌酶抑制活性的色原酮苷类化合物(式1 13)，其中4个为新结构的色原酮 苷类化合物，分别为 C-2' -decoumaroyl-aloeresin G (式 1)、allo-aloeresin D (式 2)、 2‘ -0-coumaroyl-aloesinol (式 3)、2' -0-[p-methoxy-(E) -cinnamoyl]-aloesinol (式 4)。本发明分离得到的13个色原酮苷类化合物具有很好的0 -分泌酶抑制活性，可对 抗A3聚合过程中产生的游离基对神经细胞的损伤。因此，上述有效成分及其衍生物和有
17效组分有可能从减少A 3生成来对抗老年痴呆症，可作为制备治疗和预防老年痴呆症的有 效药物。发明还涉及以本发明化合物的一种或几种作为活性成份的药物组合物。该药物组 合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的 固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在 其药物组合物中的重量百分比含量通常为0. 1-95%。本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道 或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、 阴道、直肠等。给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包 括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括0/V型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、 粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶 片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、 颗粒齐IJ、散齐IJ、微丸、滴丸、栓齐IJ、膜齐IJ、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软 膏剂、凝胶剂、糊剂等。本发明化合物可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种
微粒给药系统。为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀 释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳 糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙 醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶 浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡 波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维 素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙 烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂 酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双 层片和多层片。为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助流剂混 合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合 剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀 释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物 作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、PH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶 剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基环糊精等；PH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、 氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干 粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加 剂。
