牙龈蛋白酶抑制前肽的制作方法
【专利摘要】本发明涉及抑制、降低或阻止蛋白酶活性的化合物、肽或拟肽，以及这些化合物、肽或拟肽用于治疗或预防病症的用途。特别地，所述病症可以是牙周疾病。所述蛋白酶活性可以是牙龈蛋白酶的活性。本发明的化合物、肽或拟肽还可在用于鉴定蛋白酶抑制剂的测定中使用。
【专利说明】牙龈蛋白酶抑制前肽
【技术领域】
[0001] 本发明涉及抑制、降低或阻止蛋白酶活性的化合物、肽或拟肽（peptidomimetic) 以及这些化合物、肽或拟肽用于治疗或预防病症的用途。特别地，所述病症可以是牙周疾 病。所述蛋白酶活性可以是牙龈蛋白酶（gingipain)的活性。本发明的化合物、肽或拟肽 还可在用于鉴定蛋白酶抑制剂的测定中使用。
【背景技术】
[0002] 牙周疾病是牙支持组织的细菌相关炎性疾病并且是重大的公共卫生问题。几乎所 有的人类群体都在一定程度上受到牙周疾病的影响。1989年的美国牙健康调查（US Dental Health survey)报道了 85%的受研究人群有牙周疾病。牙周疾病的主要形式是牙銀炎，其 与牙菌斑在牙龈边缘的非特异性积累相关。牙周疾病（牙周炎）的更具破坏性的形式与被 特定革兰氏阴性菌龈下感染有关。参与这种疾病的主要细菌病原体被称为"红色复合物"， 其由福赛坦氏菌（Tannerella forsythia)、齿銀卩卜啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis) 和齿垢密螺旋体（Treponema denticola)构成。齿銀P卜啉单胞菌（P. gingivalis)是慢性 牙周炎的主要发病原因。
[0003] 齿龈卟啉单胞菌的主要毒力因子是其胞外的半胱氨酸蛋白酶，统称为牙龈蛋白 酶。最常见的是RgpA和RgpB(Arg-牙銀蛋白酶）和Kgp(Lys-牙銀蛋白酶）。Arg-牙銀蛋 白酶在Arg残基的羧基侧切割蛋白质并且Lys-牙銀蛋白酶在Lys残基的羧基侧切割蛋白 质。
[0004] 这些细胞表面半胱氨酸蛋白酶被认为对于降解蛋白质以提供用于生长以及用于 存活和毒力之其他内在和外在功能的肽是重要的。用于存活和毒力的这些功能中的数个可 以是细菌附着宿主组织、血细胞凝集以及细菌细胞表面和分泌蛋白的加工。RgpA和Kgp的 催化结构域可以作为复合物结合在细胞表面上，具有一系列非共价结合序列相关的血凝素 /黏附素结构域，而RgpB已经显示不作为蛋白酶黏附素复合物的一部分存在并且可以仅由 催化结构域组成。
[0005] 像其他的半胱氨酸蛋白酶一样，牙龈蛋白酶作为无活性形式合成，在N端具有前 肽（prop印tide)区，其被移除以产生成熟的、活性形式。牙龈蛋白酶高度保守，并且成熟的 酶和前肽二者的氨基酸序列都揭示它们仅与其他半胱氨酸蛋白酶关系较远地相关。
[0006] 需要更好的或替换的参与多种疾病（特别是牙周疾病）之发病机理的细菌酶抑制 剂。
[0007] 本说明书中参考的任何现有技术不是也不应当被视为承认或任何形式的建议该 现有技术构成了澳大利亚或任何其他司法管辖区的公知常识，或者该现有技术可以由本领 域技术人员合理地预料为确定、理解和视为相关。
[0008] 发明概述
[0009] 根据本发明，提供了用于抑制、降低或阻止细菌酶之活性的化合物、肽或拟肽，所 述化合物、肽或拟肽包含牙龈蛋白酶前肽或其片段的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述 酶可以是胞外蛋白酶。优选地，所述胞外蛋白酶是半胱氨酸蛋白酶，更优选为牙龈蛋白酶。 所述蛋白酶可以是来自于齿銀卩卜啉单胞菌之菌株的RgpA、RgpB或Kgp。
[0010] 在某些实施方案中，所述化合物、肽或拟肽是包含选自SEQ ID NO :1至10之氨基 酸序列的肽或拟肽（图1中示出）。
[0011] 在另一些实施方案中，所述肽或拟肽包含与SEQ ID N0 :1至10中示出的那些旁系 同源或直系同源的序列。
[0012] 在另一些实施方案中，所述肽或拟肽包含以上氨基酸序列中的保守替换。这些替 换在下文中进一步描述。本发明的肽可以是分离的、纯化的、富集的、合成的或重组的。
