)，7.21(s，lH)，7.15(d，J = 8.4Hz，3H)，7.05(t，J = 7.9Hz，lH)， 6.91(d，J=8.8Hz，3H)，5.67(s，lH)，4.15-4.05(m，2H)，3.85(s，3H)，2.45(s，3H)，1.04(t，J = 7.1Hz,3H)〇
[0251] 13C 匪R(100MHz, CDCl3) δ (ppm) δ = 165.69,165.42,162.59,162.22,151.09， 147.26,146.36,135.86,132.63,130.29,129.04,128.95,128.61,128.46,127.57,126.18， 124.85,124.23,122.41,119.08,116.44,113.78,66.57,63.69,55.49,47.31,22.01， 21.95〇
[0252] 高分辨:计算值：[M+H]+: 668.1935，实测值:668.1935。
[0253] 实施例26
[0254] 化合物III -2 (3R，4R) -3- (4-甲氧基苯甲酰氨基)-2-氧代-4- (4- (I -对甲苯磺酰 基-1H-1，2，3-三唑-4-基)苯基)色满-3-羧酸乙酯的制备
[0256] 根据实施例25的制备方法，将原料1-7换为原料Ia-7,其他条件不变，得到式III-2 的目标产物，产率为80%，d.r.〉95:5,92%ee〇
[0257] 4匪1?(4001泡，〇0(：13)8.31(8，1!1)，7.99((1，了 = 8.4泡，2!1)，7.75((1(1，了 = 21.5， 8.5Hz，4H)，7.38-7.29(m，3H)，7.21(s，lH)，7.15(d，J = 8.4Hz，3H)，7.05(t，J = 7.9Hz，lH)， 6.91(d，J=8.8Hz，3H)，5.67(s，lH)，4.15-4.05(m，2H)，3.85(s，3H)，2.45(s，3H)，1.04(t，J = 7.1Hz,3H)〇
[0258] 13C 匪R(100MHz, CDCl3) δ (ppm) δ = 165.69,165.42,162.59,162.22,151.09， 147.26,146.36,135.86,132.63,130.29,129.04,128.95,128.61,128.46,127.57,126.18， 124.85,124.23,122.41，119.08,116.44,113.78,66.57,63.69,55.49,47.31,22.01， 21.95〇
[0259] 高分辨:计算值：[Μ+Η]+: 668.1935，实测值:668.1935。
[0260] 实施例27
[0261] 药理活性筛选实验
[0262] 1、3,4_二氢香豆素衍生化合物普遍表现出一定的抗肿瘤细胞增值的活性，我们对 所合成的化合物进行了如下3种临床常见肿瘤细胞活性测试：
[0263] HepG2(肝癌细胞系）;MG63(骨肉瘤细胞系）；SW620(胶质瘤细胞系）。
[0264] 2、药物母液配制
[0265] 将药物配成第1浓度(32ug/ml)的100*的母液(3.2mg/ml)。
[0266] 3、测试方法
[0267] (1)取对数生长期的细胞，胰酶消化后调整为5*104/ml，每孔加入IOOul细胞悬液 (5000个），培养过夜；
[0268] (2)按如下方式配制药物，每孔加入IOOul含药物的培养基：
[0269] 第1浓度:按1:100将100*母液稀释于培养基中，1.5培养基+15ul母液；
[0270] 第2~6浓度:按照1:2的比例进行梯度稀释，Iml培养液+0.5ml上浓度药物；
[0271] (3)按如下方式布板：
[0273] (4)加药后24H和48H进行CCK8检测。
[0274] 4、测试结果
[0275] 对所有合成的化合物进行了生物活性测试，如表2所示，化合物1-2和1-6对HepG2 (肝癌细胞系）;MG63(骨肉瘤细胞系）；SW620(胶质瘤细胞系)三种肿瘤细胞均表现出了良好 的抑制活性。化合物1-9和II-I对IfepG2 (肝癌细胞系)表现出了较好的活性。
[0276] 表2化合物对常见肿瘤细胞增殖活性的抑制情况（％ )
[0278]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围，例如，将实施例12-22的R-CPA换为S-CPA，其他条件不变，可以得到 相应Ib结构的化合物，此类化合物也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种3，4-二氨香豆素类化合物，其特征在于，所述化合物为式I所示化合物，其立体 异构体或其混合物形式：其中，Ri选自氨； R2选自Cs-lO芳基〇2-6烘基、〔3-8环柄基〔2-6烘基、二Cl-6柄基娃基〇2-6烘基、Cs-lO芳基Cl-6柄 基、〔3-8环柄基Cl-6柄基、二Cl-6柄基娃基Cl-6柄基、Cl-6柄基、〔3-8环柄基、Cs-IQ芳基、Cs-IQ杂芳 基、C2-6締基、C2-6烘基、C5-10杂芳基C6-10芳基;其中，C6-10芳基可任选的被一个或多个独立选 自氨、Cl-6烷基、、C3-8环烷基、Cl-6烷氧基、面素、C2-6締基、C2-6烘基的基团取代;Cs-lO杂芳基可 选的被一个或多个独立选自氨或对甲苯横酷基的基团取代； 或Ri与R2同与他们连接的碳原子一起形成C5-6环烷基。