专利名称：：喹啉-2-酮类衍生物，其药物组合物及其用途的制作方法
技术领域：
：本发明属于药物化合物和药物
技术领域：
，具体地说，涉及一类6-氯-3-(2-羟乙基)-喹啉-2-酮化合物，其化合物作为活性成分的治疗乙型肝炎的药物组合物，其制备方法，以及该药物组合物在制备抗乙型肝炎抑制剂药物和抗乙型肝炎药物中的应用
背景技术：
：乙型肝炎是严重危害人体健康的病毒性传染疾病。据世界卫生组织报道，全球有超过20亿人为乙型肝炎病毒携带者，其中约3亿人为慢性终身感染并发病。这些慢性肝炎的病人易转成慢性肝炎，是肝硬化、肝癌的主要病因。乙型肝炎病毒(HBV)感染是二个严重的公共卫生问题，而且治疗慢性肝炎的费用是相当昂贵的，估计每年因病毒性肝炎导致直接经济损失300亿500亿人民币。近年来HBV疫苗免疫、各种抗病毒药物的应用在控制HBV感染取得了一定的效果，但同时也导致HBV变异株出现，HBeAg阴性慢性乙型病毒性肝炎(CHBV)增多，停药后HBV易反弹，而且费用高。为了有效地控制HBV，需要研制不同类型的临床治疗药物。乙型肝炎病毒(h印atitisBvirus,HBV)属DNA嗜肝病毒科，主要是通过血液制品、母婴和性接触等途径传播，且易转成慢性肝炎，是引发肝硬化、肝癌的主要病因之一。乙型肝炎病毒的复制过程涉及5步结合、侵入、转录、翻译、基因复制和包装。研究报道一些中草药具有抗HBV活性，如叶下珠、白花蛇舌草等能抑制体外HBsAg和HBeAg的分泌，具有抗HBV作用，他们不良反应相对较小，可长期服用。其中一些植物的提取物对HBVDNA有不同程度的抑制作用。黄芩甙、苦参素对HBsAg和HBeAg具有体外抑制作用。我国研制的联苯双酯是在人工合成五味子丙素过程中发现的一种具有降酶作用和治疗肝炎的有效成分。甘草甜素制剂强力新甘草甜素注射液对病毒性肝炎患者有减轻症状、抗炎和降低转氨酶等作用。强力新的换代产品甘利欣为甘草酸二铵左旋化合物，疗效强于强力新。他们主要降低转氨酶。目前国际公认的疗效较好的抗乙肝病毒药物主要为核苷类药物如拉米夫定(lamivudine)、阿地福韦酉旨(adefovirdipivoxiil)、恩替卡韦(enticavir)、替比夫定(tibivudine)。这些药物在体外或体内实验中，对HBV病毒有抑制作用。其作用机制为药物进入细胞内成为三磷酸化合物，通过底物的竞争，对病毒的聚合酶或反转录酶抑制，最终抑制病毒DNA的合成、病毒的增殖。因短期使用仅有暂时效果，适合长期用药。但经过长期的治疗后，病毒可能出现变异和耐受性，而且停药后，病毒反弹高。为控制乙型肝炎的蔓延，医学界还研究出有效的乙型肝炎疫审，对公众进行免疫注射，主要用于预防，获得了良好的效果。但对已感染HBV则无效。另外治疗慢性乙型肝炎采用的药物是a-干扰素(IFN)，其作用主要是免疫调节。但干扰素治疗慢性乙型肝炎有其制约因素其一，它从未获得真正成功，除非病人在治疗前已出现对HBV的实质性免疫反应。其二，在干扰素诱导的HBeAg血清转换之前，肝炎活动的突然一过性加重，表现为ALT升高，可导致肝硬化病人发生肝功能衰竭，偶尔出现死亡。综上所述，抗肝炎药物有非常大的市场需求，但是现在临床应用的抗肝炎药物普遍存在耐药性的问题，成功地开发出能解决药物的耐药性，临床效率高且毒副作用较小的新一代抗乙型肝炎的药物，将具有很强的市场竞争力和市场前景。迄今，现有技术中没有6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮化合物的报道，以及6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯國3國(2-羟乙基)4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯画3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮三种化合物作为有效成分的药物组合物的报道，也没有该三种化合物或其药物组合物应用在制备或治疗乙型肝炎药物中的报道。
发明内容本发明的目的在于提供6-氯-3-(2-羟乙基)-喹啉-2-酮化合物，以及此类化合物用于治疗乙型肝炎的药物组合物，其中含有式(I)6國氯-3画(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-、6-氯-3國(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮及药用载体和/或赋形剂，提供该药物组合物的制备方法，该化合物或其药物组合物在制备抗乙型肝炎抑制剂药物和在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。5为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案式(I)化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-喹啉-2-酮(6—Ghloro誦3—(2國hydroxyGthyl)画quinolin—2(1H)—one)其中R表示H或2-F或2-C1即化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮或6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮或6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮。优选的化合物为其中R表示2-F或2-Cl。治疗乙型肝炎的药物组合物，含有式(I)化合物和药学上可接受的载体。式(I)化合物的制备方法，包括以5-氯-2-氨基-二苯酮(R-H)或5-氯-2-氨基-2，-氟-二苯酮(R=2-F)或5-氯-2-氨基-2'-氯-二苯酮(R=2-C1)为起始原料，在碱性条件下与1，4一丁内酯发生氨基化/Knoevenagel縮合反应得到I的粗产物，粗产物经硅胶柱层析，CHC13/CH30H(97:3)洗脱得到6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6誦氯-3-(2-羟乙基)國4國(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯画3-(2國羟乙基)一4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮。本发明制备含6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮等三种药物的具体方法是氮气保护下向50mL两口圆底烧瓶加入2-氨基-5-氯-二苯酮或2-氨基-5-氯-2'-氟-二苯酮或2-氨基-5-氯-2，-氯-二苯酮(1mmol)和经过无水处理的THF5mL，搅拌下冷却至(TC，氮气保护下滴加LiHMDS(6-甲基-2硅胺碁锂)的THF(四氢呋喃)溶液7.5mL(1MinTHF)，(TC下继续搅拌30分钟，随后滴加l，4一丁内酯(387mg,4.5mmo1)，滴加完毕将反应体系控制在(TC下反应30分钟随后升温至室温反应30分钟，加入水5mL，室温下搅拌24小时。反应完毕后将反应液倒如50mL冰水中，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂得到的粗产品经硅胶柱层析，CHCB/CH30H(97:3)洗脱得到6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮或6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮或6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮等三个化合物，加入可药用载体和/或赋形剂即可。合成示意图如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>R=H,2-F,2-CIR=H,2-F,2-CI本发明同时提供了本发明药物化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6"(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮在制备抗乙型肝炎抑制剂药物中和制备抗乙型肝炎药物中的应用。本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组合物含有0.1-99%，优选为0.5-90%的本发明化合物，其余为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。所述的可接受的药用载体是一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经注射(静注、肌注)和口服两种形式给药。具体实施例方式为了更好地理解本发明的实质，下面将用本发明的试验例来说明本发明式(I)化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮等三种药物的药理作用结果，但不以此试验例来限定本发明。试验例l:化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6咖氯画3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮对H印G2.2.15细胞的药物毒性和对HBsAg、HBeAg分泌的抑制作用1材料和方法1.1材料化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯國3國(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮分别以5-氯-2-氨基-二苯酮、5-氯-2-氨基-2'-氟-二苯酮和5-氯-2-氨基-2'-氯-二苯酮为起始原料，在碱性条件下与1，4-丁内酯发生氨基化/Knoevenagel縮合反应得到。拉米夫定(lamivudine)(葛兰素史克制药(苏州)有限公司，国药准字H20030581);HepG2.2.15细胞(引自广州空军医院);高糖DMEM(GIBICO);G418(GIBICO);胎牛血清(天津血研所)；L-谷氨酰胺(AMRESCO);青霉素，链霉素(石药集团中诺药业有限公司)。1.2HepG2.2.15细胞，用高糖DMEM液培养，培养液添加10%胎牛血清，0.03。/。L-谷氨酰胺，100mg/LG418,1()5iU/L青酶素，100mg/L链霉素，5。/。NaC03调pH至6.8-7.0。1.3仪器酶标仪Bio-RAD680(美国)；C02培养箱ThermoForma3310(美国)；倒置生物显微镜XD-101型(南京)等。1.4实验过程用胰蛋白酶将HepG2.2.15细胞消化，用添加了0.03。/。L-谷氨酰胺，100mg/LG418,100IU青酶素，100IU链霉素的高糖DMEM液制成单细胞悬液，每孔按3x105x0.lmL—i分种于96孔板，0.1mL/L，24h后换用含2。/。的胎牛血清，380pg/mL的含药培养液，每种药物设四个药物浓度，每个浓度设三孔，四倍稀释，同时设三孔不加药物的细胞对照组及一孔空白细胞组，并以拉米夫定做阳性药物对照；7d后收集上清，用ELISA法测定HBsAg和HBeAg的分泌情况。同时用MTT法测定药物对细胞的毒性。1.5药物对细胞半数毒性浓度(CC5Q)的测定根据Mosmann建立的MTT法检测药物的细胞毒性(Y.Nakajima,Y.Saton,M.Katsumata,K.Tsujiyama,Y.Ida,andJ.Shoji,P一oc/2e肌'5t71994,36,119-127)。具体方法是向吸去上清的细胞孔中加入0.4mg/mLMTT，0.1mL/孔，37°C5。/。C02培养4h，去上清，每孔加入O.lmL二甲基亚砜，孵育10min，在酶标仪上测定溶液在490nm下的吸光度值。药物对细胞的破坏百分率Ildestrcy-(A细胞对照组-A供试样品组)/(A细胞对照组-A空自组)X100，50%毒性浓度(CC5o)为实验孔存活细胞为对照孔50%时的药物浓度。