阿托西班的中间体的合成与应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种阿托西班关键中间体的液相合成方法，即H-Ile-Thr（Bzl）-Asn-Cys（Bzl）-Pro-OH的制备方法。采用此液相接肽合成方法，反应易监测，较固相合成法成本低，更适合大规模工业化生产。主要合成步骤：采用BSA保护脯氨酸，通过N-羟基琥珀酰亚胺酯法在脯氨酸N端逐个连接S-苄基半胱氨酸、天冬酰胺、苄基保护的苏氨酸和异亮氨酸，得到五肽中间体。
【专利说明】阿托西班的中间体的合成与应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种合成阿托西班五肽中间体的液相合成方法，以及该关键中间体在 制备阿托西班中的应用。
【背景技术】
[0002] 阿托西班是由辉凌公司（Ferring AB)研制，其结构如下（II)，是子宫内及蜕膜、胎 膜上受体的环状催产素抑制剂，于2000年3月首次在奥地利上市。使用后可剂量相关性地 抑制宫缩，并使环状肽催产素介导的前列腺素分泌减少，达到保胎目的。
[0003]
【权利要求】
1.阿托西班五肽中间体的液相合成方法，其特征在于，包括如下步骤： a. 以脯氨酸为原料，使用BSA保护其羧基，再与N端保护的S-苄基半胱氨酸的活性酯 连接，制得N-叔丁氧羰酰基-S-苄基半胱氨酰-脯氨酸，再于酸性条件下脱去N端保护 基得到S-苄基半胱酰氨-脯氨酸； b. 以S-苄基半胱酰氨-脯氨酸为原料，使用BSA保护脯氨酰的羧基部分，再与N端保 护的天冬酰胺的活性酯连接，制得N-叔丁氧羰酰基-天冬酰胺-S-苄基半胱氨酰-脯氨酸， 再于酸性条件下脱去N端保护基得到天冬酰胺-S-苄基半胱氨酰-脯氨酸； c. 以天冬酰胺-S-苄基半胱氨酰-脯氨酸为原料，使用BSA保护脯氨酰的羧基部分，再 与N端保护的0-苄基苏氨酸的活性酯连接，制得N-叔丁氧羰酰基-0-苄基-苏氨酰-天 冬酰胺-S-苄基半胱氨酰-脯氨酸，再于酸性条件下脱去N端保护基得到0-苄基-苏氨 酰-天冬酰胺-S-苄基半胱氨酰-脯氨酸； d. 以0-苄基-苏氨酰-天冬酰胺-S-苄基半胱氨酰-脯氨酸为原料，使用BSA保护脯 氨酰的羧基部分，再与N端保护的异亮氨酸的活性酯连接，制得N-叔丁氧羰酰基-异亮氨 酰-〇-苄基-苏氨酰-天冬酰胺-S-苄基半胱氨酰-脯氨酸，再于酸性条件下脱去N端保 护基得到异亮氨酰-〇-苄基-苏氨酰-天冬酰胺-S-苄基半胱氨酰-脯氨酸，即H-Ile-Thr (Bzl) -Asn-Cys (Bzl) -Pr〇-〇H，其结构（I )如下 e. 具体合成路线如下：
其中 Rl=Boc、Cbz、Trt、Mz
R2=0Su、ONb、OBt、OOBt、OAt。
2. 根据权利要求1所述的阿托西班五肽中间体的液相合成方法，其特征在于：步骤a、 c、d中所述的N端保护基团选自叔丁氧羰基（B0C)、苄氧羰基（Cbz)、三苯甲基（Trt)、对甲 氧苄氧羰基（Mz)。
3. 根据权利要求1所述的阿托西班五肽中间体的液相合成方法，其特征在于：用酸脱 除N端保护基时所述的酸选自包括三氟乙酸、盐酸、氢氟酸；所用溶剂包括：二氯甲烷、四氢 呋喃、1，4-二氧六环。
4. 根据权利要求1所述的阿托西班五肽中间体的液相合成方法，其特征在于：步骤a、 b、c、d中所述的氨基酸的相应活性酯选自N-羟基琥珀酰亚胺酯、N-羟基-5-降冰片烯-2， 3-二甲酰亚胺酯、1-羟基苯骈三氮唑酯、3-羟基-4-氧-3,4-二氢-1，2, 3-苯骈三氮唑酯、 1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑酯。
