12rC下灭菌20 分钟，冷却备用），巧光酶标仪（Spectra max GEMINI xps,Molecular Devices公司）。
[0027]实施例1:式I所示苯次横酷胺类化合物的合成 [00%]按照下述反应方程式制备。
[0030] 其中化、R2、R3如式（I)中所定义。
[0031 ] 冰盐浴下，将0.51 g(5mmo 1)的S乙胺和0.72g(5mmol)的苯硫氯与20血无水乙酸溶 液中混合，缓缓滴加1.17g(5mmolA-色氨酸乙醋（溶于IOmL无水乙酸），再在冰盐浴下反应 化，TLC跟踪检测，反应完全后，过滤，用乙酸洗涂，并将滤液减压浓缩，产物经过常压柱层析 分离提纯，洗脱剂:石油酸/乙酸乙醋= 2:1(V/V)，得到式1所示化合物白色晶体1.19g(产 率:70.6%)。
[0032] 基本按照同样的方法合成式2-7所示化合物。
[0033] 式1-7所示化合物的物化表征数据见表l，iHNMR、高分辨质谱数据见表2。
[0034] 表1式1-7所示苯次横酷胺类化合物的物化参数
[0036]表2苯次横酷胺类化合物I -7的iHNMR、高分辨质谱
[00；3 引
[0039]实施例2:苯次横酷胺类化合物对CVB3 3C蛋白酶抑制活性的测定
[0040] 测试模型每孔总体积为50化，包括CVB3 3C蛋白酶溶液(终浓度2.3iiM)、底物溶液 (终浓度25i^M)和PBS-BSA缓冲液（2XPBS缓冲液额外添加2mg/mLBSA和5.85mg/mL化Cl)， 每种化合物两倍浓度梯度，化合物终浓度为0-20化M;同时设置负对照（不含CVB3 3C蛋白 酶)和空白组(DMSO)，另设置了正对照芦平曲韦组。每个组设3个平行，混匀后37°C解育60分 钟后用Spectra max GEMINI XPS巧光酶标仪读取巧光数值，激发波长为340皿，发射波长为 4Wnm。将各孔的数值减掉空白组得到真实值，计算化合物对3C蛋白酶的抑制率，抑制率计 算公式为抑制率（％) = l〇〇X(负对照-待测化合物组数值)/负对照。同时计算其ICso值。
[0041] 式1-7所示苯次横酷胺类化合物对CVB3 3C蛋白酶的ICso数据见表3,抑制曲线见图 Io
[0042] 由图1和表3可W看出，本发明所提供的苯次横酷胺类化合物对CVB3 3C蛋白酶有 着很强的抑制作用，ICso达到測级，与阳性对照芦平曲韦（ICso= 1.57山〇活性相似。
[0043] 实施例3:苯次横酷胺类化合物对化Ia细胞的细胞毒性的测试
[0044] 测试模型每孔总体积为10化L，接种人子宫颈癌细胞化Ia细胞(终浓度5X IO5个/ mU，于37°C、5%C02条件下培养24h后，加入不同浓度的被试化合物，继续解育16h，再加入 10化CCK-8溶液，地后检测波长45Onm处吸光度。本模型同时设置模型组(DMSO)和空白组 (未加 DMSO)，每个组设3个平行。
[0045] 结果见表3所示，由表3可知，各化合物在相应ICso剂量范围内对化Ia细胞没有显示 细胞毒性。
[0046] 表3式1-7所示苯次横酷胺类化合物对CVB3 3C蛋白酶的抑制活性和对化Ia细胞的 细胞毒性
[0048] 实施例4:苯次横酷胺类化合物对细胞抗CVB3病毒感染的影响测试