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给 药方法给药。本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使 用。当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。本发明的技术优势为本发明提供的13个色原酮苷类化合物，包括4个新的色原酮苷类化 合物，经活性测定试验表明，具有明显的分泌酶抑制活性，其中新化合物 C-2' -decoumaroyl-aloeresin G(l)和化合物Aloeresin D(5)的活性尤为显著(IC5。分别 为20. 5 1:11*39.(^10。色原酮苷类化合物是植物芦荟中抑制A 0生成的主要有效成分， 作用机制和药效明确，为进一步制备治疗和预防老年痴呆症的有效药物奠定了物质基础。
具体实施例方式以下将结合实施例对发明作进一步说明，但并不限制本发明的范围。库拉索芦荟(Aloe vera L.)药膏是购自同仁堂药店，水提物。实施例1.化合物1-13的制备干燥的库拉索芦荟(Aloe vera L.)药膏(250. 0g)以95%乙醇(5. 0L)回流提取 3次，合并提取液，减压回收溶剂，得到的浸膏200. 0g以60 100目的硅胶(1.0kg)柱层 析，体积比为80 20 2氯仿-甲醇-水的洗脱液(10. 0L)洗脱分为5个部分Fr. I Fr. V。Fr. II (5. 2g)经100-200目的硅胶柱层析(300g)，用体积比为90 10 50 50 氯仿-甲醇梯度洗脱，体积比例为90 10,80 20,50 50氯仿-甲醇的混合洗脱液各 4000mL，分为 3 份Fr. II -1 Fr. II -3。Fr. II _2(2.6g)经薄层层析制备(展开系统体积比为85 15 1氯仿-甲 醇-水)洗脱得化合物1 (5. Omg, Rf = 0. 50)和化合物6 (2. Omg, Rf = 0. 46)。Fr. II -3(0. 2g)经反相高效液相制备(Unicorn 0DS，10 y m，250 X 20mm)，洗脱液 为体积比为55 45的甲醇/水(流速3. OmL/min)得化合物5 (60. Omg, tE = 29. 2min)和 化合物 2 (5. Omg, tE = 37. 8min)。Fr. IV (4. 2g)先经过羟丙基葡聚糖凝胶(s印hadex LH-20，100g)柱层析，用体积 比为0 1 1 0的甲醇-水梯度洗脱，甲醇在混合洗脱液中的体积比例依次增加10%， 即混合洗脱液中甲醇-水的体积比为0 10，1 9,2 8,3 7,4 6,5 5,6 4,7 3， 8 2,9 1,10 0，每份混合洗脱液的体积为350mL，分为11份Fr. IV _1 IV-11 ；其 中Fr. IV -8 (233. Omg)用反相C-18硅胶柱层析，体积比为30 70甲醇-水洗脱，又分为3 份Fr. IV -8-1 Fr. IV -8-3 :Fr. IV -8-2 (100. Omg)经薄层层析制备(展开系统氯仿_甲 醇-水 75 25 2)得化合物 7 (30. Omg, Rf = 0. 56)和化合物 10 (3. 4mg，Rf = 0. 44)。Fr. II -3(0. 2g)经反相高效液相制备(Unicorn 0DS, 10 u m, 250 X 20mm)洗脱液为 体积比为31 69 0. 1甲醇-水-三氟乙酸(流速3. OmL/min)得化合物9 (6. Omg, tE = 49. 6min)和化合物 8 (10. 2mg, tE = 54. Omin)。C-2 ' -decoumaroyl-aloeresin G(化合物 1)白色无定型粉末， m. p. 119 °C ； [a]o+3.08° (c 0. 33，MeOH) ;ESI-MS m/z 415 [M+Na]+，HR-ESI—MS m/z 393. 1592 [M+H] + (calcd for C20H2508 :393. 1549) ；UV (MeOH)入 max (log ￡ ) :209. 