Smmol)的二氯甲烧溶液20ml，混合均匀后，再滴加 S乙胺0.4ml(2.9mmol)，升溫至50°C 回流反应，用薄层色谱法监测反应进程，反应完毕后，将反应液减压蒸馈除去溶剂得到浅黄 栋色粘稠液体，用适量无水丙酬溶解后，加入80-100目硅胶揽拌混匀，再减压蒸馈除去丙酬 后，用柱层析(硅胶200-300目）分离纯化，干法上样，丙酬-石油酸(体积比1:2.7)混合溶剂 为洗脱剂，收集洗脱液，真空旋蒸干燥，得栋褐色固体，用丙酬-石油酸混合溶剂重结晶，得 浅黄栋色晶体，收率26.1%，烙点148°C-153°C，经NMR分析确证为邻硝基咖啡酸苯乙醋(化合 物结构确认数据同制备例1)。
[0026] 制备例4.邻硝基咖啡酸苯乙醋的制备（酷化步骤W二氯亚讽为溶剂，增加催化剂用 量） 将咖啡酸0.9g巧.Ommol)和二氯亚讽20ml置100mL圆底烧瓶中，混匀，升溫至100°C回 流反应，待反应液变为澄清后，减压蒸馈除去剩余的二氯亚讽，得到乳白色固体咖啡酸酷 氯，加入无水二氯甲烧（氨化巧干燥）20ml使溶解，在室溫条件下滴加邻硝基苯乙醇0. Sg (4. Smmol)的二氯甲烧溶液20ml，混合均匀后，再滴加 S乙胺0.5ml(3.6mmol)，升溫至50°C 回流反应，用薄层色谱法监测反应进程，反应完毕后，将反应液减压蒸馈除去溶剂得到浅黄 栋色粘稠液体，用适量无水丙酬溶解后，加入80-100目硅胶揽拌混匀，再减压蒸馈除去丙酬 后，用柱层析(硅胶200-300目）分离纯化，干法上样，丙酬-石油酸(体积比1:2.7)混合溶剂 为洗脱剂，收集洗脱液，真空旋蒸干燥，得栋褐色固体，用丙酬-石油酸混合溶剂重结晶，得 浅黄栋色晶体，收率20.2%，烙点146°C-152°C，经NMR分析确证为邻硝基咖啡酸苯乙醋(化合 物结构确认数据同制备例1)。
[0027] 制备例5.邻硝基咖啡酸苯乙醋的制备(酷化步骤W二氯亚讽为溶剂，降低酷化回流溫 度） 将咖啡酸0.9g巧.Ommo 1)和二氯亚讽20ml置1 OOml圆底烧瓶中，混匀，升溫至80°C回流 反应，待反应液变为澄清后，减压蒸馈除去剩余的二氯亚讽，得到乳白色固体咖啡酸酷氯， 加入无水二氯甲烧（氨化巧干燥）20ml使溶解，在室溫条件下滴加邻硝基苯乙醇0. Sg (4. Smmol)的二氯甲烧溶液20ml，混合均匀后，再滴加 S乙胺0.4ml(2.9mmol)，升溫至50°C 回流反应，用薄层色谱法监测反应进程，反应完毕后，将反应液减压蒸馈除去溶剂得到浅黄 栋色粘稠液体，用适量无水丙酬溶解后，加入80-100目硅胶揽拌混匀，再减压蒸馈除去丙酬 后，用柱层析(硅胶200-300目）分离纯化，干法上样，丙酬-石油酸(体积比1:2.7)混合溶剂 为洗脱剂，收集洗脱液，真空旋蒸干燥，得栋褐色固体，用丙酬-石油酸混合溶剂重结晶，得 浅黄栋色晶体，收率26.4%，烙点147°C-153°C，经NMR分析确证为邻硝基咖啡酸苯乙醋(化合 物结构确认数据同制备例1)。
[002引 试验例.邻硝基咖啡酸苯乙醋对屯、肌缺血再灌注损失的影响 取40只雄性SD大鼠，随机分为4组(每组10只）：（1)假手术组(SHAM组）：大鼠只穿线不 结扎左冠状动脉，结扎前5分钟尾静脉注射给予含有0.01%二甲基亚讽(DMSO)的生理盐水， 注射量为0.1 ml/kg(体重）；（2)缺血再灌注组(CON组）：结扎大鼠左冠状动脉前降支造成屯、 肌缺血，缺血30分钟后恢复冠脉血流，再灌注120分钟，结扎前5分钟尾静脉注射给予含有 0.01%DMS0的生理盐水，注射量为O.lml/kg(体重）；（3)咖啡酸苯乙醋组(CA阳组）：结扎大 鼠左冠状动脉前降支30分钟，再灌注120分钟，结扎前5分钟尾静脉注射给予咖啡酸苯乙醋 10 yg/kg，注射量为0.1 ml/kg(体重）；（4)邻硝基咖啡酸苯乙醋组(CA阳-N02组）：结扎大鼠 左冠状动脉前降支30分钟，再灌注120分钟，结扎前5分钟尾静脉注射给予邻硝基咖啡酸苯 乙醋10 yg/kg，注射量为O.lml/kg(体重）。监测结扎前、缺血期及再灌注期间大鼠屯、率、屯、 电图的变化情况;检测血清中内源性抗氧化酶T-SODXAT和GSH-Px活力W及NO含量的变化； TTC染色考察屯、肌缺血再灌注后屯、肌梗死面积的大小。
