如例如约11 至约13小时）。在一些此类实施例中，在步骤iii)前，将步骤ii)的冻干机搁板维持在约 5至约15°C (诸如约10°C )的中间干燥温度。
[0097] 在一些实施例中，将步骤ii)的冻干机搁板维持在中间干燥温度和120微巴的压 力下。
[0098] 在一些实施例中，将中间干燥温度维持不长于约13小时。
[0099] 在一些实施例中，其中凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约10mm(诸如例 如约8_)，在冻干机搁板的冻干包括：
[0100] a)将冻干机搁板的温度在约1. 5至约2. 5小时范围内的时间段内带到约-50°c的 冷冻温度；
[0101] b)将步骤a)的冷冻温度维持约4至约6小时范围内的时间段以产生冷冻的凝血 酶溶液；
[0102] C)将步骤b)的冻干机搁板的温度增加到约-15°c的初级干燥温度，并将压力在约 50至约90分钟范围内的时间段内带到约100至约160微巴；
[0103] d)将初级干燥温度和压力维持约11至约13小时范围内的时间段；
[0104] e)将步骤d)的冻干机搁板的温度增加到约25°C的次级干燥温度，并将压力在约 60至约90分钟范围内的时间段内降低到小于约50微巴；以及
[0105] f)将次级干燥温度和压力维持约9. 5至约11小时范围内的时间段。
[0106] 在一些实施例中，其中凝血酶水溶液在冻干容器中的高度不大于约20mm(诸如约 15至约19mm，例如约17mm)，在冻干机搁板上的冻干包括：
[0107] a)将冻干机搁板的温度在约1. 5至约2. 5小时范围内的时间段内带到约-50°C的 冷冻温度；
[0108] b)将冷冻温度维持约4至约6小时范围内的时间段以产生冷冻的凝血酶溶液；
[0109] c)将步骤b)的冻干机搁板的温度增加到约-15°C的初级干燥温度，并将压力在约 30至约70分钟范围内的时间段内降低到约100至约160微巴；
[0110] d)将初级干燥温度和压力维持约30至约32小时范围内的时间段；
[0111] e)将步骤d)的冻干机搁板的温度增加到约25°C的次级干燥温度，并将压力在约 40至约80分钟范围内的时间段内降低到小于约50微巴；以及
[0112] f)将次级干燥温度和压力维持约13至约17小时范围内的时间段。
[0113] 在一些实施例中，步骤a)和b)是在大气压力下进行的。
[0114] 在一些实施例中，提供了一种可根据本文所述的任何方法获得的固体凝血酶组合 物。
[0115] 在一些实施例中，固体凝血酶组合物具有不超过约3% (重量/重量）的水含量和 至少95%的凝血酶活性恢复率。
[0116] 在一些实施例中，凝血酶组合物具有不超过约1. 5% (重量/重量）的水含量和至 少98%的凝血酶活性恢复率。
[0117] 在一些实施例中，固体凝血酶组合物在非冷冻贮藏条件下（诸如在室温下）可稳 定至少2年。
[0118] 在一些实施例中，固体凝血酶组合物包含约19. 5%至约78% (占总组合物的重量 百分比）的甘露糖醇、约1%至约20% (占总组合物的重量百分比）的乙酸钠、约2%至约 53% (占总组合物的重量百分比）的白蛋白、约2. 5%至约31% (占总组合物的重量百分 比）的氯化钙和约6%至约45% (占总组合物的重量百分比）的氯化钠。
[0119] 在一些实施例中，固体凝血酶组合物包含约22%至约66% (占总组合物的重量百 分比）的甘露糖醇、约1. 5%至约10% (占总组合物的重量百分比）的乙酸钠、约2. 5%至 约43% (占总组合物的重量百分比）的白蛋白、约4%至约17% (占总组合物的重量百分 比）的氯化钙和约9. 5%至约25% (占总组合物的重量百分比）的氯化钠。
[0120] 除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的 普通技术人员通常理解相同的含义。此外，描述、材料、方法和实例仅是例示性的并且不旨 在是限制性的。类似于或等同于本文所述的方法和材料可用于实践本发明。
[0121] 如本文所用，术语"粉饼"或"固体粉饼"是指由冻干方法产生的多孔海绵状结构 状组合物。
[0122] 如本文所用，相对于粉饼的术语"塌缩"是指粉饼不再能够支撑其自身结构的点。
[0123] 如本文所用，术语"固体组合物"是指基于固体组合物的总重量计具有等于或小于 约3% (重量/重量）诸如等于或小于1. 5%的水含量的组合物。
[0124] 如本文所用，术语"凝血酶活性恢复率"是指在复原时与冻干前凝血酶水溶液中的 初始凝血酶活性相比的固体组合物中的凝血酶活性。通常，活性恢复率以百分比表示。
[0125] 如本文所用，相对于冻干/固体凝血酶组合物的术语"稳定"是例如可基本上支撑 其自身结构而无粉饼塌缩的组合物，和/或在非冷冻温度贮藏条件下（例如，在2-8°C与至 高室温诸如小于25°C的温度下）保持其活性的至少80% (诸如90%、95%或更高）达至少 2年的组合物。在本发明的一个实施例中，固体组合物在室温下贮存时稳定2年。通常，塌 缩最明显地特征在于在干燥期间失去粉饼结构。塌缩通常产生体积明显小于用来制备粉饼 的配方的体积的结构。此外，可以观察到平均孔径和孔隙度的减小以及堆积密度的增大。