0 (3. 27)，250. 0(2. 93)，259 (3. 01)，275. 0(2. 75sh) ,308(2. 95) nm ； IR(KBr) :vmax :3390，2925，2856， 1657，1626，1454，1383，1331，1296，1122，1080，1043,903,850,550cm_1 ；1H-NMR(CD30D， 400MHz) 7. 03 (1H, m, H-10)，6. 80 (1H, s, H_6)，6. 20 (1H, d, J = 15. 6Hz, H_9)，5. 95 (1H, s, H-3),4. 71 (1H, d, J = 10. 0Hz, H-l' ) ,4. 06 (1H, t，9. 6Hz，H-2' )，3. 90 (3H，s，7_0CH3)， 3. 84(lH，dd，J = 12. 0，2. 0Hz，H-6b' )，3. 64 (1H，m，H_6a'，)，3. 44 (2H，m，H_3‘，H_4')， 3. 25 (1H, m, H-5 ' ), 2. 74 (3H, s，5_CH3)，1. 92 (3H，d, J = 6. 8Hz, H-ll) ； 13C_WR(CD3OD， 125MHz) : 182. 7 (C_4)，162. 7 (C_2)，162. 5 (C_7)，158. 8 (C_la)，144. 0 (C_5)，139. 0 (C-10)， 124. 7 (C-9) ,117. 4(C-4a) , 113. 3 (C_8) , 112. 8 (C_6) , 109. 8(C-3) ,82. 9 (C_5 ')， 80. 3 (C-3 ' )，75.1(C-1' ) ,72. 4(C-2 ' )，72. 3 (C_4 ' )，63.0(C_6' )，56. 9 (7_0CH3)， 23. 6 (5-CH3)，18. 4(C-11)。Allo-aloeresin D(化合物 2)淡黄色无定型粉末，m. p. 124°C ；[a]o +49.1° (c 0. 01, MeOH) ；HR-ESI-MS m/z :557. 2012 [M+H] +(calcd for C29H32012 :557. 2023) ；UV(MeOH) 入匪(log e ) :211. 0(4. 35) ,226. 0(4. 33) , 252. 0 (4. llsh) ,294(4. 13)nm ；IR(KBr) :vmax 3361，1718，1653，1599，1514，1458，1383，1161,984,837,721cm_1 ；1H-NMR(CD30D，500MHz) 6. 93(2H，d，J = 8. 5Hz，H-5〃，H_9〃)，6. 74 (1H，s，H_6)，6. 59 (1H，d，J = 12. 5Hz，H_3 〃)， 6. 48(2H，d，J = 8. 5Hz，H-6〃，H_8〃)，6. 10 (1H，s，H_3)，5. 66 (1H，d，J = 10. 0Hz，H_2 〃)， 5. 49 (1H, d, J = 12.5Hz，H_2 〃 ), 5. 06 (1H, d, J = 10. 0Hz, H-l' )，4. 41(1H，m, H-10), 3. 90(lH，m，H-6b' )，3. 85 (3H，s，7_0CH3)，3. 60 (2H，m，H_3'，H_6a' )，3. 48 (lH，m，H_4')， 3. 40 (1H, m, H-5 ' )，2. 86 (1H, dd, J = 10. 5,4. 0Hz, H_9a)，2. 68 (3H, s, 5_CH3)，2. 67 (1H, d，J= 10. 0Hz, H-9b), 1. 23 (3H, d, J = 6. 0Hz, H-ll) ； 13C_匪R(CD30D，75MHz) :182.3(C_4)， 167. 6(C-1 " )，167. 4(C-2)，162. 1(C-7)，160. 0(C-7 〃 )，159. 8 (C_la)，145. 0 (C_3 〃 )， 144. 6 (C-5)，133. 2 (C_5 “，C-9 “ )，127. 0 (C_4 “ )，117. 2 (C_4a), 115. 7 (C~2 “，C—6 “， C-8" )，112. 7(C-6)，112. 5(C-3)，111. 8(C-8)，83. 0(C-5' ) ,77. 7 (C-3' )，73.4(C_2')， 72. 8 (CI ' ) ,72. 4(C-4 ' ), 65. 