一种干细胞培养体系及其培养方法与流程

文档序号:12457141阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种干细胞培养体系,其特征在于:由下到上依次包括饲养层细胞、设置于所述饲养层细胞上方的一层用于分离饲养层细胞和干细胞的细胞筛网、三维培养基,所述三维培养基包括由Matrigel制作而成的三维支架和完全培养基,所述完全培养基包括DMEM培养基、FCS、β-疏基乙醇、LIF、谷氨酰胺和胰岛素。

2.根据权利要求1所述的一种干细胞培养体系,其特征在于:所述完全培养基以DMEM培养基为基础,包括15%的所述FCS,所述β-疏基乙醇浓度为0.1mmol/ml,所述LIF浓度为1.5×103U/ml,所述谷氨酰胺浓度为200ug/ml,所述胰岛素浓度为10-50ng/ml。

3.根据权利要求2所述的一种干细胞培养体系,其特征在于:所述完全培养基还包括0.1ug/ml的胎球蛋白。

4.根据权利要求3所述的一种干细胞培养体系,其特征在于:所述完全培养基还包括0.4uM的爱帕琳肽。

5.根据权利要求4所述的一种干细胞培养体系,其特征在于:所述完全培养基还包括0.5uM的Blebbistatin。

6.根据权利要求5所述的一种干细胞培养体系,其特征在于:所述完全培养基还包括浓度为100ng/ml硫酸乙酰肝素2。

7.根据权利要求6所述的一种干细胞培养体系,其特征在于:所述完全培养基还包括10ug/ml的维生素E。

8.根据权利要求7所述的一种干细胞培养体系,其特征在于:所述DMEM培养基为高糖型。

9.根据权利要求8所述的一种干细胞培养体系,其特征在于:所述细胞筛网孔径为1um-100um。

10.一种用如权利要求1所述的细胞培养体系培养干细胞的方法,其特征在于:

a)在培养容器内制备一层饲养层细胞;

b)将一层细胞筛网固定于培养容器内且位于饲养层细胞上方;

c)制备干细胞悬液,与Matrigel等比例混合后,加入到培养容器内,静置;

d)向培养容器内加入完全培养基,每天更换一次完全培养基。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1