HCO3溶液和去离子水洗涤多次，用无水硫酸镁除水后过滤，经甲醇沉淀，抽滤后真空烘干得到产物V大分子引发剂(6sPCL-Br);将 4.8g 产物 V、32.0g ME02MA、14.2g 0EGMA、0.5g Cufc 和 0.4gPMDETA加入到60ml四氢呋喃中，体系冷冻抽真空三次，在氩气保护下65°C反应5h，冷却后过中性氧化铝柱，透析，冻干得产物VI温度响应型6sPCL-f P (ME02MA-c^0EGMA);将6.4g产物VI和0.8g叠氩化钠溶于50ml N, N-二甲基甲酰胺中，体系冷冻抽真空三次，在氩气保护下60°C反应48h。反应结束后，旋蒸除溶剂用四氢呋喃溶解后过中性氧化铝柱，经正己烷沉淀，抽滤后真空烘干得到产物VII叠氩化的6sPCL-fP (MEO2MA-CtOEGMA)-N3;
将 6.4g 产物 VI1、5.5g 产物 ΙΙΙ、0.Ig CuBr 和 0.2g PMDETA 加入到 50ml N, N-二甲基甲酰胺中，体系冷冻抽真空三次，在氩气保护下75°C反应36h，反应结束后透析，冻干，得到最终产物 6SPCL-ZH3 (ME02MA-c^0EGMA) -/KDS 共聚物。
【主权项】
1.一种用于药物控释和基因载体的温度响应型聚合物的制备方法，其特征在于:具体步骤如下: (1)将低分子量壳聚糖和邻苯二甲酸酐按照摩尔比为1:2?6(以壳寡糖中的吡喃糖环计算摩尔比)计量加入到N，N- 二甲基甲酰胺中，在氮气或氩气保护下反应，反应温度为100?150°C，反应时间为4?12小时，待反应产物冷却到室温，将其加入到甲醇中沉淀，抽滤，并用甲醇重复洗涤抽滤3次，将过滤产物在40°C下真空烘干24h，得到产物I邻苯二甲酰化壳寡糖；所述低分子量壳聚糖为壳寡糖COS ； (2)将步骤(I)得到的邻苯二甲酰化壳寡糖、4-戊炔酸、催化剂1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和催化剂羟基苯并三唑按照摩尔比为1:4?8:4?8:2?4 (以壳寡糖中的吡喃糖环计算摩尔比)计量加入到N，N- 二甲基甲酰胺中，在氮气或氩气保护下室温反应24?72小时；反应结束后，将产物加入到甲醇中沉淀，抽滤，再用N，N- 二甲基甲酰胺溶解后经甲醇沉淀，重复3次，将过滤产物在40°C下真空烘干24h，得到产物II炔基化邻苯二甲酰化壳寡糖； (3)将步骤(2)得到的炔基化邻苯二甲酰化壳寡糖和水合肼按照摩尔比为1:5?10 (以壳寡糖中的吡喃糖环计算摩尔比)计量加入到N，N-二甲基甲酰胺中，在氮气或氩气保护下反应，反应温度为80?140°C，反应时间为4?8小时，待反应产物冷却到室温，将其加入到甲醇中沉淀，抽滤，并用甲醇重复洗涤抽滤至滤液无色为止，将过滤产物在40°C下真空烘干24h，得到产物III炔基化壳寡糖，备用； (4)将含有羟基官能团的引发剂A和环酯类单体B按照摩尔比为1:20?1000计量加入到反应Il中，按照单体总摩尔量的ο.οι?1%加入催化剂C，在氮气或氩气保护下反应，反应温度为100?140°C，反应时间为12?36小时，待反应产物冷却到室温，加入二氯甲烷使其溶解，将溶液加入到甲醇中沉淀，抽滤，再用二氯甲烷溶解后经甲醇沉淀，重复3次，将过滤产物在40°C下真空烘干24h，得到产物IV聚酯类高分子材料； (5)将步骤(4)得到的聚酯类高分子材料和三乙胺按照摩尔比为1:4?50计量加入到二氯甲烷中，随后将反应体系冷却到(TC，并向其中逐滴滴加2-溴异丁酰溴溶液，所述2-溴异丁酰溴溶液用量为产物IV聚酯类高分子材料摩尔数的3?35倍，用二氯甲烷稀释5?10倍，(TC搅拌2小时后移至室温下继续反应36-72小时；反应结束后旋蒸浓缩，并依次用饱和NaHCO3溶液和去离子水反复洗涤多次，用无水硫酸镁除水后过滤、旋蒸浓缩，将溶液加入到甲醇中沉淀，抽滤，再用二氯甲烷溶解后经甲醇沉淀，重复3次，将过滤产物在40°C下真空烘干24h，得到产物V原子转移自由基聚合的大分子引发剂； (6)将步骤(5)得到的ATRP大分子引发剂、催化剂溴化亚铜、配体PMDETA、MEO2MA单体和OEGMA单体按照摩尔比为1: (2?20): (2?20): (10?1000): (10?1000)计量加入到四氢呋喃中，在氮气或氩气保护下反应，反应温度为40?80°C，反应时间为5?10小时，待反应产物冷却到室温，用四氢呋喃稀释后过中性氧化铝柱子以除去铜盐，旋蒸浓缩后透析除去未反应的单体，最后冷冻干燥得到产物VI温度响应型嵌段共聚物； (7)将步骤(6)得到的温度响应型嵌段共聚物和叠氮化钠按照摩尔比为1:10?30计量加入到N，N- 二甲基甲酰胺中，在40?60°C温度下反应24?72小时；反应结束后旋蒸浓缩除去N，N-二甲基甲酰胺，用四氢呋喃重新溶解产物后过中性氧化铝柱子以除去残留的钠盐，将溶液旋蒸浓缩后加入到正己烷中沉淀，抽滤，再用四氢呋喃溶解后经正己烷沉淀，重复3次，将过滤产物在40°C下真空烘干24h，得到产物VII叠氮化的温度响应型嵌段共聚物； (8)将步骤(7)得到的叠氮化温度响应型嵌段共聚物、步骤(3)得到的炔基化壳寡糖、催化剂溴化亚铜、配体PMDETA按照摩尔比为1:10?100:4?30:4?30计量加入到N, N- 二甲基甲酰胺中，在氮气或氩气保护下反应，反应温度为50?80°C，反应时间为24?72小时；反应结束后透析处理以除去未反应的原料，然后进行冷冻干燥处理，得到最终的用于药物控释和基因载体的温度响应型聚合物。
2.根据权利要求1所述的用于药物控释和基因载体的温度响应型聚合物的制备方法，其特征在于:所述壳寡糖COS的数均分子量Mn为1000?3000，聚合度DP为2?10，脱乙酰度超过95%。
3.根据权利要求1所述的用于药物控释和基因载体的温度响应型聚合物的制备方法，其特征在于:所述含有羟基官能团的引发剂A为聚乙二醇、乙二醇、新戊二醇、季戊四醇、双季戊四醇或环糊精中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的用于药物控释和基因载体的温度响应型聚合物的制备方法，其特征在于:所述环酯类单体B为ε -己内酯、L-丙交酯、D-丙交酯、D，L-丙交酯、乙交酯或丁内酯中的一种或几种。
5.根据权利要求1所述的用于药物控释和基因载体的温度响应型聚合物的制备方法，其特征在于:所述催化剂C为辛酸亚锡、环烷氧锡、钛酸四丁酯、乙酰丙酮铁或异丙醇铝中的一种或几种。
【专利摘要】本发明涉及一种用于药物控释和基因载体的温度响应型聚合物的制备方法。在壳寡糖上氨基被保护的情况下，与4-戊炔酸反应，得到炔基化壳寡糖；利用疏水性环酯类单体开环聚合制备出大分子引发剂，结合原子转移自由基聚合，在大分子链上引入具有温度响应性的亲水链段MEO2MA和OEGMA，制备出两亲性嵌段共聚物，并使其端基叠氮化；通过点击化学反应，在两亲性嵌段共聚物上引入亲水性的壳寡糖分子链，制备出用于药物控释和基因载体的温度响应型聚合物。本发明制备的聚合物材料具有温度响应性和生物相容性，且具有较为丰富的氨基基团，能够起到搭载外源基因的作用，此外该两亲性嵌段共聚物可以在水中自组装成胶束，在癌症化疗、基因治疗等领域都具有良好的应用前景。
【IPC分类】A61K47-34, C08G81-02, C12N15-87
【公开号】CN104629059
【申请号】CN201510041679
【发明人】任杰, 王雪芳, 李建波
【申请人】同济大学
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年1月28日