本发明涉及N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂多肽及其应用，具体涉及具有抑制N-甲基-D-天冬氨酸受体，减轻抑郁症状的多肽。
背景技术：
抑郁症是近年来最受人们关注的精神疾病。尽管抑郁症就在我们的身边，但病人接受治疗的比例并不高，中国的抑郁症治疗率不到10％，即使在发达国家，也还不到一半。很多人把抑郁症仅仅当作是一种精神状态，而这种想法也往往导致患者错过最佳的治疗时机。由于现代社会的压力和生活方式改变，在20岁以上的成人中，抑郁症的发病率正以每年11.3％的速度增长。而在青少年当中，抑郁症也呈现出逐年上升的趋势。抑郁症将仅次于缺血性心脏病，成为人类残疾和死亡的第二大原因。
最新研究提出，抑郁症的谷氨酸受体异常假说，并认为药物治疗新靶点。离子型谷氨酸受体N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体和α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体是与抑郁症发生最为相关的两种谷氨酸受体，该类受体在激活时可允许Na+、Ca2+等阳离子通过。此外，NMDA受体的膜外侧端存在甘氨酸(glycine)的结合位点，通道内则有Mg2+结合位点，这些都是NMDA受体功能调节的关键位点。在生理条件下，突触后膜的AMPA受体和NMDA受体(主要为NR2A受体亚型)的激活是突触可塑性和学习记忆能力增强的重要电生理机制；而在谷氨酸兴奋性毒性损伤等病理过程中，突触外NMDA受体(主要为NR2B受体亚型)的激活则会导致Ca2+超载、氧化应激损伤和细胞凋亡或退行性变等抑郁症状。因此，NMDA受体抑制剂成为抑郁症治疗的新靶点和研究的热点。
但是，现阶段的NMDA受体抑制剂有氯胺酮、苯环利定，未用于治疗抑郁症。
技术实现要素：
发明目的
本发明提供全新的序列，该序列N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂多肽，对抑郁症具有很好的疗效。
技术方案
N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂多肽，其特征在于其序列为SEQ ID NO：1。
N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂多肽在治疗抑郁症药物中的应用。
有益效果
利用固相合成法化学合成N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂多肽，该多肽具有全新的序列，该多肽可用于治疗抑郁症。分子结果显示，N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂多肽能显著抑制大鼠海马神经元细胞NMDA受体电流，其IC50值为3.81±0.72μM。在体药理结果显示，本发明的多肽能够减少小鼠悬尾实验中应激绝望模型小鼠的悬尾时间；也能减少小鼠强迫游泳实验中应激绝望模型小鼠的强迫游泳时间；同时，本发明多肽能够减少慢性不可预测应激模型大鼠的觅食潜伏期，提高其在糖水实验中对糖水的摄取，与模型组相比，具有统计学差异。觅食潜伏期主要检测的是大鼠焦虑样行为，大鼠糖水偏好表明了大鼠的兴趣缺失倾向。由此可见，本发明多肽能改善急性和慢性抑郁症模型动物的抑郁症状。可作为临床抑郁症有效的候选治疗方法。
具体实施方式
多肽由上海生工吉尔合成。
实施例1
N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂多肽对大鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体电流抑制作用。
采用全细胞膜片技术记录培养大鼠海马神经元NMDA受体电流。从生24h内的SD大鼠脑内提取、培养海马神经元，37℃、5％CO2的培养箱内培养8-13天进行膜片钳实验。
全细胞膜片钳记录所用仪器为CEZ-2400膜片钳放大器(日本Nihon Kohden)，玻璃微电极所充内液成分(mmol/L)：KCl 140，CaCl2 1，MgCl2 2，HEPES 10，EGTA 11，ATP 4，用1M KOH将pH值调至7.2，用蔗糖将渗透压调至310mOsm/L，电极电阻3-5MΩ。灌流用外液成分(mmol/L)：NaCl 150，KCl 5，CaCl2 2.5，HEPES 10，D-葡萄糖10，河鲀毒素0.0002，用1M NaOH将pH值调至7.4，用蔗糖将渗透压调至340mOsm/L。将微电极在细胞膜上，在电极与细胞膜之间形成高阻(1-5GΩ)封接后，进一步将膜吸穿，调节电容和串联电阻补偿，膜电位钳制于-50mV，膜电流应用低通滤波(1Hz，-3dB)，记录实验结果。
本发明多肽用细胞外液配制不同梯度浓度的终溶液，pH调至7.4。给药方式通过微操纵器移动自制的快速换液装置的排管给药，每管的直径(O.D/I.D)为500/200μm，管口距离记录细胞约100μm。实验在室温22-25℃范围内进行。记录不同梯度浓度多肽对大鼠海马神经元NMDA受体电流数据。
在大鼠海马神经元NMDA受体电流结果显示，本发明多肽可以抑制阳离子内流，其IC50值为3.81±0.72μM。
