人nlk基因相关的用途及其相关药物的制作方法
【专利说明】
[0001] 本申请是申请日为2011年12月23日，申请号为201110440594. 4,发明名称为： 《人NLK基因相关的用途及其相关药物》的中国专利申请的分案申请。
技术领域
[0002] 本发明涉及生物技术领域，更具体地涉及人NLK基因相关的用途及其相关药物。
【背景技术】
[0003] Nemo样激酶（Nemo-like kinase, NLK)定位于细胞核，是一种属于脯氨酸介导 的蛋白激酶超家族中保守的丝氨酸-苏氨酸激酶，最初认为与果蝇的眼细胞的极化及脊 椎动物多种发育过程有关（Choi KW, Benzer S. Rotation of photoreceptor clusters in the developing Drosophila eye requires the Nemo gene. Cell. 1994 ；78:125-36. Verheyen EMjMirkovic I，MacLean SJ，Langmann C，Andrews BC，MacKinnon C. The tissue polarity gene Nemo carries out multiple roles in patterning during Drosophila development. Mech Dev. 2001 ;101:119-32. )D近年来的研究认为NLK可调节、磷酸化转录 因子，并通过多种信号途径参与细胞的凋亡过程（BiOtt BK, Pinsky BAiErikson RLNlk is a murine protein kinase related to Erk/MAP kinases and localized in the nucleus. Proc Natl Acad Sci U S A. 1998 ；95:963-8. Mirkovic IjCharish KjGorski SMjMcKnight KjVerheyen EM. Drosophila Nemo is an essential gene involved in the regulation of programmed cell death. Mech Dev. 2002 ;119:9-20.)〇
[0004] Wnt信号传导通路包括：细胞外因子（Wnt)、跨膜受体（Frizzled，Fz)、胞质蛋白 (Dsh，β-catenin/APC/Axin复合体等）及核内转录因子（TCF/LEF)，与多种肿瘤的发生 发展密切相关（Bienz M, Clevers H. Linking colorectal cancer to Wnt signaling. Cell 2000;103:311-20.)。NLK 是 Wnt/0-catenin 信号通路的负调节因子，可使 TCF/ LEF磷酸化，抑制β-catenin/TCF复合体的转录活性。c-myb原癌基因表达物c-Myb蛋 白作为转录因子可调控下游多种基因转录，影响造血干细胞的增殖与凋亡。fct-i通过 转化生长因子β激活性激酶TAKl诱导NLK直接结合并磷酸化c-Myb蛋白多个位点， 后续发生遍在蛋白化及蛋白酶依赖的降解，可能造成细胞周期Gl期的阻滞，然而对Myb 家族另一成员a-Myb的调控则主要表现为磷酸化并抑制其与DNA结合区结合而发挥作 用(Kanei-Ishii C, Ninomiya-Tsuji J,Tanikawa J,Nomura T,Ishitani T,Kishida S, Kokura K, Kurahashi T, Ichikawa-Iwata E, Kim Y, Matsumoto K,Ishii S. ffnt-1 signal induces phosphorylation and degradation of c_Myb protein via TAKl, HIPK2, and NLK. Genes Dev. 2004;18:816-29.)。另外，研宄发现，TAKl-NLK通路可磷酸化具有影响细 胞凋亡、应激、DNA损伤/修复、肿瘤发生的转录因子F0X01，并促使F0X01从胞核至胞质的 移位，而抑制 F0X01 的转录功能（Kim S, Kim Y, Lee J, Chung J. Regulation of F0X01 by TAKl-Nemo-like kinase pathway. J Biol Chem. 2010 ;285:8122_9·)。进一步研宄发现，NLK 还可通过磷酸化转录共激活因子CBP/P300的C-末端区域而影响转录因子如NF-kB、AP-1、 Smad等的转录活性的方式参与细胞凋亡过程（Yasuda J, Yokoo H, Yamada T, Kitabayashi I, Sekiya T, Ichikawa Η. Nemo-like kinase suppresses a wide range of transcription factors, including nuclear factor-kappaB. Cancer Sci.2004 ；95:52-7. Shi Y, Ye K, Wu H, Sun Y, Shi H, Huo K. Human SMAD4 is phosphorylated at Thr9 and Serl38 by interacting with NLK. Mol Cell Biochem. 2010;333:293-8·)。
[0005] 关于NLK在肿瘤中的研宄已有在结直肠癌、前列腺癌和肝癌中的报道。NLK被认 为是结肠癌Wnt/β -catenin信号通路的抑癌基因。野生型的NLK在结直肠癌中被诱导表 达，通过磷酸化TCF/LEF抑制细胞生长，促进p53非依赖的细胞凋亡，但不影响细胞周期 (Yasuda J, Tsuchiya A, Yamada T, Sakamoto M, Sekiya T, Hirohashi S. Nemo-like kinase induces apoptosis in DLD-1 human colon cancer cells. Biochem Biophys Res Commun 2003 ;308:227-33.)。在前列腺癌中，NKL负调节雄性激素受体信号转导途径。NLK过表达可 显著诱导雄性激素受体阳性表达的前列腺癌细胞发生细胞凋亡。进一步的研宄发现，NLK能 够通过与雄激素受体形成复合物的方式抑制雄激素受体对靶基因的转录活性，且在转录水 平抑制雄激素受体mRNA 的表达（Emami KH, Brown LG, Pitts TE, Sun X，Vessella RL, Corey E. Nemo-like kinase induces apoptosis and inhibits androgen receptor signaling in prostate cancer cells. Prostate. 2009;69:1481-92·)。而在人肝癌细胞系中，敲除 NLK的表达可以抑制细胞生长，同时发现，Gl-S期细胞增加，细胞周期相关蛋白cyclin Dl、 ⑶K2的表达也明显降低，说明NLK在肝癌形成中可能具有通过作用cyclin D1XDK2而发挥 促有丝分裂的作用（Jung KH, Kim JK, Noh JH, Eun JW, Bae HJ, Xie HJ, Ahn YM, Park WS, Lee JY, Nam Sff. Targeted disruption of Nemo-like kinase inhibits tumor cell growth by simultaneous suppression of cyclin Dl and CDK2 in human hepatocellular carcinoma.J Cell Biochem. 2010;110:687-96·)。综上，NLK 在不同肿瘤的发生发展中可 能发挥不同的生物学功能。
[0006] RNA干扰（RNA interference, RNAi)即用核苷酸组成的短的双链RNA(dsRNA)进 行转录后基因沉默。它可高效、特异地阻断体内特定基因的表达，导致其降解，从而引起 生物体内特异基因的沉默，使细胞表现出某种基因表型的缺失，是近年来新兴的一种常用 的研宄基因功能、寻找疾病治疗方法的实验室技术。研宄表明，长度为21-23nt的双链 RNA能够在转录和转录后水平特异性的引起RNAi (Tuschl T, Zamore PD, Sharp PA, Bartel DP. RNAi:double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at 21 to 23 nucleotide intervals. Cell 2000;101:25-33·)。肿瘤患者虽经化疗、放疗和综合 治疗，但五年生存率仍很低，如能对肿瘤发病和进展有关的基因进行干预，将能为肿瘤的治 疗开辟新途径。近年来，RNAi已成为肿瘤的基因治疗的有效策略。利用RNAi技术可以抑制 原癌基因、突变的抑癌基因、细胞周期相关基因、抗凋亡相关基因等的表达来抑制肿瘤进程 (Uprichard, Susan L. The therapeutic potential of RNA interference. FEBS Letters 2005 ；579