，加入1-叔下氧幾基赃嗦（135mg，1.Ommol)，室溫反应12h。减压 蒸除有机溶剂，残留物进行柱层析纯化（二氯甲烧/甲醇（V/V) = 10/1)，得到淡黄色油状 物（1. 25g, 56. 60% )。
[030引 MS-ESI:巧SI,pos.ion) m/z:308. 4 [M+1]
[0306] 步骤。4- (2-((7-环戊基-6-(二甲基氨基甲酯基）-7H-化咯[2, 3-d]喀 晚-2-基）氨基）喀晚-5-幾基）赃嗦-1-甲酸叔下醋
[0307] 在氮气保护下，将2-氯-7-环戊基-N，N-二甲基-7H-化咯[2, 3-d]喀晚-6-酷 胺（322mg, 1.0mmol)，4-(2-氨基喀晚-5-幾基）赃嗦-I-甲酸叔下醋（320mg,l.Ommol，碳 酸飽化52mg, 2.Ommol)，BINAP(58mg, 0.lmmol)和醋酸钮巧2mg, 0.lmmol)溶于 1，4-二氧六 环（25血）揽拌加热至Iior反应。冷至室溫，加入二氯甲烧（100血）稀释，娃藻±过滤，滤 液减压浓缩蒸出溶剂，残余物进行柱层析分离（二氯甲烧/甲醇（V/V) =10/1)得到淡黄 色固体（201mg, 33. 17% )
[030引 MS-ESI: (ESI,pos.ion)m/z: 564.8[M+1]
[0309] 步骤3)7-环戊基-N，N-二甲基-2-(巧-(赃嗦-I-幾基）喀晚-2-基）氨 基）-7H-化咯巧，3-d]喀晚-6-甲酯胺
[0310] 在100血单口烧瓶中，将4- (2- ((7-环戊基-6-(二甲基氨基甲酯基）-7H-化咯 垃3-d]喀晚-2-基）氨基）喀晚-5-幾基）赃嗦-1-甲酸叔下醋（230mg，0. 5mmol)溶 于二氯甲烧（10血）中，在冰浴条件下加入S氣乙酸巧血)，揽拌30min，然后缓慢升至室溫 揽拌化。减压蒸除溶剂，残留物用饱和碳酸氨钢溶液调PH至6-7,二氯甲烧（100mLx3)萃 取，干燥，浓缩有机相，后经柱层析分离（二氯甲烧/甲醇（V/V) =10/1)得到淡黄色固体 (135mg, 58. 19% )〇
[031UMS-ESI: (ESI,pos.ion)m/z: 464.6[M+1]
[0引引 古匪R化OOMHz,DMSO-de) 5 10. 54(s, 1H),8.88(s, 1H),8. 63(s, 2H),6.66(s,IH)，4. 76 - 4. 65 (m,IH)，3. 85 (s,IH)，3. 64 (d,J= 4.細z, 2H)，3. 54 - 3. 47 (m, 2H)，3. 06 (d,J = 3.9Hz，6H)，2.86 - 2.79 (m，2H)，2.76 - 2.74(m，2H)，2.43 - 2.32 (m，2H)，2.06-1.90(m，4H)，1.69 - 1.58 (m，2H).