[0049] 测试模型选取lOiig/mL的药物来测试其对细胞抗CVB3感染的活性。将状态良好的 化La细胞种在12孔板中，于37°C、5%C02条件下培养2地后，将培养基换为不含血清的DMEM 培养基继续培养化后加入相应药物，解育40min后按MOI = 0.1感染CVB3病毒，正对照组只含 细胞，不加入药物和病毒，负对照组细胞只加入病毒，不加药物处理，继续培养1加至负对照 细胞出现明显细胞病变效应(CPE)后用MTS试剂检测细胞活力，各组数据与负对照组利用t 检验作差异显著性分析，测试结果如图2所示。从图2可W看出，各实验组与负对照相比均有 显著性差异，说明本发明设及的苯次横酷胺类化合物对细胞对抗CVB3感染也有活性。
【主权项】
1. 苯次磺酰胺类化合物在制备预防和/或治疗含有3C蛋白酶的病毒感染的抗病毒药物 中的应用； 所述苯次磺酰胺类化合物的结构式如式I所示，式I中，Ri为11或&-〇5烷基;R2为!1或&-〇5烷基;R3为!1或&-〇5烧氧羰基。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于:所述病毒为柯萨奇病毒。3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于:所述柯萨奇病毒为B3亚型。4. 根据权利要求1-3中任一项所述的应用，其特征在于：式I中，心为甲基、乙基或异丙 基;R2为Η或甲基;R 3为H、甲氧羰基或乙氧羰基。5. 苯次磺酰胺类化合物在制备病毒3C蛋白酶抑制剂中的应用， 所述苯次磺酰胺类化合物的结构式如式I所示，式I中，Ri为11或&-〇5烷基;R2为!1或&-〇5烷基;R3为!1或&-〇5烧氧羰基。6. 根据权利要求5所述的应用，其特征在于:所述病毒为柯萨奇病毒。7. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于:所述柯萨奇病毒为B3亚型。8. 根据权利要求5-7中任一项所述的应用，其特征在于：式I中，心为甲基、乙基或异丙 基;R2为Η或甲基;R 3为H、甲氧羰基或乙氧羰基。9. 一种预防和/或治疗含有3C蛋白酶的病毒感染的抗病毒药物，其活性成分为苯次磺 酰胺类化合物， 所述苯次磺酰胺类化合物的结构式如式I所示，式I中，Ri为11或&-〇5烷基;R2为!1或&-〇5烷基;R3为!1或&-〇5烧氧羰基。10. 根据权利要求9所述的药物，其特征在于:所述病毒为为柯萨奇病毒； 所述柯萨奇病毒为B3亚型； 式I中，Rl·为甲基、乙基或异丙基;R2*H或甲基;R3为H、甲氧羰基或乙氧羰基。
【专利摘要】本发明公开了一种苯次磺酰胺类化合物作为病毒3C蛋白酶抑制剂在制备抗病毒药物中的应用。所述苯次磺酰胺类化合物的结构式如式I所示，式I中，R1为H或C1-C6烷基；R2为H或C1-C6烷基；R3为H或C1-C6烷氧羰基。通过体外酶活测试，本发明所提供的苯次磺酰胺类化合物对CVB3？3C蛋白酶有着很强的抑制作用，IC50达到μM级，与阳性对照芦平曲韦(IC50＝1.57μM)活性相似，但化学结构与芦平曲韦等短肽化合物完全不同，很可能具有与芦平曲韦完全不同的作用机制。经过细胞水平活性测试，本发明所提供的苯次磺酰胺类化合物对CVB3病毒有抑制作用。苯次磺酰胺类化合物可以通过抑制CVB3？3C活性，在细胞水平上产生CVB3病毒抑制效果，具有良好的抗病毒药物应用前景。
【IPC分类】A61P31/14, A61K31/405
【公开号】CN105663122
【申请号】CN201610104635
【发明人】张立新, 王建国, 代焕琴, 王钦钦, 宋福行, 商建丽, 王洛强, 马荣
【申请人】中国科学院微生物研究所, 南开大学
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年2月25日