实施例2
N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂多肽对小鼠强迫游泳应激绝望模型的影响。
采用ICR小鼠作为受试动物，取50只小鼠，雌雄各半，体重为18-22g，随机分为5组：高剂量组、中剂量组、低剂量组，阳性对照组，空白组，每组l0只。治疗组皮下注射本发明多肽，剂量分别为20、10、5mg/Kg，对照组氟西汀，剂量为10mg/Kg，空白组给予生理盐水，连续给药7天。第7天给药后1h，小鼠进行强迫游泳实验，小鼠在20-25℃水中强迫游泳6min，记录后4min内不动时间，不动时间，即为小鼠在水中停止挣扎，仅将头露出水面漂浮的时间，以此评价本发明多肽对小鼠强迫游泳应激绝望模型的影响。
表1本发明多肽对小鼠强迫游泳应激绝望模型的影响
*p<0.05，**p<0.01与空白组相比
本发明多肽对小鼠强迫游泳应激绝望模型结果如表1显示：本发明多肽能够减少小鼠强迫游泳时间，在剂量在5-20mg/Kg时呈剂量依赖性，与空白组相比，具有统计学差异。
实施例3
N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂多肽对小鼠悬尾应激绝望模型的影响。
采用ICR小鼠作为受试动物，取50只小鼠，雌雄各半，体重为18-22g，随机分为5组：高剂量组、中剂量组、低剂量组，阳性对照组，空白组，每组l0只。治疗组皮下注射本发明多肽，剂量分别为20、10、5mg/Kg，对照组氟西汀，剂量为10mg/Kg，空白组给予生理盐水，连续给药7天。第7天给药后1h，小鼠进行悬尾实验，将小鼠用胶带固定在其尾部距末端约1cm处，使小鼠保持悬挂状态6min，记录后4min的不动时间，以此评价本发明多肽对小鼠悬尾应激绝望模型的影响。
表2本发明多肽对小鼠悬尾应激绝望模型的影响
*p<0.05，**p<0.01与空白组相比
本发明多肽对小鼠悬尾应激绝望模型结果如表2显示：本发明多肽能够减少小鼠悬尾时间，在剂量在5-20mg/Kg时呈剂量依赖性，与空白组相比，具有统计学差异。
实施例4
N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂多肽对大鼠慢性不可预测应激模型的影响。
采用SD大鼠作为受试动物，取60只大鼠，雌雄各半，体重为180-220g，随机分为6组，高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性对照组、模型组、空白组，每组l0只。建立大鼠慢性不可预测应激模型：应激内容为：束缚4h；湿垫料过夜；摇晃1h(160r/min)；禁食12h；冰水游泳4℃，10min；饲养笼倾斜45°过夜；夹尾1min；拥挤过夜(8只/笼)。白天使用两种应激，夜晚使用一种应激，连续应激4周。最后一次刺激后给药。给药方案：治疗组皮下注射本发明多肽，剂量分别为20、10、5mg/Kg，对照组氟西汀，剂量为10mg/Kg，空白组给予生理盐水，连续给药7天。第7天给药后1h，大鼠进行新奇觅食潜伏期实验和糖水偏好实验，以此评价本发明多肽对大鼠慢性不可预测应激模型的影响。新奇觅食潜伏期实验即：实验动物在进行24h禁食后，将动物置于一个长×宽×高为76.5cm×76.5cm×40cm的旷场中，旷场中间放有一定量的食物，动物从旷场的一角放入，观察动物在5min内成功觅食所花费的时间。同时试验后测量动物在5min内消耗的食物总重量，以此作为参考来判断实验动物饥饿程度是否一致。糖水偏好实验即：在糖水检测前用1％的糖水让动物适应48h，禁水4h后将动物置于放有两个相同水瓶的饲养笼中。这两只水瓶一只盛有1％的糖水，另一只装有自来水。记录1h内每只大鼠分别饮用糖水和自来水的体积。糖水偏好＝饮用的糖水体积/(饮用的糖水体积+自来水总体积)×100％。
表3本发明多肽对大鼠慢性不可预测应激模型的影响
*p<0.05，**p<0.01与模型组相比
本发明多肽对大鼠慢性不可预测应激模型结果如表3显示：本发明多肽能够减少模型组大鼠的觅食潜伏期，提高慢性不可预测应激模型大鼠糖水实验中对糖水的摄取，与模型组相比，具有统计学差异。觅食潜伏期主要检测的是大鼠焦虑样行为，大鼠糖水偏好表明了大鼠的兴趣缺失倾向。由此可见，本发明多肽能改善慢性不可预测应激模型大鼠的抑郁症状。
SEQUENCE LISTING
<110> 苏州普罗达生物科技有限公司
<120> N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂多肽及其应用
<130>
<160> 1
<170> Patent In version 3.3
<210> 1
<211> 45
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Gln Tyr Ile Glu Phe Ser Lys Pro Phe Lys Tyr Gln Gly Leu Thr Ile
1 5 10 15
Leu Val Lys Lys Gly Thr Arg Ile Thr Gly Ile Asn Asp Pro Arg Leu
20 25 30
Arg Asn Pro Ser Asp Lys Phe Ile Tyr Ala Thr Val Lys
35 40 45