2. 根据权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其混合物形式，其中， R2选自C6-10芳基乙烘基、C3-8环烷基乙烘基、SCl-6烷基娃基乙烘基、C6-1日芳基乙基、C3-8 环柄基乙基、二Cl-6柄基娃基乙基、Cl-6柄基、C3-8环柄基、Cs-lO芳基、Cs-lO杂芳基、〔2-6締基、〔2-6 烘基、C5-10杂芳基C6-10芳基;其中，C6-10芳基可任选的被一个或多个独立选自氨、Cl-6烷基、面 素或C2-6烘基的基团取代;C5-10杂芳基可选的被一个或多个独立选自氨或对甲苯横酷基取 代； 或Ri与R2同与他们连接的碳原子一起形成C5-6环烷基。3. 根据权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其混合物形式，其中， R2选自苯乙烘基、4-甲基苯乙烘基、4-氯苯乙烘基、3-氣苯乙烘基、环丙基乙烘基、Ξ甲 基娃基乙烘基、苯乙基、4-甲基苯乙基、4-氯苯乙基、3-氣苯乙基、环丙基乙基、Ξ甲基娃基 乙基、乙基、4-乙烘基苯基、环己基、2-嚷吩基、乙締基、目或Ri与R2同与他们连接的碳原子一起形成环戊烷基。4. 根据权利要求1所述的立体异构体，其具有la或化结构： 其中，R\护如权利要求1所定义。5. 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物为下列化合物，其立体异构 体或其混合物形式： 3-(4-甲氧苯甲酯氨基)-2-氧代-4-(苯乙烘基)色满-3-簇酸乙醋； (3R，4R)-3-(4-甲氧苯甲酯氨基)-2-氧代-4-(苯乙烘基)色满-3-簇酸乙醋； (3S，4S)-3-(4-甲氧苯甲酯氨基)-2-氧代-4-(苯乙烘基)色满-3-簇酸乙醋； 3- (4-甲氧苯甲酯氨基)-2-氧代-4-(对甲苯基乙烘基)色满-3-簇酸乙醋； (3R，4R)-3-(4-甲氧苯甲酯氨基)-2-氧代-4-(对甲苯基乙烘基)色满-3-簇酸乙醋； (3S，4S)-3-(4-甲氧苯甲酯氨基)-2-氧代-4-(对甲苯基乙烘基)色满-3-簇酸乙醋； 4- ((对氯苯基）乙烘基)-3-(4-甲氧苯甲酯氨基)-2-氧代色满-3-簇酸乙醋； (3R，4R)-4-((对氯苯基）乙烘基)-3-(4-甲氧苯甲酯氨基)-2-氧代色满-3-簇酸乙醋； (3S，4S)-4-((对氯苯基）乙烘基)-3-(4-甲氧苯甲酯氨基)-2-氧代色满-3-簇酸乙醋； 4-((3-氣苯基）乙烘基)-3-(4-甲氧苯甲酯氨基)-2-氧代色满-3-簇酸乙醋； (3R，4R)-4-((3-氣苯基）乙烘基)-3-(4-甲氧苯甲酯氨基)-2-氧代色满-3-簇酸乙醋； (3S，4S)-4-((3-氣苯基）乙烘基)-3-(4-甲氧苯甲酯氨基)-2-氧代色满-3-簇酸乙醋； 4-(环丙基乙烘基)-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代色满-3-簇酸乙醋； (3R，4R)-4-(环丙基乙烘基)-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代色满-3-簇酸乙醋； (3S，4S)-4-(环丙基乙烘基)-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代色满-3-簇酸乙醋； 3- (4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代-4-((Ξ甲基娃基）乙烘基)色满-3-簇酸乙醋； (3R，4S)-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代-4-((Ξ甲基娃基）乙烘基)色满-3-簇酸乙 醋； (3S，4R)-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代-4-((Ξ甲基娃基）乙烘基)色满-3-簇酸乙 醋； 4- (4-乙烘基苯基)-3-(4-甲氧苯甲酯氨基)-2-氧代色满-3-簇酸乙醋； (3R，4R)-4-(4-乙烘基苯基)-3-(4-甲氧苯甲酯氨基)-2-氧代色满-3-簇酸乙醋； (3S，4S)-4-(4-乙烘基苯基)-3-(4-甲氧苯甲酯氨基)-2-氧代色满-3-簇酸乙醋； 3- (4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代-4-(嚷吩-2-基)色满-3-簇酸乙醋； (3R，4R)-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代-4-(嚷吩-2-基)色满-3-簇酸乙醋； (3S，4S)-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代-4-(嚷吩-2-基)色满-3-簇酸乙醋； 4- 环己基-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代色满-3-簇酸乙醋； (3R，4R)-4-环己基-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代色满-3-簇酸乙醋； (3S，4S)-4-环己基-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代色满-3-簇酸乙醋； 