5. 根据权利要求1-4中任一项所述的合成方法，其特征在于：包括如下步骤： (a)制备S-苄基半胱酰氨-脯氨酸 将BSA和L-脯氨酸加到无水二氯甲烷中，10?35°C下搅拌2?4h，滴入N-叔丁氧羰 酰基-S-苄基半胱氨酸-(N-羟基）琥珀酰亚胺酯的二氯甲烷溶液，10?35°C下反应5? 8h，减压蒸除溶剂，加乙醚，用5%的碳酸氢钠水溶液萃取；合并水相，加入柠檬酸调至PH5? 7,用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤后经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压 浓缩至干，得淡黄色油状物，加入无水乙醚析出白色固体；将白色固体加至无水二氯甲烷 中，0?15°C下搅拌滴加三氟乙酸至 :VCF3a)QH=l?5 :1，搅拌反应2?5h，减压浓缩至 干，得到淡黄色油状物，用乙酸乙酯/乙醚重结晶，得到白色固体； (b) 制备天冬酰胺-s-苄基半胱氨酰-脯氨酸 将S-苄基半胱酰氨-脯氨酸和BSA加到无水二氯甲烷中，10?35°C下搅拌3?4h，滴 入N-叔丁氧羰酰基-天冬酰胺-(N-羟基)琥珀酰亚胺酯的二氯甲烷溶液，10?35°C下搅 拌8?10h，减压蒸除溶剂，加乙醚，用5%的碳酸氢钠水溶液萃取；合并水相，加入柠檬酸调 至PH5?7,用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤后经无水硫酸钠干燥，过滤， 滤液减压浓缩至干，得淡黄色油状物，乙酸乙酯重结晶，得到的固体加至无水二氯甲烷中， 0?15°C下搅拌滴加三氟乙酸至V eH2a2 :VeF3_=l?5 :1，10?35°C下搅拌反应2?5h，减 压浓缩至干，得到淡黄色油状物，用乙酸乙酯/乙醚重结晶，得到白色固体； (c) 制备0-苄基-苏氨酰-天冬酰胺-S-苄基半胱氨酰-脯氨酸 将天冬酰胺-S-苄基半胱氨酰-脯氨酸和BSA加到无水二氯甲烷中，10?35°C下搅拌 3?4h，滴入N-叔丁氧羰酰基-0-苄基-苏氨酸-(N-羟基）琥珀酰亚胺酯的二氯甲烷溶 液，10?35°C下搅拌6?8h，减压蒸除溶剂，加乙醚，用5%的碳酸氢钠水溶液萃取；合并水 相，加入柠檬酸调至PH5?8,用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤后经无水硫 酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得淡黄色油状物，乙酸乙酯重结晶，得到的固体加至无 水二氯甲烷中，〇?15°C下搅拌滴加三氟乙酸至:V CF3axH=l?5 :1，10?35°C下搅拌 反应2?5h，减压浓缩至干，用甲醇/乙醚重结晶，得到白色固体； (d) 制备异亮氨酰-0-苄基-苏氨酰-天冬酰胺-S-苄基半胱氨酰-脯氨酸 将0-苄基-苏氨酰-天冬酰胺-S-苄基半胱氨酰-脯氨酸和BSA加到无水二氯甲烷 中，10?35°C下搅拌3?4h，滴入N-叔丁氧羰酰基-异亮氨酸-(N-羟基)琥珀酰亚胺酯 的二氯甲烷溶液，10?35°C下搅拌6?8h，减压蒸除溶剂，加乙醚，用5%的碳酸氢钠水溶液 萃取；合并水相，加入柠檬酸调至PH5?8,用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗 涤后经无水硫酸钠干燥，过滤，得到的白色固体加至无水二氯甲烷中，〇?15°C下搅拌滴加 三氟乙酸至V CH2a2 :VCF3axH=l?5 :1，10?35°C下搅拌反应2?5h，减压浓缩至干，用甲醇/ 乙醚重结晶，得到白色固体。
【文档编号】C07K1/02GK104098650SQ201310129543
【公开日】2014年10月15日 申请日期:2013年4月15日 优先权日:2013年4月15日
【发明者】冯文化, 刘巾玮, 张韵 申请人:中国医学科学院药物研究所