调与多种类型的骨质疏松症相关，因此 需要能够有效抑制RANKL活性的抑制剂，以治疗以骨损坏为特征的疾病。
[0013]Denosumab是新批准用于治疗骨转移症的药物。它是一种全人源抗RANKLIgG2型 单克隆抗体，是一种有效的抑制破骨细胞形成与骨吸收的抑制剂。用于治疗绝经后妇女骨 质疏松症以及实体瘤和多发性骨髓瘤导致的骨转移和骨折。
[0014] 立顿等关于乳腺癌相关骨转移的II期临床研究中，随机分为六个组，其中五个组 使用denosumab，主要终点是骨转换标志物N-端肽对尿肌酐的比例（uNTX/Cr)，并对其安全 性和骨骼相关事件（SREs)进行了评估。注射denosumab的病人多数明显显示uNTX/Cr的 降低，相比于双磷酸盐病人更少出现SRES(9%vs对16% )。直接比较denosumab和唑来 磷酸的一个较大的安慰剂对照随机试验表明，denosumab在延缓或阻止乳腺癌病人骨转移 中的SRES表现优异。对RANKL的抑制剂而言，denosumab提供了一种治疗骨质疏松所致骨 折、恶性肿瘤的骨骼并发症和RA中的潜在骨破坏的新方法。然而，除了由成骨细胞表达， RANKL也可通过活化T细胞及RA中的滑膜细胞产生，而RANKL的受体，S卩RANK，也由单核/ 巨噬细胞和树突状细胞表达。小鼠模型中RANKL、RANK和OPG的缺失突出了这一路径在啮 齿类动物免疫系统发展和成熟中的重要性，包括T细胞和/或B细胞的功能。药理/毒理 研究提出了免疫抑制的一些问题，尽管在临床试验中已经确定了对骨密度和骨折发生率的 有益效果，在治疗前必须评估denosumab的风险。临床研究中denosumab组感染的严重不 良反应的总发生率高于对照组。denosumab组与细菌和非特异性病原相关的感染的发生率 高于对照组。考虑到感染的风险，在进行免疫抑制治疗或具有高感染风险的病人中，应避免 使用denosumab。除了免疫抑制的高风险，denosumab由于其IgG2亚型及游离半胱氨酸结 构的复杂性很难控制生产，这使其在生产工艺开发发展及GMP生产中产中难度加大，难以 进行很好的质量控制。
【发明内容】
[0015] 为了降低已有抗RANKL抗体的免疫抑制副作用和感染风险，并且为了更有利于大 规模生产和质量控制，本发明提供了新的全人源抗RANKL抗体。
[0016] 本发明第一方面涉及全人源抗RANKL抗体或其片段，其包含如SEQIDNO:1或 SEQIDNO:3所示的重链以及如SEQIDNO:5或SEQIDNO:7所示的轻链；或者选自以下 (1)-(4)中的一项或几项：
[0017] (1)其中所述重链的可变区序列为：在所述重链的可变区序列即SEQIDNO:9序 列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且形成的抗体或其片段具有相同或相似活 性；
[0018] (2)其中所述轻链的可变区序列为：在所述轻链的可变区序列即SEQIDNO:11 序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且形成的抗体或其片段具有相同或相似活 性；
[0019] (3)其中所述重链的恒定区序列为：在所述重链的恒定区序列即SEQIDNO:13 序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且形成的抗体或其片段具有相同或相似活 性；
[0020] (4)其中所述轻链的恒定区序列为：在所述轻链的恒定区序列即SEQIDNO:12 序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且形成的抗体或其片段具有相同或相似活 性。
[0021] 在本发明的实施方案中，所述全人源抗RANKL抗体或其片段包含如SEQIDNO: 1 所示的重链以及如SEQIDNO:5所示的轻链。
