ES7. 5ml/L，并调节pH至7. 0±0. 1。在本发明的具体实施方案中，所述生产培养 基用于抗体生产。在本发明的实施方案中，所述生产培养基为表1-2的生产培养基。
[0043] 在本发明的实施方案中，所述流加培养基中含有氢氧化钠、无水磷酸氢二钠、流加 培养基干粉Ma Xfeed402、L-酪氨酸二钠盐二水物、L-半胱氨酸盐酸盐一水物、天冬酰胺、葡 萄糖、维生素 B12、硫酸亚铁、Pluronic F-68、氯化钠、HC1、碳酸氢钠。
[0044] 在本发明的具体实施方案中，所述流加培养基中含有5M氢氧化钠7. 325mL、无水 磷酸氢二钠3. 09g/L、流加培养基干粉Maxfeed40239. 03g/L、50g/L L-酪氨酸二钠盐二水 物23. 8mL、50g/L L-半胱氨酸盐酸盐一水物23. 2mL、葡萄糖50g/L、I. 75g/L维生素 B12贮 存液 0· 3ml/L、5g/L 七水硫酸亚铁存液 〇· 3ml/L、Pluronic F-680. 3g/L、氯化钠 0· 24g/L 和碳酸氢钠〇.366g/L。在本发明的具体实施方案中，所述流加培养基用于流加培养。在本 发明的实施方案中，所述流加培养基为表1-3的流加培养基。
[0045] 在本发明的实施方案中，所述步骤5)的纯化依次包括亲和层析、阴离子交换层析 和阳离子交换层析。
[0046] 在本发明的具体实施方案中，所述步骤5)的纯化步骤具体包括：首先收集过蛋白 A亲和层析柱pH在3. 4-3. 6范围（用280nm进行监测）的洗脱液，调pH值至7~9,上样到 阴离子交换层析柱，280nm进行监控和收集样品，将收集液pH值调节至5~7,上样到阳离 子交换层析柱，收集样品，超滤浓缩后获得抗HER2人源化抗体。
[0047] 在本发明的实施方案中，所述蛋白A亲和层析柱是Mabselect SuRe或ProSep Ultra Plus或ProSep vA Ultra或MabCapture A或具有类似功能的蛋白A亲和层析介质。
[0048] 在本发明的实施方案中，所述阴离子交换层析柱是Q Sepharose FF或Fractogel TMAE或Poros HQ或Captol Q或具有类似功能的阴离子交换层析介质。
[0049] 在本发明的实施方案中，所述阳离子交换层析柱是Poros HS或Poros XS或SP Sepharose FF或Fractogel S03-或Fractogel SH Hicap或具有类似功能的阳离子交换层 析介质。
[0050] 本发明第六方面涉及组合物，其含有本发明第四方面任一项的抗HER2人源化抗 体；
[0051] 在本发明的实施方案中，所述抗HER2人源化抗体中VHS异构体的含量为0~ 0. 4%，例如为0~0. 2%、0~0. 1% ;和/或在本发明的实施方案中，所述抗HER2人源化抗体 中NGHC异构体的含量为0. 2%~1%，例如为0. 3%~0. 75%。
[0052] 本发明还涉及本发明第一方面任一项的核酸分子、第二方面任一项的重组载体、 或者第三方面任一项的重组细胞在制备抗HER2人源化抗体中的用途。
[0053] 在本发明的实施方案中，其中所述抗HER2人源化抗体轻链可变区的氨基酸序列 如SEQ ID NO :3所示，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO :4所示。
[0054] 本发明还涉及本发明第四方面任一项的抗HER2人源化抗体在制备抗肿瘤药物中 的用途；优选地，所述肿瘤例如为乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、食道癌或胃癌。
[0055] 在本发明中，所述VHS异构体是指在蛋白表达后的修饰过程中，抗体产物蛋白 由于N-末端先导肽酶切不完全而得到的异构体，所述酶切不完全的N-末端先导肽含有 VHS-序列，或者由VHS-序列组成，所述VHS-序列是指缬氨酸-组氨酸-丝氨酸-序列。
[0056] 在本发明中，所述VHS异构体的含量是指VHS异构体占总体抗体蛋白产物含量的 百分比。
[0057] 在本发明中，所述NGHC (non-glycosylated heavy chain,无糖基化修饰的重链） 是指在蛋白表达后修饰过程中抗体产物蛋白重链没有完成糖基化修饰的异构体。
[0058] 在本发明中，所述NGHC的含量是指NGHC异构体占总体抗体蛋白产物含量的百分 比。
[0059] 在本发明中，所述对细胞的驯化培养是指使细胞能够在新培养基中生长繁殖的过 程。
[0060] 在本发明中，如未特别指明，则百分比（％)是指重量百分比。
[0061] 发明的有益效果
