炎、原发性胆汁性肝硬化、乳糜泻、疱瘆样皮炎、隐源性肝硬化、反应 性关节炎、克罗恩氏病、惠普尔氏病、溃疡性结肠炎、硬化性胆管炎、移植物抗宿主病、抗体 介导的移植体排斥、骨髓移植后排斥、传染病后炎症、淋巴瘤、白血病、瘤形成、哮喘、伴有抗 β细胞抗体的1型糖尿病、斯耶格伦氏综合征、混合型结缔组织病、阿狄森病、伏格特-小 柳-原田三氏综合征、膜增生性肾小球肾炎、肺出血肾炎综合征、格雷夫斯氏病、桥本氏甲 状腺炎（Hashimoto, s thyroiditis)、韦格纳肉芽肿病（Wegener，s granulomatosis)、显微 镜下多动脉炎（micropolyarterits)、丘-施二氏综合征、结节性多发性动脉炎和多系统器 官衰竭。
[0046] 本发明还包括能有效治疗传染病的方法和组合物，所述疾病包括但不限于由细菌 剂、真菌剂、寄生虫剂和病毒剂引起的那些疾病。这样的感染试剂的实例包括以下各项：葡 萄球菌属、链球菌科、奈瑟氏菌科、球菌属、肠杆菌科、假单胞菌科、弧菌科、弯曲杆菌属、巴 斯德菌科、博德特氏菌属、弗朗西斯氏菌属、布鲁氏菌属、军团菌科、拟杆菌科、梭菌属、棒状 杆菌属、丙酸杆菌属、革兰氏阳性杆菌属、炭疽属、放线菌属、诺卡氏菌属、分支杆菌属、密螺 旋体属、包柔氏螺旋体属、钩端螺旋体属、支原体属、尿素原体、立克次体属、衣原体属、其它 革兰氏阳性杆菌属、其它革兰阴性杆菌属、系统性霉菌、其它机会性霉菌、原生动物、线虫、 吸虫、绦虫、腺病毒、疱瘆病毒（包括例如单纯疱瘆病毒和EB病毒以及带状疱瘆病毒）、痘病 毒、乳多空病毒、肝炎病毒、乳头状瘤病毒、正粘病毒（包括例如A型流感、B型流感和C型流 感）、副粘病毒、冠状病毒、小核糖核酸病毒、呼肠孤病毒、披膜病毒、黄病毒、布尼亚病毒科、 弹状病毒属、呼吸道合胞病毒，人免疫缺陷病毒和逆转录病毒。示例性的传染病包括但不限 于念珠菌病、念珠菌血症、曲霉病、链球菌性肺炎、链球菌性皮肤和口咽病状、革兰氏阴性脓 毒病、肺结核、单核细胞增多症、流感、由呼吸道合胞病毒引起的呼吸系统疾病、疟疾、血吸 虫病和锥虫病。
[0047] 在另一实施方案中，经静脉内、经皮下、经口、经鼻、经腹膜内、经舌下、经颊、经皮、 通过皮下或皮下植入、经十二指肠内或经肌内施用所述斯塔都体。在一个实施方案中，所 述斯塔都体经静脉内施用。因为本发明的斯塔都体的效力有所增强，所以在一些实施方案 中，与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比，所述斯塔都体可以用较低剂量经静脉内 施用。在一个实施方案中，所述斯塔都体以约〇. 〇lmg/Kg至约1000mg/Kg(静脉内）的剂量 经静脉内施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约0. lmg/Kg至约100mg/Kg经静脉内施 用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约〇. 5mg/Kg至约50mg/Kg经静脉内施用。在另一 实施方案中，所述斯塔都体以约lmg/Kg至约25mg/Kg经静脉内施用。在另一实施方案中， 所述斯塔都体以约5mg/Kg至约15mg/Kg经静脉内施用。在一个实施方案中，所述斯塔都体 经皮下施用。因为本发明的斯塔都体的效力有所增强，所以在一些实施方案中，与对相同抗 原具有特异性的单克隆抗体相比，所述斯塔都体可以用较低剂量经皮下施用。在一个实施 方案中，所述斯塔都体以约〇.〇lmg/Kg至约1000mg/Kg(皮下）的剂量皮下施用。在另一实 施方案中，所述斯塔都体以约〇. 2mg/Kg至约150mg/Kg经皮下施用。在另一实施方案中，所 述斯塔都体以约〇. 5mg/Kg至约80mg/Kg经皮下施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以 约2mg/Kg至约50mg/Kg经皮下施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约5mg/Kg至约 30mg/Kg经皮下施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体是在单克隆抗体之前、同时或之后 施用。在另一实施方案中，在单克隆抗体之前、同时或之后施用的斯塔都体所具有的Fab对 抗与所述单克隆抗体相同的抗原。在另一实施方案中，在单克隆抗体之前、同时或之后施用 的斯塔都体所具有的Fab对抗与所述单克隆抗体不同的抗原。
[0048] 在另一实施方案中，所述斯塔都体是在施用一种或多种额外药物和/或治疗剂之 前、期间或之后施用。在另一实施方案中，额外药物活性剂包含类固醇；生物性抗自身免疫 药物诸如单克隆抗体、融合蛋白或抗细胞因子；非生物性抗自身免疫药物；免疫抑制剂；抗 生素；和抗病毒剂；细胞因子；或能够以其它方式作为免疫调节物发挥作用的药物。在另一 实施方案中，所述类固醇是泼尼松、泼尼松龙、可的松、地塞米松、莫米松、睾酮、雌激素、氧 雄龙、氟替卡松、布地奈德、倍氯米松、沙丁胺醇或左旋沙丁胺醇。在另一实施方案中，所述 斯塔都体是在施用化疗剂之前、期间或之后施用。在另一实施方案中，当一起施用时，所述 斯塔都体和额外治疗剂显示治疗性协同作用。在一个实施方案中，所述斯塔都体是在施用 额外治疗剂之前施用。在另一个实施方案中，所述斯塔都体是在施用额外治疗剂的同时施 用。在另一个实施方案中，所述斯塔都体是在施用额外治疗剂之后施用。在一个实施方案 中，所述斯塔都体是在施用危险信号之前施用。在另一个实施方案中，所述斯塔都体是在施 用危险信号的同时施用。在另一个实施方案中，所述斯塔都体是在施用危险信号之后施用。