[0022] 在本发明的实施方案中，所述全人源抗RANKL抗体或其片段包含如SEQIDNO:3 所示的重链以及如SEQIDNO:7所示的轻链。
[0023] 本发明第二方面涉及分离的核酸分子，其编码本发明第一方面任一项的全人源抗 RANKL抗体或其片段。
[0024] 根据本发明第二方面任一项的核酸分子，其包含如SEQIDNO:2或SEQIDNO:4 所示的重链以及如SEQIDNO:6或SEQIDNO:8所示的轻链。
[0025] 根据本发明第二方面任一项的核酸分子，其包含如SEQIDNO:2所示的重链以及 如SEQIDNO:6所示的轻链。
[0026] 根据本发明第二方面任一项的核酸分子，其包含如SEQIDNO:4所示的重链以及 如SEQIDNO:8所示的轻链。
[0027] 本发明第三方面涉及重组载体，其含有本发明第二方面任一项的核酸分子。
[0028] 本发明第四方面涉及重组细胞，其含有本发明第二方面任一项的核酸分子或者第 三方面任一项的重组载体。
[0029] 本发明第五方面涉及组合物，其含有本发明第一方面任一项的全人源抗RANKL抗 体或其片段、第二方面任一项的核酸分子、第三方面任一项的重组载体或第四方面任一项 的重组细胞，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
[0030] 根据本发明第五方面任一项的组合物，其还含有至少一种治疗炎症或免疫疾病的 治疗剂。
[0031] 根据本发明第五方面任一项的组合物，其中所述治疗剂选自COXl和C0X2抑制剂、 泼尼松龙、甲氨蝶呤、氯喹、环孢菌素。
[0032] 本发明第六方面还涉及本发明第一方面任一项的全人源抗RANKL抗体或其片段、 第二方面任一项的核酸分子、第三方面任一项的重组载体或第四方面任一项的重组细胞在 制备用于预防或治疗与骨损失相关疾病的药物中的用途。
[0033] 根据本发明第六方面任一项的用途，其中所述与骨损失相关疾病包括但不限于骨 质疏松、关节炎骨溶解破坏、恶性肿瘤或恶性肿瘤骨转移、佩吉特骨病（畸形性骨炎）、伴随 骨破坏的炎症（例如骨髓炎）、伴随骨破坏的自身免疫性疾病或类风湿性关节炎、高钙血 症、骨坏死、骨质稀少。
[0034]根据本发明第六方面任一项的用途，其中所述恶性肿瘤包括但不限于乳腺癌，前 列腺癌，甲状腺癌，肾癌，肺癌，皮肤癌，食道癌，直肠癌，膀胱癌，子H颈癌，卵巢癌、肝癌、胃 肠道癌、多发性骨髓瘤和淋巴瘤（何杰金氏病）。
[0035] 根据本发明第六方面任一项的用途，其中所述骨质疏松包括但不限于原发性骨质 疏松，内分泌骨质疏松（包括但不限于甲状腺功能亢进，甲状旁腺功能亢进，库欣综合征， 肢端肥大症），骨质疏松的遗传和先天形式（包括但不限于成骨不全，高胱氨酸尿症，门克 斯综合征，赖-戴综合征），和由于肢端固定的骨质疏松。
[0036] 本发明第七方面涉及本发明第一方面任一项的全人源抗RANKL抗体或其片段、第 二方面任一项的核酸分子、第三方面任一项的重组载体或第四方面任一项的重组细胞与至 少一种治疗炎症或免疫疾病的治疗剂联合使用在制备用于预防或治疗骨损失的药物中的 用途。
[0037] 根据本发明第七方面任一项的用途，其中所述治疗剂选自COXl和C0X2抑制剂、泼 尼松龙、甲氨蝶呤、氯喹、环孢菌素。
[0038] 根据本发明第七方面任一项的用途，其中所述与骨损失相关疾病包括但不限于骨 质疏松、关节炎骨溶解破坏、恶性肿瘤或恶性肿瘤骨转移、佩吉特骨病（畸形性骨炎）、伴随 骨破坏的炎症（例如骨髓炎）、伴随骨破坏的自身免疫性疾病或类风湿性关节炎、高钙血 症、骨坏死、骨质稀少。
[0039] 根据本发明第七方面任一项的用途，其中所述恶性肿瘤包括但不限于乳腺癌，前 列腺癌，甲状腺癌，肾癌，肺癌，皮肤癌，食道癌，直肠癌，膀胱癌，子H颈癌，卵巢癌、肝癌、胃 肠道癌、多发性骨髓瘤和淋巴瘤（何杰金氏病）。
