啉酮类物质的 回收率在91.0% - 108. 4%之间，平均相对标准偏差（RSD)小于8%，说明本发明方法的回 收率高，重复性好。
[0063] 表4方法的重复性和加标回收率
[0064]
【附图说明】
[0065] 图1为本发明测定MI、CMI和BIT含量的LC-MS/MS标准样品色谱图
[0066] 图2为本发明测定MI、CMI和BIT含量的LC-MS/MS水基胶样品色谱图
[0067] 图中：1 -MI、MI-d3,2 -CMI、CMI-d3,3 -BIT、BIT-13C6。
【具体实施方式】
[0068] 本发明结合以下实例做进一步描述，但并不是限制本发明。
[0069] 实例：
[0070] 1、材料、试剂与仪器：
[0071] API4500QTRAP质谱仪（美国应用生物系统公司）；DIONEX U3000型高效液相色谱 仪（美国Thermo公司）；Mettler XS2〇5型电子天平（感量：0.0001g，瑞士Mettler公司）； Sigma3-30K台式高速离心机（德国Sigma公司）；HY-8A大容量振荡器（金坛市国旺实验仪 器厂）；实验用水均为美国Millipore Advantage A10制备的去离子水（电阻率彡18. 2MD .cm) ;2_甲基-4-异噻唑啉-3-酮（彡98.0%，DR公司）、5_氯-2-甲基-4-异噻唑 啉-3-酮（彡99.0%，DR公司）、1，2_苯并异噻啉-3-酮（彡99.0%，DR公司）；d3-2-甲 基-4-异噻唑啉-3-酮.盐酸盐（MI-d 3，纯度彡98%，TRC公司），d3-5-氯-2-甲基-4-异 噻唑啉-3-酮（CMI-d 3,纯度彡98%，TRC公司）；13C6-1，2-苯并异噻啉-3-酮（BIT- 13C6，纯 度彡98%，TRC公司）；甲醇（色谱纯，美国默克公司）；有机相过滤膜（0.22 ym，上海兴亚 净化材料厂）；一次性注射器（5mL，江西洪达医疗器械集团有限公司）。玻璃器皿：各种规 格移液管、容量瓶和具塞锥形瓶。
[0072] 2?实验样品
[0073] 接嘴胶、搭口胶、包装胶、中线胶各1个。
[0074] 3.样品处理和分析：
[0075] 称取水基胶0. 3g，精确至0. lmg，置于50mL具塞三角瓶中，用5mL水分散后加入 20mL甲醇，150r/min振荡萃取30min，移取约1. 8mL萃取液于2mL离心管中离心10min，转 速为10000r/min。准确移取lmL上清液至10mL容量瓶中，加入100 y L内标使用液，用甲醇 定容，取约2mL过0. 22 y m有机相滤膜，待LC-MS/MS检测。
[0076] 4.标准工作溶液的配制：
[0077] 准确称取1. Omg的MI-d3、CMI-d#P BIT- 13C6,分别置于3只10mL容量瓶中，用甲醇 稀释至刻度，配制成浓度均为l〇〇mg/L的内标储备液。分别移取MI-d 3、CMI-djP BIT- 13C6 的储备液5. OmL至50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成MI-d3、CMI-d# BIT- %浓 度为10mg/L的混合内标工作溶液。
[0078] 分别称取适量的3种异噻唑啉酮标准物质，用甲醇配制成浓度为1000mg/L的标准 储备溶液。分别准确移取lmL的MI、lmL的CMI、0. 25mL的BIT标准储备液于100mL容量瓶 中，用甲醇定容，配制浓度为MI、CMI浓度为10mg/L，BIT浓度为4mg/L的混合标准储备液。
[0079] 分别准确移取 2 y L、10 y L、50 y L、100 y L、250 y L、500 y L、100 y L 混合标准溶液 至lOmL容量瓶中，加入100 yL内标工作溶液，用甲醇定容至刻度。
[0080] 5.分析及结果计算：
