肿瘤活性，具有良 好的开发前景；
[0037] (4)本发明设及的1-甲氧基-4, 5-二径基异哇嘟从娱蚁中提取获得，娱蚁产地分 布广泛，易于养殖，可用于大规模提取分离纯化；
[0038] (5)本发明设及的1-甲氧基-4, 5-二径基异哇嘟结构简单，易于合成，可W规模生 产，生产成本低廉；
[003引 （6)本发明首次从娱蚁粉末中提取得到了 1-甲氧基-4, 5-二径基异哇嘟，与已知 异哇嘟类化合物在取代基或者取代位置上有所不同，且发明人经过大量实验证明运种物质 具有很好的抗追疾、抗菌和抗肿瘤活性，可用于制备抗追疾、抗菌和抗肿瘤药物。
【附图说明】
[0040] 附图1为本发明活性物质I的HPLC图谱，图中主峰出峰时间为15. 468min，经过分 析可W确定该活性物质I的纯度达到95%W上，可W用于后续结构鉴定；
[00川附图2为本发明活性物质I的高分辨质谱图（HRESIMS)，由高分辨质谱可知：分子 式Ci0HgN03(m/z 192. 0664[M+H]% calcd for 192. 0655)，化合物分子量为191. 0664 ;
[0042]附图3为本发明活性物质I的氨谱图伯-NMR)，从氨谱中可W看出活性物质I中 氨原子化学环境的种类和不同化学环境氨原子的数目比；
[0043] 附图4为本发明活性物质I的碳谱图，从碳谱中可W看出活性物质I中碳原子的 数目和碳原子的种类；
[0044] 附图5为本发明活性物质I的二维HMBC图谱，从HMBC图谱中可W看出活性物质 I中远程偶合的碳氨关系；
[004引附图6为本发明活性物质I的二维服QC图谱，从服QC图谱中可W看出活性物质I中直接相连的碳氨关系；
[0046] 附图7为本发明活性物质I的红外图谱，从红外图谱中可W看出活性物质I中的 特征峰；
[0047] 具体结构解析如下；
[004引红外图谱（附图7)给出数据IR脚r)Vmax:具有特征峰3055cm 1，1662cm 1，1567cm 1，1405cm 1，1340cm 1，1199cm 1，1140cm 1，1056cm 1，1015cm 1，843cm 1，753cm I和 726cm1，可出确定该活性物质I具有苯环结构，取代基中有径基和甲氧基。高分辨质谱 HRESIMS(附图2)给出分子式Ci0HgN03(m/z 192. 0664[M+田Scaled for 192. 0655)，说明活 性物质I具有7个不饱和度。附图3的Ih-NMR值20, 600MHz)中5h7.15 (IH，d，J=7.細z， H-6)，7. 48 (IH，t，J =8. OHz，H-7)，7. 59 (IH，d，J =8. OHz，H-8)为苯环上ABX系统的3个 质子信号，5h4.43(3H，s，-0CH3)为甲氧基质子信号，5h8.53(lH，s，H-3)为单峰。附图4 的"C-NMR值20, 75MHz) 5C:156.6(C-I)，146.6(C-5)，140.0 (C-4)信号表明该化合物中C-4 和C-5与径基相连，C-I和甲氧基相连。结合分子式说明活性物质I为哇嘟或异哇嘟类化 合物，结构中有2个径基和1个甲氧基，其中一个取代基位于苯环5位。在HSQC(附图6) 中可W看出5c:135.0 (C-3)，129. 2 (C-7)，113. 5 (C-6)，112. 9 (C-8)，直接与氨原子相连。在 HMBC(附图5)中，Sh4. 43(3H，s，-0CH3)与Scl56.6(C-1)存在远程相关，说明甲氧基位于 C-I位；Sh8.53 (1H，S，H-3)与5cl56.6(C-I)，Scl40.0 (C-4)和5cl26.7 (C-IO)存在远程 相关，且H-3为单峰，说明活性物质I为异哇嘟类化合物；Sh7.59(1H，d，J=8. OHz, H-8) 与5cl56.6(C-I)，Scll3.5 (C-6)和Scl29.2 (C-7)存在远程相关，说明活性物质I的2个 径基分别位于化晚环4位和苯环5位。综合附图1-7的数据分析结果，可W确定活性物质 I为1-甲氧基-4,5-二径基异哇嘟，分子量为191. 1，结构式为：
[0049]
[0050] 附图8为娱蚁醇提物的葡聚糖凝胶层析图谱，共收集了 3个组分（组分1~3);
[0051] 附图9为葡聚糖凝胶层析组分3的制备型高效液相分离图谱，共收集了6个组分 (组分3-1~3-6);
[005引附图10为组分3-6的半制备型高效液相分离图谱，共得到3个样品（样品1~3)，其中样品2为1-甲氧基-4, 5-二径基异哇嘟。
【具体实施方式】
[0053] 实施例1
[0054] 娱蚁中1-甲氧基-4, 5-二径基异哇嘟的制备和结构鉴定 [00巧]a.水提法和醇提取法制备娱蚁提取物：
