于向非天然地表达所述蛋白对的植物细胞，植物部分 或植物提供该蛋白质对，或可用于向植物细胞，植物部分或植物提供一种以上经修饰的底 物蛋白质。
[0022] 举例而言，所述病原体-特异性蛋白酶的底物蛋白质可以是来自拟南芥 (Arabidopsis thaliana)的PBSl或RIM同系物，所述NB-LRR蛋白质可以是来自拟南 芥的RPS5或RPS2,其中，PBSl或RIM同系物经修饰以包含异源蛋白酶识别序列。本领 域技术人员可以理解，"PBS1"指avrPphB敏感（susceptible) 1。本领域技术人员可以理 解，"RIN4" 指抗丁香假单胞菌斑点致病变种（Pseudomonas syringae pv.maculicola 1) ("RPM1"）相互作用蛋白质4。本领域技术人员可以理解，"avrRpt2"指来自丁香假单胞菌 (Pseudomonas syringae)的细菌无毒性基因，其编码在植物-丁香假单胞菌相互作用中起 作用的"AvrRpt2"多肽（参见 Innes 等（1993) J. Bacteriol 175:4859-4869)。本领域技术 人员可以理解，"avrPphB"指来自丁香假单胞菌的细菌无毒性基因，其编码在植物-丁香假 单胞菌相互作用中起作用的"AvrPphB"多肽。
[0023] 如上所述，本申请的方法包括向植物细胞，植物部分或植物引入至少一种本申请 所描述的核酸分子，构建体，表达盒或载体，以赋予其对表达病原体-特异性蛋白酶的植物 病原体的抗病性。
[0024] 因此，所述的组合物、系统和方法通过向植物细胞，植物部分或植物转移核苷酸序 列赋予其对植物病原体的抗病性，所述核苷酸序列编码至少一种病原体-特异性蛋白酶的 经修饰底物蛋白质，和任选地编码NB-LRR蛋白质（当所述NB-LRR蛋白质对所述植物细胞， 植物部分或植物为非天然存在时）。所述的对经工程化以特异于植物病原体-特异性蛋白 酶，所述的工程化通过使经修饰的底物蛋白质包含植物病原体-特异性蛋白酶的异源蛋白 酶识别序列。当被植物病原体-特异性蛋白酶激活后，所述的对启动包括细胞程序性死亡 在内的宿主防御性应答。
[0025] 以下的描述将有助于更好地理解本申请的以上这些以及其他的特征，目的和有益 效果。在所述描述中参照了附图，其简述如下。
[0026] 附图简述
[0027] 结合以下详细说明，将更容易明白本申请进一步的特征，目的和有益效果。所述的 详细描述参照以下附图，其中：
[0028] 图1是一张照片，其显示当与含AvrRpt2切割位点的经修饰的PBS1 (植物 病原体-特异性蛋白酶的底物蛋白质）共表达时，RPS5(NB-LRR抗病性蛋白质）可被 AvrRpt2(植物病原体-特异性蛋白酶）激活。通过注射载有所示核酸分子的根瘤土壤杆菌 (Agrobacterium tumefaciens)，所不核酸分子在粘毛烟草（Nicotiana glutinosa)叶中瞬 时表达。各核酸分子在地塞米松-诱导型启动子的控制之下，在施用地塞米松24小时后， 对叶拍照。可见的叶萎陷（leaf collapse)显示细胞程序性死亡被激活。
[0029] 图2是图表，说明从用与图1所使用的相同菌株接种的粘毛烟草（N. glutinosa) 叶圆盘（leaf disks)的电解液泄漏。电解液泄漏增加表示由于细胞死亡导致质膜丧失完 整性。PBS严2表示其中的AvrPphB (植物病原体-特异性蛋白酶）切割位点（GDKSHVS;SEQ ID N0:1)被 AvrRpt2 切割位点（VPKFGDW;SEQ ID N0:2)替代的 PBS1。
[0030] 图3是表达PBS严2( 即，其中的AvrPphB切割位点被AvrRpt2切割位点替代的 PBSl)的转基因拟南芥的被感染叶的照片。示出的是来自右侧接种了丁香假单胞菌菌株 DC3000(AvrRpt2)的五个不同的初级转化子的叶。照片是在接种后24小时拍摄的，即未转 化的拟南芥叶不显示细胞死亡的时间点。用于该试验的拟南芥在RIM和RPS2中包含突变， 其避免在不存在经修饰的PBSl的情况下由AvrRpt2激活细胞死亡。