3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代-4-乙締基色满-3-簇酸乙醋； (3R，4R)-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代-4-乙締基色满-3-簇酸乙醋； (3S，4S)-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代-4-乙締基色满-3-簇酸乙醋； 3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代-3,3a，4,5-四氨-2H-环戊二締并[de]苯并化喃-3-簇酸乙醋； (3R，3aR)-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代-3,3曰，4,5-四氨-2护环戊二締并[(16]苯 并化喃-3-簇酸乙醋； (3S，3aS)-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代-3,3曰，4,5-四氨-2护环戊二締并[(16]苯 并化喃-3-簇酸乙醋； 3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-4-(4-甲基苯乙基)2-氧代色满-3-簇酸乙醋； (3R，4R)-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-4-(4-甲基苯乙基)2-氧代色满-3-簇酸乙醋； (3S，4S)-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-4-(4-甲基苯乙基)2-氧代色满-3-簇酸乙醋； 3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代-4-(4-(1-对甲苯横酷基-1Η-1，2,3-Ξ挫-4-基）苯 基)色满-3-簇酸乙醋； (3R，4R)-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代-4-(4-(1-对甲苯横酷基-1护1，2,3-^挫-4-基)苯基)色满-3-簇酸乙醋； (3S，4S)-3-(4-甲氧基苯甲酯氨基)-2-氧代-4-(4-(1-对甲苯横酷基-1护1，2,3-^挫-4-基)苯基)色满-3-簇酸乙醋。6. -种权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其混合物形式的制备方法，其特征在 于式I由邻径基节醇化合物A和叮内醋化合物B在催化剂的作用下制得：其中Ri、R2是如权利要求1~4任一项中所定义的。7. 根据权利要求6所述的制备方法，其中催化剂为憐酸或手性憐酸，优选憐酸二苯醋、 R-CPA或S-CPA。8. 根据权利要求7所述的制备方法，其中，催化剂的用量为A的5~20mol%，B与A的摩尔 比为1:1~2:1，反应在有机溶剂下进行。9. 权利要求1-5任一项所述的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。10. 根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述抗肿瘤药物为治疗肝癌、骨肉瘤、胶 质瘤或其他恶性肿瘤的药物。
【专利摘要】本发明提供了一种3,4-二氢香豆素类化合物及其制备方法和用途，所述化合物为式I所示化合物，其立体异构体或其混合物形式：其中，R1选自氢；R2选自C6-10芳基C2-6炔基、C3-8环烷基C2-6炔基、三C1-6烷基硅基C2-6炔基、C6-10芳基C1-6烷基、C3-8环烷基C1-6烷基、三C1-6烷基硅基C1-6烷基、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、C5-10杂芳基、C2-6烯基、C2-6炔基、C5-10杂芳基C6-10芳基；其中，C6-10芳基可任选的被一个或多个独立选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C1-6烷氧基、卤素、C2-6烯基、C2-6炔基的基团取代；C5-10杂芳基可选的被一个或多个独立选自氢或对甲苯磺酰基的基团取代；或R1与R2同与他们连接的碳原子一起形成C5-6环烷基。该类化合物能够用于治疗癌症相关疾病。
【IPC分类】C07D311/20, A61K31/366, C07D311/94, C07D409/04, A61K31/381, C07F7/10, C07D405/10, A61P35/00, A61K31/4192, A61K31/695
【公开号】CN105541774
【申请号】CN201610019328
【发明人】陈加荣, 余晓叶, 魏强, 肖文精
【申请人】华中师范大学
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年1月13日