可依任何制药习知技术配合常用的载剂或医药上可接受的载剂制成 含有医疗有效量的组成物。
[0040] 本文所使用的「载剂」或「医药上可接受的载剂」一词是指包括但不限于制药上可 接受的赋形剂、填充剂、稀释剂或类似物，包括制药业一般知识者所熟知者。
[0041] 以上述发明说明以及下列实施例说明本发明，但并非用以限制本发明的范围。
[0042] 实施例1:本发明具式I的异喹啉生物碱衍生物的制备
[0043]依序加入I. 6g多巴胺（dopamine)、IOmL甲醇、ImLlN盐酸、及2mL99 %乙酸于50 毫升的圆底瓶中，在室温下搅拌六小时，经减压浓缩所得的浓缩物通入LobarRP-18管柱 (typeB,Merck)进行纯化。以0. 05%甲酸水溶液冲提后，所得冲提液经NMR核磁共振光 谱分析鉴定，确认该化合物为去甲猪毛菜碱（salsolinol)。
[0044] 依据ESI-TOF质谱仪、NMR核磁共振光谱等分析结果，去甲猪毛菜碱分析数据如 下：
[0045]1HNMR(CD3OD, 400MHz)S6. 63 (1H，s)，6. 57 (1H，s)，4. 30 (1H，q，J= 6. 8Hz，H-1)， 3.40(1H,dt,J= 12. 6, 5. 6Hz,Ha-3) ,3. 20(1H,ddd,J= 12. 6, 8. 2, 5. 6Hz,Hb-3), 2. 92 (1H,ddd,J= 16. 8, 8. 2, 5. 8Hz,Ha-4) , 2. 80 (1H,dt,J= 16. 8, 5. 6Hz,Hb-4), I. 55(3H,d,J= 6. 8Hz,Me-l) ;ESmS:m/z. 180([M+H]+)。
[0046] 网脉碱（reticuline)可依习知方法自樟科植物五掌楠（Neolitsea konioshii(H. )K. &S.)木部分离而得（J.Chin.Chem.Soc.Taip. 1992, 39, 189-194)。
[0047] 实施例2:去甲猪毛菜碱及网脉碱于促进AMPK活性的评估
[0048]C2C12骨骼肌原母细胞株系购自台湾财团法人食品工业发展研究所。C2C12细 胞株为由成年C3H小鼠的腿骨骼肌于95 %氧气、5 %二氧化碳及37 °C细胞培养箱中所 培养出来的细胞株，该细胞培养于含4. 5mg/mL葡萄糖、10 %胎牛血清（fetalbovine serum,FBS;Gibco/Invitrogen,Carlsbad,CA)、及抗生素溶液（终浓度penicillinlOOIU/mL,链霉素（streptomycin) 100ug/mL)的DMEM(Gibco/Invitrogen,Carlsbad,CA)培养 基中。当C2C12肌母细胞增殖至培养皿的七分满后，以2%马血清（horseserum;Gibco/ Invitrogen,Carlsbad,CA)取代胎牛血清，以将C2C12肌母细胞诱导成具多细胞核的肌细 胞。四天后C2C12肌母细胞分化成肌细胞，细胞于实验前24小时将培养液换成不具血清的 DMEM以降低细胞的代谢活动。
[0049] 将C2C12肌细胞分别以liiM、3iiM及IOiiM的去甲猪毛菜碱及网脉碱处理5分钟 及15分钟，然后将C2C12肌细胞用PBS缓冲液清洗并加入含有蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲 液（20禮作18-11(：1?117.4，1001111似(：1，11111￡0丁八，11111￡6丁八，0.1%505,0.5%脱氧胆酸钠 (sodiumdeoxycholate), 1%NP-40 及 100X蛋白酶抑制剂混合物（proteaseinhibitor cocktail))。收集细胞并置于冰上离心，然后将样本的上清液调整为相同浓度。
[0050] 结果
[0051] 如图1所示，以10UM的去甲猪毛菜碱处理C2C12细胞5分钟后，其增进AMPK磷 酸化的功效可为对照组的1. 66倍，显示去甲猪毛菜碱在促进AMPK活性上具有优异的功 效。