[0031] 图4是PBS严2构建体的示意图，说明实施例5中所讨论的、RIM切割位点2 (RCS2) 对PBSl激活环（activation loop)中的AvrPphB切割位点的替换。
[0032] 图5是诱导后24小时拍摄的照片，示出PBSIkgs2与AvrRpt2和PRS5的共表达诱导 了 RPS5-依赖的细胞死亡应答，而如实施例5中所讨论的，在不存在AvrRpt2或PBS严S2时 没有检测到细胞死亡。
[0033] 图6是图表说明如实施例5中所讨论的，PBS严2与AvrRpt2与经AvrPphB切割的 野生型PBSl诱导了等量的电解液泄漏，而PBS严 S2与C122A仅微弱地激活RPS5。数据代表 平均值与标准偏差（η = 4)。
[0034] 图7是免疫印迹，其确认如在实施例5中所讨论的，在诱导后6小时AvrRpt2切割 了 PBSIkgs2,而 C122A 或 AvrPphB 不然。
[0035] 图8是照片，其显示如实施例5中所讨论的，应答接种丁香假单胞菌在转基因系2 和5中HR的诱导，而系1和3不然。"Col"表示野生型拟南芥（Arabidopsis)亲本。
[0036] 图9是图表，其显示如实施例5中所讨论的，在拟南芥中PBS严S2赋予对 DC3000(avrRpt2)细菌生长的抗性。数据代表平均cfu cm_2(n = 4)，误差棒表示标准偏差。
[0037] 图10包含免疫印迹，其显示如实施例5中所讨论的，与PBS严2表达相关的对 DC3000(avrRpt2)细菌生长的抗性。
[0038] 图11是免疫印迹，显示如实施例5中所讨论的，通过由DC3000递送的AvrRpt2在 转基因拟南芥中表达的PBS严 S2的切割。星号表示C-末端PBSl KS2切割产物的预期大小。
[0039] 图12是照片，显示DC3000 (avrPphB)注射后21小时PBSIkgs2转基因拟南芥也显示 HR，如实施例5中所讨论的，证明在这些转基因系中保留了 RPS5的天然识别特异性。
[0040] 图13描述的是PBSItgs构建体，如实施例5中所讨论的，用TEV切割位点替换 AvrPphB切割位点侧翼的7个氨基酸。
[0041] 图14包含免疫印迹，显示如实施例5中所讨论的，由抗-HA(上部的图）检测出的 PBSItgs-HA 切割。
[0042] 图15是本氏烟草（N. benthamiana)的照片，如实施例5中所讨论的、共表达 PBSItgIP TEV蛋白酶激活RPS5。每片叶子的左侧渗入（infiltrated) 了递送PBSItgs, TEV 蛋白酶和RPS5的土壤杆菌菌株。
[0043] 图16是说明PBSItgs连同TEV蛋白酶诱导的RPS5-介导的细胞死亡，所述细胞死 亡由电解液泄漏表示。如实施例5中所讨论的、所述的电解液泄漏水平与由AvrPphB切割 的野生型PBSl所诱导的电解液泄漏水平类似。数据代表平均值与标准偏差（η = 4)。
[0044] 图17是照片，如实施例6所讨论的，应用大豆显示AvrPphB识别。
[0045] 本发明可以有多种修饰和替代形式，附图中以举例的方式给出了示例性的具体实 施方案，以下进行具体描述。应当理解，对于示例性【具体实施方式】的描述并非旨在将本发明 限定到所公开的特定形式，相反地，其旨在涵盖落入以上的具体实施方案以及所附的权利 要求所定义的、本发明范围内的全部修饰的、等价的以及替代形式。因此，应参照上述的具 体实施方案以及后附的权利要求来解释本发明的范围。
[0046] 发明详述
[0047] 以下参照附图对本发明的组合物、系统以及方法进行更为完整的描述，所述的附 图中显示出了本发明的一些但非全部的具体实施方案。事实上，本发明可以体现为许多中 不同的形式，不应被局限于所列出的具体实施方案，然而，本申请提供了这些具体实施方案 以满足法律的要求。
[0048] 类似地，得意于体现在上述描述和相关附图中的教导，本领域技术人员可以想到 本发明适用的、本申请所描述的组合物、系统和方法的多种修饰和其他具体实施方案。因 此，可以理解本申请不限于所公开的特定具体实施方案，还有其他的具体实施方案也落入 后附的权利要求的范围之内。尽管本申请中应用了特定的术语，它们仅用于一般性的和描 述性的意义，不是用于限定的目的。