[031引实施例10 7-环戊基-N，N-二甲基-2-(巧-(赃嗦-I-幾基）化嗦-2-基）氨 基）-7H-化咯巧，3-d]喀晚-6-甲酯胺
[0314]
[031引步骤1)4-(5-氨基化嗦-2-幾基）赃嗦-1-甲酸叔下醋
[0316] 在100血单口烧瓶中，将2-氨基-5-化嗦甲酸（l.〇〇g，7. 19mmol)溶于DMF(45血）， 加入1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐化51g，8. 95mmol)和二异丙基乙胺乙 胺（2. 5血，14.Ommol)，揽拌15min后，加入1-叔下氧幾基赃嗦（1. 30g, 6. 98mmol)，室溫反 应15h。反应结束后减压蒸除有机溶剂，残留物进行柱层析纯化（二氯甲烧/甲醇（V/V)= 10/1)，得到淡黄色油状物（1. 85g，83. 70% )。
[0317]MS-ESI: (ESI,pos.ion)m/z: 308. 4 [M+1]"；
[0引引步骤2)4-巧-((7-环戊基-6-(二甲基氨基甲酯基）-7H-化咯[2,3-d]喀 晚-2-基）氨基）化嗦-2-幾基）赃嗦-1-甲酸叔下醋
[0319] 在氮气保护下，将2-氯-7-环戊基-N，N-二甲基-7H-化咯[2, 3-d]喀晚-6-酷 胺（125mg，0. 43mmol) ,4-(5-氨基化嗦-2-幾基）赃嗦-1-甲酸叔下醋（150mg，0.eOmmol， 碳酸飽（300mg, 0. 92mmol)，BINAP(70mg, 0.llmmol)，醋酸钮（25mg, 0.llmmol)溶于I, 4-二 氧六环（35血）揽拌加热至110°C，反应13h。反应结束后将反应液冷至室溫，娃藻±过滤， 滤液减压浓缩蒸出溶剂，残余物进行柱层析分离（二氯甲烧/甲醇（V/V) =10/1)得到淡 黄色固体（140mg，64.86% )
[0320] MS-ESI: (ESI,pos.ion)m/z: 564.8[M+1]"；
[0321] 步骤:3)7-环戊基-N，N-二甲基-2-(巧-(赃嗦-I-幾基）化嗦-2-基）氨 基）-7H-化咯巧，3-d]喀晚-6-甲酯胺
[032引在100血单口烧瓶中，将4-巧-((7-环戊基-6-(二甲基氨基甲酯基）-7H-化咯 垃3-d]喀晚-2-基）氨基）化嗦-2-幾基）赃嗦-1-甲酸叔下醋（230mg，0. 5mmol)溶 于二氯甲烧（10血）中，在冰浴条件下加入S氣乙酸巧血)，揽拌30min，然后缓慢升至室 溫揽拌化。减压蒸除溶剂，残留物用饱和碳酸氨钢调PH至6-7,二氯甲烧（100mLx3)萃 取，干燥，浓缩有机相，经柱层析分离（二氯甲烧/甲醇（VA) =10/1)得到淡黄色固体 (135mg, 58. 19% ) 〇
[032引MS-ESI: (ESI,pos.ion)m/z: 464.6[M+1]
[0324] iHMlR(600MHz，DMS0-d6)5l0.53(s，lH)，9.53(s，lH)，8.89(s，lH)，8.56(s ，lH)，6.69(s，lH)，5.76(s，lH)，4.80 - 4.72(m，lH)，3.64(d，J= 4.6Hz，2H)，3.54-3. 47 (m, 2H), 3. 06 (d,J= 3. 9Hz,6H), 2.86- 2. 79 (m, 2H), 2. 76 - 2. 74 (m, 2H), 2. 43 -2. 32 (m, 2H)，2. 06 -I. 90 (m, 4H)，I. 69 -I. 58 (m, 2H).
[0325] 实施例 11-33
[0326] 通过用相应的起始原料合成方案I所述的操作方法获得下列化合物：
[032引
[0329] 实施例 34-62
[0330] 通过用相应的起始原料合成方案4所述的操作方法获得下列化合物：
[0331]
[0333]
[0334] 实施例63
[0335] 通过用相应的起始原料合成方案5所述的操作方法获得下列化合物：
[0337] 本发明化合物的体外抗肿瘤活性测定
[033引示例1本发明化合物的体外酶学抑制活性
[0339] 实验方法：
[0340] 下述实验中缩写所代表的含义如下：
[0341] 肥阳S:?乙基赃嗦乙硫横酸巧rij-35 :十二烷基聚乙二醇酸；DTT:二硫苏糖醇； 邸TA:乙二胺四乙酸；CDK4/切cD3 :周期蛋白依赖性蛋白激酶4 ;CDK6/切cD3 :周期蛋白依 赖性蛋白激酶6;P巧tideFAM-P22 :巧光素标记肤22;ATP憐酸酸腺巧；DMSO:二甲基亚 讽；Staurosporine:星抱菌素；CoatingReagent#3 :#3 被膜剂