[0029]邻硝基咖啡酸苯乙醋对大鼠屯、率的影响见表1。大鼠屯、肌缺血再灌注模型制备过 程中屯、电图的变化见图1。邻硝基咖啡酸苯乙醋对大鼠缺血再灌注后屯、肌梗死面积的影响 见表2，邻硝基咖啡酸苯乙醋可W改善屯、肌缺血再灌注所致的屯、肌梗死，降低梗死面积。邻 硝基咖啡酸苯乙醋对大鼠缺血再灌注后血清T-S0D、CAT、GSH-Px活力W及NO含量的影响见 图2,缺血再灌注组中=种抗氧化酶的活力均大幅降低，与假手术组相比有显著性差异(P< 0.05)，说明屯、肌缺血再灌注损伤会降低细胞的抗氧化能力，使屯、肌细胞受损;而咖啡酸苯 乙醋组、邻硝基咖啡酸苯乙醋组同缺血再灌注组比较，都可在一定程度内逆转缺血再灌注 引起的细胞内抗氧化酶活力下降，且邻硝基咖啡酸苯乙醋组保护抗氧化酶活力效果更优， 说明邻硝基咖啡酸苯乙醋较咖啡酸苯乙醋清除氧自由基的能力更强，对维持屯、肌细胞的抗 氧化能力、保护细胞正常结构、减轻细胞氧化损伤的效果更好。
[0030] 表1邻硝基咖啡酸苯乙醋对大鼠屯、率的影响
最后说明的是，W上实施例仅用W说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本 发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可W在 形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精 神和范围。
【主权项】
1. 邻硝基咖啡酸苯乙酯，结构式如式I所示：2. 权利要求1所述的邻硝基咖啡酸苯乙酯的制备方法，其特征在于:先将咖啡酸和二氯 亚砜经酰化反应生成咖啡酸酰氯，再将咖啡酸酰氯与邻硝基苯乙醇在有机溶剂中、催化剂 存在下经酯化反应生成邻硝基咖啡酸苯乙酯。3. 根据权利要求2所述的邻硝基咖啡酸苯乙酯的制备方法，其特征在于:所述有机溶剂 为三氯甲烷、二氯甲烷、氯仿和丙酮中的任一种或两种以上混合物;所述催化剂为乙醇钠、 丁基锂、三乙胺和乙醇胺中的任一种或两种以上混合物。4. 根据权利要求3所述的邻硝基咖啡酸苯乙酯的制备方法，其特征在于:所述有机溶剂 为二氯甲烷;所述催化剂为三乙胺。5. 根据权利要求2所述的邻硝基咖啡酸苯乙酯的制备方法，其特征在于:所述咖啡酸、 邻硝基苯乙醇和催化剂的用量摩尔比为5.0:4.8:2.2-3.6。6. 根据权利要求5所述的邻硝基咖啡酸苯乙酯的制备方法，其特征在于:所述咖啡酸、 邻硝基苯乙醇和三乙胺的用量摩尔比为5.0:4.8:2.9。7. 根据权利要求2所述的邻硝基咖啡酸苯乙酯的制备方法，其特征在于:所述酰化反应 的温度为60_100°C，所述酯化反应的温度为30-70°C。8. 根据权利要求7所述的邻硝基咖啡酸苯乙酯的制备方法，其特征在于:所述酰化反应 的温度为80_100°C，所述酯化反应的温度为50°C。9. 根据权利要求1至8任一项所述的邻硝基咖啡酸苯乙酯的制备方法，其特征在于：先 将咖啡酸和过量二氯亚砜经酰化反应生成咖啡酸酰氯，减压蒸馏除去剩余二氯亚砜后，加 入有机溶剂溶解，再在温度10_30°C条件下滴加邻硝基苯乙醇的有机溶剂溶液，混合均匀 后，滴加催化剂，经酯化反应生成邻硝基咖啡酸苯乙酯，最后经柱层析分离纯化获得邻硝基 咖啡酸苯乙酯纯品。10. 权利要求1所述的邻硝基咖啡酸苯乙酯在制备改善心肌缺血再灌注损伤的药物中 的应用。
【专利摘要】本发明公开了结构式如式I所示的邻硝基咖啡酸苯乙酯，是将咖啡酸和二氯亚砜经酰化反应生成咖啡酸酰氯，后者再与邻硝基苯乙醇在有机溶剂中、催化剂存在下经酯化反应制得；与咖啡酸苯乙酯相比，其保护抗氧化酶活力效果更优，清除氧自由基能力更强，对维持心肌细胞的抗氧化能力、保护细胞正常结构、减轻细胞氧化损伤的效果更好，能够显著减少缺血/再灌注心肌细胞凋亡，降低心肌梗死面积，可用于制备改善心肌缺血再灌注损伤的药物，在心血管系统疾病的治疗中发挥重要作用。
【IPC分类】A61P39/06, A61P9/00, C07C201/12, A61P9/10, C07C205/42
【公开号】CN105669461
【申请号】CN201610010602
【发明人】李逐波, 李德娟, 左华, 何小燕
【申请人】西南大学
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年1月8日