)化合物 (结构式5 )，但得到的往往是一个磷酸二氢根配体的Pt (IV)化合物(结构式3 )、二个磷酸二 氢根配体的Pt(IV)化合物和磷酸的混合物，无法分离。
[0037
[0038]结构式5.本发明合成的双磷酸根的Pt (IV)抗癌化合物。
[0039] 本发明的Pt(IV)化合物具有较好的水溶性，采用常规的方法测得室温下分别大于 25mg/ml(PPtl)，100mg/ml(PPt2)，明显高于顺钼（lmg/ml)、卡钼（17mg/ml)和奥沙利钼 (8mg/ml)。水溶液稳定性采用核磁共振谱的方法测定:取2mg样品，溶于0.5ml D2O中，室温 放置，不同时间点采用BrukerAM-500测定31P匪R，比较各个时间点测得的 31P匪R与起始 的31P WR，结果表明：两个化合物在3天内31P NMR无明显变化，说明它们的水溶性具有很好 的稳定性，稳定时间至少3天，满足作为药物使用的要求。
[0040] 本发明的Pt(IV)化合物体外具有很高的抗癌活性，以PPtl为例。PPtl体外对人肝 癌细胞株SMMC-7721、人非小细胞肺癌细胞株A549、人卵巢癌细胞株SK-0V-3、人结肠癌细胞 株SW480的生长均有明显的抑制作用，抗癌活性明显大于水溶性Pt(II)抗癌药物-卡铂，而 且整体抗癌活性与顺铂相当。同时，可以预测本发明的Pt(IV)化合物在体内对癌细胞有较 好的选择性，对骨癌和骨转移癌具有靶向作用，显示出良好的临床应用前景。
【具体实施方式】
[0041 ] (1)本发明的Pt (IV)抗癌化合物PPt 1的合成方法
[0042] 称取8 · 40g( 28mmol)顺铂，加入250ml的水，搅拌，加热至60°C，逐滴加入30wt % H2〇2420ml，在60°C下继续搅拌反应4小时，冷却至室温，析出浅黄色的产物，过滤，冰水洗涤， 烘干，在水中重结晶，得到浅亮黄色晶体状的ci s，trans，ci s- [Pt (IV) (NH3) 2(OH) 2C12 ] 5.8g，产率约62 %。
[0043] 准确称取2.0618(6.17111111〇1)(^8，杜&118，(^8-[?七（1￥)(顺3)2(0102(：12]，加入85% 的磷酸溶液〇 . 678克（5.88mmol，相当于化学计量的95 % )，搅拌混合后，在60°C下再加入 50ml水搅拌反应20小时并减压浓缩至近干后，加入100ml的水搅拌溶解，冷却至室温，过滤 出去未反应的cis，trans，ci S-[Pt(IV)(NH3)2(OH)2Cl2]，滤液冷冻干燥，得到浅黄色的晶状 粉末cis，trans，cis-[Pt(IV)(NH 3)2(OH)(H2P04)Cl2]2·36克，产率93%。样品送结构分析，
[0044] 结构参数：
[0045] 1)元素分析测定值:N 6.71%，H 2.19%，Pt 47.0%
[0046] 计算值:N 6.76%，H 2.17%，Pt 47.2%
[0047] 2)红外光谱IR(KBr，cm-〇 :3443(s，v〇-η)，3265,3176(s，vn-η)，1632，1564[m，Sa (NH3) ], 1321 (m, vp=〇), 1040,1009(m, vp-o),558,537,521 (w, vpt-N, vpt-o)
[0048] 3)核磁共振谱3中匪1?(〇2〇4口111):52.91(!12?〇4一）
[0049] 以上测定数据符合结构式3所示的PPtl的组成和结构式。
[0050] (2)本发明的Pt (IV)抗癌化合物PPt-2的合成方法
[00511称取6.0g(15mm0l)奥沙利铂于600mL蒸馏水中，稍加热至完成溶解为止，缓慢滴加 入30wt %H20221.5ml，搅拌反应5小时后，析出白色沉淀，过滤、冰水洗涤、在60°C下烘干，最 后在沸水中重结晶提纯，得到白色晶状的(^8，廿 &如，(^8-[?七（1￥)(11?，21?-环已二胺）（0!02 (C204)]5.73g，产率 88%。
[0052] 准确称取 2.4068(5.58111111〇1)的(^8，杜&118，(^8-[?七（1￥)(11?，21?-环已二胺）（0!1)2 (C 204)]，加入85%磷酸溶液0.637g(5.53mmol，相当于化学计量的99% )，搅拌混合后，在60 °〇下再加入30ml水搅拌反应20小时并减压浓缩至近干后，加入50ml的水搅拌溶解，冷却至 室温，过滤出去不溶物，滤液冷冻干燥，得到白色的晶状粉末c i s，trans，cis-[Pt(IV)(lR， 2R-环已二胺)2(OH) (H2P04) (C204) ]2.75克，产率97%。样品送结构分析.
