生，例如使用Ladner等，美国专利No. 4, 946, 778 (其通 过引用全文并入本文中）；Bird 等，（1988) Science 242:423-426 ;Whitlow 等，（1991) Methods in Enzymology 2:1-9 ;Whitlow 等，（1991)Methods in Enzymology 2:97-105 和 Huston 等，（1991)Methods in Enzymology Molecular Design and Modeling:Concepts and Applications 203:46-88中描述的方法。多特异性抗体是具有至少两个特异性 结合不同抗原的抗原结合位点的抗体分子。这类分子可以通过本领域中已知的技术产 生，例如使用Segal，美国专利No. 4, 676, 980(其公开内容通过引用全文并入本文中）； Holliger等，（1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 ;Whitlow等，（1994)Protein Eng. 7:1017-1026和美国专利No. 6, 121，424中描述的方法。
[0240] 人源化抗体是具有来自非人物种的一个或多个互补决定区（CDR)和来自人 免疫球蛋白分子的框架区的来自非人物种的抗体分子（参见，例如Queen，美国专利 No. 5, 585, 089,其通过引用全文并入本文中）。人源化单克隆抗体可以通过本领域中已知的 重组DNA技术产生，例如使用PCT公开No. WO 87/02671 ;欧洲专利申请184, 187 ;欧洲专利 申请 171，496 ;欧洲专利申请 173, 494 ;PCT 公开 No. TO 86/01533 ;美国专利 No. 4, 816, 567 ; 欧洲专利申请 125,023 ;Better 等（1988)Science 240:1041-1043 ;Liu 等（1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3439-3443 ;Liu 等（1987) J. Immunol. 139:3521-3526; Sun 等（1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84:214-218 ;Nishimura 等（1987)Cancer Res. 47:999-1005 ;Wood 等（1985)Nature 314:446-449 和 Shaw 等（1988)J.Natl. Cancer Inst.80:1553-1559) ;Morrison(1985)Science 229:1202-1207 ;0i 等（1986) Bio/Techniques 4:214 ;美国专利 5,225,539 Jones 等（1986)Nature 321:552-525 ; Verhoeyan 等（1988) Science 239:1534 和 Beidler 等（1988) J. Tmmunol. 141:4053-4060 中 描述的方法。
[0241] 更特别地，人源化抗体可以例如使用不能表达内源免疫球蛋白重链和轻链基因但 可以表达人重链和轻链基因的转基因小鼠产生。转基因小鼠以正常方式用选择的抗原（例 如，对应于本发明的标志物的多肽的全部或一部分）免疫。针对抗原的单克隆抗体可以使 用常规杂交瘤技术获得。转基因小鼠携带的人免疫球蛋白转基因在B细胞分化过程中重 排，且随后经历类别转换和体细胞突变。因此，使用这种技术，有可能产生治疗有用的IgG、 IgA和IgE抗体。对于用于产生人抗体的这一技术的综述，参见Lonberg和Huszar (1995) Int. Rev. Immunol. 13:65-93。对于用于产生人抗体和人单克隆抗体的这一技术及用于产生 这类抗体的方案的详细讨论，参见例如，美国专利5, 625, 126 ;美国专利5, 633, 425 ;美国专 利5, 569, 825 ;美国专利5, 661，016和美国专利5, 545, 806。另外，公司可以使用类似于以 上描述的技术参与提供针对选择的抗原的人抗体。
[0242] 识别选择的表位的完全人抗体可以使用称为"定向选择（guided selection) "的 技术产生。在这种方式中，选择的非人单克隆抗体，例如鼠抗体，用于指导识别相同表位的 完全人抗体的选择（Jespers 等，1994, Bio/technology 12:899-903)。
