含有枯草芽孢杆菌的生物有机肥及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物农药技术领域，涉及一种含有枯草芽孢杆菌的生物有机肥，特别 适用于茄科类作物根结线虫病害防治。 技术背景
[0002] 根结线虫是危害农作物的重要病害。在线虫侵入植物根系后，会在植物的细根及 粗根各部位产生大小不一的不规则瘤状物，即根结。植物根系在线虫寄生后，其功能受到破 坏，使植株地上部生长衰弱、变黄，从而影响作物产量。同样，茄科类作物根结线虫病害也是 主要发生在作物的根部。须根或侧根上产生肥肿畸形瘤状结节，常成糖萌芦状；根结初期为 白色，表面光滑；后期变为褐色，并且表面粗糙；剖开根结可见乳白色线虫。病情严重时，植 株生长不良，植株矮小、萎蔫或枯死。一般发病地块减产20%左右，发病严重地块减产50% 以上，有的甚至造成绝产。
[0003] 根结线虫病害在我国种植茄科类作物的地区广有发生。利用化学药物灭杀根结 线虫会造成作物农药残留增加；长期施用会使根结线虫产生抗药性，进一步增加防治难度； 而且化学杀线剂对环境污染严重，对环境威胁大、对人畜不安全。为保证植茄科类作物生产 的安全性和农业土地的可持续性使用，生物防治方法作为一种安全、有效的方法日益受到 重视。
[0004] 近些年根际微生物群落的研宄是根结线虫生物防治研宄的热点之一。目前常采用 的方法是将拮抗菌制成浓缩液体制剂或者符合固体粉剂，在作物移栽前施用。但是由于用 于根结线虫防治的菌株在复杂的土壤生态因子的影响下，其防治的稳定性得不到保证，从 而防治效果不明显。并且由于侵染不同作物的根结线虫的种类不同，需要有针对性的拮抗 菌株；而目前还没有用于茄科类作物根结线虫病害防治的拮抗菌和其作为主要成分的生物 有机肥。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种茄科类作物根结线虫病害的拮抗菌和其作为主要成分 的生物有机肥，通过联合作用提高拮抗菌在土壤中定植能力，提高其对根结线虫的防治效 果。这对改善茄科作物根际微环境、促进生物防治技术的发展具有重要的意义。
[0006] 本发明的技术方案通过以下方法实施： 枯草芽孢杆菌的复苏培养是采用固体LB培养基培养，37°C静置培养24小时。固体LB培养基的成分为：琼脂20g、蛋白胨10g、酵母浸出物5g，NaCl10g，加水至1000mL，pH=7。 将上述混合物，在120°C高温高压灭菌处理30分钟，40°C下冷却并凝固。
[0007] 将枯草芽孢杆菌单克隆菌落接种到一级液体培养基中，37°c摇床培养，转速为200 转/分钟，过夜培养后得到液体菌种。枯草芽孢杆菌的一级液体培养基的成分为：豆饼粉 4g/L，玉米粉 3g/L，Na2HP04 0 . 8g/L，（NH4)2S04 0 . 4g/L，NH4C1 0.15g/L，加水至 1000mL， pH=7。将上述混合物，在120°C高温高压灭菌处理30分钟。
[0008] 将液体菌种接种到二级发酵培养基中，37°C摇床培养，转速为200转/分钟，过 夜，进行放大培养。枯草芽孢杆菌的二级发酵培养基的成分为：豆饼粉6g/L，玉米粉8g/ L，Na2HP04 0 . 8g/L，（NH4)2S04 0 . 4g/L，NH4C1 0.12g/L，CaCl2 0.12g/L，加水至 1000mL， pH=7。将上述混合物，在120°C高温高压灭菌处理30分钟。
[0009] 所述的枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种，菌体大小为（0. 7~0.8um)X( 2~3 um)，无荚膜，周生鞭毛，能运动，革兰氏染色呈阳性。
[0010] 将通过二级发酵培养得到的枯草芽孢杆菌二级培养菌液按照重量配比与以下物 质混合堆肥，其组成为2~3%枯草芽孢杆菌二级培养菌液（10 9CFU/mL每毫升的菌落形成单 位)、15~25%豆渣、35~45%泥炭、8~12%动物粪便、2~4%木肩、20~30%秸杆。优选配方为2%枯 草芽孢杆菌二级培养菌液（10 9CFU/mL)、20%豆渣、40%泥炭、10%鸡粪、3%木肩、25%秸杆。在 各物料按照比例混合均匀后，加入一定比例的枯草芽孢杆菌菌液，同时加入总体积10%的 水进行堆捂。每隔5天翻堆，堆捂发酵30天后若观察到物料疏松、温度下降、无明显异味， 则表明发酵完全。对发酵物料取样，依照国家有机肥标准NY525-2011检测。
[0011] 将生产得到的生物有机肥通过联合用药的方式防治茄科类作物的根结线虫。具体 的方法为：将该生物有机肥作为底肥施用，在移栽时每株作物施用20~50g。将二级发酵菌 液稀释10000倍，在移栽后浇灌每株作物根部20~50mL。将稀释后的菌液通过喷灌系统在 作物生长期喷施到作物叶面、根部，每30天喷施一次，要求每次喷施均匀浸透。
[0012] 本发明的优点在于：本发明针对茄科作物，采用联合用药的方式，施用特定的微生 物，并使其在植物根际形成优势菌群，达到对根结线虫较好的防治。