[0053] 结构参数：
[0054] 1)元素分析测定值:C 18.5%，N 5.44%，H 3.36%，Pt 38.0%
[0055] 计算值：C 18.8%，N 5.48%，H 3.32%，Pt 38.2%
[0056] 2)红外光谱IR(KBr，cm-4 :3434(s，v〇-h)，3201，3092(m，VN-h)，2940,2865(w，vc-h) 1721(vs,Vas(coo-)), 1372(s,va(co〇-)), 1021,981 (m,vp-〇) ,573,509(w,vpt-N,vpt-o)
[0057] 3)核磁共振谱31P NMR(D2〇，ppm):S2.92(H2P〇4-)
[0058] 13C NMR(D20，ppm) :δ165(Ο)0-)，61(C-1，C-2)，30(C-3，C-6)，23(C-4，C-5)
[0059] 以上测定数据符合结构式3所示的PPt-2的组成和结构式。
[0060]
[00611 (3)本发明的Pt (IV)抗癌化合物的抗癌活性
[0062] 以 PPt-Ι 为例
[0063] 用不含血清的培养液将受试的化合物和对照药品顺铂、卡铂配成所需浓度，应用 SRB法(磺酰罗丹明B蛋白染色法)检测各个化合物对人肝癌细胞株SMMC-7721、人非小细胞 肺癌细胞株A549、人卵巢癌细胞株SK-0V-3、人结肠癌细胞株SW480的增殖生长的抑制作用。 [0064] SRB法:接种对数生长期细胞于96孔培养板，加入不同浓度的药物，每个浓度设3个 复孔，同时设相应浓度的溶媒对照。癌细胞在37°C、5% C02条件下培养72小时。细胞用SRB室 温中染色，最后加入Tris溶液溶解，酶标仪(BioTek)51 Onm波长下测定0D值，以下列公式计 算细胞生长抑制率，根据各浓度抑制率，根据非线性回归方法计算半数抑制浓度IC5Q。抑制 率=(0D 修糧 l-〇D 值j激jl) /0D 值*]鲰 X 1 〇〇 %
[0065] 表1.本发明的Pt(IV)化合物对癌细胞牛长的半数抑制浓度IC5〇(t = 72h，n = 3)
[0066]
[0067] 如表1结果所示，PPtl体外对人肝癌细胞株SMMC-7721、人非小细胞肺癌细胞株 A549、人卵巢癌细胞株SK-0V-3、人结肠癌细胞株SW480的生长均有明显的抑制作用，抗癌活 性明显大于水溶性Pt(II)抗癌药物-卡铂，而且整体抗癌活性与顺铂相当，而目前体外抗癌 活性能与顺铂媲美的Pt(IV)化合物未见报道，说明磷酸的轴向配位可以提高Pt(IV)化合物 抗癌作用。因此，PPtl作为顺铂的前药、具有水溶性高、稳定、抗癌活性显著的优点，显示出 良好的临床应用前景。
【主权项】
1. 以磷酸二氢根为轴向配体的铂（IV)化合物，其特征在于:结构如下的Pt(IV)化合物， 其中，2A为氨/胺配体，包括2NH 3、IR，2R-环已二胺、1，2-双(氨甲基）环丁烷、NH3/环戊胺或 NH3/环己胺;2X为目前已上市铂（II)类抗癌药物的离去基团，包括2C1'草酸根、I，1-环丁烷 二羧酸根或丙二羧酸根，该化合物还可以含有1个或2个结晶水，2. 如权利要求1所述的Pt (IV)化合物，其特征在于:包含如下结构的两种化合物：3. 权利要求1和2的所述的Pt(IV)化合物在制备抗恶性肿瘤药物中的应用。4. 权利要求1和2的所述的Pt (I V)化合物在制备抗肺癌、肝癌、胃癌、卵巢癌、乳腺癌或 骨转移癌药物中的应用。
【专利摘要】本发明涉及一类以磷酸二氢根为轴向配体的铂(IV)抗癌化合物，化学结构如下。其中，载体基团2A为氨/胺配体，包括2NH3、1R,2R-环已二胺、1,2-双(氨甲基)环丁烷、NH3/环戊胺、NH3/环己胺；离去基团2X为目前已上市铂(II)类抗癌药物的离去基团，包括2Cl-、草酸根、1,1-环丁烷二羧酸根、丙二羧酸根。磷酸的键合不但有助于化合物向癌细胞核运转、提高对癌细胞的选择性，而且还能介导化合物靶向骨癌，显示出很强的抗癌作用。同时，该化合物水溶性好、稳定，非常适应作为抗癌药物的用途,其结构式如下。
【IPC分类】A61P35/00, A61P35/04, C07F15/00
【公开号】CN105481902
【申请号】CN201510881017
【发明人】刘伟平, 楼丽广, 侯树谦, 高安丽, 谢成英, 全海天, 姜婧
【申请人】昆明贵金属研究所, 中国科学院上海药物研究所
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年12月3日