一种MI‑2关键中间体及其制备方法与流程

本发明属于有机合成技术领域，具体涉及一种制备mi-2关键中间体的方法。

背景技术：

淋巴瘤（lymphoma）是淋巴结或结外淋巴组织的恶性肿瘤，nhl是成人淋巴瘤的主要类型，占世界上常见恶性肿瘤的第七位，弥漫性大b细胞淋巴瘤（dlbcl）是其中最为常见的一种亚型，其中abc型淋巴瘤是预后最差，治愈率最低，最易产生耐药性的一种类型。因此寻求更加有效的治疗手段尤其是靶向药物用于治疗abc型淋巴瘤成为目前亟待解决的难题。

大量研究数据显示黏膜相关型淋巴组织淋巴瘤易位蛋白（malt1）是abc型淋巴瘤中有效的靶分子，它可以切割多种底物，以促进淋巴细胞增殖，提高淋巴瘤细胞的存活率。malt1的催化活性在正常情况下受抗原受体触发的严格控制，通过其诱导的单泛素化依赖的二聚反应来诱导malt1的激活。通过特异性抑制malt1的活性，可以达到抑制淋巴细胞恶性增值的目的。

mi-2是最近报道的一种骨架新颖、结构简单的malt1抑制剂，该化合物是fontan等人通过高通量筛选（high-throughputscreening,hts）发现的一种具有三氮唑环结构骨架的小分子先导化合物。细胞实验结果表明，mi-2的药效活性可达到纳摩尔级别并对abc型淋巴瘤具有一定的选择性。同时，mi-2（其结构如图1所示）是一种不可逆的malt1抑制剂，其分子结构中的氯甲基酰胺结构部分可以与malt1中的活性位点共价性结合，这可能是其发挥不可逆抑制作用的原因。本课题组前期研究结果显示，在mi-2乙二醇单甲醚支链区域进行合理结构修饰能够大大提高其抑制恶性dlbcl淋巴瘤细胞增殖的能力。

本发明以3,4-二氯苯甲酸为起始原料，经7步常规反应后得到mi-2关键中间体。发明中所涉及的反应操作简单、条件温和、易于处理，所用的试剂及仪器皆为实验室常用易得的，具有很强的操作性。通过该中间体，可快速大量获得mi-2及其在乙二醇单甲醚支链区域改造后的类似物，有助于对mi-2进行系统全面的构效关系研究，具有十分重要的意义。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种mi-2关键中间体及其制备方法，通过该中间体，可快速大量获得mi-2及其在乙二醇单甲醚支链区域改造后的类似物，有助于对mi-2进行系统全面的构效关系研究，具有十分重要的意义。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种mi-2关键中间体，其结构式为：

。

一种制备如上所述的mi-2关键中间体的方法，包括以下步骤：

1）以3,4-二氯苯甲酸为主要起始原料，合成3，4-二氯苯甲酰氯；

2）3，4-二氯苯甲酰氯再与硫氰酸钾反应得到3，4-二氯苯甲酰异硫氰酸酯；

3）3，4-二氯苯甲酰异硫氰酸酯与甲醇反应得到3，4-二氯苯甲酰氨基硫代甲酸甲酯；

4）3，4-二氯苯甲酰氨基硫代甲酸甲酯与对硝基苯肼反应得到3-甲氧基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑；

5）3-甲氧基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑与醋酸反应得到3-羟基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑；

6）3-羟基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑与过量醋酸、锌粉反应得到3-羟基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氨基苯基）-1,2,4-三氮唑；

7）将3-羟基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氨基苯基）-1,2,4-三氮唑依次与氯乙酸和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐混合反应得到mi-2关键中间体：3-羟基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氯乙酰氨基苯基）-1,2,4-三氮唑。

所述的制备mi-2关键中间体的方法，具体为：

1）将3，4-二氯苯甲酸溶于适量二氯甲烷溶剂中，冰浴条件下依次加入1.1当量草酰氯和催化量的n，n-二甲基甲酰胺，撤去冰浴装置，室温搅拌12h后低温旋干得到3，4-二氯苯甲酰氯；

2）向3，4-二氯苯甲酰氯的丙酮溶液中加入等当量的硫氰酸钾，混合溶液在60℃条件下搅拌反应1小时后，反应液经纯化后得到3，4-二氯苯甲酰异硫氰酸酯；

3）3，4-二氯苯甲酰异硫氰酸酯用丙酮溶解后，向其中加入2.5当量甲醇，混合溶液在60℃条件下搅拌反应3小时后，反应液经纯化后得到3，4-二氯苯甲酰氨基硫代甲酸甲酯；

