CH3，4" ' -OCH3);碳原子标记参见图 1。咕 NMR和1H-1!! COSY谱显示 出两对双质子双峰[5!17.81(2!1，(1，1 = 8.2取），7.16(2!1，(1，1 = 8.2取），7.14(2!1，(1，了 = 8.2Hz)，6.87 (2H，d，J = 8.2Hz)]，表明该化合物含有两个1，4-二取代芳环。此外，观察到一 组 ABX 的耦合信号 SH6.59(lH，d，J = 2.3Hz)，6.55(lH，dd，J = 8.2,2.3HzWP7.22(lH，d，J = 8.2Hz)，表明该化合物含有一个1，2,4-三取代的芳环。另两个间耦合信号SH6.35(lH，d，J = 1.8Hz)和6.57(1!1，(1，1=1.8他），说明还含有一个1，2,3,5-四取代芳香环。除了芳族质子， 还有两个反式烯烃质子信号阳6.78(1!1，(1，1=16.0抱）和7.24(1!1，(1，1=16.0泡），两个亚甲 基脂肪族质子信号[阳2.21(111，2!0,2.49(111，2!0]，一个次甲基信号[6!14.43(1!1，1^，8)]，以 及五个甲氧基信号[5!13.74,3.78,3.82,3.82,3.85(3!1，8)]。 13〇匪1?和邯0(：谱显示了34个碳 信号，包括六个含氧季碳，五个芳香族季碳，十三个芳香族次甲基碳，三个脂族次甲基碳，两 个脂族亚甲基碳，五个甲氧基碳。HMBC谱中，反式烯烃质子与对-甲氧基苯和四取代苯环的 相关性表明该化合物为共辄芪类化合物。COSY相关谱表明了脂族链碳信号C-a'，C-'的存在，HMBC谱中H 2_a'与芳香族碳的相关性表明C-a'与2,4_二甲氧基苯基相连。 N0ESY谱中Η-γ '信号与反式烯烃单元和3-羟基-5-甲氧基苯环的相关性表明，上述二苯乙 烯单元与C-γ '相连。HMBC谱中各甲氧基信号分别与C-5，C-4'，C-2"，C-4"和C-4" '的相关性 表明C-5，C-4'，C-2"，C-4"和C-4" '各连有一个甲氧基基团。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和N0ESY 谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如图1所示，立体构型进一步通 过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致(图2)。
[0025] 实施例2:化合物(I)药理作用试验
[0026] -、材料和仪器
[0027]人胃癌细胞株SGC-7901购于赛尔试剂公司。化合物（I)自制，HPLC归一化纯度大于 98 %。PDTC、胰蛋白酶、MTT、二甲基亚砜(DMS0)、琼脂糖、冰醋酸购于美国Sigma公司。RPMI-1640培养基、PBS磷酸盐缓冲溶液购于美国GIBC0公司。胎牛血清购于山东银香伟业公司。台 盼蓝(北京中杉金桥生物技术有限公司），TUNEL试剂盒(凯基生物科技发展有限公司），DAB 显色试剂盒(北京中杉金桥生物公司），甲醛(美国Fisher公司），过氧化氢酶(天津市天新精 细化工开发中心）。
[0028] WD-9403C紫外分析仪(德国Biometra公司），梯度PCR仪(德国Biometra公司），凝胶 成像分析系统（上海天能公司），电泳仪(北京六一），电子天平（上海精密仪器仪表有限公 司），RKI-1002型二氧化碳培养箱（日本Ikemoto公司），超净工作台（苏州净化实验设备有限 公司），超速离心机(北京医疗器械厂），低速离心机(北京医疗器械厂），Wil 〇vert S型倒置 显微镜（日本Olympus公司），立式压力蒸汽灭菌器(上海博讯实业有限公司），细胞计数板 (上海精密仪器公司），超纯水纯水器(英国PURELAB ulTRA GENETIC)。
[0029] 二、试验方法
[0030] 1、胃癌细胞SGC-7901的培养
[0031] 1.1细胞复苏
[0032] (1)从液氮罐中取出细胞冻存管，迅速置于37°C~42°C，75%酒精中，然后移至同 温水浴锅中；（2)轻轻晃动1~3min冻存管，使冻存液融化，迅速移至超净台中；（3)将含有细 胞的冻存液吸入无菌离心管，加入适量RP頂-1640培养基；（4)吹打混匀后放入低速离心机， 800rpm/min离心3分钟，去除上清液；（5)加入适量培养基吹匀，将细胞悬液依据浓度接种到 1 OmL培养皿中；（6)置于含5 %二氧化碳、37 °C饱和湿度的培养箱中培养。