[0013] 本发明的肽或拟肽包括分离的、纯化的或重组的前肽或其片段之氨基酸序列，因 为当是同源牙龈蛋白酶的一部分时其可天然存在。在另一些实施方案中，本发明的肽或拟 肽可以包括合成的前肽或其片段之氨基酸序列，任选地具有翻译后修饰。
[0014] 在一些特定的实施方案中，肽或拟肽由选自包含SEQ ID N0 :1至10中任一种的氨 基酸序列组成或基本上由其组成。
[0015] 在另一些实施方案中，本发明的肽或前肽包含氨基酸序列，其与选自SEQ ID No :1 至 28 的氨基酸序列具有至少 60、70、80、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或 100%的同一 性。优选地，选自SEQ ID No :1至10,甚至更优选地选自SEQ ID No :1至3。
[0016] 在另一些实施方案中，本发明的肽或拟肽由与选自SEQ ID No :1至28的氨基酸 序列具有至少60、70、80、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%同一性的氨基酸序列 组成或基本上由其组成。在这些实施方案中，化合物、肽或拟肽包含SEQ ID N0 :1至28以 及"基本上由" SEQ ID N0:1至28 "组成"的另外的氨基酸残基，只要其表现出可以根据下 文中描述的测定确定的用于抑制、降低或阻止细菌酶之活性的活性即可。类似地，"基本上 由" SEQ ID N0 :1至28中一种"组成"的化合物、肽或拟肽，这种情况下其短于对应的SEQ ID，只要其表现出可以根据以下描述的测定确定的用于抑制、降低或阻止细菌酶之活性的 活性即可。因此，这些实施方案不包括全长牙龈蛋白酶序列。优选地，本发明的化合物、肽 或拟肽由与选自SEQ ID No :1至10的氨基酸序列具有至少60、70、80、90、91、92、93、94、95、 96、97、98、99或100 %同一性的氨基酸序列组成或基本上由其组成。甚至更优选地由SEQ ID No :1至3组成。
[0017] 本发明的"化合物"是通过本文中所述的测定鉴定作为抑制剂的化合物。化合物可 以是蛋白质（例如抗体或其片段或拟抗体（antibody mimetic))、肽、核酸（包括RNA、DNA、 反义寡核苷酸、肽核酸）、碳水化合物、有机化合物、小分子、天然产物、文库提取物或来自体 液。
[0018] 在一些实施方案中，本发明的化合物、肽或拟肽的氨基酸长度为约10至约300。在 另一些实施方案中，长度为约20至205或者约50至约210。在另一些实施方案中，长度为 约100至约200个氨基酸。
[0019] 齿龈卟啉单胞菌是革兰氏阴性菌的一个实例，其已经演变为在富含蛋白质的厌氧 条件下生长。最近，存在于富含蛋白质的、厌氧的或更极端条件中的数种其他细菌和古细菌 (archaea)的基因组已经被测序；这些物种中的一些仍必须在体外生长。这些基因组研究 已经提供了证据表明与牙龈蛋白酶具有序列相似性以及与牙龈蛋白酶之前肽具有显著序 列相似性的蛋白质。除了在食烯经脱硫杆菌（Desulfatibacillum alkenivorans)AK_01的 情况下，如对前肽预期的，在前肽的N端区域中发现了与牙龈蛋白酶前肽的显著序列相似 性。
[0020] 这些细菌包括：Candidatus Cloacamonas acidaminovorans，存在于许多厌氧 消化器的互养细菌；Candidatus Kuenenia stuttgartiensis，铵氧化细菌；海洋绿滑 菌（Chloroherpeton thalassium)，一种非丝状、弯曲且滑行的绿硫细菌，其是专性光养 生物；食烯经脱硫杆菌AK-01，从河口沉积物分离的嗜中温硫酸盐还原菌（mesophilic sulfate-reducer)，其利用 C13 至 C18 烷烃，1-烯烃（C15 和 C16)和 1-烷醇（C15 和 C16)作为生长基质；Desulfococcus oleovorans (菌株 DSM6200/Hxd3)，从德国北部 油田的油-水分离器的盐水相中分离的烷烃降解硫酸盐还原菌（Hxd3是Λ-变形细 菌（delta-proteobacterium)，其能够在C12至C20烧经上厌氧生长）以及嗜压发光菌 (Photobacterium profundum)，其被归为嗜压（piezophile)，因为它生活在高压下，已在 2500米的深度被分离。