4）将步骤3）制得的3，4-二氯苯甲酰氨基硫代甲酸甲酯用乙醇溶解后，加入1.2当量对硝基苯肼混合均匀，在90℃条件下搅拌反应12小时后，反应液经纯化后得到3-甲氧基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑；

5）将步骤4）所制得的3-甲氧基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑用醋酸溶解后，加入5当量质量分数为33%hbr醋酸溶液，反应液在100℃条件下搅拌反应6小时，冷却，将反应液加入至50ml冰水中并充分搅拌，抽滤得到3-羟基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑；

6）将步骤5）所得的3-羟基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑用适量甲醇溶剂溶解后，加入锌粉、过量醋酸并混合均匀，室温下搅拌反应过夜后，所得反应液经纯化后得到3-羟基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氨基苯基）-1,2,4-三氮唑；

7）将步骤6）制得的3-羟基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氨基苯基）-1,2,4-三氮唑用适量的ch2cl2溶剂溶解，依次加入1.5当量氯乙酸和2当量1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，混合均匀，在室温下搅拌反应2小时后，所得反应液经后处理后得到所述的mi-2关键中间体，即3-羟基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氯乙酰氨基苯基）-1,2,4-三氮唑。

一种利用如上所述的mi-2关键中间体制备mi-2及其类似物的方法：将mi-2关键中间体与三苯基膦混合，用四氢呋喃溶剂溶解后，加入乙二醇单甲醚或醇试剂，在冰浴条件下加入偶氮二甲酸二异丙酯，反应液在室温条件下搅拌反应1小时，所得反应液经纯化后即可得到mi-2或其类似物。

所述的纯化具体为：将反应液用乙酸乙酯稀释后，依次加入适量的水、饱和食盐水萃取1~2次，收集有机相并加入无水硫酸钠干燥后，过滤浓缩，得到的粗产物在合适的洗脱极性下经硅胶柱层析纯化后得到mi-2及其类似物。

本发明的显著优点在于：

本发明所设计的合成路线中所涉及的反应操作简单、条件温和、易于处理，所用的试剂及仪器皆为实验室常用易得的，具有很强的操作性。根据本路线可以快速大量获得malt1抑制剂mi-2及其在乙二醇单甲醚支链区域改造后的类似物，有助于对mi-2进行系统全面的构效关系研究，具有十分重要的意义。

附图说明

图1为mi-2的结构式；

图2为mi-2关键中间体的合成路线。

具体实施方式

为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。

实施例1

一种制备mi-2关键中间体的方法，具体合成步骤为：

1）3，4二氯苯甲酰氯（c）的制备：

在磁力搅拌反应装置中，往装有磁力搅拌子的200ml圆底烧瓶中加入3,4-二氯苯甲酸（9.55g，50mmol）和100ml二氯甲烷，在0℃冰水浴条件下，逐滴加入草酰氯（4.7ml，55mmol），然后接上尾气吸收装置，末端置于装有氢氧化钠溶液的烧杯中，用保鲜膜将烧杯口包裹（用于吸收反应过程中产生的氯化氢气体）。室温下搅拌，反应12小时，经tlc检测已基本无原料3,4-二氯苯甲酸即可停止反应。用旋转蒸发仪除去二氯甲烷溶剂，无须纯化即可进行下一步的反应；

2）3，4-二氯苯甲酰异硫氰酸酯（d）的制备：

取一个干净干燥的100ml圆底烧瓶，先在室温下，将步骤1）制得的3,4-二氯苯甲酰氯（10.5g，50mmol）溶于20ml丙酮中，并加入kscn（4.9g，50mmol）；放入磁力搅拌子，在磁力搅拌反应装置中，加热到60℃，反应1小时。待反应液冷却下来后，经旋转蒸发仪进行旋蒸，除去溶剂后，向粗品中加入20ml乙酸乙酯溶解后转移至分液漏斗中，依次加入水（2×15ml）、饱和食盐水（1×10ml）萃取，收集有机相并加入适量无水硫酸钠干燥后浓缩，得到的粗产物经硅胶柱层析得到10.8g白色固体，洗脱剂为pe/etoac=4:1，反应收率为93%。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.13(d,j=2.1hz,1h),7.88(dd,j=8.4,2.1hz,1h),7.58(d,j=8.4hz,1h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ160.67,150.23,140.11,133.88,132.27,131.24,130.79,129.36.

3）3，4-二氯苯甲酰氨基硫代甲酸甲酯（e）的合成；

向3，4-二氯苯甲酰异硫氰酸酯（d）（504mg，2.2mmol）的丙酮（5ml）溶液中加入meoh（5ml）。将混合物在60℃下搅拌反应3小时。将反应混合物用etoac（15ml）稀释，加h2o（3×5ml）萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到粗产物。残余物通过硅胶柱层析（pe/etoac=2:1）纯化，得到目标产物（481mg，83％），为白色固体。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.16(s,1h),7.92(d,j=2.1hz,1h),7.68–7.63(m,1h),7.57(d,j=8.3hz,1h),4.18(s,3h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ189.84,160.81,138.07,133.87,132.71,131.18,130.04,126.81,59.74.