CC50=Antilg[(C5G-<50%破坏率的百分数)/(〉50%破坏率的百分数-<50%破坏率的百分数)xC+lgB]，A:破坏率大于50%的药物浓度；B:破坏率小于50%的药物浓度；C=lgA-lgB。1.6药物对细胞半数抑制浓度的测定采用酶联免疫法(ELISA)测定。药物对HBsAg、HBeAg的抑制百分率ninhibitory=(A细胞对照组一A供试样品组)/A细胞对照组一A空白组)X100，50%抑制浓度(IC5。)为HBsAg或HbeAg以抑制率为50%时的药物浓度，计算方法同CC50。2.结果最终结果以选择指数(SI，为评价药物临床应用前景的参数，SI=CC5()/IC5o)来评价，其中SI>2为无毒有效，1<SI<2为有毒有效，SI<l为有毒无效。具体结果见表l、表2和表3:.<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表3.含有式(I)的三种化合物对HepG2.2.15细胞HBsAg、HBeAg的抑制效果化合物CC50IC50(HBsAg)IC50(HBeAg)SI(Hg/mL)(吗/mD(ng/mL)HBsAgHBeAg6國氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉>147190.11283.9>16.32>5,18-2-酮6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2隱氟陽苯>950.459.40173.2>16.00>5.48基)-喹啉-2-酮6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯576.024.80167.923.263.43基)-喹啉-2-酮拉米夫定98100337098302.9113.结论实验结果显示，化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉國2誦酮、6-氯陽3國(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2画羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮在体外对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg有一定的抑制作用。以下通过实施例来进一步阐明本发明的制备方法及药物组成。实施例1:化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮的制备化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)_4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮合成和分离以6_氣_3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮的合成分离过程为例氮气保护下向50mL两口圆底烧瓶加入2-氨基-5-氯-二苯酮(1mmol,231mg)和经过无水处理的THF5mL，搅拌下冷却至0'C，氮气保护下滴加LiHMDS的THF溶液7.5mL(1MinTHF)，(TC下继续搅拌30分钟，随后滴加l，4一丁内酯(387mg,4.5mmo1)，滴加完毕将反应体系控制在0'C下反应30分钟随后升温至室温反应30分钟，加入水5mL，室温下搅拌24小时。反应完毕后将反应液倒如50mL冰水中，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂得到的粗产品经硅胶柱层析，CHC13/CH30H(97:3)洗脱得到白色固体6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮255mg，得率85%。6-氯-3國(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮均参照此方法合成。6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯國3誦(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮的结构数据熔点用北京泰克仪器有限公司的数字显示显微熔点仪测定；旋光经SEPA-300仪测定；红外光谱用BrukerTensor27型红外光谱仪测定，采用KBr压片；质谱(MS)用VGAutoSpec-3000型质谱仪测定，采用FAB-MS技术；核磁共振谱CH隨R和"C丽R)用BrukerAM-400超导核磁共振仪测定，TMS作内标；青岛海洋化工厂出品的200-300目和10-40pm硅胶作为柱层析材料；薄层层析用青岛海洋化工厂出品的硅胶板指导分离，展开剂为CHC13/CH30H(97:3)。结构如图所示:Ho分子式C17H14C1N02分子量300性状白色无定型粉末(氯仿)IR(KBr)v丽3423,1659,1611,1485，1441，1408,1372cm-1。FAB咖MS(m/z):300[M+l]+(100)。^NMR(C5D5N)&12.05(s,1H,,,7.58-7.47(m,4H),7.36-7.28(m,3H),6.67(d,J=2.3Hz,1H),4.53(t,/=5.5Hz,1H,OH),3.41(dd,13.8,7.1Hz,2H),2.49-2.44(m,2H)。13CNMR(C5D5N)&161.6,147.3,136.3,135.5,129.6,129.3,128.8(overlapped),128.7(overlapped),128.3,125.4,125.1,121.5,117.0,59.3,32.1。分子式C17H13C1FN02分子量318性状白色无定型粉末(氯仿)IR(KBr)vmax:3383,1662,1488,1447,1411，1370cm_1。FAB-MS(m/z):318[M+l]+(100)。iHNMR(C5D5N)&12.13(s,IH,NH),7.62-7.36(m,6H),6.68(s,IH),4.56(t,J=5.4Hz,IH,OH),2.56-2.38(m,4H)。