[0021] 来自超界古细菌（superkingdom archea)的两个种也显示出与牙銀蛋白酶 前肽具有显著相似性的序列。热鬃毛甲烧菌（Methanosaeta thermophila)为从被洪 水淹没的稻田和污水消化器分离的厌氧嗜热专性乙酸营养型产甲烷菌（aceticlastic methanogen) Jciduliprofundum boonei是培养的来自深海热液喷口的专性嗜热酸广域古 菌（thermoacidophilic euryarchaeote)〇
[0022] 示出与SEQ ID NO :1至10的牙龈蛋白酶前肽具有相似性的来自这些细菌的前肽 在本发明的范围内。这样的多肽的实例为（但不限于）具有SEQ ID N0 :11至28之序列的 那些（在图2中示出）。
[0023] 在某些实施方案中，提供了用于抑制细菌酶的组合物，其包含本发明的化合物、肽 或拟肽以及可药用载体。所述组合物还可以包含二价阳离子。
[0024] 本发明的组合物可以包含具有不同氨基酸序列的前肽以使所述组合物抑制多于 一种类型的细菌酶。例如，本发明的组合物可以包含另两种各自对特定牙龈蛋白酶（例如， RgpA或RgpB和Kgp)显示出选择性的前肽。在一个实施方案中，本发明的组合物包含具有 SEQ ID N0:1至28(优选SEQ ID N0:1至10)中任一种或更多种的序列。例如，在组合物 中的一些前肽可以具有与来自于Kgp的前肽具有同一性的氨基酸序列，而组合物中前肽的 其余部分可以具有与来自于Rgp的前肽具有同一性的氨基酸序列。本文中已经提到了序列 同一性的水平。
[0025] 本发明的组合物包含已经从生物组织或者流体纯化或者富集的牙龈蛋白酶前肽 或者其片段。
[0026] 在一个实施方案中，提供了治疗或预防一种或更多种本文中所述病症的方法，其 包括向对象施用有效量的本发明化合物、多肽、拟肽或组合物。在一个实施方案中，所述化 合物、肽、拟肽或组合物直接施用至对象的牙龈。
[0027] 在另一个实施方案中，本发明的方法还包括施用选自以下的药剂：抗炎剂、抗生素 和抗生物膜剂（antibiofilm agent)。抗生素可以选自阿莫西林、多西环素和甲硝唑。抗炎 剂包括非留类抗炎药（NSAID)。NSAID的实例包括抑制环氧合酶的化合物。NSAID的具体实 例包括阿司匹林、布洛芬和萘普生。
[0028] 在另一个实施方案中，提供了用于治疗或减轻对象中牙周疾病之症状的方法，所 述方法包括向对象施用本发明的化合物、肽、拟肽或组合物。在另一个实施方案中，所述方 法还包括施用用于诱导响应于参与牙周疾病起始或进展之细菌的免疫应答的蛋白质。在一 个实施方案中，所述细菌是齿龈卟啉单胞菌。
[0029] 在另一个实施方案中，本发明提供了有效量的本发明化合物、肽、拟肽或组合物在 制备用于治疗或预防牙周疾病和/或本文所鉴定的适于治疗之其他病症的药物中的用途。
[0030] 本发明还提供了用于治疗或预防牙周疾病（和/或以上所鉴定的适于治疗的其他 病症）的药物组合物，其包含有效量的本发明化合物、肽或拟肽和可药用载体。所述组合物 还可以包含选自抗炎剂、抗生素和抗生物膜剂的药剂。抗生素可以选自阿莫西林、多西环素 和甲硝唑。
[0031] 在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防牙周疾病（和/或以上所鉴 定的适于治疗的其他病症）的药物组合物，其包含作为活性成分的本发明化合物、肽或拟 肽。所述化合物还可包含二价阳离子。