[0243] 本发明的抗体可以在产生后分离（例如，从受试者的血液或血清分离）或合成后 分离和通过公知的技术进一步纯化。例如，IgG抗体可以使用蛋白A色谱纯化。对于本发明 的蛋白质特异性的抗体可以通过例如亲和色谱进行选择或例如部分地纯化或纯化。例如， 重组表达和纯化的（或部分纯化的）本发明蛋白质如本文中所述地产生，并共价或非共价 地与固体支持物（如，例如，色谱柱）偶联。柱然后可以用于从包含针对大量的不同表位的 抗体的样品中亲和纯化对于本发明的蛋白质特异性的抗体，从而生成基本上纯化的抗体组 合物，即基本上不含污染抗体的组合物。基本上纯化的抗体组合物在这种情况中意思是抗 体样品包含最多仅30% (以干重计）的针对所需的本发明蛋白质的表位以外的表位的污染 抗体，且优选地最多20%，还更优选最多10%和最优选最多5% (以干重计）的样品是污染 抗体。纯化的抗体组合物意思是组合物中至少99%的抗体针对所需的本发明蛋白质。
[0244] 针对蛋白质的抗体可用于通过标准技术如亲和色谱或免疫沉淀分离蛋白质。此 外，这种抗体可用于检测标志物蛋白质（例如，HSP90f3)或其片段（例如，在细胞裂解产物 或细胞上清液中）以评价标志物的水平和表达模式。抗体也可以例如作为临床检验程序的 部分诊断地用于监测组织或体液中（例如，在疾病状态或毒性状态相关的体液中）的蛋白 质水平，以例如测定给定治疗方案的效力。检测可以通过使用包含与可检测物质偶联的本 发明抗体的抗体衍生物促进。可检测物质的实例包括各种酶、辅基、荧光物质、发光物质、生 物发光物质和放射性物质。合适的酶的实例包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β -半乳糖 苷酶或乙酰胆碱酯酶；合适的辅基复合物的实例包括抗生蛋白链菌素/生物素和抗生物素 蛋白/生物素；合适的荧光物质的实例包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、若丹明、二氯 三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光物质的实例包括鲁米诺；生物发光物质的实 例包括萤光素酶、萤光素和水母蛋白；和合适的放射性物质的实例包括 125I、131I、35S或3η。
[0245] 抗体也可以用作治疗代谢综合征和/或糖尿病的治疗剂。
[0246] V. HSP90的小分子抑制剂
[0247] HSP90的小分子抑制剂包括，但不限于格尔德霉素（GM)类似物（例如，ΙΡΙ-493
【主权项】
1. 一种治疗受试者的代谢综合征的方法，包括向所述受试者施用HSP90调节剂，从而 治疗所述受试者的代谢综合征。
2. 权利要求1的方法，其中所述HSP90调节剂是HSP90抑制剂。
3. 权利要求2的方法，其中所述HSP90抑制剂是HSP90 0的抑制剂。
4. 权利要求2的方法，其中所述HSP90抑制剂是HSP90 0的特异性抑制剂。
5. 权利要求2或3的方法，其中所述HSP90抑制剂是HSP90 a的抑制剂。
6. 权利要求1-5任一项的方法，其中所述代谢综合征包括2型糖尿病。
7. 权利要求1-5任一项的方法，其中所述代谢综合征包括1型糖尿病。
8. 权利要求1-5任一项的方法，其中所述代谢综合征包括胰岛素抵抗。
9. 权利要求1-5任一项的方法，其中所述代谢综合征包括胰岛素不足。
10. 权利要求1-5任一项的方法，其中所述代谢综合征包括肥胖症。
11. 权利要求1-5任一项的方法，其中所述代谢综合征包括高胰岛素血症。
12. 权利要求1-5任一项的方法，其中所述代谢综合征包括葡萄糖耐量降低（IGT)。
13. 权利要求1-12任一项的方法，其中患有代谢综合征的受试者表现出以下征兆中的 二种或更多种： a) 等于或高于130/85mmHg的血压； b) 等于或高于100mg/dL的空腹血糖； c) 大的腰围，其中大的腰围对于男性是40英寸或更大和对于女性是35英寸或更大； d) 低HDL胆固醇，其中低HDL胆固醇对于男性是低于40mg/dL，和低于50mg/dL ;和 e) 等于或高于150mg/dL的甘油三醋。
14. 权利要求2-13任一项的方法，其中所述HSP90抑制剂包括核酸抑制剂。
15. 权利要求14的方法，其中所述核酸抑制剂包括反义核酸分子。
16. 权利要求14的方法，其中所述核酸抑制剂包括双链核酸分子。
17. 权利要求16的方法，其中所述核酸抑制剂包括选自siRNA、shRNA和dicer底物 SiRNA(DsiRNA)的双链 RNA。
18. 权利要求2-13任一项的方法，其中所述HSP90抑制剂包括抗体。
19. 权利要求2-13任一项的方法，其中所述HSP90抑制剂包括小分子。
20. 权利要求19的方法，其中所述小分子选自氯尼达明或其类似物、南蛇藤醇或其类 似物、葛杜宁或其类似物及香豆霉素或其类似物。
21. 权利要求1-20任一项的方法，其中治疗所述代谢综合征包括使受试者的血糖水平 正常化。
22. 权利要求1-20任一项的方法，其中治疗所述代谢综合征包括使受试者的HblAc水 平正常化。
23. 权利要求1-20任一项的方法，其中治疗所述代谢综合征包括防止与不良循环相关 的至少一种糖尿病并发症。
24. 权利要求1-20任一项的方法，其中治疗所述代谢综合征包括缓解至少一种2型糖 尿病的征兆或症状。
25. 权利要求1-20任一项的方法，其中治疗所述代谢综合征包括缓解至少一种1型糖 尿病的征兆或症状。