[0040] 根据本发明第七方面任一项的用途，其中所述骨质疏松包括但不限于原发性骨质 疏松，内分泌骨质疏松（包括但不限于甲状腺功能亢进，甲状旁腺功能亢进，库欣综合征， 肢端肥大症），骨质疏松的遗传和先天形式（包括但不限于成骨不全，高胱氨酸尿症，门克 斯综合征，赖-戴综合征），和由于肢端固定的骨质疏松。
[0041] 本发明还涉及本发明第一方面任一项的全人源抗RANKL抗体或其片段、第二方面 任一项的核酸分子、第三方面任一项的重组载体或第四方面任一项的重组细胞在制备作为 RANKL抑制剂的药物中的用途。
[0042]本发明还涉及检测试剂或试剂盒，其含有本发明第一方面任一项的抗体或其片 段；
[0043]优选地，所述抗体或其抗原结合部分还可包含可检测的标记；或者
[0044] 优选地，所述检测试剂或试剂盒还可包含第二抗体，其特异性识别所述抗体或其 抗原结合部分；或者
[0045] 优选地，所述第二抗体还可包含可检测的标记。
[0046] 本发明还涉及本发明第一方面任一项的抗体或其片段在制备检测试剂或试剂盒 中的用途，其中所述检测试剂或试剂盒用于检测核因子K-B受体活化因子配体（RANKL)， 或者用于诊断核因子K-B受体活化因子配体相关疾病。
[0047] 在本发明中，术语"抗体"是指通常由两对相同的多肽链（每对具有一条"轻"（L) 链和一条"重"(H)链）组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为K和A轻链。重链可 分类为il、S、Y、a或e，并且分别将抗体的同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在 轻链和重链内，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的"J"区连接，重链还包含大 约3个或更多个氨基酸的"D"区。各重链由重链可变区（Vh)和重链恒定区（Ch)组成。重链 恒定区由3个结构域（41、(^2和(^3)组成。各轻链由轻链可变区（\)和轻链恒定区（CJ 组成。轻链恒定区由一个结构域Q组成。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或 因子，包括免疫系统的各种细胞（例如，效应细胞）和经典补体系统的第一组分（Clq)的结 合。Vh和\区还可被细分为具有高变性的区域（称为互补决定区（CDR))，其间散布有较保 守的称为构架区（FR)的区域。各由按下列顺序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、 FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个⑶R和4个FR组成。各重链/轻链对的可变区（Vh 和Vj分别形成抗体结合部位。氨基酸至各区域或结构域的分配遵循KabatSequencesof ProteinsofImmunologicalInterest(NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md. (1987andl991))，或Chothia&Lesk(1987)J.Mol.Biol. 196:901-917;Chothia等人（1989) Nature342:878-883的定义。术语"抗体"不受任何特定的产生抗体的方法限制。例如，其 包括，特别地，重组抗体、单克隆抗体和多克隆抗体。抗体可以是不同同种型的抗体，例如， IgG(例如，IgGl，IgG2,IgG3 或IgG4 亚型），IgAl，IgA2,IgD，IgE或IgM抗体。
[0048]在本发明中，术语抗体的"片段"是指全长抗体的一个或多个部分，所述部分保 持结合抗体所结合的相同抗原（例如，RANKL)的能力，与完整抗体竞争对抗原的特异性结 合。通常参见，FundamentalImmunology,Ch. 7 (Paul,