[0052] 此外，如图2所示，分别以3iiM及10iiM的网脉碱处理C2C12细胞5分钟后，其 增进AMPK磷酸化的功效分别为对照组的1. 52及2. 05倍，而在处理C2C12细胞15分钟后， 其亦可增进AMPK磷酸化的功效分别达对照组的1. 04及2. 07倍，显示网脉碱在促进AMPK 活性上具有优异的功效。
[0053] 实施例3、去甲猪毛菜碱于降血糖作用的评估
[0054] 以口服葡萄糖耐受试验（OralGlucoseToleranceTest, 0GTT)进行降血糖作用 的评估。每只ICR小鼠以高脂食物及高果糖喂食2周后，分别以去甲猪毛菜碱（10mg/kg/ day)及Glibenclamide(10mg/kg)连续14天投予小鼠，每组各以8只小鼠进行动物实验。 在第1天投予及连续投予14天后，分别将小鼠麻醉，接着分别给予去甲猪毛菜碱（IOmg/ kg/day)及Glibenclamide(10mg/kg)，30分钟后，口服葡萄糖（lg/kg)并立即采血，将此 时间定为第〇分钟，并采取之后第30, 60、90、120及150分钟的血液，离心后测血清血糖 含量。
[0055] 结果
[0056] 如图3所示，显示以高糖高脂食物喂食诱导第II型糖尿病的小鼠，去甲猪毛菜 碱在快速降血糖作用上，具有与Glibenclamide相近的降血糖功效。如图4所示，进一步 发现去甲猪毛菜碱在长期降低血糖的作用上，亦具与Glibenclamide相近的降血糖功效。 [0057] 由实施例结果可知，去甲猪毛菜碱在促进AMPK活性上具有优异的功效。此外， 去甲猪毛菜碱具有与Glibenclamide相近的降血糖功效，且因Glibenclamide会影响胰岛 素分泌，但相对于Glibenclamide，去甲猪毛菜碱对胰岛素分泌量具有较低的影响性。网 脉碱于增进AMPK活性亦具有优异功效，10iiM之网脉碱即具有相当佳的功效。
【主权项】
1. 一种异喹啉生物碱衍生物用于制备具有活化磷酸化腺苷酸依赖蛋白激酶（AMPK)功 效的药物的用途，其中该异喹啉生物碱衍生物具有下式I:其中R、&及R2各独立为H、烷基或酰基（RaCO)，R3为烷基或经取代的苄基；其中Ra为H或烷基。2. 如权利要求1所述的用途，其中该经取代的苄基具有下式II:其中X及Y各独立为H、0H、甲氧基（OMe)或酰氧基（RaC〇-〇_);其中Ra为H或烷基。3. 如权利要求1所述的用途，其中该具式I的异喹啉生物碱衍生物为去甲猪毛菜碱 (salsolinol)或网脉喊（reticuline)。4. 如权利要求3所述的用途，其中该具式I的异喹啉生物碱衍生物为去甲猪毛菜碱 (salsolinol)〇5. 如权利要求3所述的用途，其中该具式I的异喹啉生物碱衍生物为网脉碱 (reticuline)〇6. -种异喹啉生物碱衍生物用于制备具有降血糖功效的药物的用途，其中该具式I的 异喹啉生物碱衍生物为权利要求1至5中任一项的定义。7. -种异喹啉生物碱衍生物用于制备治疗糖尿病的药物的用途，其中该具式I的异喹 啉生物碱衍生物为权利要求1至5中任一项的定义。8. -种异喹啉生物碱衍生物用于制备治疗AMPK相关疾病的药物的用途，其中该具式 I的异喹啉生物碱衍生物为权利要求1至5中任一项的定义。9. 如权利要求8所述的用途，其中该AMPK相关疾病为癌症、心血管疾病、或新陈代谢 疾病。10. 如权利要求8所述的用途，其中该药物具有抗发炎或促进伤口愈合的功效。
【专利摘要】本发明公开一种异喹啉生物碱衍生物用于制备具有活化磷酸化腺苷酸依赖蛋白激酶(AMPK)功效的药物的用途,其中该异喹啉生物碱衍生物可为去甲猪毛菜碱(salsolinol)或网脉碱(reticuline)。其中该药物可以活化AMPK,因而可用于调节细胞生长及代谢,及治疗AMPK相关疾病。
【IPC分类】A61P29/00, A61P35/00, A61P3/00, A61P9/00, A61K31/472, A61P3/10, A61P17/02
【公开号】CN105078992
【申请号】CN201410223093
【发明人】李水盛, 苏铭嘉, 叶集焕, 蔡胜发, 蔡政谚, 阮琪惇, 徐兆民
【申请人】资元堂生物科技股份有限公司
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2014年5月23日
【公告号】WO2015176539A1