[0032] 在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含有效量的本发明化合物、 肽或拟肽作为主要成分。例如，所述组合物可以用于治疗或预防牙周疾病和/或本文所鉴 定的适于治疗的其他病症。优选地，所述组合物还包含二价阳离子。
[0033] 在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防牙周疾病和/或本文所鉴定 的适于治疗之其他病症的本发明化合物、肽或拟肽。
[0034] 在另一个实施方案中，本发明提供了组合物，其包含用于治疗或预防牙周疾病的 本发明组合物、肽或拟肽。优选地，所述组合物还包含二价阳离子。
[0035] 所述二价阳离子优选地选自：2112+、0& 2+、(：112+、附2+、&)2+、？ 62+、5112+和此2+。此外，所 述二价阳离子可以与氟化物联合，例如SnF+和CuF+。然而，目前优选的二价阳离子为Ca 2+或 Zn2+。
[0036] 还优选二价阳离子与肽的比例在1.0 : 2.0至1.0 : 10. 0的范围内，优选在 1. 0 : 4. 0的范围内。
[0037] 本发明还提供了用于鉴定半胱氨酸蛋白酶抑制剂的测定，其包括以下步骤：
[0038] -在本发明的化合物、肽或拟肽存在下，将半胱氨酸蛋白酶与候选化合物接触，
[0039] -确定候选化合物是否与本发明的化合物、肽或拟肽竞争；
[0040] 其中竞争指示候选化合物是半胱氨酸蛋白酶的抑制剂。
[0041] 本发明还提供了用于鉴定半胱氨酸蛋白酶抑制剂的测定，其包括以下步骤：
[0042] -在候选化合物存在或不存在下，将半胱氨酸蛋白酶与本发明化合物、肽或拟肽接 触，
[0043] -确定所述化合物、肽或拟肽与蛋白酶结合的水平，
[0044] 其中，在候选化合物存在下与候选化合物不存在下相比，所述化合物、肽或拟肽的 水平降低，从而将候选化合物鉴定为半胱氨酸蛋白酶的抑制剂。
[0045] 本发明还提供了用于鉴定半胱氨酸蛋白酶抑制剂的测定，其包括以下步骤：
[0046] -在本发明化合物、肽或拟肽存在或不存在下，将半胱氨酸蛋白酶与候选化合物接 触，
[0047] -测定候选化合物与蛋白酶结合的水平，
[0048] 其中，在所述化合物、肽或拟肽存在下与所述化合物，肽或拟肽不存在下相比，候 选化合物的水平降低，从而将候选化合物鉴定为半胱氨酸蛋白酶的抑制剂。
[0049] 本发明还提供了用于鉴定半胱氨酸蛋白酶抑制剂的测定，其包括以下步骤：
[0050] -在候选化合物存在或不存在下，在允许将本发明的化合物、肽或拟肽与半胱氨酸 蛋白酶结合的条件下，提供本发明的化合物、肽或拟肽，
[0051] -确定所述化合物、肽或拟肽与所述蛋白酶结合的水平，
[0052] 其中，在候选化合物存在下与候选化合物不存在下相比，所述化合物、肽或拟肽的 水平降低，从而将候选化合物鉴定为半胱氨酸蛋白酶的抑制剂。
[0053] 本发明还提供了用于鉴定半胱氨酸蛋白酶抑制剂的测定，其包括以下步骤：
[0054] -在本发明的化合物、肽或拟肽存在或不存在下，在允许所述候选化合物与半胱氨 酸蛋白酶结合的条件下，提供候选化合物，
[0055] -测定所述候选化合物与所述蛋白酶结合的水平，
[0056] 其中，在所述化合物、肽或拟肽存在下与所述化合物、肽或拟肽不存在下相比，所 述候选化合物的水平降低，从而将候选化合物鉴定为半胱氨酸蛋白酶的抑制剂。
[0057] 优选地，被鉴定为半胱氨酸蛋白酶抑制剂的候选化合物根据本文中所述的步骤用 另一种半胱氨酸蛋白酶和本发明的相同或另一种化合物、肽或拟肽测定一次或更多次，以 确定候选化合物是否抑制一种或更多种半胱氨酸蛋白酶。
[0058] 优选地，所述候选化合物是抗体或其片段或者拟抗体例如anticalin。候选化合物 可以是文库的一部分，这种情况下测定以高通量进行。
[0059] 优选地，所述半胱氨酸蛋白酶为牙銀蛋白酶，更优选Kgp、RgpA或RgpB。甚至更优 选地所述牙銀蛋白酶为Kgp。