[0013] 具体实施效果 下面结合实施例对本发明做进一步说明。以下所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并 非对本发明作任何形式上的限制；任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明技术方案 范围情况下，都可利用上述揭示的方法和技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动 和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据 本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同替换、等效变化及修饰，均仍属 于本发明技术方案保护的范围内。
[0014] 实施例1 一种含有枯草芽孢杆菌的生物有机肥，由枯草芽孢杆菌二级培养菌液2kg、豆渣20kg、 泥炭40kg、鸡奠10kg、木肩3kg和稻杆25kg制成。
[0015] 该生物有机肥通过以下方式制备： (1)分别称取琼脂20g、蛋白胨10g、酵母浸出物5g、NaCl10g，溶解在水中，并加水定容 至1000mL，调节pH为7。将上述混合物，在120°C高温高压灭菌处理30分钟，冷却、铺平 板、凝固后待用。
[0016] (2)将枯草芽孢杆菌在上述的固体培养基上进行复苏培养，37°C，静置培养24小 时。
[0017] (3)分别称取豆饼粉 4g、玉米粉 3g、Na2HP040. 8g、（NH4)2S040. 4g和NH4C10?15g， 用水溶解，并加水至1000mL，调节pH为7。将上述混合物，在120°C高温高压灭菌处理30 分钟，制成一级液体培养基。
[0018] (4)从固体培养基上挑取复苏的枯草芽孢杆菌单克隆在一级液体培养基中，37°C 摇床培养，转速为200转/分钟，培养12小时。
[0019] (5)分别称取豆饼粉 6g、玉米粉 8g、Na2HP04 0 . 8g、（NH4)2S04 0 . 4g、NH4C1 0? 12g 和CaCl2 0. 12g，溶解在水中，并加水至1000mL，调节pH为7。将上述混合物，在120°C高 温高压灭菌处理30分钟，制成二级发酵培养基。
[0020] (6)从一级液体培养基中量取培养产物10mL加入到二级发酵培养基中。37°C摇 床培养，转速为200转/分钟，培养12小时，形成二级培养菌液。
[0021] (7)将制备的枯草芽孢杆菌二级培养菌液2kg，分别与豆渣20kg、泥炭40kg、鸡 粪10kg、木肩3kg和秸杆25kg均匀混合，加入总体积10%的水后进行堆捂，堆内温度为 30-65C°，每隔5天翻堆，堆捂发酵30天后观察到物料疏松、温度下降30C°以下、无明显 异味，发酵完全，制得该生物有机肥。
[0022] 实施例2生物有机肥进行检测和鉴定 按照实施例1配方制备的生物有机肥，在同等条件下与传统型的有机肥进行检测，对 比两种肥料各组分的含量。
[0023] 表1含有枯草芽孢杆菌生物有机肥和传统有机肥检测结果比较
【主权项】
1. 含有枯草芽孢杆菌的生物有机肥，其特征在于由以下重量配比的原料制成：2~3%枯 草芽孢杆菌二级培养菌液，其中枯草芽孢杆菌10 9CFU/mL、15~25%豆渣、35~45%泥炭、8~12% 动物粪便、2~4%木肩、20~30%秸杆。
2. 根据权利要求1所述的含有枯草芽孢杆菌的生物有机肥，其特征在于由以下重量配 比的原料制成：2%枯草芽孢杆菌二级培养菌液、20%豆渣、40%泥炭、10%鸡粪、3%木肩、25% 稻杆。
3. 根据权利要求1或2所述的含有枯草芽孢杆菌的生物有机肥的制备方法，其特征在 于：将上述原料按配比混合均匀后，加入混合原料总体积10%的水，堆捂发酵；每隔5天翻 堆1次，发酵30天后，物料疏松、温度下降，发酵完全，从而制得该生物有机肥。
4. 根据权利要求1或2所述的含有枯草芽孢杆菌的生物有机肥的应用，其特征在于： a. 将该生物有机肥作为底肥在移栽茄科类作物时使用，在移栽时每株茄科类作物施生 物有机肥20~50g; b. 将枯草芽孢杆菌二级培养菌液稀释10000倍形成的菌液稀释液，在移栽后浇灌每株 茄科类作物根部20~50mL，将菌液稀释液在茄科类作物生长期喷施到作物叶面、根部，每30 天喷施一次，要求每次喷施均匀浸透。
【专利摘要】本发明公开一种含有枯草芽孢杆菌的生物有机肥及其应用，特别适用于茄科类作物根结线虫病害防治，其组成为2~3%枯草芽孢杆菌菌液、15~25%豆渣、35~45%泥炭、8~12%动物粪便、2~4%木屑、20~30%秸秆，优选配方为2%枯草芽孢杆菌菌液、20%豆渣、40%泥炭、10%鸡粪、3%木屑、25%秸秆。上述原料混合均匀后，加入总体积10%的水，堆捂发酵。每隔5天翻堆1次，发酵30天后，制得该生物有机肥。将该生物有机肥作为底肥在移栽时使用，并且将枯草芽孢杆菌菌液稀释10000倍，在移栽后灌根和喷施在叶面和根部，能够有效的防治茄科类作物根结线虫病害。
【IPC分类】A01C21-00, C05G3-02
【公开号】CN104692957
【申请号】CN201510093102
【发明人】高宇
【申请人】安徽远大机械制造有限公司
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2015年3月3日