4）3-甲氧基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑（f）的合成：

取50ml茄形瓶，加入e（432mg,1.6mmol），对硝基苯肼（250mg,1.6mmol），加入5ml甲醇，固体溶解后放入磁力搅拌子，将反应瓶放在磁力搅拌反应装置中，设置温度为70℃，接上冷凝水回流装置，搅拌反应18小时。经tlc检测已基本无原料e即可停止反应。将反应液倒入60ml分液漏斗中，加入20ml乙酸乙酯和20ml去离子水，震荡萃取，分出水相后，有机相用饱和氯化钠溶液再萃取一次。有机相装于50ml锥形瓶中，加入适量无水硫酸钠，放入磁力搅拌子，进行干燥。干燥后的有机相过滤到100ml茄形瓶中，旋转蒸发仪抽去溶剂。通过tlc检测，确定洗脱剂的极性比为pe:etoac=4:1，粗品经硅胶柱层析纯化得到517mg黄色固体，反应收率为89%。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.28(d,j=9.0hz,2h),7.69(d,j=2.1hz,1h),7.54(d,j=9.0hz,2h),7.45(d,j=8.4hz,1h),7.23–7.19(m,1h),4.07(s,3h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ169.07,151.90,147.14,142.45,135.62,133.78,131.07,131.01,127.94,127.24,125.25,125.12,57.34.

5）3-羟基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑（g）的合成：

将步骤4）所制得的3-甲氧基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑（f）（109mg,0.30mmol)用5ml醋酸溶解后，加入质量分数为33%的hbr醋酸溶液（736mg,3.0mmol），反应液在100℃条件下搅拌反应6小时；冷却，将反应液加入至50ml冰水中并充分搅拌，抽滤得到104mg浅黄色固体物质即3-羟基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑（g），反应收率为99%。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.83(s,1h),8.30(d,j=8.8hz,2h),7.76(d,j=2.0hz,1h),7.68(d,j=8.4hz,1h),7.62(d,j=8.8hz,2h),7.38–7.32(m,1h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ167.02,150.75,146.48,142.24,133.41,131.73,131.17,130.80,129.04,128.17,125.64,124.99.

6）3-羟基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氨基苯基）-1,2,4-三氮唑（h）的合成：

将3-羟基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑（g）（105mg,0.3mmol）溶于2ml甲醇溶剂中，依次向反应溶液中加入0.5ml醋酸、锌粉（196mg,3mmol）。放进磁力搅拌子，室温下搅拌过夜。经tlc检测反应液中基本没有原料g时停止反应，旋转除去甲醇。将反应后的产物用乙酸乙酯溶解，用蒸馏水和饱和食盐水萃取若干次，收集有机相，然后用无水硫酸钠进行干燥除去有机相中的水，旋转蒸发仪除去乙酸乙酯。得到的粗产物经硅胶柱层析纯化得到89mg浅黄色固体，洗脱剂极性为ch2cl2/meoh=10:1，反应收率为93%。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.30(s,1h),7.66–7.55(m,2h),7.32(d,j=8.4hz,1h),7.00(d,j=8.2hz,2h),6.60(d,j=8.2hz,2h),5.50(s,2h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ166.19,149.69,149.17,132.47,131.36,130.90,129.95,128.52,128.25,126.98,125.92,113.87.

7）3-羟基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氯乙酰氨基苯基）-1,2,4-三氮唑（a）的合成：

取一个25ml茄型瓶，加入3-羟基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氨基苯基）-1,2,4-三氮唑（h）（635mg,2.0mmol），氯乙酸（260mg,3.0mmol），edci（760mg，4.0mmol），再加入2ml二氯甲烷，用超声仪使固体溶解，放入磁力搅拌子。常温反应3小时。经tlc检测无原料后，停止反应。将反应后的产物用乙酸乙酯溶解，用蒸馏水和饱和食盐水萃取若干次，收集有机相，然后用无水硫酸钠进行干燥除去有机相中的水，旋转蒸发仪除去乙酸乙酯。得到的粗产物经硅胶柱层析纯化得到725mg浅黄色固体，洗脱剂极性为ch2cl2/meoh=10:1，反应收率为93%。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.50(s,1h),10.57(s,1h),7.73–7.61(m,4h),7.36(d,j=8.7hz,2h),7.31–7.26(m,1h),4.27(s,2h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ166.56,165.17,149.69,139.01,133.01,132.86,131.51,131.04,130.30,128.54,128.29,126.48,119.99,43.65.

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。