9 (C-10), 63. 1 (C-6 ' )，57. 0 (7_0CH3)，44. 6 (C_9)， 23. 7(5-CH3) ,23. 6(C-11)。高尚芦荟(Aloe noblis)鲜品5. 0kg在甲醇(15L)中室温浸泡一周，将冷浸液过 滤，减压浓缩得浸膏210g。将浸膏悬浮于1L水中，分别用石油醚(3X500mL)，乙酸乙酯 (3 X 800mL)和正丁醇(3 X 800mL)萃取。乙酸乙酯部分(13. 0g)经硅胶柱层析(100 200目，400g)，用体积比92 8 90 10氯仿-甲醇梯度洗脱，体积比92 8,90 10的氯仿-甲醇混合洗脱液各6000mL， 分为11个部分Fr. I Fr. XI。其中Fr. IV (943mg)经羟丙基葡聚糖凝胶(s印hadex LH-20，60g)，用体积比为 20 80甲醇-水洗脱，得五个部分(Fr. IV _1至Fr. IV _5)。Fr. IV -3(120mg)经反相高效液相制备(Unicorn 0DS, 10 u m, 250 X 20mm)洗脱液 为体积比为 27 73 的 CH3CN/H20 (流速 3. OmL/min)得化合物 13 (35mg, tE = 53. 8min)。Fr. W (1.6g)经羟丙基葡聚糖凝胶(s印hadex LH_20，60g)柱层析，用体积比为 20 80 甲醇-水洗脱分为 11 份Fr. VII-1 Fr. W-ll :Fr. VII _10 (309mg)经薄层层 析制备(展开系统氯仿-甲醇-水85 15 1)得化合物4 (40. Omg, Rf = 0. 54)，化合物 11(140. Omg, Rf = 0. 47)和化合物 12(7. Omg, Rf = 0. 38)。
20
Fr. IX (1. 7g)先经过羟丙基葡聚糖凝胶(s印hadex LH_20，60g)柱层析脱色(流 动相为甲醇)，再用薄层层析制备(展开系统体积比为80 20 2的氯仿-甲醇-水)得 化合物 3 (50. Omg，Rf = 0. 44)。2' -0-coumaroyl-aloesinol(化合物 3)黄白色无定型粉末，[O^6 -177.3° (cO. 105, MeOH) ；HR-ESI-MS m/z 541. 1716 [M-H]+ (calcd for C28H290n :541. 1710)； ^-WlUCDsOD，400MHz) :7. 35-7. 39 (3H, m, H_3〃，H_5〃，H_9〃 ) ,6. 84 (2H, d, J = 8. 4Hz, H-6 “，H-8 “ ) ,6. 50 (1H, s, H_6)，6. 04 (1H，s, H_3)，6. 01 (1H，d, J = 16. 0Hz, H_2 “)， 5. 67(1H，t，J = 10. 0，9. 6Hz，H-2 ' )，5. 15 (1H，d，J = 10. 0Hz，H_1 ' ) ,4. 32 (1H, m，H-10)，3. 42-3. 88(5H，m，H-3 ‘，H_4 ‘，H_5， ' H-6 ' )，2. 82 (1H，dd，J = 14. 0， 7. 6Hz, H-9a), 2. 75 (1H，dd, J = 13. 6,5. 6Hz, H_9b)，2. 58 (3H, s，5_CH3)，1. 25 (3H, d, J = 6.0Hz，H-ll) ； 13C-NMR(CD30D，75MHz) : 182. 2 (C_4)，168. 0 (C_l “ )，167. 2 (C_2)， 161. 3(C-7)，161. 2(C-7 “ )，160. 4 (C_la)，146. 2 (C_3 “ )，143. 5 (C_5)，131. 0 (C_5 〃， C-9〃)，128.3(C-4〃)，117. 0(C-4a)，116. 7(C-6〃，C-8〃)，116. 3 (C_6)，115. 8 (C_2〃)， 112.1 (C-3) ,110.0 (C-8), 82. 8 (C-5 ' )，77. 9 (C_3 ' )，74. 0 (C_2 ' )，73.0(C_1 ')， 72. 1 (C-4' ) ,66. 7 (C-10)，63. 1 (C_6' ) ,44. 3 (C_9)，23. 5 (5_CH3)，23. 5 (C_l 1)。2' -0-[p-methoxy-(E)-cinnamoyl]-aloesinol(化合物 4)黄白色无定型粉 末，HR-ESI-MS m/z 557. 1998[M+H]+ ；1H_WR(CD30D，400MHz) 7. 