丝体提供充足的营 养。
【附图说明】
[0012] 图1是实验二的实验结果对比图； 图中标号1-9分别表示实验二中的配方1-9所培养出的金龟子绿僵菌； 图2是实验三的实验结果对比图； 图中标号1-15分别表示实验三中的配方1-15所培养出的金龟子绿僵菌。
【具体实施方式】
[0013] 适宜金龟子绿僵菌产孢的发酵培养基，包括种子培养基和固体发酵培养基，其中 所述种子培养基包括固体种子培养基和液体种子培养基；每升固体种子培养基中含有质量 浓度为20%马铃薯汁1000mL、葡萄糖20g、KH 2P04 3g、MgS04 1. 5g和琼脂20g，余量为水；每 升液体种子培养基中，含有蛋白胨10 g、蔗糖10 g、K2HP04 0. 3 g、MgS04 0. 3 g和NaCl 0. 3 g，余量为水； 所述固体发酵培养基的成分为：麦麸、玉米糁和蒸馏水；其中麦麸和玉米糁的质量比 为1:1，蒸馏水的质量为麦麸和玉米糁总质量55-60%。所述固体发酵培养基的制备方法 为：取质量比为1:1的麦麸和玉米糁，混合均匀，放入三角瓶中，加入麦麸和玉米糁总质量 55-60%的蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀，塞上棉塞，121°C蒸汽灭菌45min。
[0014] 以上所述的适宜金龟子绿僵菌产孢的发酵培养基的使用方法，包括以下步骤： 步骤一、将金龟子绿僵菌接种至固体种子培养基上，置于25°C恒温培养箱培养7~12d 后(待产生大量橄榄绿色孢子后)，在超净工作台上用灭菌的质量体积为0. 2%的吐温-80洗 下固体种子培养基上的孢子，转移到灭菌的放有液体种子培养基和玻璃珠的三角瓶中，震 荡十分钟，使孢子分散均匀；然后置于25°C恒温摇床上150rpm震荡培养2~3d，所得发酵液 即为液体种子； 步骤二、在超净工作台上用移液枪吸取5 mL的液体种子，接入灭菌后的固体发酵培养 基上，在酒精灯火焰上方用玻璃棒搅拌均匀，置于25°C恒温培养箱中进行培养10天后结 束培养，即培养出产孢的金龟子绿僵菌； 步骤三、计算金龟子绿僵菌产孢子的量：准确称取质量为m (lg左右)的发酵，放入盛有 少许蒸馏水的小三角瓶中，用玻璃棒将菌丝打散，经三层纱布过滤，过滤时用角匙压散结块 的菌丝,经多次反复打散菌丝、洗涤、过滤，将孢子完全洗出，收集滤液，加入玻璃珠,120rpm 振荡2h，定容至适当体积V，适当稀释，用血球计数板计数，记为N ;参照公式计算一定重量 发酵原料的产孢量。
[0015] 产孢量的计算公式如下：
【主权项】
1. 适宜金龟子绿僵菌产孢的发酵培养基，其特征在于：包括种子培养基和固体发酵培 养基； 所述种子培养基包括固体种子培养基和液体种子培养基；每升固体种子培养基中含有 质量浓度为20%马铃薯汁1000 mU葡萄糖20g、KH2PO4 3g、MgSO4 I. 5g和琼脂20g，余量为 水；每升液体种子培养基中，含有10 g蛋白胨、10 g蔗糖、0.3 g K2HP04、0. 3 g MgSOJP0.3 g NaCl，余量为水； 所述固体发酵培养基的成分为：麦麸、玉米糁和蒸馏水；其中麦麸和玉米糁的质量比 为1: 1，蒸馏水的质量为麦麸和玉米糁总质量55~60%。
2. 如权利要求1所述的适宜金龟子绿僵菌产孢的发酵培养基的制备方法，其特征在 于：所述固体发酵培养基的制备方法为：取质量比为1:1的麦麸和玉米糁，混合均匀，放 入三角瓶中，加入麦麸和玉米糁总质量55~60%的蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀，塞上棉塞， 121°C蒸汽灭菌45min，即制备出固体发酵培养基。
3. 如权利要求1所述的适宜金龟子绿僵菌产孢的发酵培养基的使用方法，其特征在 于：包括以下步骤： 步骤一、将金龟子绿僵菌接种至固体种子培养基上，置于25°C恒温培养箱培养7~12d 后，在超净工作台上用灭菌的质量体积为〇. 2%吐温-80洗下固体种子培养基上的孢子，转 移到灭菌的放有液体种子培养基和玻璃珠的三角瓶中，震荡十分钟，使孢子分散均匀；然后 置于25°C恒温摇床上150rpm震荡培养2~3d，所得发酵液即为液体种子； 步骤二、在超净工作台上用移液枪吸取5 mL的液体种子，接入灭菌后的固体发酵培养 基上，在酒精灯火焰上方用玻璃棒搅拌均匀，置于25°C恒温培养箱中进行培养10天后结束 培养，即培养出长出孢子的金龟子绿僵菌。
4. 如权利要求3所述的适宜金龟子绿僵菌产孢的发酵培养基的使用方法，其特征在 于：采用培养出的金龟子绿僵菌制备金龟子绿僵菌孢子粉的步骤为：将发酵后的固体发酵 培养基在研钵中研磨后，先用20目筛子过滤，再依次用60目、100目和60目筛子过滤，最后 用200目筛子过滤，收集金龟子绿僵菌所产生的孢子；将所收集的孢子放入烘箱中干燥，温 度25°C下干燥24h取出，即制备出金龟子绿僵菌孢子粉。
【专利摘要】适宜金龟子绿僵菌产孢的发酵培养基及其制备和使用方法，涉及一种培养基；所述培养基，包括种子培养基和固体发酵培养基。所述种子培养基包括固体种子培养基和液体种子培养基；固体种子培养基中含有马铃薯汁1000mL、葡萄糖、KH2PO4、MgSO4和琼脂，余量为水；液体种子培养基中含有蛋白胨、蔗糖、K2HPO4、MgSO4和NaCl，余量为水；所述固体发酵培养基的成分为：麦麸、玉米糁和蒸馏水;其中麦麸和玉米糁的质量比为1:1，蒸馏水的质量为麦麸和玉米糁总质量55-60%。本发明适宜金龟子绿僵菌产孢的发酵培养基适于金龟子绿僵菌的生长，每克发酵原料可产生1×109以上个孢子；制备的孢子粉萌发率可达95%。
【IPC分类】C12R1-645, C12N3-00
【公开号】CN104651294
【申请号】CN201510131011
【发明人】侯颖, 徐建强, 林晓民, 刘圣明, 李晓艳
【申请人】河南科技大学
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2015年3月25日