[0126] 术语"冻干"通常是指冷冻溶液以及然后降低水浓度（例如通过升华到不支持生 物或化学反应的水平）的方法。所得的冻干组合物可贮存相对长的一段时间。在贮存后， 可将冻干组合物作为粉末使用或可通过添加各种体积的水溶液而复原。在复原期间添加的 体积可类似于冻干前溶液的体积，更低或更高。
[0127] 如本文所用，术语"包含"、"包括"、"具有"及其语法变体应视为指定所述特征、整 数、步骤或组分，但不排除一种或多种另外的特征、整数、步骤、组分或其组的添加。这些术 语涵盖术语"由...组成"和"基本上由...组成"。
[0128] 如本文所用，不定冠词"一个"和"一种"意指"至少一个/种"或"一个或多个/ 一 种或多种"，除非上下文另有明确说明。
[0129] 如本文所用，术语"约"是指±10%。
[0130] 本文所述的溶液和方法使得能够通过与本领域当前已知的冻干方法相比更短的 冻干循环得到固体凝血酶组合物，从而提高冻干能力并降低生产成本。使用本文所述的溶 液和方法得到的固体凝血酶组合物在冻干后与已知的凝血酶组合物相比具有低水含量，在 室温下贮存期间在相对长的时间段内稳定，并在复原时示出高百分比的凝血酶活性恢复 率。
【附图说明】
[0131] 本发明的一些实施例在本文中参考附图进行描述。说明书连同附图使得本发明的 一些实施例可如何实践对于本领域普通技术人员显而易见。附图用于例示性讨论的目的， 并且不试图显示比本发明的基本理解所需更详细的实施例的结构细节。为清楚起见，附图 中描绘的一些物体未按比例绘制。
[0132] 在附图中:
[0133] 图1示出了在如本文所述的示例性短冻干循环后得到的粉饼的视觉外观。
【具体实施方式】
[0134] 本发明在其一些实施例中涉及用于冻干凝血酶水溶液的方法、用于此类冻干方法 的凝血酶溶液，和通过此类方法产生的固体凝血酶组合物。
[0135] 本文教导的原理、用途和具体实施可参考所附说明书得到更好理解。在精读说明 书后，本领域技术人员能够实施本发明而无需过度努力或实验。
[0136] 在详细说明至少一个实施例之前，应当理解本发明不一定在其应用中限制于下述 说明书中所示的组分和/或方法的构建和排列的细节。本发明能够具有以各种方式实践或 实施的其它实施例。本文采用的措辞和术语用于描述性目的且不应视为限制性的。
[0137] 如上所述，已知的凝血酶溶液在所存在的赋形剂的数量和类型方面以及在各种赋 形剂的浓度方面变化相当大。
[0138] SM
[0139] 材料和方法
[0140] 凝血酶储各溶液:
[0141] 用于制备以下实例中所述的凝血酶水溶液的凝血酶储备溶液包含约3, 500IU/ml 的凝血酶、约200mM的NaCl，和下述稳定剂：2%的甘露糖醇和0. 2%的人血清白蛋白（HSA) (除非另外指明）。储备溶液由人血浆的因子II (前凝血酶）制备，该因子基本上如美国专 利5143838中所述而活化并通过依次使用二乙基氨基乙基（DEAE)纤维素阴离子交换树脂 和SP阳离子交换树脂而纯化，该专利据此以引用方式并入。
[0142] 冻干:
[0143] A.冻干容器中高度为8mm的凝血酶溶液的冻干:
[0144] 在Christ Epsilion 2-8D冻干机（德国的克里斯特公司（Christ，Germany))的 冻干机搁板上在8ml的娃化玻璃小瓶（德国的肖特公司（Schott，Germany))中进行冻干。 将每只小瓶灌装2ml的凝血酶水溶液。每只小瓶中溶液的高度为约8mm。
[0145] 如下表1 (总时间34小时）和表2 (总时间30小时）中所指定，进行了两个不同 的短冻干循环。所给的温度为冻干机搁板的温度。
[0146] 在冻干后，得到了体积类似于冻干前水溶液的体积的固体凝血酶组合物。
[0147] 表 1
[0148]
【主权项】
1. 一种用于冻干凝血酶水溶液的方法，所述方法包括： 提供包含以下成分的所述凝血酶水溶液：约1至低于约4. 6% (w/v)的糖或糖醇、至少 约0. 7至低于约1. 75% (w/v)的氯化钠、约0. 2至约3% (w/v)的白蛋白、氯化妈和乙酸钠； 以及 冻干所述凝血酶水溶液。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述凝血酶水溶液包含约200至约2000IU/ml的 凝血酶、约0. 3至约I. 5% (w/v)的氯化妈和约0. 14至约1% (w/v)的乙酸钠。
3. 根据权利要求1或2所述的方法，其中所述凝血酶水溶液包含：约1. 6至低于约 4. 6% (w/v)的糖或糖醇、约0. 7至约I. 7% (w/v)的氯化钠、高于约0. 2至低于约3%的白蛋 白（w/v)、约0? 3至约I. 2% (w/v)的氯化妈和约0? 14至约0? 7% (w/v)的乙酸钠。
4. 根据权利要求3所述的方法，其中所述糖或糖醇以2% (w/v)的浓度存在，所述白蛋 白以约0.6% (w/v)的浓度存在，所述氯