35-7. 39 (1H, m, H-3 “)， 7. 25(2H，d，J = 8. 4Hz，H-5〃，H_9〃 ) ,6. 69 (2H, d, J = 8. 4Hz, H-6"，H_8〃 ) ,6. 50 (1H, s, H-6) ,6. 04 (1H, d, J = 16. 0Hz, H-2 “ ) ,6. 02 (1H, s, H_3)，5. 68 (1H，t, J = 10.0， 9. 6Hz，H-2 ' )，5. 12(1H，d，J = 10. 0Hz，H-l ' )，4. 32 (1H，m，H-10)，3. 40-3. 90 (5H， m, H-3 '，H-4 '，H-5, ' H-6 ' ), 3. 74 (3H, s，7 “ _0CH3)，2. 82 (1H，dd, J = 13.6， 7. 2Hz, H-9a), 2. 75 (1H, dd, J = 13. 6,5. 2Hz, H_9b)，2. 56 (3H, s，5_CH3)，1. 24 (3H, d, J = 6.0Hz，H-ll) ； 13C-NMR(CD30D，75MHz) : 182. 2 (C_4)，168. 2 (C_l “ )，167. 2 (C_2)， 161. 2(C-7 “ )，160. 4(C-7)，160. 4(C-la)，146. 6(C-3 “ ), 143. 5 (C-5), 131. 1 (C-5 〃， C-9〃)，127.1 (C-4 〃)，116. 9(C-4a)，116. 8(C-6〃，C-8〃)，116.3(C_2〃)，115. 7 (C_6)， 112.1 (C-3), 109. 9 (C-8), 82. 8 (C-5 ' )，77. 9 (C_3 ' )，74. 0 (C_2 ' ), 72. 9 (C-4 ')， 72. 2(C-1 ' ) ,63. 1 (C-10) ,62. 4(C-6 ' )，56. 1 (7_0CH3)，44. 6 (C_9)，23. 5 (5_CH3)， 23. 3(C-11)。 实施例2、化合物2、3、4绝对构型的确定新化合物2，3，4的结构中含有一个手性碳(C-10)，其结构测定需要确定绝对构 型。据文献报道，C-10构型为R和S的两种非对映异构体的旋光值非常接近，无法用于判 断绝对构型；而葡萄糖的C-2'位无酰基取代的色酮苷类化合物(如化合物7)的两种非对 映异构体不仅在HPLC上的保留时间RT不同，而且它们的旋光也不相同，据此可确定化合物 2，3和4的C-10位立体构型。因此，先将2-4分别碱水解，得到C-2'位去酰基产物2a，3a和4a，通过测定化合 物 2a，3a，4a 的旋光值分别为{ [a]o -30.1° (c 0. 24,Me0H)}, { [a]o+6.8 (cO. 24, MeOH)} 和{ [a]o+6.9 (c 0. 25，MeOH)}，推断化合物2，3和4中C-10位的绝对构型分别为(R)_， (S)_和(S)_构型。碱水解
新化合物2与化合物5的水解产物(即C-2 ‘位去酰基产物)是相同的，但化合物 2量少，所以先取化合物5(20mg)溶解于0. 5mL甲醇，搅拌下滴加30% K2C03_H20 0. 5mL，室 温下搅拌7. 5小时后，加入lO.OmL水稀释。先后用乙酸乙酯和正丁醇萃取，正丁醇层经硅 胶薄层制备(展开剂为CHC13-CH30H-H2075 25 2，Rf = 0. 54)得到化合物5a(5. 4mg)。 在分析型高效液相上的保留时间RT = 5. 3min (流动相CH30H-H20 30 70，流速lmL/min， 入.=300nm)。化合物2 (2. Omg)也用相同的方法进行水解，得到相应的水解产物2a (未 分离)，经比较2a与化合物5a在高效液相上的保留时间相同。8-C-glucosyl-7-methoxyl- (R) -aloesol (5a)白色无定型粉末，m. p. 145 °C ； [a]o -30.1° (c 0. 24, MeOH) ；ESI-MS :m/z = 433. 2 [M+Na]+jH-WRGOOMHz，CD30D) 8 =1. 24 (3H, d, J = 6. 0Hz, H—ll)，2. 58 (2H, dd, J = 9. 5,5. 0Hz, H_9)，2. 73 (3H, s, H_12)， 3. 32-3. 44 (3H, m, H-3' , H-4' , H-5' ), 3. 60 (1H, m, H-6' a ), 3. 84 (1H, m, H-6' 3)， 3. 