13CNMR(C5D5N)&161.3,159.8,157.4,141.3,136.3,131.3,131.2129.7,125.8,125.2,125.2,124.3,122.5,120.8,117.3,59.0,32.4。分子式C17H13C12FN02分子量334性状白色无定型粉末(氯仿)IR(KBr)vmax:3421，1650,1488,1471，1432,1409cm一1。FAB-MS(m/z):334[M+l]+(100),316(33)。]HNMR(C5D5N)&2.14(s,IH,NH),7.69-7.36(m,6H),6.56(s,IH),4.55(t,/=5.6Hz,IH),3.42-3.37(m,2H),2.56-2.48(m,IH),2.31-2.29(m,IH)。13CNMR(C5D5N)<5:161.5,144.4,136.4,134.0,131.8，131.2,130.6130.5,129.7,129.6,127.8,125.8,124.2,120.4,117.2,58.8,32.3。实施例2:按实施例1的方法先制得6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)_4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮，用少量的DMSO溶解后，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。实施例3:按实施例1的方法先制得6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、.6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮，用少量的DMSO溶解后，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶解，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。实施例4:将所合成得到的6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2画羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮，按其与赋形剂重量比为9:1的比例加入赋形剂，制成粉剂。实施例5:按实施例1的方法先制得6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮，按其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂，制粒压片。实施例6:按实施例1的方法先制得6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮，按常规口服液制法制成口服液。实施例7:按实施例1的方法先制得6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮，按其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂，制成胶囊。实施例8:按实施例1的方法先制得6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮，按其与赋形剂重量比为3:1的比例加入赋形剂，制成胶囊。权利要求1、式(I)化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-喹啉-2-酮(6-chloro-3-(2-hydroxyethyl)-quinolin-2(1H)-one)id="icf0001"file="S200810058290XC00011.gif"wi="54"he="39"top="55"left="80"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中R表示H或2-F或2-Cl。2、按照权利要求1的化合物，其中R表示2-F或2-Cl。3、治疗乙型肝炎的药物组合物，含有式(I)化合物和药学上可接受的载体。4、权利要求I化合物的制备方法，包括以5-氯-2-氨基-二苯酮(R=H)或5-氯-2-氨基-2，-氟-二苯酮(R=2-F)或5-氯-2-氨基-2，-氯-二苯酮(R=2-C1)为起始原料，在碱性条件下与1，4一丁内酯发生氨基化/Knoevenagel缩合反应得到I的粗产物,粗产物经硅胶柱层析，CHC13/CH30H(97:3)洗脱得到6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯國3-(2-羟乙基)誦4匪(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮。5、式(I)化合物在制备抗乙型肝炎抑制剂药物中的应用。6、式(I)化合物在制备抗乙型肝炎药物中的应用。全文摘要式(I)化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-喹啉-2-酮，含有式(I)化合物的用于治疗乙型肝炎的药物组合物，由化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮或6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮或6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮及药学上可接受的载体组成，上述三种药物化合物的制备方法，及其在制备抗乙型肝炎抑制剂药物和治疗乙型肝炎药物中的应用。文档编号A61P1/00GK101260077SQ200810058290公开日2008年9月10日申请日期2008年4月17日优先权日2008年4月17日发明者俊周,泉张,张奉学,张雪梅,江志勇,辟程,杰罗,陈纪军,马云保申请人:中国科学院昆明植物研究所;广州中医药大学热带医学研究所