26. 权利要求1-20任一项的方法，其中治疗所述代谢综合征包括缓解至少一种胰岛素 抵抗的征兆或症状。
27. 权利要求1-20任一项的方法，其中治疗所述代谢综合征包括缓解至少一种胰岛素 不足的征兆或症状。
28. 权利要求1-20任一项的方法，其中治疗所述代谢综合征包括缓解至少一种高胰岛 素血症的征兆或症状。
29. 权利要求1-20任一项的方法，其中治疗所述代谢综合征包括缓解至少一种葡萄糖 耐量降低（IGT)的征兆或症状。
30. 权利要求1-20任一项的方法，其中治疗所述代谢综合征包括缓解至少一种肥胖症 的征兆或症状。
31. 权利要求1-30任一项的方法，其中治疗所述代谢综合征包括缓解以下至少一种： a) 等于或高于130/85mmHg的血压； b) 等于或高于100mg/dL的空腹血糖； c) 大的腰围，其中大的腰围对于男性是40英寸或更大和对于女性是35英寸或更大； d) 低HDL胆固醇，其中低HDL胆固醇对于男性是低于40mg/dL，和低于50mg/dL ;和 e) 等于或高于150mg/dL的甘油三醋。
32. 权利要求31的方法，其中治疗所述代谢综合征包括缓解等于或高于130/85mmHg的 升尚的血压。
33. 权利要求31的方法，其中治疗所述代谢综合征包括缓解等于或高于lOOmg/dL的升 高的空腹血糖。
34. 权利要求31的方法，其中治疗所述代谢综合征包括缓解大的腰围，其中大的腰围 对于男性是40英寸或更大和对于女性是35英寸或更大。
35. 权利要求31的方法，其中治疗所述代谢综合征包括通过提高HDL胆固醇来缓解低 HDL胆固醇，其中低HDL胆固醇对于男性是低于40mg/dL，和低于50mg/dL。
36. 权利要求31的方法，其中治疗所述代谢综合征包括缓解等于或高于150mg/dL的升 高的甘油三酯。
37. 权利要求1-36任一项的方法，其中治疗代谢综合征包括缓解脂肪肝。
38. 权利要求1-36任一项的方法，其中治疗代谢综合征包括调节脂肪积贮。
39. -种诊断受试者的代谢综合征的方法，包括： a) 测定来自所述受试者的样品中的HSP9O0表达或活性水平；和 b) 将所述来自受试者的样品中的HSP9O0表达或活性水平与对照样品相比较，其中与 对照样品相比受试者样品中提高的HSP90 0表达或活性指示受试者的代谢综合征。
40. -种监测受试者的代谢综合征的方法，包括： a) 在第一时间点和第二时间点从所述受试者获得样品； b) 测定所述第一时间点和所述第二时间点的HSP9O0表达或活性水平；和 c) 比较所述第一时间点的HSP9O0表达或活性水平与所述第二时间点的HSP9O0表达 或活性水平，其中所述第二时间点的HSP90 0表达或活性水平相对于所述第一时间点的变 化指示受试者的代谢综合征的变化。
41. 权利要求39或40的方法，其中所述HSP9O0表达水平包括HSP9O0蛋白或 HSP90AB1基因的表达水平。
42. 权利要求40的方法，其中HSP90 0表达或活性的提高指示所述代谢综合征的恶化。
43. 权利要求40的方法，其中HSP90 0表达或活性的降低指示所述代谢综合征的改善。
44. 权利要求39-43任一项的方法，其中所述代谢综合征包括2型糖尿病。
45. 权利要求39-43任一项的方法，其中所述代谢综合征包括1型糖尿病。
46. 权利要求39-43任一项的方法，其中所述代谢综合征包括胰岛素抵抗。
47. 权利要求39-43任一项的方法，其中所述代谢综合征包括胰岛素不足。
48. 权利要求39-43任一项的方法，其中所述代谢综合征包括肥胖症。
49. 权利要求39-43任一项的方法，其中所述代谢综合征包括高胰岛素血症。
50. 权利要求39-43任一项的方法，其中所述代谢综合征包括葡萄糖耐量降低（IGT)。
51. 权利要求39-50任一项的方法，其中患有代谢综合征的所述受试者进一步表现出 一种或多种以下征兆： a) 等于或高于130/85mmHg的血压； b) 等于或高于100mg/dL的空腹血糖； c) 大的腰围，其中大的腰围对于男性是40英寸或更大和对于女性是35英寸或更大； d) 低HDL胆固醇，其中低HDL胆固醇对于男性是低于40mg/dL，和低于50mg/dL ;和 e) 等于或高于150mg/dL的甘油三醋。
【专利摘要】本发明提供用HSP90抑制剂，特别是HSP90β抑制剂，治疗代谢综合征的方法。本发明提供使用HSP90(特别是HSP90p)的表达和活性水平诊断和监测代谢综合征的方法。
【IPC分类】C12N15-12, A61K9-38, C12N15-11
【公开号】CN104812898
【申请号】CN201380039309
【发明人】N·R·纳莱恩, R·萨兰加拉简, V·K·维施努达斯, E·景
【申请人】博格有限责任公司
【公开日】2015年7月29日
【申请日】2013年5月24日
【公告号】CA2874676A1, EP2854865A2, US20140154266, WO2013177535A2, WO2013177535A3, WO2013177535A8