一种用竹笋提取胰蛋白酶抑制剂的方法
【技术领域】：
[0001] 本发明属于蛋白制备领域，具体涉及一种用竹笋提取胰蛋白酶抑制剂的方法。
【背景技术】：
[0002] 我国拥有十分丰富的竹类资源，主要分布于福建、江西、浙江等省。竹笋是竹鞭或 杆基上的芽萌发分化而成的膨大的芽和幼嫩的茎，是一种高蛋白低脂肪的森林蔬菜。随着 笋用林和笋竹两用林丰产技术的推广，我国鲜笋产量逐年递增，2006年产竹笋500万?600 万吨，除40%鲜销外，其余均用于罐头笋和笋干的加工。但是，近年来由于传统笋产品市场 趋于饱和，市场竞争激烈，导致相关企业经济效益低下，鲜笋原料价格偏低，农民增产不增 收。此外，传统笋加工会产生笋头、笋壳和笋煮液等大量废弃物，导致资源浪费和环境污染。 因此，要将资源优势转化为经济优势实现竹笋加工剩余物的综合利用，就要研宄挖掘全笋 的营养价值和药用价值，重视产品创新，研发竹笋深加工产品，提升竹笋的附加值。这对竹 笋产业的可持续发展具有重要意义。
[0003] 据报道，在竹笋中蛋白质含量较高，每IOOg鲜竹笋含有蛋白质高达2.65g。竹笋 中用于制作笋罐头、笋干等笋制品的笋肉只占笋体很少一部分。以毛竹笋为例，其笋肉只占 30%，其余均为笋头和笋壳等下脚料，其比例高达70%，而这些下脚料的营养成分多数并不 会比笋肉低。竹笋中含氮物质丰富，因此利用竹笋、笋渣、笋壳生产或提取特殊用途的氨基 酸、多肽、蛋白质是研宄者关注的焦点。文献报道，利用DEAE-纤维素柱色谱、亲和层析柱和 阳离子交换柱从新鲜竹笋里分离得到一种分子量为20kDa的抗真菌蛋白（Dendrocin)，它 能抑制菌丝体的生长，经分析其N端序列与拟甜蛋白相似，这种蛋白不像其他抗菌蛋白一 样具有红细胞凝集和核糖核酸酶活性。日本科学家Masatoshi等利用亲和色谱从毛竹笋中 分离得到了 2种具有抗致病菌和抗真菌功能的多肽，被分别命名为Pp-AMPl和Pp-AMP2,其 氨基酸序列分析发现其与槲寄生毒素具有高度同源性。武汉大学生命科学学院罗曼等采用 挥发性酸和碱调节鲜舆壳压榨液pH值，分别获得无盐的Fraction-I和Fraction-II，其压 榨后的汁液，加入Fe2+并超滤浓缩，经硫酸铵盐析和丙酮分级后，用CM-22纤维素离子交换 柱层析，以PH值5. 2的乙酸钠溶液分级洗脱，获得高纯竹笋过氧化物酶。提示了罐头笋加 工尾料可通过系统的生化工程处理，获得高附加值的酶制剂。浙江大学张英等、黄伟等利 用竹笋加工废弃物-笋煮液或笋浸泡液，结合组合式膜技术、电渗析等工艺技术，制备出竹 笋氨基酸肽类提取物，其中氨基酸总量（以干基计）一般在20%?40%，游离氨基酸含量 占10%?30%，并含有0.5%?1.0%的S-羟基赖氨酸，氨基酸组成以酪氨酸、丝氨酸、 天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、S-羟基赖氨酸等为主。该产品具有良好 的感官品质和浓郁的鲜味，可广泛用于功能性食品、饮品和调味品等。中国林业科学研宄院 亚热带林业研宄所张金萍等采用等电点沉淀法、乙醇胺复溶-沉淀法从毛竹春笋（或笋加 工废液）中分离、精制酪氨酸，纯度大于98. 5%。
[0004] 胰蛋白酶抑制剂是具有抑制胰蛋白酶作用的一类物质，是人类重要的药物资源， 具有广阔的应用前景。蛋白的酶水解在一系列生理过程如消化中扮演着重要的角色，而该 反应则受蛋白酶抑制剂的调控。添加到食品及食品成分中的抑制剂，能减少游离氨基酸的 吸收，抑制生产中的蛋白水解反应。抑制剂可作为一种有利的手段，用于控制害虫、预防和 治疗疾病（如癌症和艾滋病），以及抑制食品加工中不受欢迎的蛋白酶催化反应等。此外， 蛋白酶抑制剂也可作为有价值的生化工具，用干蛋白酶的种类和特性研宄。
[0005] 天然的胰蛋白酶抑制剂存在于鸟蛋、大豆、红花豆和马铃薯中。目前生产上主要利 用大豆来提取。
【发明内容】
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[0006] 本发明的目的是提供一种用竹笋提取胰蛋白酶抑制剂的方法，利用该方法能够高 效的提取到胰蛋白酶抑制剂，提取的胰蛋白酶抑制剂纯度高，从而实现了竹笋资源利用效 率，促进竹笋综合利用技术提升，带动竹产业发展。
[0007]本发明的用竹笋提取胰蛋白酶抑制剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0008] 将竹笋去皮用水清洗干净切片，然后按竹笋：水质量体积比Ig将切片的竹 笋加入到水中，然后磨碎，再在60-90°C下反应3-30min，过滤，去渣取滤液，边搅拌边向滤 液中加入600-750g/L的硫酸铵溶液，直至溶液澄清，置于3-7°C下8-12小时，然后离心，去 掉上清液，将沉淀物再溶解于水中，然后经葡聚糖凝胶G25柱，用水洗脱，洗脱馏分经浓缩 后再经葡聚糖凝胶G50柱，用水洗脱，洗脱馏分再经二乙二胺乙基纤维素-葡聚糖凝胶A50， 用0.lg/L-0. 3g/L的NaCl溶液梯度洗脱，收集0. 12-0. 15g/L的梯度洗脱馏分，即得到胰蛋 白酶抑制剂。
[0009] 优选，所述的将沉淀物再溶解于水中，优选是将沉淀物再溶解于水中使蛋白质浓 度为质量百分数1%。
[0010] 本发明主要运用物理化学、有机化学、生物化学、现代分离技术等相关理论和方 法，研宄竹笋降解分离提纯最佳工艺方案：即将竹笋去壳清洗干净切碎，加水磨碎成浆，浆 液加热后过滤去渣，再加入硫酸铵，低温过夜，离心去清液，柱分离，得到胰蛋白酶抑制剂。 本发明的方法简单合理，有效利用了竹笋中的蛋白质资源，用本发明可以开发出高附加值 的竹笋产品，提高竹笋加工业的经济效益，提高资源利用效率，促进竹笋综合利用技术提 升，带动竹产业发展和农村经济的繁荣。
【附图说明】：
[0011] 图1是蛋白的SDS-PAGE图，其中1、粗提竹笋胰蛋白酶抑制剂，2、纯化的胰蛋白酶 抑制剂。
【具体实施方式】：
[0012] 以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
[0013] 实施例1
[0014]竹笋去皮用水清洗干净，切成约3X5cm小片，然后按竹笋：水质量体积比Ig:1ml将切片的竹笋加入到水中，用混合器磨碎，再在60°C下反应3min，过滤，去渣取滤液，边搅 拌边向滤液中缓慢加入600g/L