[0049] 在另一个实施方案中，所述斯塔都体与物种特异性或嵌合型斯塔都体分子一起施 用以治疗人、非人灵长类（例如，猴、狒狒和黑猩猩）、小鼠、大鼠、牛、马、猫、犬、猪、兔、山 羊、鹿、绵羊、雪貂、沙鼠、豚鼠、仓鼠、蝙蝠、鸟类（例如，鸡、火鸡和鸭）、鱼类和爬行类。在另 一个实施方案中，所述人是成人或儿童。在另一个实施方案中，施用所述斯塔都体以预防自 身免疫疾病。在另一实施方案中，施用所述斯塔都体以预防伴侣动物和家畜中疫苗相关的 自身免疫性病状。
[0050] 在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体所显示的细胞 杀伤与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比有所增强。在一个实施方案中，所述增强 的细胞杀伤由ADCC介导。在另一实施方案中，所述斯塔都体所显示的ADCC与对相同抗原 具有特异性的单克隆抗体相比高出至少2倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示 的ADCC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少5倍。在另一个实施方案中， 所述斯塔都体所显示的ADCC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少10倍。 在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的ADCC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗 体相比高出至少20倍。在另一个实施方案中，所述增强的细胞杀伤由CDC介导。在另一实 施方案中，所述斯塔都体所显示的CDC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至 少2倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的CDC与对相同抗原具有特异性的单 克隆抗体相比高出至少5倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的CDC与对相同 抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少I 0倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所 显示的CDC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少20倍。在另一个实施方 案中，所述增强的细胞杀伤由DC介导。在另一实施方案中，所述斯塔都体所显示的DC与对 相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少2倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都 体所显示的DC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少5倍。在另一个实施方 案中，所述斯塔都体所显示的DC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少10 倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的DC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗 体相比高出至少20倍。
[0051] 在一个实施方案中，所述斯塔都体含有两个或更多个多聚化结构域，且所显示的 细胞杀伤与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比有所增强。在一个实施方案中，所述细 胞杀伤由ADCC介导。在另一实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显 示的ADCC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少2倍。在另一个实施方案中， 具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的ADCC与含有一个多聚化结构域的斯 塔都体相比高出至少5倍。在另一个实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔 都体所显示的ADCC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少10倍。在另一个实 施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的ADCC与含有一个多聚化 结构域的斯塔都体相比高出至少20倍。在另一个实施方案中，所述增强的细胞杀伤由CDC 介导。在另一实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的CDC与含 有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少2倍。在另一个实施方案中，具有两个或更 多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的CDC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高 出至少5倍。在另一个实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的 CDC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少10倍。