[0060] 本文已经定义了可用于本发明测定的本发明化合物、肽或拟肽。优选地，本发明的 化合物、肽或拟肽包含与选自SEQ ID No :1至28的氨基酸序列具有至少60、70、80、90、91、 92、93、94、95、96、97、98、99或100%同一性的氨基酸序列。优选地，选自SEQ ID No:l至 10,甚至更优选地，选自SEQ ID No :1至3。在另一些实施方案中，本发明的化合物、肽或拟 肽由与选自SEQ ID No :1至28的氨基酸序列具有至少60、70、80、90、91、92、93、94、95、96、 97、98、99或100%同一性的氨基酸序列组成或者基本上由其组成。
[0061] 在一个实施方案中，本发明提供了用于本发明测定的本发明化合物、肽或拟肽。在 一个实施方案中，当用于本发明的测定时，本发明提供了本发明的化合物、肽或拟肽。在一 个实施方案中，本发明提供了用于本发明测定的经标记的化合物、肽或拟肽。
[0062] 本发明还提供了由Kgp之催化结构域的氨基酸序列组成或基本上由其组成的重 组或合成蛋白质。换句话说，由Kgp之催化结构域的氨基酸序列组成的蛋白质不与黏附素 结构域连接或不与其接触。
[0063] 在一个实施方案中，本发明提供了由Kgp或Rgp之催化结构域的氨基酸序列组成 或基本上由其组成的重组或合成蛋白质在本发明的测定中鉴定半胱氨酸蛋白酶（优选Kgp 或Rgp)抑制剂的用途。在一个实施方案中，本发明提供了当用于本发明的测定来鉴定半胱 氨酸蛋白酶（优选Kgp或Rgp)抑制剂时由Kgp或Rgp之催化结构域的氨基酸序列组成或 基本上由其组成的重组或合成蛋白质。
[0064] 本发明还提供了通过本文中所述的测定鉴定的化合物用于抑制半胱氨酸蛋白酶 的用途。优选地，所述半胱氨酸蛋白酶是Kgp或Rgp。甚至更优选地，所述半胱氨酸蛋白酶 是Kgp。在一个实施方案中，本发明还提供了被本文中所述的测定鉴定为抑制剂的化合物用 于治疗或预防牙周疾病的用途。
[0065] 本发明还提供了治疗或预防牙周疾病和/或本文所鉴定的适于治疗或预防的其 他病症的方法，其包括施用本发明的肽或拟肽和/或通过由本文中所述的测定鉴定为半胱 氨酸蛋白酶抑制剂的化合物。
[0066] 由于是肽的物理性质而不是肽的特异性序列导致了其蛋白酶抑制活性，可以在肽 序列中进行所谓的保守替换而基本上不损失活性。意图为基本上不导致活性损失的这种保 守替换涵盖在本发明中。
[0067] 同时，以上提到的保守替换的概念被本领域技术人员很好的理解，为清楚起见，保 守替换是如下列出的那些。
[0068] Gly, Ala, Val, lie, Leu, Met ；
[0069] Asp, Glu ；
[0070] Asn, Gin ；
[0071] Ala, Ser, Thr ；
[0072] Lys, Arg, His ；
[0073] Phe，Tyr，Trp，His ;和
[0074] Pro，N a -碱性氨基酸。
[0075] 除非上下文另有要求，本文中使用的术语"包括/包含（comprise) "以及该术语的 变化形式，例如"包括/包含（comprising、comprises和comprised) "不旨在排除另外的 添加物、成分、整数或步骤。
[0076] 附图简述
[0077] 图1 :来自多种齿龈卟啉单胞菌菌株之牙龈蛋白酶前肽的氨基酸序列。
[0078] 图2 :来自除了齿龈卟啉单胞菌之外的细菌之前肽的氨基酸序列。
[0079] 图3 :来自齿龈卟啉单胞菌Kgpeat Λ ABM1突变体ECR368培养物上清液经脱盐的丙 酮沉淀的蛋白质的离子交换色谱，使用与AKTA-Basic FPLC系统相连接的Q-琼脂糖柱。所 述柱用10mM醋酸钠（pH5. 3)洗脱然后应用10mM醋酸钠中0-1M NaCl的线性梯度洗脱。洗 脱液在280nm的吸光度监测。测量所收集级分的Lys-和Arg-特异性蛋白水解活性。将含 有Lys-活性的级分汇集并收集用于进一步纯化。
[0080] 图4 :ECR368培养物上清液的浓缩样品在使用与AKTA-Basic FPLC系统相连接的 Superdex G75柱脱盐后的凝胶过滤纯化。柱用TC50缓冲液（ρΗ8· 0,1. OmL/分钟）洗脱。 在280nm和215nm的吸光度监测洗脱液。级分A8-A9含有活性Kgpeat Λ ABM1。