[0033] 1.2细胞传代
[0034] (1)待培养皿中的细胞贴壁约80 %时，在超净台中用移液管吸取旧的培养基吹打 数次培养皿中细胞，以吹掉死亡细胞；（2)用移液管吸去旧培养基，加入适量0.25 %胰酶消 化细胞，置于30°C培养箱中消化；（3)约3min后将培养皿置于倒置显微镜下观察，待细胞周 边发亮、回缩变圆后则说明细胞已经从壁上脱离；（4)迅速于超净台中吸去胰酶。加入适量 培养基反复吹打细胞，使细胞完全脱离培养皿；（5)将细胞悬液按浓度分别接种至不同的培 养皿中，补足培养基；（6)重新置于含5 % C02、37 °C饱和湿度的培养箱中培养。
[0035] 2、细胞计数
[0036] (1)准备好细胞计数板及盖玻片，二者均用酒精擦拭干净，将盖玻片盖在计数板 上；（2)待酒精挥发后，吸出适量细胞悬液，滴加在盖玻片边缘，使悬液充满盖玻片和计数板 之间，注意不要溢出盖玻片及两侧的玻璃槽，静置后计数；（3)在显微镜下找到4个大格，每 个大格又分为16个小格，分别计数4个大格中的细胞数，取平均值。压线细胞计左侧和上方 的，不计右侧和下方的；（4)细胞浓度(个/mL)=每个方格的平均细胞数X 10000; (5)将细胞 悬液稀释成实验所需浓度。
[0037] 3、细胞活力测定
[0038] (1)取待测定的SGC-7901胃癌细胞悬液0.9mL; (2)向细胞悬液中加入台盼蓝吹打 混匀；（3)采用细胞计数板盲法计数至少200个细胞，倒置显微镜下观察；（4)镜下观察细胞 染色情况，细胞内染成淡蓝色者为死细胞，未染色者为活细胞，以活细胞所占细胞总数的百 分比反映细胞的活力（％)。
[0039] 4、MTT检测细胞生长抑制率
[0040] 实验分组:①阴性对照组;②化合物（I)组1，化合物（I)(5〇ym〇l/L);③化合物（I) 组2，化合物（I) (1 ΟΟμL?ο 1 /L);④roTC组 1，PDTC (50μL?〇 1 /L);⑤PDTC组2，PDTC (1 ΟΟμL?ο 1 /L); ⑥联合用药组1，化合物（I) (25ym〇l/L)+PDTC(25ym〇l/L);⑦联合用药组2，化合物（I) (50μ mol/L)+PDTC(50ymol/L)〇
[0041 ] (1)取对数生长期的SGC-7901细胞，用细胞计数板计数，调节细胞浓度为5 X 105/ mL; (2)使用加样器以每孔100yL接种于96孔板。注意接种时只接种到中间的60个孔，周边36 孔以PBS填充，同时铺3个96孔板；（3)将铺好的96孔板置于37°C，5%C02细胞培养箱中，待 24h细胞贴壁后取出；（4)将96孔板分为化合物（I)组，（0、50、100ymol/L)，roT(^(0、50、100 ymol/L)，两药联合组(0/0、25/25、50/5(^111〇1/1)，同时设立不含细胞的空白对照组（只加培 养基)分别予以不同处理；（5)各药物每个浓度设5个复孔，分别培养24、48及72h; (6)分别在 特定的结束时间点取出96孔板，每孔加入MTT (5g/L)溶液20yL，放回培养箱继续培养4h，终 止培养。（7)小心吸去孔内上清液，每孔加入150yL DMS0，平板摇床振荡10min使结晶充分溶 解，显微镜下观察颗粒消失。（8)于酶标仪490nm波长处测定各孔的光密度(0D)值，计算各时 间点的细胞生长抑制率。抑制率=[1 -(加药组0D值-空白对照组0D值)/ (阴性对照组0D值-空白对照组0D值）]X 100 %。
[0042] 5、TUNEL法检测细胞调亡指数
[0043] 5.1细胞爬片的制备
[0044] (1)盖玻片的处理:将盖玻片置于浓硫酸中浸泡过夜，次日先用自来水冲洗数次， 再置于无水乙醇中浸泡4h，然后用去离子水冲洗干净，放在供干箱中烘干后进行高压消毒， 取出直接放入超净台中备用。6孔板置于超净台内紫外线照射30min; (2)放置盖玻片:在六 孔板的每孔中准备放盖玻片的位置滴入少量培养基后再放置盖玻片，使得盖玻片与孔板考 培养基的张力粘合到一起，防止加细胞悬液时盖玻片飘起，造成双层细胞贴壁；（3)取对数 生长期的SGC-7901细胞，消化吹打成细胞悬液，用细胞计数板调整细胞浓度为lX10 6/mL。 (4)用加样器在放有盖玻片的每孔分别加入lmL细胞悬液