在另一个实施方案中，具有 两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的CDC与含有一个多聚化结构域的斯塔都 体相比高出至少20倍。在另一个实施方案中，所述增强的细胞杀伤由DC介导。在另一实施 方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的DC与含有一个多聚化结构 域的斯塔都体相比高出至少2倍。在另一个实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域 的斯塔都体所显示的DC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少5倍。在另一 个实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的DC与含有一个多聚 化结构域的斯塔都体相比高出至少10倍。在另一个实施方案中，具有两个或更多个多聚化 结构域的斯塔都体所显示的DC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少20倍。
[0052] 在另一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体所显示的对 细胞增殖的抑制与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比有所增强。在一个实施方案 中，所述斯塔都体对细胞增殖的抑制与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比多出至少 10%。在另一个实施方案中，所述斯塔都体对细胞增殖的抑制与对相同抗原具有特异性的 单克隆抗体相比多出至少20%。在另一个实施方案中，所述斯塔都体对细胞增殖的抑制与 对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比多出至少50%。在另一个实施方案中，本发明涉 及一种含有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体，且所显示的对细胞增殖的抑制与含有 一个多聚化结构域的斯塔都体相比有所增强。在一个实施方案中，所述斯塔都体对细胞增 殖的抑制与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比多出至少10%。在另一个实施方案中， 所述斯塔都体对细胞增殖的抑制与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比多出至少20%。 在另一个实施方案中，所述斯塔都体对细胞增殖的抑制与含有一个多聚化结构域的斯塔都 体相比多出至少50%。
[0053] 在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体所显示的补体 结合与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比有所增强。在另一实施方案中，所述斯塔 都体所显示的补体结合与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比有所增强。在一个实施 方案中，所述增强的补体结合是与Clq结合。在一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的增 强的补体结合与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少2倍。在另一个实施方 案中，所述斯塔都体所显示的增强的补体结合与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比 高出至少5倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的增强的补体结合与对相同抗 原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少I 0倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显 示的增强的补体结合与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少20倍。在一个 实施方案中，所述增强的补体结合通过EC 50值来测量。在一个实施方案中，所述斯塔都体 的补体结合EC50值与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比低至少5倍。在另一个实 施方案中，所述斯塔都体的补体结合EC 50值与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比 低至少10倍。在另一实施方案中，所述斯塔都体的补体结合EC 50值与对相同抗原具有特 异性的单克隆抗体相比低至少20倍。在一个实施方案中，多聚化斯塔都体所显示的补体结 合相对于对相同抗原具有特异性的非多聚化斯塔都体有所增加。在另一个实施方案中，多 聚化斯塔都体所显示的补体结合EC 50值相对于对相同抗原具有特异性的非多聚化斯塔 都体有所减少。在另一实施方案中，所述多聚化斯塔都体的EC 50值与所述非多聚化斯塔 都体相比低至少2倍。在另一个实施方案中，所述多聚化斯塔都体的EC 50值与所述非多 聚化斯塔都体相比低至少5倍。