[0342] 1. IX激酶缓冲液及终止实验缓冲液配制：
[034引（1)Ix不含MnClz激酶缓冲液（50mM肥阳S,pH7. 5, 0. 0015 % 化ij-35,IOmM MgClz，2mMDTT);似终止实验缓冲液（IOOmM肥阳S,抑 7. 5, 0. 015 % 化ij-35, 0. 2 %CoatingReagent#3, 50mM邸TA)。
[0344] 2.测试激酶的化合物连续稀释准备：
[034引 （1)采用100%DMSO将化合物稀释到最高终浓度的50倍。将100yL该浓度的化 合物溶液转移至96孔板的一孔。（2)按20yL原溶液用60yLDMSO稀释的比例依次稀释 化合物10个浓度。（3)将100yL100%DMSO溶液加入到两个空孔中，作为无化合物对照 和无酶对照。（4)准备一张中间板，分别将IOiiL各浓度化合物从原板中转移到中间板，并 加入90yLIx激酶缓冲液，振荡混匀10分钟。（5)准备实验板：从96孔板的中间板中对 应孔转移5yL化合物溶液到对应的384孔板中。
[0346] 3.激酶反应
[0347] (1)准备2. 5x酶溶液：将酶加入Ix激酶缓冲液中。似准备2. 5x肤溶液：将巧光 素标记肤和ATP加入Ix激酶缓冲液中。（3)将10yL2. 5x酶溶液加入到含有5yLDMSO 含量为10 %的化合物溶液的384孔实验板中，室溫解育10分钟。（4)将10yL2. 5x肤溶 液加入384孔实验板中。（5)激酶反应及终止：28°C解育相应的时间，加入25yL终止缓冲 液终止反应。
[034引4.数据测量：读取数据并收集。
[034引 5.曲线拟合
[0350] (1)拷贝并转换测量的数据；似转换为抑制率：抑制率=(最大值-样本值）/ (最大值-最小值）*100 最大值"为无化合物对照值；"最小值"为无激酶对照孔数值。（3) 将数据输入相应分析软件Xlfit得出ICw值。
[0351] 实验结果如下：表2本发明化合物的体外酶学抑制活性
[0353] 实验结论：从表2可见，本发明化合物对CDK4、CDK6激酶均有较强的抑制作用，体 外酶学抑制活性均小于10Um。
【主权项】
1. 一种化合物，其为如式（I)所示的化合物，或式（I)所示的化合物的立体异构体，几 何异构体，互变异构体，氮氧化物，水合物，溶剂化物，代谢产物，药学上可接受的盐或前药，L为键； R1 为R4; R4为 _(C(RShh-R' -N(R2)-(C(R3)2)n-Rla，-0-(C(R3)2)n-Rla，-S-Rla，-N(R2)-C(=0)-Rla，-C( = 0)-Rlc，-0-(CH2)2-N(CH2CH3)2, -CH2-N(CH2CH3) (CH2CH20H)，1?13为c512螺杂双环基，c512桥杂双环基，c512桐合杂双环基，c3 9环烷基，c3 9杂环基或C19杂芳基；其中，Rla不为环戊基； RlbSC5 12螺杂双环基，C5 12稠合杂双环基，-N(CH2CH3) (CH2CH20H)，Q9杂芳基，2)或者E环为当=为:=1时，T2为Z6，当为一时，T2为Z1，R1 为R5; R5为氢，C丨 4烷基，C丨 4卤代烷基，-C(R3)2-C(=0)-C(R3) 2-H，-C(R3)2-C(=0) -(C(R3) 2)n-0R3,C5 12螺杂双环基，C5 12桥杂双环基，C5 12稠合杂双环基，C3 9环烷基，C3 9杂环基或Ci9 杂芳基； L为键，-(C(R3) 2)n-，-N(R2)(C(R3) 2)n-，-S-或-C(=0)-;L为-(C(R3)2)m-，-N(R2)-，-〇-(C(R3)2)n-，-S-或-CbO)-;!?1 为R6;R6为C39环烷基，C3 9杂环基或其中，Z2,Z和Z1 各自独立地为-C(R3)2_，-N(R2)-，-0-，-S-或-C(=0)-; Z3,Z4,Z5,Z6和Z7各自独立地为CR3或N; m为1，2或3 ; n为0，1，2或3 ; 各R2独立地为氢，Ci4烷基，Ci，代烷基，-C(R3)2-C(=0)-C(R3)2-HS-C(R3)2-C(=0)_ (C(R3)2)n-0R3； 各R3独立地为氢，氟，氯，溴，Ci4烷基，羟基，羧基，氨基，Ci4烷氧基，醛基，氨基Ci4烧 基，氨基酰基，Q4卤代烷基或Ci4烧氨基； 