89 (3H, s，0CH3-7)，4. 12 (1H, t, J = 10. 0Hz，H_2' )，4. 323 (1H，m，H-10)，4. 94(lH，d，J = 10. 0Hz, H-l' )，6. 03 (1H, s, H_3)，6. 86 (1H, s, H_6)。化合物3(10mg)溶解于0. 5mL甲醇，搅拌下滴加Na0H_H20(2. 8mg/mL) 0. 5mL，室温 下搅拌30min后，加入15.0mL水稀释。用正丁醇萃取，无水Na2S04干燥有机层，减压回收， 薄层制备(展开剂为 CHC13-CH30H-H20 80 20 2，Rf = 0. 27)得化合物 3a (2. 8mg)。旋 光值为{ [a]o +6.8° (c0. 24，Me0H)}，(+)-ESI-MS (m/z) 419. 1 [M+Na]，(-)-ESI-MS (m/z) 395. 3 [M-H]。化合物4(10. 7mg)溶解于 0. 5mL 甲醇，搅拌下滴加 Na0H_H20(3. Omg/mL)0. 5mL，室 温下搅拌30min后，加入15. OmL水稀释。用正丁醇萃取，无水Na2S04干燥有机层，减压回 收，薄层制备(展开剂为 CHC13-CH30H-H20 80 20 2，Rf = 0. 27)得化合物 4a (4. Omg)。 旋光值为{[OC]i6+6.9° (C 0. 25, MeOH)}, (+)-ESI-MS(m/z) :419. 1 [M+Na]，(-)-ESI-MS(m/ z) 395. 3 [M-H]。 结构式(2a_5a)药理实验实验例1 0 -分泌酶抑制活性的测定利用荧光共振能量转移法(FRET)测定化合物对BACE-1的体外抑制活性。具体地 说就是将 4 ii M 荧光肽底物 Mca-Ser-Glu-Val-Asn-Leu-Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-Lys (Dnp) -A rg-Arg-NH2, 2 u g/ml重组人BACE-1 (R&D公司)以及不同浓度的待测化合物加入50mM乙酸钠缓冲液(PH4. 0)中，使终体积为100 ill。设定荧光酶标仪(SpectraMAXGemini XS 型，Molecular Devices 公司)激发和 发射波长分别为320nm和405nm，读取反应起始及25°C保温60min后的荧光强度。抑制率 按照下列公式计算抑制率(%) = [1-(FS-FS0)/(FC-FC0)] X100%其中FS(1和Fs分别为待测化合物反应起始和保温60min后的荧光强度，Fro和Fc分 别为阴性对照反应起始和保温60min后的荧光强度。利用软件Prism 3. 0作抑制率对待测 化合物浓度的非线性拟合曲线，计算IC5(I值。具体结果如下色原酮苷类化合物1-13的0 _分泌酶抑制活性 * 阳性对照是 N-Benzyloxycarbonyl-Val-Leu-leucinal(Z-Val-Leu-Leu-CHO， CALBIOCHEM 565749)。
权利要求
一种如通式(Ⅰ)所示的色原酮苷类化合物其中，R1选自羟基或C1-6直链或支链烷氧基；R2选自氢、苯基上取代或未取代的苯丙烯酰基；苯基上的取代基选自羟基、C1-4烷氧基；R3选自取代或未取代的C1-6直链或支链烷基、取代或未取代的C1-6直链或支链烯基；取代基选自羟基、酮基。F2009100815800C0000011.tif
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于， 队选自羟基、甲氧基； R2选自氢、苯基上具有羟基或甲氧基取代的苯丙烯酰基； R3选自丙烯基，(S)-异丙醇基，(R)_异丙醇基，丙二醇基，丙酮基。
3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物如通式(IA)所示，(IA) 其中，礼选自羟基或Cm直链或支链烷氧基；R3选自取代或未取代的Cm直链或支链烷基、取代或未取代的CM直链或支链烯基；取 代基选自羟基、酮基。
4.根据权利要求3所述的化合物，其特征在于，所述的化合物如通式(IAa)所示， (IAa)其中，礼选自羟基或Cm直链或支链烷氧基。
5.根据权利要求3所述的化合物，其特征在于，所述的化合物如通式(IAb)所示， (IAb)其中，礼选自羟基或Cm直链或支链烷氧基； R31和R32独立的选自氢、羟基、酮基。