[0062] 本发明通过改进编码抗体的核苷酸序列和载体设计，优选重组细胞，优化目标产 物抗体在无血清、化学成分确定性培养基中的制备方法，从而改变了在哺乳动物细胞内表 达抗体时的翻译后修饰方式，获得了不含VHS异构体和不含NGHC异构体的抗HER2人源化 抗体，由于其具有更高的纯度，更有利于保证抗体的质量和活性，大大提高了抗HER2人源 化抗体的生产水平。
【附图说明】
[0063] 图IPCR扩增MIL41/VH、MIL41/Vk基因片段的琼脂糖电泳结果；其中泳道2、5为 分子量Marker DL2000,泳道1为MIL41/V κ的PCR产物，泳道3、4为MIL41/VH的PCR产 物。
[0064] 图2宿主细胞驯化培养流程图。
[0065] 图3宿主细胞驯化过程中细胞生长曲线图
[0066] 图4抗体MIL41的制备、纯化流程图。
[0067] 图5帕妥珠的IEC色谱图。
[0068] 图 6MIL41 的 IEC 色谱图。
[0069] 图7帕妥珠和MIL41的IEC重叠图谱
[0070] 图8MIL41、帕妥珠、无关抗体抑制MDA-MB-175增殖的实验结
[0071] 果。
【具体实施方式】
[0072] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为 可以通过市购获得的常规产品。
[0073] 实施例1抗体MIL41核苷酸序列的获得
[0074] 抗体氨基酸序列为重组人源抗体rhuMab2C4的抗体序列，来自国际专利PCT/ US2003/021590。选择在哺乳动物细胞中使用频率较高的密码子进行反向翻译，通过生物信 息学技术合理优化，利用分子建模和分子生物学突变实验，获得了本发明抗体MIL41的核 苷酸序列。
[0075] 抗体MIL41的轻链核苷酸序列为：
[0076] Ratatccagatgacccagagcccctccagcctgtccgccagcgtgggcgaccgcgtgaccatcacctgc aaggccagccaggacgtgagcatCggcgtggcctggtaccagcagaagcccggcaaggcccccaagctgetgatcta cagcgcctcctaccgctacaccggcgtgccctcccgcttcagcggctccggcagcggcaccgactttaccctgacca tctccagcctgcagcccgaggactttgccacctactactgccagcagtactacatctatccctataccttcggccag ggcaccaaggtggagatcaagcgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaa atctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggata acgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagc accctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctc gcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (SEQ ID N0:1)，其中带有下划线的序列为可变区 序列；
[0077] 抗体MIL41的重链核苷酸序列为：
[0078] gaggtgcagctggtggagagcggcggcggcctggtgcagcccggcggcagcctgcgcctgtcctgcgcc gccagcggcttcacctttaccgactacaccatggactgggtgcgccaggctcccggcaagggcctggagtgggtggc cgacgtgaaccccaacagcggcggcagcatctacaaccagcgcttcaagggccgcttcaccctgagcgtggaccgca gcaagaacaccctgtacctgcagatgaacagcctgcgcgccgaggacaccgccgtgtactactgcgcccgcaacctg ggccccagcttctacttcgactattgggggcagggcaccctggtcaccgtgagcagcgctagcaccaagggcccatc ggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactact tccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacag tcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgactgtgccctctagcagcttgggcacccagacctacatctgcaa cgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcc caccgtgcccagcacctgaactcctggggggacc