[0054] 在一个实施方案中，斯塔都体所展现的补体结合水平取决于Fab而变化。因此，在 一个实施方案中，具有相同的多聚化结构域和相同的Fc区但具有不同的Fab的两种斯塔都 体展现不同的补体结合水平。在一个实施方案中，具有抗CD20Fab的多聚化斯塔都体所展 现的补体结合与具有跟抗CD20Fab相同的多聚化结构域和相同的Fc区但具有抗TNF或抗 HER2/neu Fab的多聚化斯塔都体相比显著较高。
[0055] 在一个实施方案中，本发明涉及包含多聚化斯塔都体的组合物。在另一实施方案 中，所述组合物包含至少2种、至少3种、至少4种、至少5种、至少6种、至少7种、至少8 种、至少9种、至少10种或更多种斯塔都体。
[0056] 附图简述
[0057] 图1是多聚化连续斯塔都体和多聚化C末端斯塔都体和组成斯塔都体的结构单元 的示意性图示。
[0058] 图2是连续斯塔都体的一般结构的示意性图示。
[0059] 图3是若干种连续斯塔都体的结构的示意性图示，其说明具有一个或多个所指示 的多聚化结构域或连接结构域的构建体。
[0060] 图4是连续斯塔都体构建体的说明。
[0061] 图5是若干种多聚化C末端斯塔都体的结构的示意性图示，其说明具有一个或多 个所指示的多聚化结构域的构建体。
[0062] 图6是多聚化C末端斯塔都体构建体的说明。
[0063] 图7是本发明的优选斯塔都体的结构的示意性图示，其包含由异亮氨酸拉链和 IgG2铰链分隔的两个IgGlFc结构域。
[0064] 图8是非还原SDS-PAGE凝胶，其示出了所指示的C末端多聚化斯塔都体的多聚体 的形成与未改变的抗体GB2500的比较。
[0065] 图9是非还原SDS-PAGE凝胶，其示出了所指示的连续斯塔都体的多聚体的形成与 未改变的抗体GB2500的比较。
[0066] 图10示出了所指示的斯塔都体的ADCC与未改变的HER2/neu抗体GB2500的比较， 如通过效应细胞对靶细胞比率范围内的靶细胞杀伤百分比所测量。
[0067] 图11示出了所指示的斯塔都体的ADCC剂量反应与未改变的HER2/neu抗体 GB2500的比较，如通过斯塔都体浓度范围内的靶细胞杀伤百分比所测量。
[0068] 图12示出了代表性等离子体共振（Biacore)数据，其指示所指示的各斯塔都体或 未改变的抗体GB2500与Fc γ RIIIa的结合或解离。
[0069] 图13示出了所有测试斯塔都体或未改变的抗体GB2500的Fc γ RIIIa结合数据。 [0070] 图14描绘了所指示的斯塔都体的Biacore结合（RU)与ADCC活性之间的相关性。 ADCC活性呈现为各斯塔都体相对于GB2500的倍数差异平均值。
[0071] 图15示出了在Mono Q柱上通过离子交换色谱法纯化斯塔都体构建体的结果。泳 道SB是未分级的斯塔都体；通过非变性凝胶（左图）来分析洗脱色谱图（右图）上的峰1、 2和3〇
[0072] 图16示出了非还原（上图）和还原（下图）SDS_PAGE凝胶，其示出了所指示的连 续斯塔都体的多聚体的形成与未改变的抗体GB2500的比较。
[0073] 图17示出了亲本抗体GB2500或所指示的连续斯塔都体与Fc γ RIIIa的结合。在 3333-208ηΜ范围内的浓度下测试GB2500 (在HEK或CHO细胞中生长）。在200-12. 5ηΜ范 围内的浓度下测试连续斯塔都体GB2524、GB2538、GB2540、GB2542、GB2554和GB2555。
[0074] 图18是涉及用斯塔都体或其相应单克隆抗体处理人PBMC-SCID (hu-PBMC SCID) 小鼠的研宄的实验流程图的示意图。
[0075] 图 19 示出 了在经 PBS、GB4500、GB4563 或 GB4542 处理的 hu-PMBC SCID 小鼠中人 IgM的血清水平随时间变化。
[0076] 图 20 示出 了在经 PBS、GB4500、GB4563 或 GB4542 处理的 hu-PBMC SCID 小鼠中外 周血中的人B细胞数目随时间变化。
[0077] 图 21 示出了经 PBS、GB4500、GB4563 或 GB4542 处理的 hu-PBMC SCID 小鼠的脾中 的人B细胞的数目。
[0078] 图22示出了在所指示的抗体或斯塔都体浓度（μ g/mL)下由GB4500或GB4542 介导的细胞增殖的抑制百分比。使用T检验计算GB4500对比GB4542的统计学显著性； *ρ〈0· 05, **Ρ〈0· 005。
[0079] 图23示出了在所指示的抗体或斯塔都体pmol/mL下由GB4500或GB4542介导的 细胞增殖的抑制百分比。
[0080] 图24示出了在所指示的抗体或斯塔都体浓度（μ g/mL)下由GB4500、GB4596或 GB4542介导的补体依赖性细胞毒性百分比。
[0081] 图25示出了在所指示的抗体或斯塔都体pmol/mL下由GB4500或GB4542介导的 补体依赖性细胞毒性百分比。
[0082] 图26示出了在小鼠 Raji-SCID淋巴瘤模型中在肿瘤内注射PBS、GB4500或 GB4542 (有或无 CpG)之后的平均肿瘤体积随时间变化。
[0083] 图27示出了在小鼠 Raji-SCID淋巴瘤模型中在肿瘤内注射PBS、GB4500或 GB4542 (有或无 CpG)之后的中位肿瘤体积随时间变化。
[0084] 图28示出了补体Clq与抗体GB2500、斯塔都体GB2542、抗体GB7500、斯塔都体 GB7542、抗体GB4500和斯塔都体GB4542的结合，如通过在所指示的斯塔都体或抗体浓度下 的吸光度（450nm)来测量。
[0085] 图29示出了补体Clq对抗体GB2500、斯塔都体GB2542、抗体GB7500、斯塔都体 GB7542、抗体GB4500和斯塔都体GB4542的结合的EC50值。
[0086] 图30示出了与抗体GB2500和斯塔都体GB2542、GB2554及GB2555的补