6.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物如通式(IB)所示， (IB)其中，礼选自羟基或Cm直链或支链烷氧基；R3选自取代或未取代的Cm直链或支链烷基、取代或未取代的CM直链或支链烯基；取 代基选自羟基、酮基；R’选自氢、羟基或Ci_3烷氧基。
7.根据权利要求6所述的化合物，其特征在于，所述的化合物如通式(IBa)所示， (IBa)其中，礼选自羟基或Cm直链或支链烷氧基； R’选自氢、羟基或Ci_3烷氧基。
8.根据权利要求6所述的化合物，其特征在于，所述的化合物如通式(IBb)所示， (IBb)其中，礼选自羟基或Cm直链或支链烷氧基； R31和R32独立的选自氢、羟基、酮基； R’选自氢、羟基或Ci_3烷氧基。
9.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物选自 13。
10.如权利要求1 9中任一项所述的化合物，其特征在于，所述化合物是从芦荟属植 物中经提取、分离和纯化制备而成的。
11.制备权利要求9所述的化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤(1)取干燥的芦荟药膏以70 100%乙醇回流提取2 5次，合并提取液制成浸膏；(2)将上述浸膏经硅胶柱层析，以体积比为75 80 15 25 1 3的氯仿-甲 醇_水洗脱分为5个组分Fr. I Fr. V ；(3)将步骤⑵中得到的Fr.II经硅胶柱层析，体积比为50 90 50 50的氯仿-甲 醇梯度洗脱分为3组份:Fr. II -l、Fr. II -2、Fr. II -3 ；(4)将步骤(3)中得到Fr.II -2经薄层层析制备得化合物1和化合物6 ；(5)将步骤(3)中得到的Fr.II -3经反相高效液相色谱得化合物5和化合物2，(6)将步骤(3)中得到Fr.II -3经反相高效液相色谱分析得化合物9和化合物8 ；(7)将步骤⑵中得到的Fr.IV经羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，经体积比为1 0 0 1 甲醇_水洗脱液梯度洗脱分为11个组份Fr. IV -1 IV -11 ；(8)将步骤(7)中分离得到的Fr.IV -8经硅胶柱层析，体积比为20 30 70 80 的甲醇_水洗脱液洗脱分为三个组份Fr. IV -8-1 Fr. IV -8-3 ；(9)将步骤(8)中分离得到Fr.IV -8-2经薄层层析得化合物7和化合物10。
12.如权利要求11所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤(1)取干燥的芦荟药膏以质量百分比浓度90 98%乙醇回流提取3 5次，合并提取 液，减压回收溶剂，得到浸膏；(2)将步骤(1)制得的浸膏以60 100目硅胶柱层析，以浸膏重量40 80倍的体积 比为80 20 2氯仿-甲醇-水洗脱分为5个组分Fr. I Fr. V ；(3)将步骤⑵中得到的Fr.II经100 200目硅胶柱层析，用Fr. II重量50 80 倍重量的、体积比为90 10,80 20,50 50的氯仿-甲醇梯度洗脱，分为三个组份 Fr. II -1 Fr. II -3 ；(4)将步骤(3)中得到Fr.II _2经展开系统为氯仿-甲醇-水85 15 1的薄层层 析制备得化合物1和化合物6 ；(5)将步骤(3)中得到的Fr.II -3经反相高效液相色谱制备得化合物5和化合物2 ； 反相高效液相色谱的条件为固定相250X20mm、10iim Unicorn 0DS柱，流动相体积比为 55 45的甲醇-水，流速3. OmL/min ；(6)将步骤(3)中得到Fr.II -3经反相高效液相色谱分析得化合物9和化合物8 ；反 相高效液相色谱的条件为固定相为250 X 20mm、10 iim Unicorn 0DS柱，流动相为体积比为` 31 69 0. 1的甲醇-水-三氟乙酸，流速3. OmL/min ；(7)将步骤(2)中得到的Fr.IV先经s印hadex LH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，经 甲醇-水梯度洗脱，甲醇-水的体积比依次为0 10，1 9，2 8，3 7，4 6，5 5， 6 4,7 3,8 2,9 1,10 0，洗脱分为 11 个组分，分别为Fr. IV _1 IV-11;(8)将步骤(7)中分离得到的Fr.IV _8用反相C-18硅胶柱层析，体积比为30 70甲 醇_水洗脱，分为三个组份Fr. IV -8-1 Fr. IV -8-3 ；(9)将步骤(8)中得到Fr.IV-8-2经展开系统为氯仿-甲醇-水75 25 2薄层层 析制备得化合物7和化合物10。