[0081] 对混合标准工作溶液进行高效液相色谱一串联质谱分析，得到各定量离子的峰面 积，然后计算各目标化合物与对应内标的峰面积之比（MI与MI-d 3相比、CMI与CMI-d3相比、 BIT与BIT-13C6相比），拟合峰面积比与浓度成线性，且线性相关系数R 2彡0. 99。
[0082] 对试样萃取液进行分析，依据内标法由混合标准工作曲线计算得到测定值。见表 5〇
[0083] 表5水基胶样品中异噻唑啉酮的含量
[0084]
[0085] 参见说明书附图：图1为本发明测定MI、CMI和BIT含量的LC-MS/MS标准样品色 谱图
[0086] 图2为本发明测定MI、CMI和BIT含量的LC-MS/MS水基胶样品色谱图
[0087] 图中：1 -MI、MI-d3,2 -CMI、CMI-d3,3 -BIT、BIT-13C6。
【主权项】
1. 一种水基胶中异噻唑啉酮杀菌剂测定的液相色谱-串联质谱法，其特征在于：称 取水基胶，先加入一定体积的水进行分散，再加入甲醇振荡萃取，离心、稀释后，以Luna3u PFP(2)色谱柱为分析柱，以甲醇和水混合液作为流动相，采用LC-MS/MS测定水基胶中MI、 CMI和BIT的含量，以同位素内标法定量。2. 根据权利1所述的液相色谱-串联质谱法，其特征在于：①称取0. 2~0. 3g水基 胶，先加入2~5mL的水进行分散，再加入甲醇振荡萃取，取1~5ml溶液于离心管中，以 10000~150000g离心10~20min，稀释和加入内标后，经0. 22ym有机相滤膜过滤；②在 测定水基胶的过程中以Luna3uPFP(2)色谱柱为分析柱，以甲醇和水混合液作为流动相， 流动相流速0. 4~0. 6mL/min，采用LC-MS/MS测定水基胶中MI、CMI和BIT的含量，以同位 素内标法定量。3. 根据权利要求1所述的液相色谱-串联质谱法，其特征在于：①称取0. 3g水基胶， 先加入5mL的水进行分散，再加入20mL甲醇振荡萃取，转速150r/min，时间30min，移取约 1. 8mL萃取液于2mL离心管中离心lOmin，转速为10000r/min;准确移取lmL上清液至10mL 容量瓶中，加入l〇〇yL浓度为10mg/L的内标使用液，用甲醇定容，取约2mL过0. 22ym有 机相滤膜；②测定水基胶中MI、CMI和BIT过程中，色谱柱为菲罗门公司生产的Luna3u PFP(2)柱，规格为3ym, 150mmX4. 6mm，柱温30°C，流动相流速0? 5mL/min，采用梯度洗脱， 梯度洗脱程序见表1 ;③在测定水基胶中MI、CMI和BIT过程中，采用的质谱条件为：离子 源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；离子源温度：600°C;离 子对的驻留监测时间：50ms;辅助气Gasl压力：55Psi;辅助气Gas2压力：55Psi;各分析物 的定量离子对、定性离子对及去簇电压、碰撞能量见表2 ; 表1梯度洗脱程序表2质谱检测参数表注：*定量离子。4. 根据权利要求3所述的液相色谱-串联质谱法：MI的内标为：d3-2_甲基-4-异噻唑 啉-3-酮.盐酸盐（MI-d3) ;CMI的内标为：d3-5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮（CMI-d3); BIT的内标为：13C6-1，2-苯并异噻啉-3-酮（BIT-13C6)。5. 根据权利要求3所述的液相色谱-串联质谱法，其特征在于：所述的水基胶为接嘴 胶、搭口胶、包装胶、中线胶，质谱采用美国应用生物系统公司的API4500QTRAP质谱仪，液 相色谱采用美国Thermo公司的DIONEXU3000型高效液相色谱仪，并配备有真空脱气机、二 元梯度泵、自动进样器、恒温柱箱和色谱质谱工作站。6. 