所述的E环代表的子结构式可任选地被氢，Q4烷基，氟，氯，溴，氨基，羟基，羧基，Ci4 烷氧基，Q4卤代烷基，氰基，硝基，-C(R3)2-C(=0)-C(R3)2-H或-C(R3)2-C(=0) -(C(R3) 2)n-0R3 单取代或相同或不同的多取代； 所述的C5 12螺杂双环基，C5 12桥杂双环基，C512桐合杂双环基，c3 9环烷基，C3 9杂环基，C19杂芳基，R1，和1^所代表的子结构式可任选地被氢，氧代（=0)，C14烷基，氟，氯，溴，氨 基，羟基，羧基，Q4烷氧基，ci4烷氨基，ci4卤代烷基，醛基，氨基ci4烷基，氨基酰基，氰基， c3 9杂环基，C3 9环烷基，ci9杂芳基或硝基单取代或相同或不同的多取代。2.根据权利要求1所述的化合物，其中，其中，Rla不为环戊基；其中，Z2, Z和Z1各自独立地为-C(R3)2_，-N(R2)-，-0-，-S-或-C(=0)-; Z3, Z4和Z5各自独立地为CR3或N;h，k和t各自独立地为0，1，2,3或4。3.根据权利要求2所述的化合物，其中， R4为如下子结构式：-⑴?3)^-!^，，?2)-^!?3)^-!? 1^-^!?3)^-!^，、-Rla，-N(R2)-C(=0)-Rla，-C(=0)-Rlc，-0-(CH2)2-N(CH2CH 3)2, -CH2-N(CH2CH3) (CH2CH20H)，4. 根据权利要求1所述的化合物，其中，5. 根据权利要求1所述的化合物，其中， R5为氢，C丨 4烷基，C丨 4卤代烷基，-C(R3)2-C(=0)-C(R3) 2-H，-C(R3)2-C(=0) -(C(R3) 2)其中，Z2,Z和Z1 各自独立地为-c(R3)2-，-N(R2) -，-o-，-s-或-c(=0)-; Z3,Z4和Z5各自独立地为CR3或N; 各h，k和t独立地为0,1，2或3 ; 所述的R5所代表的子结构式可任选地被氢，氧代（=〇)，Ci4烷基，氟，氯，溴，氨基，羟基， 羧基，Q4烷氧基，醛基，氨基Ci4烷基，Ci4卤代烷基，Ci4烧氨基，氨基酰基，氰基，C3 9杂环 基，Q9杂芳基或硝基单取代或相同或不同的多取代。6.根据权利要求5所述的化合物，其中， R5为氢，甲基，乙基，异丙基，正丙基，正丁基，叔丁基，3, 3, 3-三氟丙基，三氟甲基，2-氟乙7. 根据权利要求1所述的化合物，其中，8. 根据权利要求1所述的化合物，其为如下之一的结构：立体异构体，几何异构体，互变异构体，氮氧化物，水合物，溶剂化物，代谢产物，酯，药学上 可接受的盐或它的前药。9. 药物组合物，包含一种如权利要求1-8任一项所述的化合物，进一步包含药学上可 接受的载体，赋形剂，稀释剂，辅剂，媒介物中的至少一种。10. 权利要求1-8任一项所述的化合物或权利要求9所述的药物组合物在制备用于预 防，处理，治疗或减轻患者由异常细胞增殖，自身免疫，炎性或感染引起的障碍或病症的药 物中的用途； 和/或权利要求1-8任一项所述的化合物或权利要求9所述的药物组合物在制备用于 预防，处理，治疗或减轻患者由CDK4或CDK6蛋白激酶改变引起的疾病的药物中的用途。
【专利摘要】本发明涉及新的作为CDK类小分子抑制剂的化合物(如式(I)所示)及其用途，还涉及含有上述化合物的药物组合物，以及这些化合物和组合物在治疗过度增殖性紊乱的疾病的用途。本发明的新化合物是有力的细胞周期蛋白依赖性激酶4(cdk4)或细胞周期蛋白依赖性激酶6(cdk6)抑制剂。
【IPC分类】A61P29/00, A61P19/08, A61P3/10, A61P25/00, A61P35/02, A61P1/16, A61P17/06, A61P19/02, A61P31/12, A61P37/00, A61P17/00, A61P1/00, A61K31/5377, C07D519/00, A61P31/10, A61P35/00, A61P7/06, A61P11/06, A61P9/10, C07D487/04, A61P11/00, A61P13/12, A61P1/18, A61K31/519, A61P37/06
【公开号】CN105294737
【申请号】CN201510443169
【发明人】刘兵, 张英俊, 聂凛凛, 柏舜, 郑常春, 聂飚, 李志勇, 谭玉梅
【申请人】广东东阳光药业有限公司
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年7月24日