13.制备权利要求9所述的化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤(1)取新鲜芦荟在低级醇中浸泡6 8天，过滤，减压浓缩后得芦荟浸膏，(2)将步骤(1)得的浸膏悬浮于4 5倍的水中，用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分别萃 取3 5次；(3)将乙酸乙酯萃取物经100 200目硅胶柱层析，用体积比为92 8 90 10氯 仿_甲醇梯度洗脱，分为11个组分Fr. I Fr. XI ；(4)将组分Fr.IV经羟丙基葡聚糖凝胶电泳，用体积比为1 9 2 8的甲醇-水洗 脱，得五个组分Fr. IV 1-至Fr. IV _5 ；(5)将步骤(4)所得的Fr.IV -3经反相高效液相色谱制得化合物13，(6)将步骤(3)所得的组分Fr.YD经羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，用体积比为10 90 20 80的甲醇-水洗脱分为11个组份Fr. VII -1 Fr. W-11 ；(7)将步骤(6)所得的组分Fr.W -10经薄层层析得化合物4、化合物11和化合物12 ；(8)将步骤(3)所得的组分Fr.IX经羟丙基葡聚糖凝胶柱层析脱色后，用薄层层析制备 得化合物3。
14.如权利要求13所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤(1)取新鲜芦荟在低级醇中室温浸泡6 8天，过滤，减压浓缩后得芦荟浸膏，(2)将步骤(1)得的浸膏悬浮于4 5倍的水中，用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分别萃 取3 5次；(3)将乙酸乙酯萃取物经100 200目硅胶柱层析，用体积比为92 8,90 10氯 仿_甲醇梯度洗脱，分为11个组分Fr. I Fr. XI ；(4)将组分Fr.IV经羟丙基葡聚糖凝胶电泳，用体积比为20 80的甲醇-水洗脱，得 五个部分Fr. IV 1至Fr. IV 5 ；(5)将步骤(4)所得的Fr.IV _3经反相高效液相色谱制得化合物13，反相高效液相色 谱的条件为固态相为10ym、250X20mm Unicorn 0DS柱，液态相为体积比为27 73的乙 腈/水，流速为3. OmL/min ；(6)将步骤(3)所得的组分Fr.YD经羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，用体积比为20 80的 甲醇-水洗脱分为11和组份Fr. VII -1 Fr. W-11 ；(7)将步骤(6)所得的组分Fr.VII-10经展开系统为体积比为85 15 1的氯仿-甲 醇_水薄层层析制备得化合物4，化合物11和化合物12 ；(8)将步骤(3)所得的组分Fr.IX经羟丙基葡聚糖凝胶柱层析脱色后，用展开系统体积 比为氯仿-甲醇-水80 20 2的薄层层析制备得化合物3。
15.一种药物组合物，其特征在于，含有有效剂量的权利要求1-9中任一项中所述的化 合物中至少一种，及药用载体。
16.根据权利要求15的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物选自片剂、胶囊、 丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂或微粒给药系统。
17.权利要求1-9中任一项所述的化合物在制备抑制分泌酶、抗氧化和/或保护神 经细胞药物中的应用。
18.权利要求1-9中任一项所述的化合物在治疗老年痴呆症和制备治疗老年痴呆症药 物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种具有β-分泌酶抑制作用的色原酮苷类化合物，其结构式如下述通式(I)表示，本发明的色原酮苷类化合物是利用多种分离手段从芦荟属植物中分离得到，可用于制备预防和/或治疗老年痴呆作用的药物。
文档编号C07D407/04GK101857590SQ200910081580
公开日2010年10月13日 申请日期2009年4月13日 优先权日2009年4月13日
发明者吕亮, 姚春所, 方唯硕, 杜冠华, 杨庆云, 王月华, 赵颖 申请人:中国医学科学院药物研究所