根据权利要求1所述的液相色谱-串联质谱法，其特征在于： 1、 提取 称取水基胶0. 3g，精确至0.lmg，置于50mL具塞三角瓶中，用5mL水分散后加入20mL甲醇，150r/min振荡萃取30min，移取约1. 8mL萃取液于2mL离心管中离心lOmin，转速为 10000r/min； 2、 稀释 准确移取lmL上清液至10mL容量瓶中，加入100yL内标使用液，用甲醇定容，取约2mL过0. 22ym有机相滤膜，待LC-MS/MS检测； 3、 内标溶液的制备 准确称取1. 〇mg的MI-d3、CMI-d#PBIT- 13C6，分别置于3只10mL容量瓶中，用甲醇稀 释至刻度，配制成浓度均为l〇〇mg/L的内标储备液。分别移取MI-d3、CMI-d#PBIT- 13(：6的 储备液5.OmL至50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成MI-d3、CMI-d#BIT- 13C6浓度 为lOmg/L的混合内标工作溶液； 4、 标准溶液的制备 分别称取适量的3种异噻唑啉酮标准物质，用甲醇配制成浓度为1000mg/L的标准储备 溶液。分别准确移取lmL的MI、lmL的CMI、0. 25mL的BIT标准储备液于100mL容量瓶中， 用甲醇定容，配制浓度为MI、CMI浓度为10mg/L，BIT浓度为4mg/L的混合标准储备液； 分别准确移取2yL、10yL、50yL、100yL、250yL、500yL、100yL混合标准溶液至lOmL容量瓶中，加入100yL内标工作溶液，用甲醇定容至刻度； 5、 测定 移取以上配制好的不同浓度的标准工作溶液和试样溶液，注入液相色谱-串联质谱 仪； 采用的液相色谱条件为： --色谱柱：Luna3uPFP(2)，4. 6x150mm, 3. 0ym; 一一流动相：甲醇和水，梯度洗脱，梯度见表1 ; --流速：〇? 5mL/min； 一一进样量：l〇yL; --柱温：30°C; 表1梯度洗脱程序采用的质谱条件为： --离子源：电喷雾离子源； --扫描方式：正离子扫描； --检测方式：多反应监测； --尚子源温度：600°C; 一一离子对的驻留监测时间：50ms--辅助气Gasl压力：55Psi; --辅助气Gas2压力：55Psi; 各分析物的定量离子对、定性离子对及去簇电压、碰撞能量见表2 ; 表2质谱检测参数表注：*定量离子 6、结果计算 对混合标准工作溶液进行LC-MS/MS分析，得到各定量离子的峰面积，然后计算各目标 化合物与对应内标的峰面积之比（MI与]\〇-(13相比、CMI与CMI-d3相比、BIT与BIT- 13(：6相 比），拟合峰面积比与浓度成线性，且要求线性相关系数R2多0. 99。对试样萃取液进行分 析，依据内标法由混合标准工作曲线计算得到测定值。
【专利摘要】本发明公开了一种水基胶中异噻唑啉酮杀菌剂测定的液相色谱-串联质谱法。包括如下步骤：称取水基胶，先加入水进行分散，再加入甲醇振荡萃取，离心、稀释后，以Luna 3u PFP(2)色谱柱为分析柱，以甲醇和水混合液作为流动相，采用LC-MS/MS测定，以同位素内标法定量。本方法首次基于使用液相色谱串联质谱技术分析水基胶中3种异噻唑啉酮类杀菌剂。本发明具有操作简便、分析速度快、灵敏度高、准确性和稳定性好的特点，特别适用于大批量水基胶中异噻唑啉酮杀菌剂的分析。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN104991017
【申请号】CN201510359833
【发明人】周晓, 李小兰, 陈志燕, 冯守爱, 周芸, 林莉, 范忠, 黄世杰
【申请人】广西中烟工业有限责任公司
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年6月25日