[0081] 图5 :来自齿龈卟啉单胞菌ECR368的Kgpeat Λ ΑΒΜ1富集级分的SDS-PAGE。泳道包 括；泳道1 : ScC-BklC?·顼染标准物，其大小以kDa表示，泳道2 :培养物上清液，泳道3 :丙 酮沉淀后的培养物上清液，泳道4 :丙酮沉淀并超离心后的培养物上清液，泳道5 :凝胶过滤 纯化后Kgpeat λ abmi富集级分。凝胶为Coomassie⑨染色的。
[0082] 图6 : (A) rKgp前肽的凝胶过滤色谱，使用与AKTA-Basic FPLC系统连接的用50mM NH4HC03平衡的Superdex G75柱。在280nm和215nm的吸光度监测洗脱液。⑶仍连接 的His-标签的rKgp前肽的MALDI-T0F MS分析示出单电荷的（m/z25,446. 9[M+H]+)，双电 荷的（m/zl2728. 8[Μ+2ΗΓ)和三电荷的（m/z8486. 5[M+3H]3+)信号，各自对应于靶分子量 (25, 285Da)。
[0083] 图7 :Kgpeat ΔΑΒΜ1富集级分的蛋白水解活性（单位/mg)，用20. Omg/L和40. Omg/ L rKgp前肽（rKgpPro)以ImM半胱氨酸于具有发色GPKNa底物的测定中。KgpeatAABMl富 集级分的终浓度每孔为1. 16mg/L。所有的样品与对照显著不同（p < 0. 05)。
[0084] 图8 :蛋白水解测定，使用发色底物GPKNa确认底物水解的速率在整个测定中是 线性的。Kgpcat ΔΑΒΜ1富集级分的蛋白水解活性（单位/mg)，0mg/L
【权利要求】
1. 用于抑制、降低或阻止细菌酶之活性的肽或拟肽，该化合物、肽或拟肽基本上由选自 SEQ ID NO :1至28的氨基酸序列及其中的保守替换组成。
2. 用于抑制、降低或阻止细菌酶之活性的肽或拟肽，该化合物、肽或拟肽由选自SEQ ID NO :1至28的氨基酸序列及其中的保守替换组成。
3. 治疗或预防牙周疾病的方法，其包括向对象施用有效量的根据权利要求1或2所述 的肽或拟肽。
4. 根据权利要求1或2所述的肽或拟肽在制备用于治疗或预防牙周疾病的药物中的用 途。
5. 用于鉴定半胱氨酸蛋白酶之抑制剂的测定，其包括以下步骤： -在肽或拟肽存在下，使半胱氨酸蛋白酶与候选化合物接触， -确定所述候选化合物是否与所述肽或拟肽竞争； 其中，竞争指示所述候选化合物是半胱氨酸蛋白酶的抑制剂， 其中所述肽或拟肽包含牙龈蛋白酶前肽或其片段的氨基酸序列。
6. 根据权利要求5所述的测定，其中所述牙銀蛋白酶前肽选自RgpA、RgpB和Kgp。
7. 根据权利要求5或6所述的测定，其中所述前肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO :1至 28及其中的保守替换。
8. 根据权利要求5至7中任一项所述的测定，其中所述前肽或其片段天然地存在。
9. 根据权利要求5至7中任一项所述的测定，其中所述前肽或其片段来自于齿龈卟啉 单胞菌（P. gingivalis)。
10. 根据权利要求5至7中任一项所述的测定，其中所述半胱氨酸蛋白酶是牙龈蛋白 酶。
11. 根据权利要求10所述的测定，其中所述牙銀蛋白酶选自RgpA、RgpB和Kgp。
12. 通过根据权利要求5至11中任一项所述的测定鉴定为半胱氨酸蛋白酶之抑制剂的 化合物用于治疗或预防牙周疾病的用途。
13. 包含牙龈蛋白酶前肽或其片段之氨基酸序列的化合物、肽或拟肽，其用于根据权利 要求5至11中任一项所述的测定。
【文档编号】C12Q1/37GK104159915SQ201280065867
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2012年11月2日 优先权日:2011年11月4日
【发明者】斯图尔特·杰弗里·达斯弗, 埃里克·查尔斯·雷诺兹, 努尔贾汉·莱拉·哈克, 埃琳娜·周·因·杜 申请人:口腔健康澳洲私人有限公司