[0056] (1)将娱蚁干体粉碎得到娱蚁粉末，加入娱蚁粉末体积10倍（5-10倍体积均可，本 实施例中优选10倍，后面同理）的PBS匀浆，然后进行超声破碎；
[0057] (2)对匀浆液进行冷冻离屯、，取上清液，冷冻干燥得到娱蚁水提物沉淀；
[005引 做取步骤似中得到的沉淀，加入沉淀体积10倍的55% (体积分数，后面的同 理）乙醇匀浆，然后在4°C条件下浸取，对浸取液再次冷冻离屯、，取上清液，冷冻干燥得到娱 蚁55%醇提物；
[005引 （4)取步骤似中得到的沉淀，加入沉淀体积10倍的70%乙醇匀浆，然后在4°C条 件下浸取，对浸取液再次冷冻离屯、，取上清液，冷冻干燥得到娱蚁70 %醇提物；
[0060] 妨取步骤似中得到的沉淀，加入沉淀体积10倍的85%乙醇匀浆，然后在4°C条 件下浸取，对浸取液再次冷冻离屯、，取上清液，冷冻干燥得到娱蚁85 %醇提物；
[006。 （6)MlT检测娱蚁水提物和醇提物的体外抗肿瘤活性，结果见表I;
[0062]表1娱蚁水提物和醇提物对5株肿瘤细胞增殖抑制作用
[0064] 根据MlT活性检测的结果，发现娱蚁55%醇提物的体外抗肿瘤活性最好，并且其 抑制5株肿瘤细胞增殖的ICw值差距较小。相对于娱蚁55 %醇提物，水提物、70 %醇提物和 85%醇提物的体外抗肿瘤活性较差。后续的实施方法中对娱蚁55%醇提物进行分离纯化。
[0065]b.葡聚糖凝胶层析法制备娱蚁55%醇提物中活性组分
[006引（1)将层析柱（规格：内径IOmm*高度500mm)安装在铁架台上，并将其与数显恒 流累W及核酸蛋白检测仪连接，层析流动相选用10%乙醇；
[0067]似葡聚糖凝胶Se地adexG25在沸水浴中加热地，取出冷却至室溫，然后将 Se地adexG25连续地加入层析柱中，并用4个柱床体积的流动相进行平衡；
[0068] (3)将娱蚁55%醇提物配置成5〇111肖/111以在层析柱中上样411心流速为2血/111111。打 开核酸蛋白检测仪检测，并按照层析图谱收集各组分样品，共收集3个组分（组分1~3)， 具体见附图8。对3个组分进行MT法检测，结果见表2;
[0069] 表2组分1~3对5株肿瘤细胞增殖抑制作用
[0071] 根据MT活性检测的结果，发现组分3的体外抗肿瘤活性最好，并且其抑制5株肿 瘤细胞增殖的ICw值差距较小。相对于组分3,组分1和组分2的体外抗肿瘤活性明显较 差。后续的实施方法中对组分3进行分离纯化。
[0072] C.高效液相色谱法制备1-甲氧基-4, 5-二径基异哇嘟
[0073] (1)用制备型RP-HPLC分离纯化葡聚糖凝胶层析组分3。用8%乙腊（含0.1% TFA)平衡比后，进行梯度洗脱，洗脱终浓度为35%，洗脱时间为50min，流速为50mL/min， 收集活性峰，冷冻干燥，共收集6个组分（组分3-1~3-6)，具体见附图9 ;对6个组分进行 MlT法检测，结果见表3;
[0074]表3组分3-1~3-6对3株肿瘤细胞增殖抑制作用
[0076] 根据MlT活性检测的结果，发现组分3-6的体外抗肿瘤活性较好，并且其抑制3株 肿瘤细胞增殖的ICe。值差距较小，后续的实施方法中对组分3-6进行分离纯化。
[0077] (2)对步骤（1)中组分3-6进行二次纯化，用半制备型RP-HPLC分离纯化。用25% 乙腊（含0. 1 %TFA)平衡比后，进行梯度洗脱，洗脱终浓度为50%，洗脱时间为35min，流 速为lOmL/min，收集活性峰，冷冻干燥，从组分3-6中纯化得到3个样品（样品1~3)，如 图10所示；对3个样品进行MT法检测，结果见表4。
[007引表4样品1~3对3株肿瘤细胞增殖抑制作用
[0080] 根据MlT活性检测的结果，发现样品2的体外抗肿瘤活性最好，并且其抑制3株肿 瘤细胞增殖的ICw值差距较小，样品1的体外抗肿瘤活性较差，因此组分3-6中样品2(附 图10)记为活性物质I，后续的实施方法和实施例中均对活性物质I进行纯度检测、结构鉴 定和活性考察。
[0081] (3)通过分析型RP-HPLC分析活性物质I的含量和纯度。用25 %乙腊（含0. 5 % TFA)平衡Ih后，进行梯度洗脱，洗脱终浓度为50%，洗脱时间30min，流速为1血/min,如附 图1所示，活性物质I的出峰时间为15. 468min;
[008引（4)对活性物质I进行红外光谱、质谱、碳谱、氨谱、二维谱分析，确定其结构，如附 图2-7所示，活性物质I为1-甲氧基-4, 5-二径基异哇嘟（1-metho巧-4, 5-diolisoquino line)，分子式为CinHgN03,分子量为191. 1，结构式为：
[0083]
[0084] 实施例2
[0085] 本实施例中提取活性组分的步骤基本同实施例1，所不同的是：1)水提时，加入的 PBS溶液体积是娱蚁粉末体积的5倍，醇提时，醇溶液的体积分数为4